可溶性肿瘤抗原对小鼠CD3AK细胞生物免疫功能的影响

目的：观察可溶性肿瘤抗原对小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞的体外增殖,体外杀瘤活性以及体内抑瘤作用的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐比色法（ＭＴＴ法）,分别检测小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活笥和杀瘤效应细胞体外杀瘤活性,并通过测定实体瘤质量来分析杀瘤效应细胞的体内抑瘤作用。结果：ＳＴＡ协同增强小鼠ＣＤ３单抗诱导的小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活性。     

CD3AK细胞冻融提取液的抗肿瘤活性研究

为研究CD3AK细胞冻融提取液的抗肿瘤作用,作者采集正常人外周血分离单个核细胞(PBMC),先用抗CD3的单克隆抗体(CD3McAb)和rIL-2诱导和激活,使之成为CD3McAb激活的杀伤细胞(CD3AK),再制备CD3AK的冻融提取液,然后进行体内、外抗肿瘤实验.结果:低剂量的CD3McAb和rIL-2能明显诱导PBMC的活化和增殖;激活后的CD3AK细胞冻融提取液可抑制小鼠肝癌实体瘤细胞H22在小鼠体内生长,其抑瘤率达68.20%(肿瘤局部注射)和60.38%(腹腔注射);在体外实验中,该提取液能有效杀伤K562和Raji瘤细胞,其杀瘤活性分别为83.32%和66.83%.以上研究说明CD3AK细胞冻融提取液有可能成为肿瘤生物治疗的一种新型制剂.     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞体外增殖和杀瘤活性比较

目的:比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞(Mtb AK)、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性.方法:分别用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC),在含rIL-2的RPMI 1640培养液中诱导扩增MtbAk、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδ T细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性.结果:与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性.结论:MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗.     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞全外增殖和杀瘤活性比较

目的：比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞（MtbAK）、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性。方法：分别和结核杆菌抗原（Mtb-Ag）、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞（PBMC）,在含rIL-2的RPMI1640培养液中诱导扩增MtbAK、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδT细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性。结果：与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性。结论：MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗。     

鼻咽癌患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞体外增殖及杀瘤活性

目的 研究鼻咽癌患者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的增殖能力、对鼻咽癌细胞株HONE1的细胞毒作用,寻求鼻咽癌过继免疫治疗的新途径。方法 提取24例鼻咽患者外周血单个核细胞,用IFN-γ、抗CD3mAb、IL-2和IL-1β共同培养诱导CIK细胞,计数不同时间点的细胞数,用MTT法检测细胞对鼻咽癌细胞株HONE1的杀伤活性,用ELISA法测定CIK细胞分泌种细胞因子的水平,同时培养CD3AK细胞和LAK细胞,与CIK细胞在增殖和杀瘤活性上进行比较。资料用SPSS13.0软件进行分析,P＜0.05为统计有差异性。结果 鼻咽癌患者CIK细胞表现出很强的体外增值活性及杀瘤活性,与CD3AK细胞和LAK细胞相比,其增殖活性和对鼻咽癌细胞株HONE1的杀伤活性均明显提高（P＜0.05）,且与正常人自体CIK细胞相比无明显差别（P＞0.1）。结论 鼻咽癌患者CIK细胞体外增殖能力和杀瘤活性明显优于CD3AK和LAK细胞,为鼻咽癌患者的临床过继免疫治疗提供了一种新的有效地治疗手段。     

不同培养条件对CIK细胞体外扩增和抗肿瘤特性的影响

目的观察不同类型、不同浓度的抗CD3单抗对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）体外增殖能力及其抗肿瘤特性的影响,优化扩增方案。方法取多名健康供血者血液用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,加入不同类型（OKT3、UCHT1、HIT3a）、不同浓度、不同组合的抗CD3单抗及细胞因子（γ-IFN、rhIL-22）,诱导生成CIK细胞,体外培养12 d。观察CIK细胞的扩增情况,采用MTT法测定其杀瘤活性。结果 （1）等量混合3种不同类型的抗CD3单抗,CIK细胞增殖反应优于添加单一类型抗CD3单抗（P〈0.05）。（2）抗CD3单抗浓度增加,CIK细胞的增殖效应及细胞毒活性反而下降。（3）不同rhIL-2浓度对CIK细胞的增殖效应及细胞毒活性均无明显影响。结论培养CIK细胞时混合不同类型的抗CD3单抗有利于CIK细胞的体外扩增。     

细胞因子诱导的杀伤细胞的生物学特性及抗肿瘤作用研究

目的 探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的生物学特性及抗肿瘤作用。方法 用淋巴细胞分离液分离健康献血者血中单个核细胞,用IFN-γ、IL-1β、IL-2、CD3单抗诱导CIK细胞。以CD3AK细胞作为对照。流式细胞仪检测细胞表型;乳酸脱氢酶（LDH）释放法分析细胞毒活性。结果 CIK细胞和CD3AK相比,在前期细胞增殖能力无明显差异,但至第10～21天时CIK细胞的增殖能力显著高于CD3AK细胞（P〈0．05）。诱导14d时,CD3^＋细胞和CD3^＋CD56^＋阳性细胞显著增多（分别约占84．75％和33．45％）。不同效靶比例的CIK细胞对K562细胞、BeL-7402细胞和Hela3细胞的溶瘤率均显著高于CD3AK细胞（P〈0．01）,在40：1的效靶比时,其杀瘤活性最强。但CIK细胞对不同肿瘤细胞的杀伤率比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 CIK细胞是CD3^＋CD56^＋双阳性细胞群,其增殖能力及杀瘤活性明显优于CD3AK细胞。CIK细胞可作为一种新的广谱、高效的免疫效应细胞应用于临床。     

正常人CIK细胞对卵巢癌SKOV3ip细胞抗肿瘤的活性

目的　观察正常人CIK(cytokine inducedkiller)细胞对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的体外细胞毒活性以及对卵巢癌腹水瘤模型的体内抗肿瘤作用。方法　取正常人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,加入细胞因子γ IFN、IL 2、抗 -CD3单抗和IL - 1,体外诱导成CIK细胞 ,用MTT法测定CIK细胞体外对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的细胞毒活性 ,并与CD3AK作对比。在Babl/c裸小鼠腹腔内接种卵巢癌SKOV3ip细胞 ,观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。结果　体外实验证明 ,CIK细胞对SKOV3ip有明显的细胞毒活性 ,对比CD3AK其抑瘤率为 89.7%与 6 7.1% (P <0 .0 5 )。裸鼠卵巢癌腹水瘤模型体内实验表明 ,CIK细胞能够显著抑制癌性腹水生长 ,其抑制率可达 10 0 %。结论　CIK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞 ,具有较强的体内外抗卵巢癌细胞活性 ,具有明显的抑制癌性腹水生长的作用 ,有可能用于临床上卵巢癌腹水的过继性免疫治疗     

激活骨髓和淋巴因子激活的杀伤细胞生物活性的实验研究

目的 :证实激活骨髓 (Activated bone marrow,ABM)具有与淋巴因子激活的杀伤 (LAK)细胞不同的生物学效应。方法 :应用重组白细胞介素 - 2 (r IL - 2 )、抗 CD3 单抗体外激活骨髓和外周血单个核细胞 ,以 MTT比色分析法测定 ABM、L AK细胞的杀伤活性 ,采用甲基纤维素半固体培养法进行粒 -巨噬细胞系祖细胞 (CFU- GM)、红系祖细胞 (BFU- E)培养。结果 :r IL- 2 +抗 CD3 单抗激活的 ABM组杀伤活性最强 (6 5 .8± 9.2 ) % ,r IL - 2激活的 ABM组次之为 (5 6 .3± 7.9) % ,活性强于相同条件下的 L AK组 ,两组差异具有显著性 (P<0 .0 1)。增殖倍数与相同条件下的 LAK细胞相比差异亦具有显著性。体外激活 3～ 5 d的 ABM与同期培养的未激活的骨髓细胞相比 BFU- E、CFU- GM形成率差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,LAK细胞则不具有造血祖细胞活性。结论 :ABM的杀伤活性和增殖效应明显强于 L AK细胞 ,且能保持造血祖细胞活性 ,抗 CD3 单抗能够促进 r IL - 2诱导的 ABM抗肿瘤活性和增殖效应 ,不损伤造血祖细胞活性 ,是优于 LAK细胞的过继免疫疗法。     

CD3AK细胞联合BCG对膀胱癌细胞的体外杀伤活性研究

目的探讨CD3AK细胞对膀胱癌细胞的体外杀伤活性,以及CD3AK细胞与BCG联合作用于膀胱癌细胞的效应.方法采用抗CD3单抗和IL-2共同刺激健康人外周血单个核细胞诱导出CD,AK细胞;以流式细胞仪测定细胞表型;用MTT法测定CD,AK以及CDaAK联合BCG对膀胱癌细胞系(T24)的杀伤活性.结果CD3AK细胞为异质细质细胞群,其细胞类型主要是CD8 细胞;在效靶比为10:1及20:1时,培养4 d的CD:,AK细胞BCG联合作用于T24细胞的杀伤率高于二者分别对T24细胞的杀伤率.结论CD3AK细胞是一种高效的抗肿瘤效应细胞,对膀胱癌细胞具有较强的杀伤作用;CD3AK细胞与BCG对膀胱细胞呈协同杀伤作用.CD3AK细胞在膀胱癌过继免疫治疗中具有重要的临床应用前景.     

T-AK细胞在体外和裸鼠体内抗人膀胱癌细胞株(Fen)的实验研究

用可溶性肿瘤抗原和抗ＣＤ３ 单克隆抗体共同刺激外周单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生ＣＤ＋８ Ｔ 细胞为主的杀瘤细胞,称为Ｔ－ ＡＫ 细胞。与ＬＡＫ细胞、ＣＤ３ － ＡＫ 细胞比较,Ｔ－ ＡＫ细胞扩增快、低依赖ＩＬ－ ２,培养１４ 天细胞数扩增２４ 倍,比ＣＤ３ － ＡＫ细胞高８ 倍,比ＬＡＫ细胞高１５ 倍,并能维持生长２１ 天。Ｔ－ ＡＫ细胞中含ＣＤ＋３ ８９％ ,ＣＤ＋４ ２１ ％ ,ＣＤ＋８ ９５％ ,ＣＤ＋１６ ２２％ ,ＣＤ＋２５ ４１％ ,ＣＤ＋５６ ４７ ％ ,ＣＤ＋３８ ９０ ％ ,它们是ＣＤ＋８ Ｔ细胞为主的异质性细胞群。体外实验结果表明,Ｔ－ ＡＫ细胞对Ｆｅｎ 的明显的杀伤作用,与ＬＡＫ、ＣＤ３ － ＡＫ细胞比较,差异有高度显著性（ Ｐ＜ ０．００１） 。裸鼠体内试验结果显示,对照组及ＬＡＫ组全部、ＣＤ３ － ＡＫ 组１ 只裸鼠长出瘤结节,而Ｔ－ ＡＫ组无一例长出瘤结节且生存期明显长     

抗CD3单克隆抗体激活杀伤细胞高效扩增培养体系的建立及细胞毒活性检测

目的： 建立从20mL外周血中高效扩增抗CD₃单克隆抗体激活的杀伤细(CD₃AK)的培养体系,并进行体外细胞毒活性检测。 方法： 采用抗CD₃单克隆抗体（Anti-CD₃ mAb）激活人外周血单个核细胞（PBMC）,在人重组白细胞介素2(rIL-2)的协同活化下,获得CD₃AK。对CD₃AK进行长期体外培养,进行增殖动力学、免疫表型和体外抗肿瘤活性的分析。 结果：在培养第7～22天,CD₃AK增殖倍数明显提高,最高可达317倍;免疫表型分析显示,CD₃⁺细胞从活化前的51.9%增加至94.6%,CD₄⁺细胞从19.5%增加至51.1%,CD₈⁺细胞从22.1%增加至52.1%;效靶比20∶1组和40∶1组的杀伤肿瘤细胞活性明显高于10∶1组（P<0.05和P<0.01）;在7～19 d的培养天数之内,杀伤肿瘤细胞活性最强。 结论： 从外周血中高效扩增的CD₃AK是以CD₃⁺、CD₄⁺和CD₈⁺细胞为主的异质性细胞群,在体外有明显的杀伤肿瘤细胞活性。     

小鼠CD_3AK细胞抗肿瘤作用初步观察

目的：通过小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外对靶细胞的杀伤活性及其体内抗肿瘤作用的观察，了解ＣＤ３ＡＫ细胞的体内外抗肿瘤效应。方法：采用ＭＴＴ法检测小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外抗肿瘤细胞毒活性，并通过实体瘤的大小、瘤组织病理切片形态观察等分析小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞的体内抗肿瘤作用。结果：小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞不仅体外具有较强的细胞毒作用，且能在小鼠体内抑制Ｓ１８０肿瘤细胞的生长和扩散，并诱导Ｓ１８０细胞坏死，与生理盐水对照组比较有显著差异。结论：ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的体内外抗肿瘤作用     

T—AK细胞上清液抑瘤活性的研究

本文应用ＭＴＴ比色法检测了ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３单抗共同诱导激活的Ｔ－ＡＫ细胞培养上清液对Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制效应，并观察了Ｔ－ＡＫ上清液抑瘤活性与Ｔ－ＡＫ细胞杀伤活性的相关性，结果表明：（１）Ｔ－ＡＫ细胞能够自发分泌一些抑制Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制因子，但活性很低；（２）Ｔ－ＡＫ细胞在杀伤Ｋ５６２细胞过程中释放的抑制肿瘤细胞生长的物质，抑瘤活性比较高，共     

α－CD_3单克隆抗体对肿瘤特异性T细胞的扩增和杀瘤活性的影响

为寻找更有效的肿瘤过继性免疫治疗的方案，用α－ＣＤ３单克隆抗体（单抗）激活ＦＢＬ－３红白血病肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞获取肿瘤特异性Ｔ细胞，并观察α－ＣＤ３单抗对肿瘤特异性Ｔ细胞的增殖、杀瘤活性及表型的影响。体外实验结果显示，免疫小鼠脾细胞经α－ＣＤ３单抗激活后，采用低剂量ＩＬ－２即可维持其长期高度的、持续的增殖；又培养过程中α－ＣＤ３单抗持续存在可大大促进其对肿瘤的特异性杀伤。细胞分型分析结果也支持了α－ＣＤ３单抗的持续存在对维持肿瘤特异性Ｔ细胞的抗瘤活性具有很重要的意义，是肿瘤过继免疫疗法中颇有前景的治疗方案。     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗ＣＤ３单克隆抗体辅以少量的基因重组人白细胞介素２和植物血凝素诱导外周血淋巴细胞，成功地研制出具有抗瘤活性的ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞。     

CD3AK细胞冻融提取液的抗肿瘤活性研究

为研究ＣＤ３ＡＫ细胞冻融提取液的抗肿瘤作用,作者采集正常人外周血分离单个核细胞（ＰＢＭＣ）,先用抗ＣＤ３的单克隆抗体（ＣＤ３ＭｃＡｂ）的ｒＩＬ－２诱导和激活,使之成为ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）,再制备ＣＤ３ＡＫ的冻融提取液,然后进行体内,外抗肿瘤实验。结果;低剂量的ＣＤ３ＭｃＡｂ和ｒＩＬ－２能明显诱导ＰＢＭＣ的活化和增殖;激活后的ＣＤ３ＡＫ细胞冻融提取液可抑制小鼠肝癌实体瘤细胞Ｈ２     

MTT法和LDH法检测T—AK细胞活性的研究

采用ＭＴＴ比色分析法和ＬＤＨ释放法检测了ＣＤ３单克隆抗体和白细胞介素－２共同激活的Ｔ－ＡＫ细胞的杀伤活生，并对检测方法进行了改良。