低氧对肾上管上皮细胞转化生长因子β1表达及增殖的影响

目的 探讨低氧在肾脏疾病进展中的作用机制。方法 将肾小管上皮细胞MDCK分别置于低氧3％和正常氧18％条件下，培养24，48，72和96h。应用台盼蓝排除法计数活细胞，观察细胞增殖；应用流式细胞仪观察细胞周期；以及半定量RT－PCR检测MDCK细胞TGF－β1mRNA的表达。结果 低氧可促进MDCK细胞增殖，G0－G1期细胞细胞减少，G2－M期细胞比例增多。低氧可促进TGF－β1 mRNA的表达，而且呈一定时间相关性。结论 慢性低氧致肾间质纤维化的机制与低氧引起的细胞增殖和细胞周期的改变有关，而这些改变又可能与低氧引起的细胞分泌生长因子改变有关。     

Roscovitine对增生期肝癌细胞周期的影响

目的 探讨细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂Roscovitine对增生期肝癌细胞SMMC-7721细胞周期的影响.方法 采用体外培养的肝癌细胞SMMC-7721,经过Roscovitine作用后,对SMMC-7721细胞的形态、生长情况、细胞周期时相的分布、凋亡以及CDK2、Caspase-3、bcl-2 mRNA的表达情况进行观察.结果 MTT提示:Roscovitine对SMMC-7721细胞的增生有抑制作用,作用效果呈时间、剂量依赖性,并促进细胞的凋亡;流式细胞仪发现G0期、G1期的比例增加,细胞出现凋亡;R-T PCR显示CDK2 mRNA表达水平降低,凋亡相关基因bel-2表达降低,Caspase-3 mRNA水平表达升高.结论 Roscovitine可以抑制增生期肝癌细胞的生长、增生,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞的凋亡,凋亡机制与bcl-2、Caspase-3的表达改变有关.     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用

目的观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用.方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,并应用三七总甙进行干预,用免疫细胞化学染色法结合图像分析观察TGF-β1的表达变化,用流式细胞仪测定细胞周期的变化.结果与对照组相比,三七总甙能够显著抑制细胞TGF-β1的表达,并使细胞停滞于S期, 而G0-G1期、G2-M期细胞明显减少(P＜0.01).结论三七总甙改变细胞周期和抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达,可能成为防治增生性瘢痕的药物.     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用

目的 观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用。方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，并应用三七总甙进行干预，用免疫细胞化学染色法结合图像分析观察TGF-β1的表达变化，用流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果与对照组相比，三七总甙能够显著抑制细胞TGF-β1的表达，并使细胞停滞于S期，而G0-G1期、G2-M期细胞明显减少（P〈0．01）。结论三七总甙改变细胞周期和抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达，可能成为防治增生性瘢痕的药物。     

大黄酸抑制肾间质成纤维细胞激活的实验研究

目的 研究大黄酸(Rhein)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)激活大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)作用及探讨大黄治疗肾脏病的作用机制。方法 以NRK-49F细胞为研究对象，采用细胞计数观察细胞生长，流式细胞仪分析细胞周期变化。α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)作为细胞活化指标，同时检测纤连蛋白(FN)表达的水平以评价细胞外基质合成的变化。结果 TGF-β1具有促进NRK-49F增殖的作用，大黄酸呈时间依赖性和剂量依赖性抑制该增殖作用。TGF-β1能够促进NRK-49F进入S期和G2/M期，而经大黄酸作用的细胞主要是G0/G1期细胞。大黄酸呈剂量依赖性显著抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞α-SMA蛋白表达水平，同时，大黄酸还可减少TGF-β1诱导的NRK-49F细胞FN 蛋白的表达水平。结论 大黄酸能够阻止TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期，抑制该细胞的增殖。同时，大黄酸还具有抑制TGF-β1激活肾间质成纤维细胞的作用，并拮抗TGF-β1导致的FN表达与合成。     

RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制

目的 探讨RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因表达后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制.方法 用携带U6启动子和LRIG2特异性短发夹RNA(shRNA)序列的质粒载体pGenesi12-LRIG2-shRNA(siRNA)及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesi12-scramble-shRNA(scr)转染胶质瘤细胞系GL15、G418(600mg/L)筛选出稳定株,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测LRIG2和表皮生长因子受体(EGFR)表达的改变.噻唑蓝(MTT)比色法检测稳定转染对照组和实验组细胞的增殖,流式细胞仪检测对照组和实验组细胞的细胞周期改变.结果 实验组细胞LRIG2 mRNA和蛋白水平与对照组比较分别下降了68.6%和62.3%,EGFR蛋白水平下降了32.6%.MTT结果显示实验组细胞增殖率低于对照组.细胞周期分析表明对照组G0/G1期为(26.72±2.10)%,实验组为(36.58±3.29)%(P<0.05),LRIG2表达下调后GL15细胞细胞周期部分阻滞在G0/G1期.结论 GL15细胞经RNA干扰基因表达后,LRIG2 mRNA和蛋白水平明显降低,同时EGFR蛋白水平下降,从而抑制细胞增殖和使细胞周期阻滞在G0/G1期.LRIG2可通过EGFR信号系统影响胶质瘤细胞的生长.     

抑制核纤层蛋白A/C表达对牵张刺激下成骨细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察小干扰RNA技术(siRNA)抑制核纤层蛋白A/C(lamin A/C)表达对牵张刺激下小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖及凋亡的影响.方法 化学合成3条针对lamin A/C靶点的siRNA序列,脂质体转染MC3T3-E1细胞,实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测lamin A/C mRNA和蛋白变化.细胞转染72 h后行牵张刺激6 h,Hoechst 33258检测DNA含量来反映细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果 筛选出的siRNA-2显著抑制lamin A/C mRNA和蛋白产物表达(P＜0.01).未转染细胞经牵张刺激,DNA合成随时间推移而增加;细胞G0/G1期比例为65.19%;S期为22.57%,细胞凋亡率为11.49%;转染细胞经牵张刺激后,DNA合成较未转染细胞显著性减少(P＜0.01);G0/G1期比例提高至85.82%;S期降低至11.37%,凋亡率达19.32%(P＜0.01).结论 抑制lamin A/C表达会导致牵张刺激诱导的促增殖作用减弱,细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞的凋亡.     

内源性转化生长因子β1对膀胱癌细胞体外生长的影响

目的：研究内源性转化生长因子β1（TGFβ1）对膀胱癌细胞增殖的影响及机制。方法：构建携TGFβ1反义RNA的复制缺陷型逆转录病毒载体pRevTβ-AS，转染膀胱癌EJ细胞株，观察抑制内源性TGFβ1表达对EJ细胞体外增殖的影响；流式细胞仪分析转染后细胞周期时相分布的改变。结果：将TGFβ1反义RNA导入EJ细胞并有效表达；抑制TGFβ1表达可以降低靶细胞的生长速度和克隆形成率，使细胞增殖指数下降12％；反义RNA转染的EJ细胞G0和G1期细胞占65．7％，高于对照组细胞，S期细胞占20．5％，低于对照组细胞。结论：内源性TGFβ1通过诱导膀胱癌细胞G1→S期转换，促进肿瘤细胞体外增殖。     

抑癌基因Tg737下调对肝癌细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨下调Tg737表达对肝癌细胞增殖能力的影响及其下游机制.方法 SMMC7721和MHCC97-H细胞分别转染空白对照病毒和干扰Tg737表达的慢病毒后,用CCK-8法绘制肝癌细胞生长曲线检测其增殖能力变化.通过流式细胞仪检测肝癌细胞周期变化,并进一步检测细胞周期调控蛋白的表达变化,推断可能的分子机制.结果 与转染空白对照病毒的细胞相比,稳定下调Tg737的SMMC7721和MHCC97-H细胞增殖能力增强,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,调控细胞周期完成G1/S转化的cyclinD1的表达水平增高.结论 在肝癌细胞SMMC7721和MHCC97-H下调Tg737表达可能通过上调cylinD1的表达促进肝癌细胞周期由G1期向S期转化,进而促进肝癌细胞的增殖.     

钙三醇抑制肾间质成纤维细胞的活化

目的 通过观察钙三醇对肾间质成纤维细胞增殖和凋亡的影响，及其对转化生长因子（TGF）β1诱导的成纤维细胞转分化和细胞外基质(ECM)合成的干预作用，旨在探讨钙三醇抗肾间质纤维化的潜在效应及相关机制。 方法 体外培养大鼠肾间质成纤维细胞NRK-49F，分别以不同浓度TGF-β1（1、2、5和10 μg/L）和（或）不同浓度钙三醇（10－4、10－5、10－6、10－7、和10－8 mmol/L）进行干扰。MTT法观察细胞增殖情况；流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡改变；实时定量PCR和Western印迹法分别检测细胞内α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、结缔组织生成因子（CTGF）及纤连蛋白（FN）的mRNA和蛋白表达。 结果 钙三醇能明显抑制正常和TGF-β1（5 μg/L）诱导的NRK-49F细胞增殖（P < 0.01）。经不同浓度钙三醇（10－4、10－5、10－6、10－7、和10－8 mmol/L）作用48 h后，NRK-49F细胞G2/S期细胞比例较TGF-β1刺激组均明显减少（分别为25.88%、21.81%、21.73%、23.28%、23.61%比27.42%，均P < 0.05），但对细胞凋亡无明显影响。NRK-49F细胞经TGF-β1刺激后，其α-SMA、CTGF、FN mRNA表达量显著上升，并在TGF-β1 1~5 μg/L的范围内呈剂量依赖效应。钙三醇能明显抑制TGF-β1诱导的α-SMA、CTGF、FN mRNA表达上调（均P < 0.05），而不同钙三醇浓度干预组之间差异无统计学意义。钙三醇能显著降低TGF-β1诱导的α-SMA和FN蛋白表达（P < 0.05）。 结论 钙三醇可通过G1期停滞抑制大鼠肾间质成纤维细胞增殖，但不影响凋亡。钙三醇具有拮抗 TGF-β1致肾间质纤维化的潜在作用。     

维生素E琥珀酸酯诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）对非雄激素敏感的前列腺癌PC-3细胞株的凋亡诱导作用及分子机制。方法：以体外培养的PC-3细胞为研究对象,采用含不同浓度的VES培养液作用于细胞。采用噻唑兰（MTT）比色法检测细胞增殖活性;采用Wright—Giemsa染色、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡并测定Fas蛋白表达水平;采用酶联免疫法检测转化生长因子口（TGF-β）的表达水平的变化。结果：VES可显著抑制PC-3细胞的生长及增殖,光镜下可见到PC-3细胞呈典型凋亡的形态学改变。FCM细胞周期分析显示G2／M期细胞增加而s期细胞明显减少,Fas蛋白和TGF-β表达明显上调。结论：VES可诱导前列腺癌PC3细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Fas、TGF-β的表达有关。     

槲皮素在人乳腺癌细胞中抑制增殖和诱导凋亡的作用

目的 探讨槲皮素对人乳腺癌细胞的作用及其相关机理.方法 分别以 12.5、25、50、100及200 μmol/L终浓度的槲皮素作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-435S,运用台盼蓝拒染法检测槲皮素对乳腺癌细胞的细胞抑制率,流式细胞术分析槲皮素对乳腺癌细胞增殖周期的影响,RT-PCR 法检测乳腺癌细胞中细胞凋亡蛋白酶3(caspase-3) mRNA表达水平.结果 槲皮素能抑制人乳腺癌细胞的增殖,且与药物的剂量及作用时间有关;槲皮素能改变乳腺癌细胞周期的分布,随着槲皮素浓度的增加,G0/G1 期细胞所占比例减少,S 期细胞所占比例增加,G2/M 期细胞比例先增加后减少; 槲皮素能够激活乳腺癌细胞中caspase-3的表达.结论 槲皮素能够抑制人乳腺癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其机理可能是通过改变细胞周期的分布及上调caspase-3的表达实现的.     

下调HDAC6表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响及机制

目的：探讨下调HDAC6表达对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响及其分子机制。 方法：分别用HDAC6 siRNA和阴性siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞,以未处理的MCF-7细胞为空白对照,分别用RT-PCR和Western blot方法检测细胞HDAC6与p21基因和蛋白的表达,CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测细胞增殖与细胞周期,并用TUNEL法检测细胞凋亡。 结果：干扰效果验证结果显示,HDAC6 siRNA转染能有效降低MCF-7细胞HDAC6 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）,而阴性siRNA无此作用（P>0.05）。与空白对照组比较,HDAC6 siRNA组细胞增殖受到明显抑制,细胞G0/G1期比例增加,S期比例减少,细胞的凋亡率明显增加（均P<0.05）;阴性siRNA组无上述改变（均P>0.05）。HDAC6 siRNA组细胞p21 mRNA与蛋白的表达均较空白对照组和阴性siRNA组明显升高（均P<0.05）。 结论：下调HDAC6的表达能抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,诱导细胞G0/G1期阻滞,并促进细胞凋亡,其机制可能与升高p21表达有关。     

卡氮芥联合全反式维甲酸诱导脑胶质瘤的凋亡及其分子机制

C6、U251细胞G1期比例分别由(42.18±2.52)%至(63.04±4.05)%、(57.14±2.52)%至(69.50±4.05)%,C6、U251细胞凋亡率2.46±1.02至17.43±2.03、10.36±1.76至21.32±2.03;Cyclin E、CDK2 mRNA表达下调,p27Kip1 mRNA表达上调.结论 BCNU与ATRA协同应用诱导脑胶质瘤细胞的凋亡,其诱导凋亡的分子机制可能是通过改变相关细胞周期蛋白导致细胞周期改变.     

Stat3显性负性基因调控人结肠癌细胞增殖与凋亡的分子机制

目的 探讨转染Stat3（转录信号传导子和激活子3）显性负性基因Stat3β质粒阻断人结肠癌细胞系SW480细胞的Stat3信号传导通路对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制.方法 应用阳离子脂质体向人结肠癌细胞系SW480细胞中转染携带Stat3β基因的质粒,四唑盐法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,反转录聚合酶链反应检测Stat3靶基因cyclinD1、bcl-xL mRNA表达情况.数据统计分析采用独立样本t检验.结果 转染Stat3β质粒36 h后,SW480细胞的增殖受到显著抑制（t=5.216,P=0.006）;G0/G1期的细胞比例由40.37%上升至67.25%,S期细胞由44.68%下降至31.23%;发生早期凋亡的细胞比例由5.34%上升至24.42%;同时cyclin D1、bcl-xLmRNA表达水平较对照组显著下降（t=5.228,P=0.010;t=3.517,P=0.025）.结论 转染携带Stat3β基因的质粒可以通过下调Stat3靶基因的表达抑制人结肠癌细胞的增殖,促进凋亡,为以Stat3为靶点的结肠癌基因治疗提供了实验基础.     

左旋棉酚体外诱导人前列腺癌LNCaP细胞凋亡的研究

目的研究左旋棉酚对人前列腺癌LNCaP细胞体外增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测左旋棉酚对LNCaP细胞增殖的影响,透射电镜观察细胞超微结构的改变,TUNEL染色观察细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期的改变,半定量RT-PCR检测Bcl-2及BakmRNA的表达水平。结果左旋棉酚在体外能显著抑制LNCaP细胞增殖,呈浓度-时间依赖性。左旋棉酚可以诱导LNCaP细胞发生典型的凋亡形态学改变和G0/G1期阻滞。RT-PCR显示Bcl-2mRNA表达水平降低,BakmRNA表达水平升高。结论左旋棉酚在体外能诱导前列腺癌细胞凋亡,其主要原因可能与BakmRNA的表达升高及Bcl-2mRNA的表达下调有关。     

转染Megsin基因对体外系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原分泌的影响及机制

目的 了解Megsin基因高表达对体外系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原分泌的影响，并探讨其机制。 方法 构建大鼠Megsin基因真核表达载体，体外转染系膜细胞。3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法检测系膜细胞增殖情况。RT-PCR方法检测系膜细胞血小板源生长因子(PDGF)-BB、IL-1β、IL-6、IL-10、TGF-β1和TNF-α mRNA表达变化。ELISA法检测细胞培养上清PDGF-BB、TGF-β1和Ⅳ型胶原浓度。观察PDGF-BB中和抗体对大鼠系膜细胞转染Megsin基因后细胞增殖和TGF-β1 mRNA表达的影响。 结果 大鼠系膜细胞转染Megsin基因后，细胞内3H-TdR掺入量显著增加，PDGF-BB和TGF-β1 mRNA表达显著上调，细胞培养上清PDGF-BB、TGF-β1和Ⅳ型胶原的浓度显著升高，3者与转染Megsin基因呈明显时间依赖性关系。PDGF-BB中和抗体显著抑制系膜细胞转染Megsin基因后细胞内3H-TdR的掺入，并下调稳定表达Megsin基因的大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA表达。结论 Megsin基因高表达在体外可促进系膜细胞PDGF-BB和TGF-β1的表达和分泌，进而促进系膜细胞增生和Ⅳ型胶原分泌。     

腺相关病毒载体介导p27Kip1基因转染骨肉瘤MG-63细胞的研究

目的 观察p27Kip1基因转染后对骨肉瘤MG-63细胞增殖和生存能力的影响.方法 重组质粒在内的三质粒共转染包装、收集腺相关病毒颗粒,检测病毒滴度并感染MG-63细胞,细胞免疫组织化学检测p27Kip1基因的表达,并行细胞增殖实验、细胞周期分析,探讨p27Kip1基因对骨肉瘤MG-63细胞的体外作用.结果 三质粒成功共转染293细胞,X-gal染色观察转染率为60%;采用CPE法(微量全细胞病变法)检测病毒滴度1.6×108 PFU/ml;细胞免疫细胞化学鉴定p27Kip1基因高表达;细胞生长曲线显示转染组细胞增殖明显减慢;流式细胞仪观察转染AAV-p27Kip1组细胞周期见S、G2期细胞比例明显降低,G0/G1期细胞比例增高.结论 p27Kip1基因重组腺相关病毒感染骨肉瘤MG-63细胞后能高表达目的 基因,并阻滞细胞于G1/S期,从而显著抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖.     

牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，吖啶噔活体染色观察细胞凋亡形态，免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测cjn,cfos表达。结果 在5－50mmol/L浓度范围内牛磺酸能剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，并能明显抑制c-jun,c-fos的表达（P＜0．01），而牛磺酸并不诱导系膜细胞的凋亡。结论 牛磺酸可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0－G1期；牛磺酸对系膜细胞增殖的抑制作用与其抑制c-jun,c-fos的表达有关。牛磺酸对系膜细胞凋亡无诱导作用。     

EGCG对高糖环境下小鼠足细胞增殖和P21^Cip1、P27^Kip1表达的影响

目的：研究作为绿茶主要活性成分的EGCG对高糖环境下足细胞增殖和周期素激酶抑制剂P21^Cip1和P27^Kip1表达的影响,从而探讨其作用机制。方法：以高糖（25mmol/L）培养的小鼠足细胞为研究对象,维生素E为对照,以不同浓度EGCG（0.2,10,100μmol/L）培养24h、48h、72h,首先以相差显微镜观察足细胞形态改变;其次,以BrduELISA法检测细胞增殖;流式细胞仪分析足细胞G1/G0、S期、G2/M期百分比;RT-PCR检测细胞周期依赖型蛋白激酶抑制剂P21^Cip1mRNA和P27^Kip1mRNA表达。结果：（1）相差显微镜下观察,高糖刺激后24h,部分足细胞脱落,呈不规则形态。（2）BrduELISA法以正常糖为对照,高糖刺激24h后,足细胞增殖无统计学差异,48h和72h后足细胞增殖减少,有统计学差异（P〈0.05）;以高糖组为对照,高糖刺激24h,维生素E组和维生素E＋EGCG协同作用组促进足细胞增殖有统计学差异（P〈0.05）,EGCG（0.2,10,100μmol/L）作用组无统计学意义;48h实验结果和24h相同;72hEGCG（100μmol/L）维生素E组和维生素E＋EGCG协同作用组促进足细胞增殖作用有统计学差异（P〈0.01）。（3）不同浓度EGCG对高糖刺激后足细胞周期G1/G0期、S期、G2/M期百分比无统计学差异（P〉0.05）。（4）RT-PCR高糖刺激后24h,足细胞P21^Cip1mRNA表达有上升,但无统计学意义（P〉0.05）;随EGCG浓度增加,以维生素E为对照,P21^Cip1mRNA表达无统计学差异（P〉0.05）。正常糖组为对照,高糖刺激后24h足细胞P27^Kip1mRNA表达上调,有统计学差异（P〈0.01）,随EGCG浓度增加,P27^Kip1mRNA表达无统计学差异（P〉0.05）。结论：EGCG（100μmol/L）作用72h促进高糖环境下足细胞增殖,对细胞周期作用不明显,高糖刺激后24h足细胞P27^Kip1mRNA表达上调,EGCG对足细胞细胞周期依赖型蛋白激酶抑制P21^Cip1mRNA和P27^Kip1表达无明显影响,提示EGCG促高糖环境下足细胞增殖作用可能还存在其他机制。