绵羊四季生精规律的研究(Ⅰ.睾丸精子日产量的季节变化)

对性成熟的绵羊睾丸组织进行定量分析和精子日产量的组织学测定,结果表明,睾丸的精子日产量以秋季最高、夏季次之、春季最低,分别为秋季的84.72%、76.68%和72.12%,而每克睾丸实质的精子日产量的季节变化无规律。以夏季、冬季较高、春季、秋季较低。     

Plac8l1在小鼠精子发生过程中的表达特征研究

目的：探讨Plac8l1（placenta-specific 8 like 1）基因在小鼠睾丸组织的表达特征,及其与精子发生的相关性。方法：经生物信息学方法初步筛选到一个睾丸特异性表达候选基因Plac8l1,并推测其可能与小鼠精子发生相关;采用半定量RT-PCR和实时定量RT-PCR对Plac8l1表达的时空特异进行了研究;应用原位杂交技术对Plac8l1 mRNA在成年小鼠睾丸中的细胞类群表达特征进行初步研究;通过构建过表达PLAC8L1-EGFP重组蛋白质粒及生物信息学分析进行亚细胞定位研究与功能预测。结果：①Plac8l1是1个睾丸特异性转录基因。②在成年小鼠,Plac8l1只在睾丸和附睾组织发生特异性转录,而且睾丸中的表达水平明显高于附睾[睾丸vs. 附睾=[（1.000±0.000） vs. （0.036±0.018）,P=0.000]。③随着小鼠精子发生的起始,睾丸中Plac8l1转录水平逐渐升高（P=0.000）。④mRNA原位杂交结果显示Plac8l1 mRNA主要定位在成年小鼠睾丸中的间质细胞和精母细胞。⑤经生物信息学分析,PLAC8L1也有着一个类似于PLAC8的功能域,过表达重组蛋白显示PLAC8L1在细胞膜上聚集。结论：Plac8l1是1个睾丸特异性基因,可能与精子发生过程中的精母细胞分化相关;PLAC8L1具有1个富含半胱氨酸的PLAC8结构域,这一结构域可能介导了PLAC8L1在细胞膜上聚集并与其他蛋白相互作用,并可能在精母细胞分化中发挥重要作用。     

FscB蛋白在鼠精子发生过程中的动态表达和迁移研究

目的:探讨一种新的睾丸特异性蛋白FSCB(Fibrous sheath CABYR binding protein)在精子内的精细动态表达和迁移过程,并研究该蛋白在正常和畸形精子中的形态定位特征.方法:应用过碘酸-希夫氏染色获得鼠睾丸曲精小管上皮中精子发生的时相性背景特征,然后应用间接免疫荧光方法对FSCB蛋白在睾丸和精子内的动态表达和迁移过程进行观察.结果:FSCB最初表达于长精细胞的第11步(时相Ⅺ),呈胞浆内弥漫性染色;随之从第11步(时相Ⅺ)至第15步(时相Ⅵ)表达逐渐加强;在精子形成的第15步(时相Ⅳ至时相Ⅵ)FscB开始向精子鞭毛迁移,最终于第16步(时相Ⅷ)FSCB蛋白整体局限定位于睾丸精子鞭毛上,胞浆内荧光染色消失.进一步研究显示该蛋自在正常精子中定位于鞭毛主段、精子头部、鞭毛颈段、中段和末段均无表达.在畸形精子中,该蛋白表达存在3种异常改变:①鞭毛内无阳性表达;②表达节段前移并缩短,提示这类精子缺乏中段;③呈现间断分布的串珠状改变.结论:FSCB是纤维鞘的重要组成蛋白,在精子纤维鞘形成的后期装配于其表面,可能是纤维鞘生物合成的最后装配步骤.该蛋白在畸形精子中存在明显表达异常,其表达异常与精子运动功能之间的关系有待深入研究.     

大鼠睾丸Cx43 蛋白表达的加龄变化研究

【立论依据】 缝隙连接(GJ)是目前认为相邻细胞间唯一能直接进行能量、物质和信息交换的一种特殊通道。缝隙连接43(Connexin 43, Cx43)是睾丸中主要的缝隙连接蛋白,存在于Sertoli cell、Leydig cell、精原细胞和精母细胞。原位染料偶联实验研究显示,在精子发生过程中,Leydig cell 之间、Sertoli cell 之间以及Sertoli cell 和精原细胞、精母细胞之间的缝隙连接起着重要的局部调节作用。 【设计思路】 采用免疫组化和图像分析技术,观察大鼠出生后不同周龄睾丸组织中Cx43的表达状况和加龄变化,利用血细胞计数板检测精子百分率和活力,探讨缝隙连接蛋白与精子发生的相关性。 【实验内容】 雄性SD 大鼠42 只,分为1、3、5、7、9、11、13 周龄组,每组6 只。断颈处死各周龄大鼠,取1~13 周龄双侧睾丸,Bouin 液固定24 h,常规石蜡包埋、切片,免疫组化检测睾丸Cx43 蛋白的表达,图像分析系统分析Cx43 蛋白表达的积分光密度值。取3~13 周龄双侧附睾,利用血细胞计数板检测精子百分率和活力。采用SPSS 19.0 建立数据库,进行统计学处理,撰写实验报告。 【材料】 SD 雄性大鼠(浙江中医药大学实验动物中心提供)。兔抗大鼠Cx43 单克隆抗体(Santa Cruz 公司),生物素标记羊抗兔IgG 抗体、SABC 免疫组化试剂盒(华美公司,北京)。 【可行性】 绍兴文理学院医学院医学实验中心是浙江省实验示范中心建设单位和绍兴市大学生创新创业实践基地,具备完成该项课题所需要的所有仪器和实验条件。指导教师是浙江省教学名师,指导省、市级学生科研课题8 项,指导学生在一级期刊和核心期刊杂志上发表论文14 篇。课题组成员动手能力较强,获校级基础医学技能操作竞赛奖,较熟练地掌握了免疫组化和图像分析技术。 【创新性】 以Cx43 蛋白为靶点,探讨Cx43 蛋白在大鼠出生后不同周龄睾丸中表达的加龄变化以及与精子发生的相关性。     

睾丸内注射15M-PGF2_α对大鼠抗生精作用的研究

用睾丸注射的方法,研究了15M-PGF2α的抗生精作用。结果1,光镜和电镜观察,注射后4h～50d曲细精管精子发生受到明显抑制,管腔内有大量脱落、变性的生精细胞,主要是精子细胞和精母细胞。界膜中的类肌细胞呈过度收缩形态。2.注射后4h～3d血睾酮浓度显著降低。3.注射后15d～40d产生完全避孕效果。     

青春期SD大鼠单侧睾丸扭转后FAS/FASL系统变化的研究

目的初步研究青春期一侧睾丸扭转SD大鼠性成熟后对侧睾丸的FAS/FASL系统的表达与对侧睾丸生精功能的变化情况的相互关系.方法建立青春期SD大鼠一侧睾丸扭转模型5组,A组为假手术对照组;B组为睾丸扭转组;C组为睾丸扭转+甲强龙组;D组为扭转侧睾丸切除组;E组为扭转侧睾丸切除+甲强龙组.于扭转后24h给予睾丸切除或/和注射甲强龙处理,术后1月处死,取对侧睾丸组织,HE染色检查,用免疫组织化学染色法检测睾丸生精细胞,支持细胞的FAS及FASL的表达情况,并对FAS及FASL的表达作定量分析.用放射免疫法检测血清中FSH,LH,T的值并做分析.结果 B组对侧非扭转睾丸的形态有病理性改变.各组睾丸组织同时表达FAS和FASL,B组的FAS和FASL的表达强度较其他各组有明显的升高.各组血清中FSH,LH,T的值没有统计学差别.结论青春期SD大鼠单侧睾丸扭转后对侧睾丸生精细胞发生FAS和FASL的高表达,从而导致细胞的凋亡增加,生育力下降.皮质激素可能通过抑制FAS和FASL的表达,降低生精细胞的凋亡,维持生精功能的稳定.     

睾丸炎动物模型的建立(一)--对睾丸形态结构的研究

目的：用昆明小鼠建立新型无菌性睾丸炎模型。方法：通过手术向小鼠右侧睾丸注入冰醋酸，应用免疫组化及光、电镜观察左侧睾丸在术后各周的变化。结果：实验组小鼠精子的活力及睾丸质量／体重与对照组相比明显降低。血清中抗睾丸组织的抗体呈强阳性。光、电镜下可见睾丸形态结构明显改变。结论：睾丸炎动物模型制作成功，其主要病理表现为生精功能发生障碍     

BANF2基因在大鼠睾丸不同发育时期的表达及初步研究

目的 观察大鼠睾丸中BANF2基因在不同发育时期的表达,进而研究该基因在精子发生中可能起的作用.方法 取三组出生后2-65日龄总计21个时间点的Wistar雄性大鼠,从各时间点的睾丸组织中提取总mRNA和总蛋白,并用实时定量PCR、Western blot技术检测BANF2基因在大鼠精子发生过程的表达水平,免疫组化观察...     

长吻海蛇Pelamis platurus(Linnaeus)生殖周期的初步研究

长吻海蛇雄性曲细精管于8月已有生精现象发生,大部分为精母细胞,也有一些精细胞和精子。9月生精功能活跃,产生大量成熟精子。11月生精细胞出现退化现象,生精功能趋缓减弱。精子贮藏于输精管内过冬,供翌年春季交配之用。雌性每年5～6月排卵受精并开始胚胎发育,当年11～12月产仔,每胎仔数1～5条。     

精子发生过程中线粒体的变化

借电子显微镜观察正常人精子发生过程中线粒体的变化以及成年和幼龄大鼠睾丸SDH和LDH组化反应,见不同程度增强,并对精子发生过程中线粒体结构变化与酶的变化作了讨论。     

布氏姜片吸虫精子形成过程

气干法制备布氏姜片吸虫染色体标本,可见精子形成过程各期生殖细胞核及其染色体形态。其精子形成过程与其它复殖吸虫大体相同。精原细胞分裂中期相有14条染色体,减数分裂中期Ⅰ有7条二价染色体,中期Ⅱ有7条单倍体染色体,可根据形态予以区分。本文结果与前人的观察在减数分裂中期Ⅰ、中期Ⅱ以及精原细胞中期染色体的认识上与廖祖荫等(1987)的不一致,就此进行了讨论     

青春期前大鼠实验性睾丸扭转对精子生成影响的研究

目的 研究青春期前大鼠睾丸扭转对精子生成的影响,以推测成熟后的生育能力.方法 40只青春期前雄性SD大鼠随机分为4组,建立单侧睾丸扭转动物模型.第1组为假手术组,第2组为左侧睾丸扭转720°固定2 h后复位,第3组为左侧睾丸扭转720°固定6 h后复位,第4组在扭转6 h复位时经尾静脉注入地塞米松注射液.术后6周观察扭转睾丸形态学变化,记录对侧睾丸质量,行组织学评估、凋亡细胞检测和流式细胞学分析.结果 1、2组对侧睾丸曲细精管结构完整,仅见散在的生殖细胞凋亡.2～4组扭转睾丸均萎缩,硬化.3、4组曲细精管结构不均,凋亡细胞增多.在4项指标上,第2组与第1组比较无统计学差异,对侧睾丸功能未受损;第3、4组可见睾丸质量降低,生殖细胞凋亡增加,单倍体细胞百分比和平均曲细精管直径均降低,分别与第1组比较有显著性差异,说明生殖细胞功能受损,生精功能降低;第3组与第4组比较没有差异,说明地塞米松无保护作用;第3、4组与第2组相比有显著性差异.结论 青春期前大鼠单侧睾丸扭转后,可产生与扭转时间相关的对侧睾丸生精功能受损,生殖细胞凋亡增多可能是生精功能降低的重要原因.地塞米松注射液对睾丸扭转后的对侧睾丸功能受损没有保护作用.     

柳氮磺胺吡啶对大鼠生精功能及精子形态的影响

用流式细胞术测定大鼠睾丸生精过程中各种细胞的相对数量及ＤＮＡ含量变化，并取大鼠附睾尾部精子进行扫描电镜观察。发现柳氮磺胺吡啶（ＳＺ）以３５０ｍｇ／ｋｇ·ｄ－１用药２个月后，可轻度抑制睾丸非生精细胞．使增殖活跃细胞ＤＮＡ含量更趋一致。，但不干扰精子的生成，也不会引起精子遗传物质的改变。精子的颈部结构发生明显破坏性改变，断头精子显著增多（Ｐ＜０．０１）。实验结果显示：ＳＺ对睾丸生精过程无明显干扰，但显然能通过某些途径导致精子形态异常。     

中华蚱蜢精子发生和减数分裂染色体形态变化的观察

介绍了中华蚱蜢Acrida Chinensis(Westw)精子发生细胞减数分裂的标本制作方法,此法效果满意,并用照片详述了精子发生过程中染色体形态的连续变化。     

小鼠睾丸组织培养时间及温度对精子生成影响的观察

为建立小鼠睾丸组织短期培养方法，对成年小鼠睾丸组织进行培养。结果显示：在３４℃条件下培养２４小时，小鼠睾丸组织各级生精细胞和间质细胞发育正常。培养４８小时，曲精小管基底部细胞发生增殖。培养７２小时，曲精小管基底层增殖的细胞向管腔面迁移。在３７℃条件下，生精上皮细胞发生脱落和崩解。结果提示，本研究建立的小鼠睾丸组织短期培养方法能有效减少曲精小管微环境的改变，为进一步建立睾丸组织长期的培养方法奠定基础     

P物质对雄性大鼠生殖激素分泌的影响

目的：研究Ｐ物质（ＳＰ）在不同水平对大鼠黄体生成素（ＬＨ）和睾酮（Ｔ）分泌的影响。方法：下丘脑、腺垂体、睾丸离体组织培养以及顺序灌注，于三级组织培养液中加入不同浓度的ＳＰ，用放射免疫分析法测定培养液中ＬＨ和Ｔ的分泌量。结果：不同浓度的ＳＰ在睾丸水平均可直接抑制Ｔ的分泌（Ｐ〈０．０１），而在腺垂体水平对ＬＨ的分泌则无显著影响（Ｐ〉０．０５）；经顺序灌注后ＳＰ（５０００ｎｇ／１０ｕｌ）可在下丘脑水平间     

基于睾丸体积和血清FSH水平预测睾丸精子含量的研究

目的 通过测定睾丸体积和血清FSH值,预测睾丸抽吸取精结果.方法 依据睾丸体积及血清FSH值,将患者分A、B、C三组行睾丸抽吸,在倒置显微镜下寻找精子.采用x2检验比较各组获取精子的成功率.结果 睾丸体积正常、血清FSH值正常组穿刺成功率为89.4％;睾丸体积偏小、血清FSH值正常组穿刺成功率为31.6％;睾丸体积偏小、血清FSH值明显增高组穿刺成功率为7.7％.结论 睾丸体积值结合血清FSH值对睾丸抽吸取精结果的预测具有指导意义.     

不灌洗法尸体睾丸低温保存的形态学研究

本实验用不准洗法在４ＣＨＣ—Ａ液中保存尸体睾丸的有效时限为８０小时．这表明用不灌洗法进行睾丸移植是可行的，并且具有不存在灌洗相关损伤，简单易行不需要特殊设备等优点，我院已应用此法移植睾丸７例，效果满意．