临床分离产AmpC β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的研究我院临床分离阴沟肠杆菌的产AmpC酶耐药情况及ampC基因型。方法收集临床分离的耐药阴沟肠杆菌15株；检测产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的菌株；测定MIC值；PCR扩增检测ampC基因及序列测定。结果15株菌中8株菌（53．3％）产AmpC酶，3株菌（20．0％）产ESBLs。产AmpC酶的菌株除对亚胺培南全敏感外。对其它抗菌药不同程度耐药。ampC基因与阴沟肠杆菌ECLC074的ampC基因高度同源。结论产AmpC酶是阴沟肠杆菌对阻内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一。阴沟肠杆菌ECLC074 ampC基因是我院主要的阴沟肠杆菌ampC基因型。产AmpC酶的阴沟肠杆菌常呈多重耐药，亚胺堵南是治疗此类菌所致感染的最有效药物。     

阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶基因检测及耐药性分析

目的了解阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶的产生情况，研究β-内酰胺酶的基因型别，并分析产酶特性和耐药表型的相关性。方法用酶提取三维试验检测ESBLs和AmpC酶，聚合酶链反应（PCR）扩增β-内酰胺酶的基因；VITEK全自动药敏分析系统和KB法检测细菌耐药性。结果101株阴沟肠杆菌中，检出ESBLs阳性株39株，高产AmpC酶阳性株53株，其中16株ESBLs和AmpC酶均阳性，非产酶菌25株；12株AmpC酶阳性菌中，7株扩增出blaDHA。基因，8株扩增出6laMIR基因，其中5株同时携带blaDBA．和blaMIR基因，1株同时携带blaMIR和blaFOX基因，4株三维试验阴性菌株blaMIR基因阳性；16株ESBLs阳性菌中，8株扩增出blaTEM基因，2株ESBLs三维试验阴性菌株blaTEM基因阳性，未检出blaSHV基因。阴沟肠杆菌对多种抗生素高度耐药，产酶菌株的耐药性明显高于非产酶株。结论阴沟肠杆菌中ESBLs和AmpC酶检出率均很高，AmpC酶以blaDHA、blaMIR基因型为主。产ESBLs和AmpC酶是阴沟肠杆菌耐药的主要原因。     

肠杆菌科细菌ESBLs和AmpC酶检测及耐药分析

目的 观察肠杆菌科细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和β-内酰胺酶（AmpC）酶检测结果,分析其耐药情况.方法 抽取本院自2010年5月～2012年5月收治的68例患者标本培养的135株肠杆菌,分别经双纸片确证试验与双纸片氯唑西林增效试验检测细菌ESBLs和AmpC酶,并经相关药敏试验观察其耐药性.结果 135株肠杆菌中检出ESBLs菌82株,AmpC酶菌53株,其中单产AmpC酶菌、单株ESBLs菌、产ESBLs及AmpC酶菌对头孢噻肟、氨曲南等药物耐药性明显高于非产AmpC酶菌,P＜0.05;所有肠杆菌耐药率均较高.结论 ESBLs菌和AmpC酶菌作为肠杆菌科细菌耐药重要因素,临床诊断及检测时应高度重视.     

同时产CTX-M-22及TEM-1型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析

目的 了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β-内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测，酶提取物三维实验检测AmpC酶，双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），等电聚焦（IEF）电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增，将β-内酰胺酶全编码基因克隆、表达，并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药，表型检测AmpC酶为阴性。ESBLs阳性，IEF显示该菌产两种p1分别为8．7及5．4的β-内酰胺酶。PCR扩增产物DNA测序证实为CTX-M-22、TEM-1型β-内酰胺酶全编码基因，产TEM-1的克隆菌株仅对青霉素类耐药，产CTX—M-22的克隆菌株对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药。对头孢噻肟的水解程度明显强于头孢他啶。结论临床分离阴沟肠杆菌株EC003同时产CTX—M-22和TEM-1型两种β-内酰胺酶，可导致对多数β-内酰胺类抗生素耐药。     

阴沟肠杆菌仪器法筛选和三维试验法测定阴沟肠杆菌AmpC酶的结果分析

近20年以来,随着三代头孢菌素在临床上大量使用,阴沟肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性不断上升,逐渐成为医院感染的重要病源菌之一。通过染色体自发突变,去阻遏持续高产AmpC酶,是阴沟肠杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制,此菌常引起患者长期、反复、多部位的感染,给临床治疗带来困难。本文对我院2003年1～12月从临床标本中分离的82株阴沟肠杆菌用阴沟肠杆菌（Microscan Walk Away-40）全自动细菌鉴定仪-NC-21复合板耐药谱推测,三维试验确证产AmpC酶的情况进行分析,现报道如下。     

产AmpC酶阴沟肠杆菌耐药的基础与临床

目的 对四川大学华西医院阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的检出率、耐药性及ampC结构基因序列进行分析．探讨阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的耐药性及临床特点。方法 采用琼脂稀释法对临床标本中分离的阴沟肠杆菌进行产AmpC酶株的筛选，用酶粗提物头孢西丁三维试验结合PCR法检测AmpC酶．并测定产AmpC酶菌株对9种抗菌药物的MIC值。对3株高度耐药阴沟肠杆菌产AmpC酶的结构基因和1株敏感菌进行PCR扩增并对产物序列进行分析，测序的菌株与E。cloacae p99进行核苷酸序列比较和推导的氨基酸序列比较。结果 阴沟肠杆菌产AmpC酶株的检出率为24．6％。产AmpC酶菌株多呈多重耐药，产AmpC酶耐药菌对9种抗菌药物的耐药率由高至低为头孢西丁、头孢噻肟、阿米卡星、氨曲南、头孢他啶、头孢哌酮／舒巴坦、环丙沙星、头孢吡肟、亚胺培南。阴沟肠杆菌耐药株ampC结构基因的核苷酸序列与E.cloacae p99的同源性为99％．推导的氨基酸序列仅Ala-58→Pro发生点突变。结论 四川大学华西医院阴沟肠杆菌产AmpC酶细菌检出率较高。产AmpC酶细菌多呈多重耐药，亚胺培南是治疗产AmpC酶细菌感染的较可靠的药物。阴沟肠杆菌产AmpC酶是其对β-内酰胺类抗生素耐药的原因之一，其ampC结构基因突变可能与其耐药性有关。     

阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶的研究进展

阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶是对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制,所产β-内酰胺酶种类较多、特性各异,并在β-内酰胺类抗生素广泛应用的选择压力下,不断有新的β-内酰胺酶产生.文中对阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶(EsBLs、AmpC、碳青霉烯酶)耐药性的研究进展作了简要综述.     

76株阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶的检测

目的 了解临床分离的阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC）及与耐药性的关系。方法 采用纸片表型确证法、表型筛选法与三维试验法分别检测76株临床分离阴沟肠杆菌的ESBLs和去阻遏持续高产AmpC酶,同时用K-B法检测体外药敏结果。结果 在76株阴沟肠杆菌中,纸片表型确证法检出产ESBLs菌株22株,占28．9％;表型筛选法检出产AmpC酶菌株30株,占39．5％;三维试验检出产AmpC酶菌株26株,占34．2％;同时产两种酶菌株4株,两种酶均不产菌株24株。对亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦、头孢吡肟、氨曲南的体外药物敏感率产AmpC酶菌株敏感率分别为100．0％、84．6％、84．6％、76．9％,产ESBLs菌株分别为100．0％、90．9％、54．5％、27．3％。结论 产ESBLs和AmpC酶是阴沟肠杆菌耐药的主要机制,亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦和头孢吡肟对产酶株的效果较好。     

阴沟肠杆菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解阴沟肠杆菌ESBLs和AmpC酶的产生情况及对临床常用抗生素的耐药特征,为临床治疗提供选药参考。方法应用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按NCCLS推荐的确证试验测定ESBLs和K-B纸片法测定药敏结果,采用头孢西丁纸片扩散法对阴沟肠杆菌进行产AmpC酶菌株筛;选,并用酶粗提物进行三维试验确证产AmpC酶菌株。结果阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的检出率为6.19%,并且所检测的7株产AmpC酶的阴沟肠杆菌均为同产ESBLs,目前,我们还未检测到单产AmpC酶菌株。AmpC酶阳性菌株与AmpC酶阴性菌株药敏结果显示：前者大多对头孢西丁、头孢唑啉、氨苄西林、哌拉西林、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星呈高度耐药,而后者大多对上述药物敏感,两者有显著性差异（均P〈0.05）。头孢他啶、头孢噻肟、氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦呈中度耐药。两者对亚胺培南、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦均为敏感。结论玉环地区阴沟肠杆菌产AmpC酶细菌检出率较高。产AmpC酶菌株多呈多重耐药;亚胺培南、头孢吡肟、哌拉西林他唑巴坦是治疗产AmpC酶菌株感染的较可靠药物。     

阴沟肠杆菌β内酰胺酶基因检测

目的 明确浙江湖州解放军第98医院临床分离的阴沟肠杆菌中β内酰胺酶基因存在状况.方法 采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应技术检测质粒型AmpC MIR及DHA、TEM、SHV、CTX-M和OXA β内酰胺酶基因.结果 该20株菌对亚胺培南和美罗培南均敏感,头孢吡肟敏感率为40.0%,对其他β内酰胺类抗生素的耐药率在80.0%～100.0%之间.MIR、DHA和TEM基因的阳性株数（%）分别为17株（85.0%）、1株（5.0%）和14株（70.0%）,而SHV、CTX-M和OXA基因均阴性.结论 临床分离的阴沟肠杆菌中质粒型AmpC MIR及TEM型β内酰胺酶基因携带率很高,在阴沟肠杆菌中检出质粒型AmpC MIR基因为国内首次报道.     

阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱β—内酰胺酶（ESBLs）的检测

目的：去阻遏持续高产AmpC酶,或产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLs),或同时高表达这两类酶,是阴沟肠杆菌对多种β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制。方法：建立了一种改良的酶提取物三维试验法,在常规NCCLS纸片扩散法基础上接种大肠杆菌ATCC25922,在头孢西叮药敏纸片周围放射性切出琼脂小槽,待测菌的粗酶提取物在槽内扩散,与头孢西叮纸片扩散相交。结果：由于AmpC酶水解头孢西叮,出现抑菌圈内生长细菌,这一现象能被加入槽内的邻氯活性,同样用头孢曲松取代头孢西叮纸片,用邻氯西林抑制槽内AmpC酶,可测出ESBLs,使用该法检测分别产AmpC酶、ESBLs的标准株和24株临床分离多重耐药的阴沟肠杆菌。结果各种标准株检测无误。24株阴沟肠杆菌中,14株去阻遏持续高产AmpC酶试验阳性,4相提并论产ESBLs试验阳性,5株此两类酶检测均阳性,1株此两类酶检测均阴性,原因待分析。结论：对于阴沟肠杆菌。这种改良的酶提取物三维试验法能较好地鉴别持续高产AmpC酶和ESBL的阴沟肠杆菌,并适用于临床常规检验。     

阴沟肠杆菌感染154例耐药性分析

目的分析阴沟肠杆菌耐药机理及现状,指导临床合理应用抗生素。方法收集医院分离到的154株阴沟肠杆菌,采用湖南天地人生物科技公司提供的微生物生化药敏卡进行药敏检测;用双纸片协同扩散法检测超广谱β-内酰胺酶;通过改良酶提取物头孢西丁和头孢曲松三维试验检测AmpC。结果阴沟肠杆菌对临床常用抗生素呈高度耐药;产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同时产AmpC酶和ESBLs菌株中尤为严重,96%菌株对亚胺培南敏感。结论阴沟肠杆菌感染的治疗可根据药敏选用氨基糖苷类及喹诺酮类药物,感染严重者可采用碳青霉烯类抗生素。     

AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶在下呼吸道感染细菌检测中的临床研究

目的探讨下呼吸道感染标本常见革兰阴性杆菌分离株中AmpC酶和超广谱β-内酰腔酶（ESBLs）的检出情况。方法 通过酶提取物三维试验检测单产AmpC酶、单产ESBLs、同时产AmpC酶和ESBLs菌株。结果 280株革兰阴性杆菌耐药株中检出单产AmpC酶菌株43株，以阴沟肠杆菌检出率最高。单产ESBLs菌株134株，以肺炎克雷伯菌检出率最高。同时产AmpC酶和ESBLs菌株19株，以阴沟肠杆菌检出率最高。结论 正确区分ESBLs和AmpC酶，对临床选择性用药具有重要的意义。     

阴沟肠杆菌高产AmpC酶基因检测及分子流行病学研究

目的研究医院阴沟肠杆菌高产AmpC酶及分子流行病学特征。方法采用KB法药敏试验，双纸片增效试验和酶提取物三维试验检测阴沟肠杆菌高产AmpC酶，聚合酶链反应检测AmpC酶基因、ERIC-PCR，研究昆明市第一人民医院2002年7月～2004年12月临床分离的84株阴沟肠杆菌的耐药性、AmpC酶基因型和克隆传播状况。结果表型初筛试验和ESBLs确认试验，高产AmpC酶检出率为27．38％（23／84），ESBLs检出率16．67％（14／84），同时高产AmpC酶和ESBLs检出率44．05％（37／84）。AmpC酶基因检出率43．75％（28／64）。三维试验高产AmpC酶检出率为47．62％（40／84）。克隆传播分析，结果发现菌株编号EC2和EC11、EC13和EC14、EC19和EC20分别具有相同的DNA指纹图，其余菌株间未见DNA指纹图。结论阴沟肠杆菌的耐药性较为复杂。表现出去阻遏高产AmpC酶、产ESBLs、同时产AmpC酶和ESBLs和质粒AmpC酶多种耐药表型。分子流行病学结果显示，虽然阴沟肠杆菌的传播与抗生素的诱导和选择作用、患者机体抵抗力下降及肠道内寄居菌的内源性感染等因素有关，但仍然要警惕医院感染的发生。     

阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱b-内酰胺酶（ESBLs）的检测

目的去阻遏持续高产AmpC酶,或产生超广谱b-内酰胺酶（ESBLs）,或同时高表达这两类酶,是阴沟肠杆菌对多种b-内酰胺类抗生素耐药的主要机制。方法建立了一种改良的酶提取物三维试验法,在常规NCCLS纸片扩散法基础上接种大肠杆菌ATCC25922,在头孢西叮药敏纸片周围放射性切出琼脂小槽,待测菌的粗酶提取物在槽内扩散,与头孢西叮纸片扩散相交。结果由于AmpC酶水解头孢西叮,出现抑菌圈内生长细菌,这一现象能被加入槽内的邻氯西林抑制,而ESBLs不能水解头孢西叮,无此现象。因邻氯西林不能抑制ESBLs活性,同样用头孢曲松取代头孢西叮纸片,用邻氯西林抑制槽内AmpC酶,可测出ESBLs。使用该法检测分别产AmpC酶、ESBLs的标准株和24株临床分离多重耐药的阴沟肠杆菌。结果各种标准株检测无误,24株阴沟肠杆菌中,14株去阻遏持续高产AmpC酶试验阳性,4株产ESBLs试验阳性,5株此两类酶检测均阳性,1株此两类酶检测均阴性,原因待分析。结论对于阴沟肠杆菌,这种改良的酶提取物三维试验法能较好地鉴别持续高产AmpC酶和ESBL的阴沟肠杆菌,并适用于临床常规检验。     

革兰阴性杆菌产酶耐药表型的检测

目的 探讨革兰阴性杆菌的产酶表型及耐药分析。方法 分别用纸片扩散法及双纸片协同法检测5282株革兰阴性杆菌中超广谱β-内酰胺酶（extanded spectrum β—lactamases，ESBLs）、头孢西丁初筛试验筛选头孢菌素酶（AmpC酶）。再应用头孢西丁提取物三维试验确认AmpC酶。抗菌药物敏感试验用K—B琼脂扩散法。结果 282株革兰阴性杆菌中检出ESBLs 146株，占51．8％，其中以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌多见，分别为41株（28％）、28株（19．2％）、15株（10．3％）。检出AmpC酶41株，占14．5％，以阴沟肠杆菌、不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为多，分别为12株（29．3％）、6株（14．6％）、5株（12．2％）、3株（7．3％）。同时检出ESBLs和AmpC酶者21株，占7．4％，其中大肠埃希菌7株、肺炎克雷伯菌6株、阴沟肠杆菌5株、不动杆菌3株。大部分产酶菌对临床常用抗菌药耐药。结论 当前耐药产酶菌株已成为患者感染的主要病原菌。     

细菌的耐药机制与对策

随着临床上应用的抗菌药物日益增多，耐药性问题也日益严重，目前已成为全球关注的问题，耐药菌可引起医院感染和社区感染，目前革兰阳性球菌中主要的耐药菌如甲氧西林耐药葡萄球菌（包括金葡萄MRSA和凝固酶阴性葡萄球菌MRCNS），耐青霉素肺炎球菌（PRSP）和耐万古霉素肠球菌（VRE）等，革兰阴性菌中主要的耐药菌（1）产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs)的肠杆菌科细菌，尤其克雷伯菌属和大肠杆菌；92）产AmpC酶的阴沟、沙雷氏和枸橡酶菌。     

医院内G-杆菌产酶检测及耐药性分析

目的了解医院常见G-杆菌的产酶及耐药情况为临床控制感染提供依据。方法收集2002-01～12住院病人分离的对三代头孢菌素至少有一种耐药的易产酶G-杆菌,采用传统K-B法进行药物监测,并使用改良的三维试验法检测细菌产酶情况。结果所监测大肠埃希菌与肺炎克雷伯杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率为94.0%、100%,大肠埃希菌AmpC的检出率为3.0%;易产诱导酶阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、粘质沙雷菌、奇异变形杆菌ESBLs检出率分别为47.0%、86.0%、80.0%、100%、40.0%。其中阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌AmpC酶的检出率为29.0%、14.0%、13.0%;鲍曼不动杆菌AmpC的检出率为33.0%;另外有7.0%的弗劳地枸橼酸杆菌、3.0%的大肠埃希菌产SSBL。亚胺培南是治疗严重易产酶细菌感染的首选药物。结论G-杆菌存在严重耐药,要正确区分细菌产酶机制,为临床控制感染提供正确的依据。     

阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性调查

目的 检测华中科技大学同济医学院附属协和医院临床标本中分离的阴沟肠杆菌产AmpC和ESBLs的情况,同时表达这两类酶的现状及耐药性,指导医生临床用药.方法 采用改良的酶提取物三维试验法,检测该院2006年05月至2007年4月临床分离的89株阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC和ESBLs的情况.结果 在89株阴沟肠杆菌中35株单产AanpC,占39.3%,38株单产ESBLs,占42.7%;12株两酶均产,占13.5%.结论 该院临床分离的阴沟肠杆菌产耐药酶的情况不容忽视,应引起高度重视.医院感染阴沟肠杆菌在临床科室的检出主要以外科呼吸道和皮肤软组织为主,医院感染阴沟肠杆菌的耐药性明显偏高于非院内感染.医院感染阴沟肠杆菌产EsBLs的分离率高,耐药率也较高,应针对它的易感因素,合理用药,防止该菌引起的医院感染.     

耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的：通过对耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检测及其耐药性分析,提示其主要耐药机制,指导临床合理用药.方法：采用氯唑西林增效试验测定AmpC酶,采用双纸片确诊试验测定ESBLs,并采用最小抑菌浓度法（MIC法）检测12种常用抗菌药物对这些菌株的体外抗菌活性.结果：64株受检菌中共检出高产AmpC酶菌29株,产ESBLs菌32株,阳性率分别为45.3%,50%.单产AmpC酶组对氨曲南、头孢曲松、哌拉西林、哌拉西林/三唑巴坦均存在不同程度的耐药（45.2%～68.5%）,其耐药率明显高于非产酶组,两者相比差异具有显著性（P＜0.05）.而单产AmpC酶组和非产酶组对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星、头孢唑林的耐药率均较高（57.7%～94.2%）;对阿米卡星、头孢吡肟、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率均较低（0%～34.6%）,两者相比差异无显著性（P＞0.05）.结论：耐头孢西丁肠杆菌科细菌中AmpC酶的检出率较高,高产AmpC酶细菌多呈多重耐药.临床可采用碳青霉烯类抗菌药物或4代头孢菌素治疗高产AmpC酶菌引起的感染,也可根据药敏试验结果选用头孢哌酮/舒巴坦或阿米卡星等抗菌药物治疗.