孟鲁司特对哮喘豚鼠气道淋巴细胞凋亡及核因子-κB活化的影响

目的:研究白三烯受体阻滞剂孟鲁司特(montelukast,MK)对哮喘豚鼠气道淋巴细胞(lymphocyte,LC)凋亡和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活化的影响及二者相关性,探讨MK阻滞哮喘气道炎症的可能机制。方法:以卵白蛋白致敏豚鼠制备哮喘模型。用密度梯度离心法分离并计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的淋巴细胞;采用TUNEL技术原位检测淋巴细胞凋亡;通过免疫细胞化学染色技术检测NF-κB胞核阳性的淋巴细胞。结果:与模型组相比,MK能显著降低哮喘豚鼠BALF中LC的数量,升高淋巴细胞凋亡率,降低NF-κB胞核阳性率。淋巴细胞凋亡异常与NF-κB激活增加呈显著负相关。结论:MK抑制气道淋巴细胞NF-κB的激活和促进淋巴细胞凋亡可能是其阻滞哮喘气道炎症的一个重要机制。     

孟鲁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞凋亡及Fas mRNA表达的影响

目的研究白三烯受体拮抗剂孟鲁司特(montelukast,MK)对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞(eosinophil,Eos)凋亡和Fas mRNA表达的影响。方法以卵白蛋白致敏豚鼠制备哮喘模型。用密度梯度离心法分离并计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒细胞；采用TUNEL技术原位检测嗜酸性粒细胞凋亡；通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测嗜酸性粒细胞Fas mRNA的表达。结果孟鲁司特能显著降低哮喘豚鼠BALF中Eos的数量；在孟鲁司特治疗组，嗜酸性粒细胞凋亡指数明显升高，Fas mRNA的表达显著增强，与模型组比较均有显著性差异。结论嗜酸性粒细胞凋亡与Fas mRNA表达增加高度相关；增强气道嗜酸性粒细胞Fas mRNA的表达，促进其凋亡，可能是孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的一个重要机制。     

孟鲁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸粒细胞炎症的抑制作用

目的　研究白三烯受体拮抗剂孟鲁司特 (mon telukast,MK )对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞 (Eosinophil,Eos)炎症的影响 ,探讨孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的可能机制。方法　以卵白蛋白致敏豚鼠制备哮喘模型。用密度梯度分离法分离并计数支气管肺泡灌洗液 (BALF)中不同密度的嗜酸性粒细胞 ;采用TUNEL技术原位检测嗜酸性粒细胞凋亡 ;通过ELISA法检测BALF中IL 5的含量 ;采用荧光酶标记法在PharmaciaUnicap 10 0System中测定BALF中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 (ECP)的水平。结果　孟鲁司特能降低哮喘豚鼠BALF中Eos的数量 ;在孟鲁司特治疗组 ,嗜酸性粒细胞凋亡指数明显升高 ,BALF中IL 5和ECP的含量降低 ,与模型组比较差异均有显著性。结论　降低气道IL 5和ECP的水平 ,促进嗜酸性粒细胞凋亡 ,减少嗜酸性粒细胞浸润 ,可能是白三烯受体拮抗剂孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的一个重要机制。     

孟鲁司特对哮喘豚鼠肺血管通透性的影响

目的 研究孟鲁司特（montelukast,MK）对哮喘豚鼠肺血管通透性和肺泡灌洗液（BALF）中一氧化氮（NO）水平的影响,探讨MK拮抗哮喘气道炎症的机制。方法 制备卵白蛋白致敏豚鼠哮喘模型。通过豚鼠引喘潜伏期和跌倒率的变化评价MK对哮喘的拮抗作用;苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织炎症的改变;伊文思蓝分光光度法测定哮喘豚鼠肺血管的通透性;硝酸还原酶法测定BALF中NO的含量。结果 MK治疗组致敏豚鼠引喘潜伏期延长,跌倒率降低,肺组织炎症减轻;肺组织提取液中伊文思蓝含量及BALF中NO含量显著降低,与模型组相比差异有显著性。结论 降低BALF中NO水平和肺毛细血管通透性,是MK拮抗哮喘气道炎症的重要机制。     

地塞米松对哮喘豚鼠气道白介素-5、白介素-10mRNA表达及嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的：检测地塞米松对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素-5（IL-5）mRNA及IL-10 mRNA表达水平及嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡率。方法：健康雄性Hartley系豚鼠随机分为地塞米松组、哮喘组和正常对照组。采用原位细胞凋亡（TUNEL）、RTPCR技术检测BALF中EOS凋亡、IL-5 mRNA及IL-10 mRNA表达水平。结果：地塞米松组BALF中的EOS较哮喘组明显下降，EOS凋亡明显上升（P〈0．01）；IL-5 mRNA水平较哮喘组明显下降，IL-10 mRNA水平较哮喘组明显升高（P〈0.05）。结论：地塞米松可以通过减少IL-5 mRNA的表达，增加IL-10 mRNA的表达有效抑制哮喘豚鼠气道EOS的上升，增加EOS的凋亡。     

异丁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞凋亡的作用及其机制

研究异丁司特 (ibudilast) 对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞 (eosinophil, EOS) 凋亡的作用及其机制。采用卵白蛋白致敏法制备豚鼠哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液 (BALF) 并进行白细胞计数及分类计数, TUNEL技术原位检测EOS凋亡, RT-PCR技术检测EOS的Fas mRNA表达, 酶联免疫吸附 (ELISA) 法测定BALF中粒细胞-巨噬细胞刺激因子 (GM-CSF) 及白介素-5 (IL-5) 的含量。结果表明, 异丁司特可明显减少哮喘豚鼠的白细胞总数和EOS数目; 在异丁司特剂量组, EOS凋亡细胞明显增多, Fas mRNA的表达显著增强, BALF中GM-CSF、IL-5含量显著降低, 与模型组比较有显著性差异。因此, 异丁司特抑制哮喘豚鼠气道EOS数目的增加、诱导EOS凋亡、增强Fas mRNA的表达、降低GM-CSF、IL-5含量可能是其拮抗哮喘的重要机制。     

三氧化二砷治疗哮喘作用机制的实验研究

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞 (EOS)凋亡和核因子 κB(NF κB)表达的影响作用 ,探讨As2 O3 对哮喘可能的治疗机制。方法　豚鼠 2 0只建立哮喘模型后随机分为对照组和As2 O3 (2mg/kg)治疗组。每组 10只 ,采用TUNEL技术原位标记细胞凋亡 ;免疫组织化学染色技术检测豚鼠气道壁NF κB ;计算机图像分析技术对气道壁EOS凋亡和NF κB表达进行定量检测。结果　对照组豚鼠支气管壁EOS凋亡指数为 (0 2 3± 0 0 5 ) % ,整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个NF κB+ 细胞网络 ,其中支气管壁胞核NF κB+ 细胞密度为 (12 6 1± 190 )个 /mm2 上皮面积 ;哮喘豚鼠经As2 O3 处理后 ,支气管壁EOS凋亡指数显著增加 (P <0 0 1) ,胞核NF κB+ 细胞密度显著下降 (P <0 0 1) ,并且气道壁EOS凋亡指数与胞核NF κB+ 细胞密度之间呈显著性负相关 (r =- 0 91,P <0 0 1)。结论　抑制气道NF κB激活 ,促进EOS凋亡 ,可能是As2 O3 治疗哮喘的重要机制之一。     

班布特罗对哮喘豚鼠淋巴细胞核因子-κB表达的影响

目的:探讨β2-受体激动剂班布特罗(bambuterol)对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)淋巴细胞核因子-κB (NF-κB)表达的影响.方法:用卵白蛋白(ovalbumin, OA)建立豚鼠哮喘模型,BALF分离淋巴细胞,采用免疫组化染色方法观察淋巴细胞NF-κB表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定淋巴细胞胞浆IκB含量及BALF中白细胞介素-10(IL-10)水平.结果:与模型组相比,班布特罗可显著增加BALF中IL-10水平及淋巴细胞胞浆IκB含量(P<0.05),降低NF-κB胞核阳性细胞百分比(P<0.05),而且这一作用可被β2-受体阻断剂普奈洛尔拮抗;但IκB含量及IL-10水平仍低于正常对照组(P<0.05),NF-κB胞核阳性细胞百分比仍高于正常对照组(P<0.05).Pearson相关分析显示NF-κB与IL-10之间呈明显负相关关系(r=-0.570,P<0.01).结论:班布特罗通过抑制IκB降解和增加IL-10水平,从而抑制淋巴细胞NF-κB表达,这可能是其抑制哮喘气道慢性炎症的机制之一.     

火把花根片对哮喘豚鼠气道炎症的作用

目的探讨火把花根片对哮喘豚鼠气道慢性炎症的作用。方法建立哮喘豚鼠动物模型 :将豚鼠 2 6只随机分为 3组 ,A组为火把花根组 (9只 ) ,B组为地塞米松组 (9只 ) ,C组为哮喘对照组 (8只 ) ,观测豚鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数量以及蛋白浓度和肺组织病理学的变化。结果A组BALF细胞总数、以嗜酸性粒细胞为主的炎性细胞数量及蛋白浓度均低于C组 (P <0 0 1) ,其肺组织气道慢性炎症表现亦较C组减轻。结论火把花根片可显著抑制哮喘豚鼠的气道慢性炎症     

班布特罗对哮喘豚鼠淋巴细胞核因子-kB表达的影响

目的 :探讨 β2 受体激动剂班布特罗 (bambu terol)对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)淋巴细胞核因子 κB (NF κB)表达的影响。方法 :用卵白蛋白 (ovalbumin ,OA)建立豚鼠哮喘模型 ,BALF分离淋巴细胞 ,采用免疫组化染色方法观察淋巴细胞NF κB表达 ,酶联免疫吸附 (ELISA)法测定淋巴细胞胞浆IκB含量及BALF中白细胞介素 10 (IL 10 )水平。结果 :与模型组相比 ,班布特罗可显著增加BALF中IL 10水平及淋巴细胞胞浆IκB含量 (P <0 .0 5 ) ,降低NF κB胞核阳性细胞百分比 (P <0 .0 5 ) ,而且这一作用可被 β2 受体阻断剂普奈洛尔拮抗 ;但IκB含量及IL 10水平仍低于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,NF κB胞核阳性细胞百分比仍高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。Pearson相关分析显示NF κB与IL 10之间呈明显负相关关系 (r =- 0 .5 70 ,P <0 .0 1)。结论 :班布特罗通过抑制IκB降解和增加IL 10水平 ,从而抑制淋巴细胞NF κB表达 ,这可能是其抑制哮喘气道慢性炎症的机制之一。     

泡桐花挥发油抗支气管哮喘变应性炎症的实验研究

目的通过豚鼠哮喘模型研究泡桐花挥发油抗哮喘气道变应性炎症的作用。方法以卵蛋白致敏豚鼠为动物模型,灌胃途径予以泡桐花挥发油大、小剂量,观察各组豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞和嗜酸性粒细胞(EOS)、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)的改变。结果泡桐花挥发油大剂量[1.2g/(kg.d)]及小剂量[0.6g/(kg.d)]均可不同程度地抑制BALF中的EOS和炎性细胞总数及气道Eotaxin的过度表达。结论泡桐花挥发油可能通过抑制哮喘动物气道中EOS的趋化、聚集而具有一定的抗哮喘气道变应性炎症的作用。     

β-石竹烯醇抑制哮喘豚鼠气道炎症及清除氧自由基作用

建立卵白蛋白（OA）致敏的特异性哮喘豚鼠模型，观察β-石竹烯醇对特异性哮喘豚鼠引喘潜伏期、支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞分类计数、支气管形态病理学改变以及血清和肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）水平的影响。结果表明，β-石竹烯醇灌胃给药，可显著延长特异性哮喘豚鼠引喘潜伏期，减少BALF中各细胞组分，减轻支气管炎症性病理改变；提高哮喘豚鼠血清和肺组织SOD活性、降低MDA水平。抑制气道炎症和清除氧自由基（OFR）可能是β-石竹烯醇平喘作用的机制之一。     

哮喘气道炎症与炎性细胞凋亡

支气管哮喘 (哮喘 )是嗜酸性粒细胞、肥大细胞和淋巴细胞等多种炎性细胞参与的呼吸道慢性炎症。这种气道炎症是哮喘气道高反应性和可逆性气道阻塞的病理基础 ,被认为是哮喘的本质。炎性细胞在气道中的浸润、聚集 ,除了与抗原递呈激活及各种原发性和继发性的炎症介质、细胞因子的趋化、刺激作用外 ,还与其细胞凋亡 (apoptosis)异常有关。近年研究表明 ,炎性细胞 ,尤其是嗜酸性粒细胞和淋巴细胞凋亡异常在哮喘的慢性气道炎症的形成及发展中起重要作用。1　细胞凋亡及凋亡过程1.1　细胞凋亡 :又称程序化死亡 (PCD) ,是一个由基因调控的主动有…     

雷公藤多甙对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的　探讨雷公藤多甙治疗哮喘的机制。方法　应用原位末端标记技术 (TUNEL)、形态学观察 ,观察雷公藤多甙对哮喘豚鼠体内嗜酸性粒细胞 (Eos)凋亡的影响。结果　 (1)哮喘豚鼠体内Eos凋亡率显著低于正常豚鼠 (P <0 0 5 )。 (2 )哮喘豚鼠应用雷公藤多甙治疗后 ,体内Eos凋亡率显著增加 (P <0 0 1) ,并伴随气道炎症和哮喘反应的减轻。结论　诱导哮喘体内Eos凋亡是雷公藤多甙治疗哮喘的重要机制     

银杏叶总黄酮对哮喘小鼠模型支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞凋亡的影响

本研究考察了银杏叶总黄酮(FG)对哮喘小鼠模型支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡的影响。采用卵白蛋白致敏的方法建立小鼠的哮喘模型，雾化给药2周后处死小鼠，收集BALF，白细胞分类计数，纯化细胞后进行AO/EB荧光染色考察FG对EOS凋亡形态的影响，细胞分离后进行流式细胞检测考察FG对EOS凋亡比例的影响。FG可明显减少哮喘小鼠的白细胞总数和EOS数目；FG治疗组EOS凋亡形态的细胞明显增多，凋亡细胞的比例明显增加，与模型组比较有显著性差异。FG能通过诱导EOS的凋亡来减少BALF的EOS数目，可能是FG拮抗哮喘炎症的一个重要机制。     

氮卓斯汀对豚鼠哮喘的拮抗作用及相关机制

目的:研究组胺H1受体拮抗剂——氮卓斯汀(azelastine,AZT)对豚鼠哮喘的拮抗作用,探讨氮卓斯汀拮抗哮喘的可能机制。方法:以卵白蛋白致敏豚鼠,制备哮喘模型,通过豚鼠引喘潜伏期和跌倒率的变化评价氮卓斯汀对哮喘的拮抗作用;分别计数外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞的数量;采用ELISA法检测血清和BALF中IL-4和IL-5的质量浓度。结果:与模型组相比,氮卓斯汀能显著延长致敏豚鼠的引喘潜伏期,降低跌倒率;氮卓斯汀显著减少哮喘豚鼠血清和BALF中嗜酸性粒细胞的数量,降低血清和BALF中IL-4和IL-5的水平。结论:降低IL-4和IL-5的水平,减少血中嗜酸性粒细胞的数量及其在气道中的浸润,可能是组胺H1受体拮抗剂——氮卓斯汀拮抗哮喘的机制之一。     

脱氧胸腺嘧啶核苷与茶碱对哮喘小鼠免疫调节作用的初步研究

目的探讨胸苷和茶碱在小鼠哮喘模型免疫调节中的作用。方法建立小鼠哮喘模型后,将动物随机分成三组,哮喘组、茶碱组及胸苷组。干预后第一、第二、第三周各处死1/3数量的动物。光镜观察其病理变化及支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞学分类;检测肺、脾组织中细胞凋亡情况;BALF上清液测定细胞因子IFN-γ、IL-4。结果与茶碱组相比,胸苷组早期肺部淋巴细胞（LC）和肺泡巨噬细胞（Am s）浸润明显,后期炎症明显恢复,且IFN-γ水平较其他两组均增高。结论胸苷能部分纠正Th2优势应答,对抗炎症反应。     

Vam3抗磷酸组胺致豚鼠哮喘作用的研究

我们以往研究表明,天然二苯乙烯低聚体类化合物Vam3,具有确切的抗炎作用。本实验旨在通过研究Vam3的抗哮喘作用,初步探讨yam3抗慢性阻塞性肺疾病（COPD）的机制。观察Vain3对磷酸组胺致豚鼠哮喘模型的影响,将豚鼠随机分成对照组,阳性药组（孟鲁斯特）,大剂量组（50mg）,小剂量组（25mg）,每组8只。观察各组豚鼠气道病理改变,对支气管肺泡灌洗液（BALF）进行总细胞计数,采用ELIsA法检测豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）及血清中TNFα,IL-4的浓度。研究发现Vam3能够减轻支气管肺泡炎性反应,减少BALF中的炎性细胞总数,抑制肥大细胞脱颗,降低TNFa、IL-4水平。病理结果显示,模型组粘液分泌增多等气道炎症的症状。Vam3给药组及阳性对照组与模型组比较,炎症反应较轻微,对气道炎症有一定的改善作用。表明Vam3通过抑制炎症细胞浸润和炎症细胞因子的生成来发挥抗哮喘作用。拟进一步观察Vam3对气道平滑肌MMP-9表达和气道上皮细胞凋亡以及对气道重塑的影响等,为探讨Vam3抗哮喘作用机理提供实验依据。     

丹皮酚对急性哮喘模型小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素表达的影响

目的观察丹皮酚对急性哮喘小鼠模型气道炎症以及对胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达的影响。方法 BALB/c小鼠48只随机分成正常对照组、哮喘模型组、丹皮酚组、布地奈德组,每组12只。卵蛋白致敏,气道激发,丹皮酚组给予丹皮酚100 mg/kg灌胃,1次/d,末次激发24 h后,检测各组小鼠气道反应性。HE染色观察气道炎症变化;采用ELISA观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13和血清总IgE的表达,real-time PCR观察TSLP的表达,Western-blot观察TSLP蛋白表达。结果哮喘组小鼠气道炎症和气道高反应性明显加重,丹皮酚能够显著抑制慢性哮喘小鼠模型的气道炎症和气道高反应性,哮喘BALF中Th2细胞因子IL-4、IL-13和血清总IgE含量显著降低。丹皮酚治疗后哮喘小鼠肺组织高表达的TSLP的mRNA和蛋白水平显著降低。结论丹皮酚能够抑制哮喘小鼠模型的气道炎症和气道高反应性,其机制可能通过抑制TSLP的的表达而实现。     

母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的 研究母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞凋亡的影响。方法30只豚鼠随机分为对照组、哮喘组及母牛分枝杆菌菌苗组各10只，应用卵清蛋白建立哮喘模型。最后一次激发豚鼠后，计数支气管肺泡灌洗液中炎症细胞，观察肺组织病理改变，应用末端标记法研究肺组织嗜酸性粒细胞的凋亡。结果母牛分枝杆菌菌苗组豚鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量为(0.22±0.12)×108·L^-1，显著低于哮喘组的(1.18±036)×108·L^-1 (P＜0.01)；肺组织哮喘炎症反应明显轻于哮喘组；肺组织嗜酸性粒细胞凋亡指数为(23.8±5.4)%，显著高于哮喘组的(4.6±0.7)%( P＜0.01)。结论母牛分枝杆菌菌苗能减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量，减轻气道哮喘炎症反应，与其诱导哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞凋亡有关。