定量PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及其临床意义

目的:了解不同临床类型乙型肝炎患者HBV DNA含量并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测163例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,应用ELISA法检测上述患者HBV感染血清免疫学标志物(HBV-M),并对两者进行比较。结果:血清HBV DNA水平在不同乙型肝炎临床类型中无显著性差异(P>0.05);与HBV-M对比,HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性病人的检出率为87.76％,HBsAg、抗-HBe、抗HBc病人的检出率为45.71％,HBsAg、抗-HBc病人的检出率为42.86％,抗-HBc单项阳性病人的检出率亦达40.00％;血清HBVDNA含量与黄疸的程度及转氨酶水平的高低未见相关。结论:提示HBV DNA的复制状态与不同乙型肝炎临床类型无明显相关关系;HBV DNA含量高低与肝功能受损程度亦无相关关系。     

抗-HBe阳性患者血清乙型肝炎病毒大蛋白检测

目的 检测乙型肝炎病毒大蛋白( HBV-LP)对抗-HBe阳性慢性乙型肝炎患者病毒复制状况的诊断价值.方法 收集抗-HBe阳性慢性乙型肝炎患者血清308例,分别进行HBV-LP、HBV DNA、PreS1及PreS2检测并进行比较分析.结果 308例抗-HBe阳性患者中,HBV LP、HBV DNA、HBV PreS1和HBV PreS2阳性率分别为58.12％、28.90％、41.88％和40.91％;HBV-LP阳性者与阴性者比较,HBV DNA、PreS、PerS2阳性率差异均有统计学意义(x2分别为17.19、37.12、54.42,P＜0.05); HBV-LP与HBV PreS1、HBV PreS2有82例共同阳性,93例共同阴性.结论 HBV-LP在抗-HBe阳性慢性乙型肝炎患者血清中检测率较高,可以作为临床抗病毒治疗监测的一个良好指标.     

HBeAg、HBV-DNA、前S1抗原相关性分析及其临床意义

了解HBeAg、HBV－DNA及前S1抗原相关性及其临床意义。采用ELISA法检测HBV标志物，PCR法检测HBV－DNA。196例不同模式HBV感染者血清HBV－DNA及前S1抗原的总检出率分别为38．78％和40．30％，二者无明显差异（P＞0．05）。其中44例HBeAg阳性模式感染者HBV－DNA和前S1抗原的检出率分别为88．64％和86．36％，两者无明显差异（P＞0．05）。152例不同模式HBeAg阴性感染者HBV－DNA和前S1抗原的检出率分别为24．34％和26．97％，明显低于HBeAg阳性模式的检出率，二者有显著性差异（P＜0．05）。结论：HBeAg、HBV－DNA及前S1抗原间有着密切的相关性。前S1抗原是病毒复制的又一新标志，且与病程的发展及疗效的观察有着重要的意义。     

动态评价联合检测乙肝病毒前S1抗原与核心抗原的临床意义

目的：探讨联合检测乙肝病毒前S1抗原和核心抗原与HBVDNA的关系以及在乙肝诊疗中的意义。方法：对100例慢性乙肝患者的346份系列血清和486例正常对照血清采用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）进行DNA定量检测,酶联免疫吸附试验（ELISA）进行乙肝病毒前S1抗原和核心抗原的联合检测（检测结果以HBV NRAg表示）及对乙肝血清标志物进行定性检测。结果：342份HBV DNA（＋）的血清中,有338份HBV NRAg检测为阳性,灵敏度为98．8％（95％CI：0．970-0．995）,HBV NRAg特异度为99．6％（95％CI：0．985-0．999）。45例患者的系列血清HBV NRAg的OD均值随着HBVDNA拷贝数降低而下降,且具有一定的相关性（r=0．721）。其中有两位患者的血清标本出现了HBV DNA阴转。此外在46例不明原因肝功能不良患者中,发现3例HBsAg（-）,HBV DNA（＋）的慢性乙肝患者。结论：联合检测乙肝病毒前S1和HBcAg不仅能反映乙肝患者体内HBV复制情况,而且对抗病毒药物在临床的使用具有一定的指导作用。     

血清乙肝病毒大蛋白在HBeAb阳性患者中检测的意义

目的:通过检测慢性乙型肝炎HBeAb阳性患者血清中乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)、乙肝病毒DNA(HBV DNA)、前S1抗原(PreSl)、前S2抗原(PreS2)等4项指标,探讨其相关性,从而了解检测HBV-LP对乙型肝炎HBeAb阳性患者病毒复制状况的诊断价值.方法:收集慢性乙型肝炎患者HBeAb阳性血清308例,分别进行HBV-LP、HBV DNA、PreSl及PreS2的检测并进行比较分析.结果:308例HBeAb阳性患者中,HBV-LP和HBVDNA、PreS1、PreS2之间差异均存在显著性意义(x2=17.19、37.12、54.42,P＜0.05),阳性率分别为58.12％,28.90％、41.88％、40.91％,HBV-LP与PreSl、PreS2有82例共同阳性,93例共同阴性.结论:HBV-LP在慢性乙型肝炎患者HBeAb阳性血清中检测率较高,可以作为临床抗病毒治疗监测的一个良好指标.     

乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测结果的对比分析

我国为乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染高发区．约有１亿人为乙肝表面抗原携带者．ＨＢＶ感染后血清学检测组合的标志模式多且复杂．由于ＰＣＲ方法的引入,可以直接检测病毒核酸（ＤＮＡ）［１］,所以对患者体内ＨＢＶ复制及传染性有了更深刻地认识．然而,由于基层单位开展ＰＣＲ检测受到条件限制,仅以血清学检测结果作为实验诊断依据,可能会出现漏检．因此,将ＨＢＶＤＮＡ与血清学标志物（ＨＢＶＭ）进行对比分析,对临床诊断ＨＢＶ感染及治疗效果的判断具有重要作用．我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ…     

乙肝病毒前S2蛋白的临床研究

新近发现HBV的S区由S、前S_1和前S_2三个基因组成。前S_2蛋白(PreS_2)上具有与人血清多聚白蛋白(PHSA)结合能力和良     

乙型肝炎病毒E抗原、大蛋白与乙肝病毒DNA的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）表面E抗原（HBeAg）、大蛋白（LHBs）与乙肝病毒DNA（HBV DNA）的关系。方法分别检测109例HBeAg阳性和116例HBeAg阴性的乙型肝炎患者的LHBs、HBV DNA表达情况,并进行对比分析。结果 HBeAg阳性组中,LHBs、HBV DNA的检测率分别为89．9％和84．4％,二者比较无统计学差异（P＞0．05）;HBV DNA定量与HBeAg定量和LHBs均呈正相关（r分别为0．81、0．94,P均＜0．05）,不同HBV DNA载量组间HBeAg定量和LHBs含量均有统计学差异（P均＜0．01）。结论对HBeAg阴性患者而言,LHBs能在一定程度上反映体内HBV的复制情况,可作为HBV DNA的补充,指导临床诊治和用药。     

荧光定量PCR与常规PCR检测血清乙型肝炎病毒的对比观察

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）与常规聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒（HBV）敏感性的差异。方法 对105份乙型肝炎患者血清用两种方法检测HBV。结果 常规PCR对10^6-10^9,10^5-10^4和≤10^3copy/ml的血清检测结果有统计学差异。常规PCR检测10^6-10^9copy/ml的血清假阴性率仅5.0%,10^4-10^5copy/ml时假阴性率达36.8%,10^3copy/ml主要为阴性结果，但有6例为阳性或弱阳性（24.0%)。结论 常规PCR对≤10^5copy/ml的血清有较高的假阴性率，比FQ-PCR灵敏度低10-100倍，弱阳性标本FQ-PCR检测也可能出现假阴性结果。     

慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒表面大蛋白水平检测意义探讨

目的探讨慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者血清乙型肝炎病毒表面大蛋白（HBV-LP） 水平差异及意义。方法选取2014年8月~2015 年12月我院诊治的慢性乙型肝炎患者508例,乙型肝炎肝硬化患者74例,原发性肝癌患者29例,采用ELISA 法检测血清HBV-LP水平,采用FQ-PCR法检测血清HBV DNA水平。结果慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者血清HBV-LP阳性率分别为77.2%、82.4%和89.7%,血清HBV DNA阳性率分别为78.9%、83.8%和93.1%;3组血清HBV-LP水平分别为（9.78±4.25）μg/L、（17.24±8.63）μg/L和（38.65±19.38）μg/L,差异有统计学意义（P<0.05）。结论HBV-LP是乙型肝炎病毒感染者血清重要的标记物,与血清HBV DNA存在某种相关性,其检测的意义值得探讨。     

延边地区朝、汉族慢性乙型肝炎患者血清标志物与HBV DNA定量的关系

目的:探讨延边地区朝、汉族慢性乙型肝炎患者血清HBVM表现模式与HBVDNA含量的关系.方法:采用荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测慢性乙肝患者1773例(朝鲜族1074例,汉族699例)血清HBVDNA含量及HBVM,比较分析朝、汉族HBVM表现模式与HBVDNA含量的关系.结果:HBVM表现模式中朝、汉族在A组(HBsAg 、HBeAg 、HBcAb )各占40.69%、47.07%(P<0.01),B组(HBsAg 、HBeAb 、HBcAb )和C组(HBsAg 、HBcAb )各占47.07%,38.34%及7.18%,4.58%(均P<0.05).两个民族A、B组HBVDNA的阳性率(A:93.82%,93.92%;B:47.54%,47.39%)相似,在A组HBVDNA含量主要以高含量(≥1014-1016copies/L,70.73%,72.17%)为主,B组多数以低含量(≥106-1010copies/L,51.64%,51.18%)为主.结论:延边地区朝、汉族HBVM表现模式有明显差异,但HBVDNA的阳性率相似,HBVDNA含量与HBVM表现模式明显相关.     

乙型肝炎病毒L蛋白颗粒的真核表达与纯化

目的:真核细胞中表达和纯化乙肝病毒L蛋白颗粒,并初步分析其物理特性与抗原性.方法:真核表达质粒pSVsigLM~ S~-瞬时转染COS-7细胞,收集48h后的培养上清采用CsCl等密度平衡离心、蔗糖密度梯度超速离心和酶联免疫吸附试验(ELISA)3者结合的方法纯化L蛋白,获得的纯化产物行Western blotting鉴定和透射电镜(TEM)观察.结果:采用超速离心结合ELISA法可以纯化L蛋白,CsCl等密度平衡离心显示在密度约1.21 g/cm~3处富含S抗原性.SDS-PAGE证实产物主要由一种42 kDa的蛋白分子组成,Western blotting证实这种蛋白为同时具有S与PreSl抗原性的L蛋白.透射电镜显示分泌的L蛋白自行组装成约23 nm的球形颗粒.结论:融合外源性信号肽能有效的引导L蛋白的组装和分泌.CsCl和蔗糖超速离心能高效纯化L颗粒并保持其完整的抗原性及颗粒形态.     

联合检测HBV前S1抗原和核心抗原的临床意义

探讨联合检测血清HBV前s1抗原（preSl）和核心抗原（HBcAg）（均为HBV核酸相关抗原，nucleic acids related antigen，HBV NRAg）的意义及临床价值。方法：采用ELISA法对393份HBsAg、HBV DNA双阳性的血清和612份HBsAg阴性血清进行HBV NRAg检测，所有标本均采用多区段巢式PCR确认阳性、阴性，采用荧光定量PCR法进行HBV DNA定量分析。结果：393份HBsAg、HBV DNA双阳性血清中，HBV NRAg阳性为382份，其阳性率为97．2％；612份HBsAg阴性的血清标本中，609份确认为HBV DNA阴性，其中检出2份HBV NRAg阳性，607份为阴性，其HBV NRAg的阴性率为99．7％（607／609），另3份HBsAg阴性血清HBV DNA阳性者，其HBV NRAg均为阳性。结论：联合检测preSl和HBcAg的HBV NRAg可作为临床HBV感染的筛选及判断HBV复制的有意义的补充项目。     

Occult hepatitis B virus infection in Southern African blacks with hepatocellular carcinoma

Background and Aim:  To ascertain the prevalence of occult hepatitis B virus (HBV) infection in southern African blacks with hepatocellular carcinoma.
Methods:  Sera from 118 patients negative for HBV surface antigen but positive for HBV antibodies were studied. HBV-DNA was detected using a nested polymerase chain reaction (PCR) assay and confirmed by nucleotide sequencing of the surface and precore/core genes.
Results:  Surface gene HBV-DNA was detected in a single PCR assay in 48.4% of the patients. Positive results increased to 57.7% after two PCR assays (not significant) and 75.7% after four assays ( P  < 0.001). No false positive results were obtained in these assays or in the 15 control samples for which PCR assays were performed four times. Significant differences in positivity rates were not observed between patients positive for HBV core antibody alone and those positive for core and surface antibodies. The sensitivity of the PCR amplification of the precore/core gene was significantly less than that of the surface open reading frame: the yield of positive results was 23.7% after one assay, 32.2% after two assays (not significant), and 52% after four assays ( P  < 0.001). Combining the results of the assays of the two genes increased the yield of positive results for the first assay (by 11.9%, P  = 0.015), but not the second (6.1%) or fourth assays (4.6%).
Conclusion:  Occult HBV infection is present in the serum of the majority of hepatocellular carcinomas in southern African blacks whose serum is negative for hepatitis B surface antigen but positive for anti-HBV core antigen. The yield of positive results increases if more than one PCR assay is performed.     

乙肝病毒基因型与肝脏病理改变的关系

目的:探讨乙型肝炎病毒基因型与慢性乙型肝炎患者肝脏病理变化的关系.方法:应用乙肝病毒型特异性引物采用巢式聚合酶链反应(PCR)和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR),对北京佑安医院住院92例慢性乙型肝炎患者进行乙型肝炎病毒基因型及亚型分析,参照2000年《病毒性肝炎防治方案》对慢性肝炎进行病理分级、分期诊断.结果:92例慢性乙型肝炎患者中HBV基因型分布为B型17例(B2亚型),B/C混合型17例(B2/Ca亚型),C型58例(Ca亚型).17例HBV B型感染患者中病理诊断肝脏炎症活动分级为G1-G3期分别为35.29%,58.82%,5.88%;肝脏纤维化程度分级为S1-3级分别为58.82%,29.41%,11.76%,17例HBV B/C型感染患者中病理诊断肝脏炎症活动分级为G1-G3期35.29%,52.94%,11.76%;肝脏纤维化程度分级为S1-3级23.52%,52.94%,23.52%,58例HBV C型感染患者中病理诊断肝脏炎症活动分级为G1-G4期31.03%,24.14%,36.21%,8.62%;肝脏纤维化程度分级为S1-4级25.86%,39.66%,5.17%,29.31%;HBV三组不同基因型的慢性乙型肝炎患者肝组织病理检查有统计学意义(x~2=15.13,P<0.01).HBV B型与B/C型感染患者年龄在21-30岁组58%-76%,31-40岁组17.6%-29.4%,C型感染患者年龄在21-30岁组25%,31-40岁组46.6%,40岁以上有24.24%;不同HBV基因型感染患者的年龄分布有显著性差异(x~2=9.54,P<0.05).结论:慢性乙型肝炎患者HBV基因型中C型比例明显高于B型与B/C型.HBV C型患者肝脏病理变化较B型与B/C型严重.不同HBV基因型感染患者的年龄分布不同.     

乙型肝炎病毒HBsAg定量检测的临床意义

HBV感染是一个严重危害人类健康的全球性公共卫生问题.全球约3.5亿人为慢性HBV感染者,其中15%～25%发展为重型肝炎、肝硬化和肝细胞癌,全球每年约有100万人死于HBV感染相关的肝病[1-3].     

e抗原阴性慢性乙型肝炎患者血清表面抗原大蛋白水平与乙型肝炎病毒DNA之间的关系

我国约1／3的慢性乙型肝炎患者乙型肝炎e抗原（HBeAg）阴性，但仍然伴有高水平的乙型肝炎病毒（HBV）复制。在不能进行HBV DNA检测的单位，对这些患者HBV复制程度的判定难以进行。现探讨HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白（LHBs）与HBV DNA的关系，试图明确LHBs是否可以用作HBeAg阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标。     

慢性乙型肝炎病毒感染者家族隐匿性乙型肝炎病毒感染的调查

目的 了解慢性HBV感染者家族隐匿性HBV感染的发生率及其与HBV标志物、年龄和性别等的关系.方法 ELISA方法检测慢性HBV感染者家族成员的HBV血清学标志物,套式PCR法检测136例HBsAg阴性家族成员的血清HBV DNA,并将隐匿性HBV感染者和HBsAg、HBV DNA均阴性者分别作为试验组和对照组进行HBV标志物、年龄、性别和生物化学检测结果的比较.两组均数比较采用t检验.率的比较采用χ~2检验或Fisher确切概率法检验.结果 在52个慢性HBV感染者家族中共检测到92例HBsAg阳性者和136例HBsAg阴性者,其中15例为隐匿性HBV感染者,慢性HBV感染者家族HBsAg阳性率和隐匿性HBV感染的发生率分别为40.4%和11.0%,15例隐匿性HBV感染者中有7例抗-HBc阳性(χ~2=5.341,P=0.02),但隐匿性HBV感染的存在与年龄、性别等无关.结论 HBV感染存在家庭聚集现象,且在其家族中存在隐匿性HBV感染,并在抗-HBc阳性者中发生率较高.     

Clinical significance of hepatitis B surface antigen mutants

Hepatitis B virus (HBV) infection is a major public health problem in many countries, with nearly 300 million people worldwide carrying HBV chronic infection and over 1 million deaths per year due to cirrhosis and liver cancer. Several hepatitis B surface antigen (HBsAg) mutations have been described, most frequently due to a single amino acid substitution and seldom to a nucleotide deletion. The majority of mutations are located in the S region, but they have also been found in the pre-S1 and pre-S2 regions. Single amino acid substitutions in the major hydrophilic region of HBsAg, called the “a” determinant, have been associated with immune escape and the consequent failure of HBV vaccination and HBsAg detection, whereas deletions in the pre-S1 or pre-S2 regions have been associated with the development of hepatocellular carcinoma. This review article will focus on the HBsAg mutants and their biological and clinical implications.