三种刺激因素对髁突软骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：研究1，25（OH）2D3、rhBMP2及IL－1对髁突软骨细胞碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：消化法培养2周新西兰白兔的髁突软骨细胞，用酶动力学方法检测1，25（OH）2D3、rhBMP2、IL－1对该细胞中ALP活性的影响。结果：对照组正常髁突软骨细胞随体外培养时间的延长，ALP活性持续增加。1，25（OH）2D3、rhBMP2作用组细胞ALP活性持续上升；而IL－1作用下细胞ALP活性在经历作用2d内显著上升后开始持续下降，ALP水平明显低于对照组。结论：1，25（OH）2D3和rhBMP2均可刺激髁突软骨细胞中ALP活性上升，但二者的变化特征并不完全相同；而IL－1对髁突软骨细胞中ALP活性具有抑制作用。     

激素和生长因子对人牙乳头细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨激素和生长因子对人牙乳头细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：采用改良酶动力学的方法，测定不同浓度的１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、胰岛素、ＥＧＦ及ＴＧＦ－β在不同时间内对体外培养人牙乳头细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对酶活性有增强作用，并与其浓度及作用时间呈正相关关系；胰岛素、ＥＧＦ和ＴＧＦ－β对酶有抑制作用，随作用时间延长，抑制越明显。结论：激素和生长因子对人牙乳头细胞的碱性磷酸酶作用不同，对人牙乳头细胞的生理功能可能有调节作用     

1，25（OH）2D3对培养人牙乳头细胞Calbindin—D28K表达和矿化能力的影响

目的：研究1,25（OH）2D3对培养人牙乳头细胞Calbindin-D28K（CaB）表达和矿化能力的影响。方法：用10^-8mol/L1,25(OH)2D3矿化液处理长期培养的第28天细胞24h,用放射免疫和免疫组化方法,观察CaB表达和碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OC）的变化。同位素示踪方法观察1,25(OH)2D3对胞外基质^45Ca^2 的影响。结果：加入1,25(OH)2D3后ALP活性约为对照组的4倍;OC含量约为对照组的1.5倍。CaB在培养28d牙乳头细胞及其胞外基质中表达,而在培养14d牙乳头细胞中CaB免疫反应阴性。1,25(OH)2D3可加强CaB表达,并使胞外基质对^45Ca^2 摄取量增加1.5倍。结论：1,25（OH）2D3有促进人牙乳头细胞矿化作用,表现在不仅能刺激OC、ALP的活性,而且可刺激具有分化表型的牙乳头细胞中CaB的合成,增加基质对Ca^2 的摄取。证实促进牙乳头细胞的钙转导是CaB在矿化过程中的作用之一,推测CaB被“俘获”在基质中时有诱导Ca^2 聚集和直接贮存的作用。     

视醛酸对髁突软骨细胞和成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：观察视醛酸（retinoic acid,RA)对髁突软骨细胞（mandibular condylar chondrocyte,MCC)碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP)活性的影响特征。方法：采用胰蛋白酶和胶原酶消化法原代培养1－2周新西兰白兔的MCC,免疫组化方法检测细胞Ⅱ型胶原的表达,检测10^-6mol/L RA和矿化诱导液（10mmol/L β甘油磷酸钠,50μg/mL VitaminC,10^-8mol/L地塞米松）对细胞ALP活性的影响,并以成骨细胞为对照,结果：MCC表达Ⅱ型胶原;RA诱导MCC ALP活性的增加,抑制成骨细胞ALP的活性,但矿化诱导液则同时引起两种细胞ALP活性的增加。结论：RA可以诱导MCC和成骨细胞分化,但存在不同的方式。     

1,25-二羟维生素D_3对MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨 1 ,2 5 二羟维生素D3 (1 ,2 5 dihydroxyvitaminD3 ,1 ,2 5 (OH) 2 D3 )对成牙本质细胞系MDPC 2 3细胞增殖和碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase,ALP)活性的影响。方法 :细胞培养 ,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法。结果 :1 ,2 5 (OH) 2 D3 明显抑制MDPC 2 3细胞增殖 ,而促进MDPC 2 3细胞内碱性磷酸酶活性 ,呈一定的剂量和时间依赖性。结论 :1 ,2 5 (OH) 2 D3 可调节成牙本质细胞增殖和ALP活性 ,在成牙本质细胞增殖和矿化过程中可能发挥重要的作用     

视醛酸对髁突软骨细胞和成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :观察视醛酸 (retinoicacid ,RA)对髁突软骨细胞 (mandibularcondylarchondrocyte,MCC)碱性磷酸酶(alkalinephosphatase ,ALP)活性的影响特征。方法 :采用胰蛋白酶和胶原酶消化法原代培养 1～ 2周新西兰白兔的MCC ,免疫组化方法检测细胞Ⅱ型胶原的表达。检测 10 -6mol/LRA和矿化诱导液 (10mmol/Lβ甘油磷酸钠 ,5 0 μg/mLVitaminC ,10 -8mol/L地塞米松 )对细胞ALP活性的影响 ,并以成骨细胞为对照。结果 :MCC表达Ⅱ型胶原 ;RA诱导MCCALP活性的增加 ,抑制成骨细胞ALP的活性 ,但矿化诱导液则同时引起两种细胞ALP活性的增加。结论 :RA可以诱导MCC和成骨细胞分化 ,但存在不同的方式     

丹参对成骨细胞株MC3T3─E1细胞碱性磷酸酶活性及DNA合成影响的实验研究

选择克隆化成骨细胞株——ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞，采用细胞培养方法，观察细胞内ＤＮＡ合成与碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性，了解丹参对体外培养的成骨细胞生长、分化与代谢的影响。研究结果显示，丹参明显增强ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内ＡＬＰａｓｅ活性，５．０ｍｇ／ｍｌ浓度时，丹参对ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内碱性磷酸酶活性影响最大，比对照组增强约１３５％。丹参这种促进作用只限于分化晚期的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞，而对分化早期细胞内碱性磷酸酶活性产生抑制作用。其次，这种作用还与药物作用时间有关。但是，丹参对各生长分化期的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内ＤＮＡ合成均无影响。本研究结果表明，丹参有明显增强体外培养分化晚期的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内碱性磷酸酶活性的作用，这种作用不是通过促进细胞增殖，而是改善细胞功能实现的，并且受丹参药物浓度与作用时间的影响，说明丹参可能在促进正畸牙齿移动中新生牙槽骨形成方面发挥作用。     

体外培养的成骨细胞中碱性磷酸酶活性的检测方法探讨

检测细胞内碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性是体外研究细胞分化及功能的重要手段。实验根据ＡＬＰａｓｅ活性检测的基本原理，探讨了体外培养的成骨细胞中ＡＬＰａｓｅ活性的检测方法。对９６孔细胞培养成骨细胞，以２００μｌ０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００＋超声破碎细胞，以氢氧化钠终止ＡＬＰａｓｅ分解底物的反应。对人胚成骨细胞而言，细胞裂解产物与底物及０．４ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ的配比比例以４０∶１００∶１００（μｌ）为宜，有较好的灵敏性和可靠性。     

1,25(OH)_2D_3对培养人牙乳头细胞Calbindin-D28K表达和矿化能力的影响

目的 :研究 1,2 5 (OH) 2 D3 对培养人牙乳头细胞Calbindin -D2 8K(CaB)表达和矿化能力的影响。方法 :用 10 -8mol/L 1,2 5 (OH) 2 D3 矿化液处理长期培养的第 2 8天细胞 2 4h ,用放射免疫和免疫组化方法 ,观察CaB表达和碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙蛋白 (OC)的变化。同位素示踪方法观察 1,2 5 (OH) 2 D3 对胞外基质4 5Ca2 的影响。结果 :加入1,2 5 (OH) 2 D3 后ALP活性约为对照组的 4倍 ;OC含量约为对照组的 1.5倍。CaB在培养 2 8d牙乳头细胞及其胞外基质中表达 ,而在培养 14d牙乳头细胞中CaB免疫反应阴性。 1,2 5 (OH) 2 D3 可加强CaB表达 ,并使胞外基质对4 5Ca2 摄取量增加 1.5倍。结论 :1,2 5 (OH) 2 D3 有促进人牙乳头细胞矿化作用 ,表现在不仅能刺激OC、ALP的活性 ,而且可刺激具有分化表型的牙乳头细胞中CaB的合成 ,增加基质对Ca2 的摄取。证实促进牙乳头细胞的钙转导是CaB在矿化过程中的作用之一 ,推测CaB被“俘获”在基质中时有诱导Ca2 聚集和直接贮存的作用。     

1,25-二羟维生素D3对MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3(1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2D3)对成牙本质细胞系MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响.方法:细胞培养,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法.结果:1,25-(OH)2D3明显抑制MDPC-23细胞增殖,而促进MDPC-23细胞内碱性磷酸酶活性,呈一定的剂量和时间依赖性.结论:1,25-(OH)2D3可调节成牙本质细胞增殖和ALP活性,在成牙本质细胞增殖和矿化过程中可能发挥重要的作用.     

1,25-二羟维生素D3对骨髓破骨细胞形成和破骨细胞分化因子mRNA表达的影响

目的：观察不同浓度的1，25-(0H)2D3对骨髓单个核细胞诱导形成破骨细胞和对单个核细胞ODF mRNA表达的影响。进一步阐明骨吸收刺激因子在破骨细胞性骨吸收中的作用机制。方法：应用不同浓度的1，25-(0H)2D3(0、10^-10、10^-8、10^-6moL／L)诱导大鼠破骨细胞的形成，观察形成破骨细胞的数目，并采用原位杂交技术检测骨髓细胞ODF mRNA的表达。结果：随着l，25-(0H)：D，浓度的增加，多核细胞计数增多；ODF mRNA表达的阳性信号显著增强。结论：1，25-(0H)2D3通过调节骨髓细胞ODF mRNA的表达，影响破骨细胞的形成和功能，进而调节局部骨微环境内骨吸收与骨形成平衡的变化，影响骨组织改建。     

人牙乳头细胞分化过程中胞内Ca~(2 )浓度变化和1,25(OH)_2D_3对Ca~(2 )影响

目的 :探讨人牙乳头细胞不同分化阶段和 1,2 5 (OH) 2 D3 作用下细胞内Ca2 的变化。方法 :体外培养人牙乳头细胞 ,利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca2 浓度的变化。结果 :具有某些成牙本质细胞表型的细胞 (2 1d)胞内Ca2 浓度比无分化表型的细胞 (14d)高约 2倍 ;1,2 5 (OH) 2 D3 使 2 1d组细胞胞内Ca2 明显升高 ,而 14d组则无明显变化。结论 :人牙乳头细胞在分化过程中胞内Ca2 浓度上调 ;1,2 5 (OH) 2 D3 能提高牙乳头细胞静息内Ca2 水平以达新的Ca2 稳态 ,促进牙乳头细胞分化     

1,25-(OH)2D3作用下人牙周膜细胞破骨细胞分化因子及破骨细胞发生抑制因子的表达及意义

目的观察1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对体外人牙周膜细胞(HPDLC)破骨细胞分化因子(ODF)mRNA及破骨细胞发生抑制因子(OCIF)mRNA表达的影响,探讨正畸牙周组织改建的分子机制。方法以不同浓度的1,25-(OH)2D3(0、1×10-10、1×10-8、1×10-6mol/L)作用于体外培养的人牙周膜细胞,利用原位杂交染色及RT-PCR检测技术,检测不同浓度的1,25-(OH)2D3作用于体外培养人牙周膜细胞ODF、OCIFmRNA表达的强度变化。结果随1,25-(OH)2D3浓度的升高,人牙周膜细胞ODFmRNA的表达升高,而OCIFmRNA的表达降低。结论1,25-(OH)2D3在体外可影响人牙周膜细胞ODFmRNA和OCIFmRNA的表达,从而通过调节ODF和OCIF相对含量的变化,影响牙周组织改建过程。     

不同浓度1,25-二羟基维生素D3对大鼠正畸牙移动过程中破骨细胞分化因子的影响

目的探讨牙周局部注射不同浓度的1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对大鼠正畸牙移动压力侧破骨细胞分化因子表达的影响,以及相关的作用机制。方法96只成年健康雄性Wistar大鼠随机等量分为对照组、A组、B组和C组。在大鼠上颌左侧第一磨牙与上颌两切牙之间安放加力装置,每隔3d注射药物10μL;对照组注射生理盐水,A组注射10-10mol/L的1,25-(OH)2D3,B组注射10-8mol/L的1,25-(OH)2D3,C组注射10-6mol/L的1,25-(OH)2D3;分别于加力后第1、3、7、14天处死各组中6只大鼠。制取标本后,HE染色观察正畸牙移动牙周膜压力侧破骨细胞的数目、形态以及活性变化,同时运用免疫组织化学染色,检测正畸牙压力侧破骨细胞分化因子(ODF)的表达。结果4组大鼠正畸牙移动压力侧破骨细胞的变化趋势一致,但是B组大鼠压力侧ODF表达在第7、14天显著提高。结论10-8mol/L的1,25-(OH)2D3能更有效地促进大鼠正畸牙的移动过程中ODF的表达,促进破骨细胞的活化。     

不同浓度1,25-二羟基维生素D3对大鼠正畸牙移动速度的影响

目的 研究牙周局部注射3种浓度的1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对大鼠正畸牙移动速度的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠96只,随机分为对照组、A组、B组和C组,每组24只.在大鼠上颌左侧第一磨牙与上颌中切牙之间安放加力装置,每隔3 d注射药物10 μL.对照组注射生理盐水,A组注射10-10 mol/L的1,25-(OH)2D3,B组注射10-8 mol/L的1,25-(OH)2D3,C组注射10-6 mol/L的1,25-(OH)2D3,分别于加力后的第1、 3、 7和14天各组处死6只大鼠.制取标本后测量第一磨牙移动距离.结果 对照组、A组和C组大鼠在正畸牙移动过程中均存在明显的正畸牙移动减慢时期,B组大鼠观察到持续的牙移动而没有移动减慢时期.结论 在大鼠正畸牙移动过程中,应用一定浓度的1,25-(OH)2D3能促进正畸牙的移动. 10-8 mol/L的1,25-(OH)2D3能更有效地促进大鼠正畸牙的移动,避免正畸牙移动过程中缓慢时相的发生.     

不同浓度1,25-二羟基维生素D3对体外培养破骨样细胞骨吸收作用的影响

目的:观察不同浓度的1,25-二羟基维生素D3对体外培养破骨样细胞骨吸收作用的影响.进一步阐述骨吸收刺激因子在正畸牙周组织改建中的作用.方法:应用不同浓度的1,25-二羟基维生素D3(0、10-10、10-8、10-6mol/L)诱导大鼠骨髓破骨样细胞的形成,观察细胞在牙本质片上形成骨吸收陷窝的数目以及陷窝面积的大小;并采用原位杂交技术检测大鼠骨髓细胞的ODF mRNA表达.结果:随着1,25-二羟基维生素D3浓度的增加,骨陷窝数明显增多,陷窝面积增大;ODF mRNA表达的阳性信号显著增强.结论:在体外,1,25-二羟基维生素D3可以调节大鼠骨髓破骨样细胞的形成及骨吸收活性.     

Effects of 1,25 - （OH） 2 D3 on Stimulation of Osteoclast - like Cells Formationand Expression of ODF mRNA in Murine Marrow Cells in Vitro

目的：观察不同浓度的1，25-(OH)2D3对破骨细胞形成及对骨髓细胞ODFmRNA表达的影响：进一步阐明骨吸收刺激因子在正畸牙周组织改建中的作用。方法：应用不同浓度的1，25-(OH)2D3(0、10^-10、10^-8、10^-6mol／L)诱导大鼠骨髓细胞破骨样细胞的形成，采用体外破骨细胞溶骨模型，观察牙本质片上骨吸收陷窝数目，采用原位杂交技术检测骨髓基质细胞ODF的mRNA表达。结果：随着1，25-(OH)2D3浓度的增加，骨陷窝数明显增多，陷窝面积增大；ODF mRNA表达的阳性信号显著增强。结论：在体外，1，25-(OH)2D3可以调节破骨细胞的骨吸收活性，进而调节局部骨微环境的骨吸收及骨形成平衡的变化。     

内源性1,25（OH）2D3缺乏对哺乳期小鼠牙齿矿化和牙本质形成的影响

目的:研究内源性1,25(OH)2D3缺乏对哺乳期小鼠牙齿矿化和发育的影响。方法:利用X线检测、HE染色、组织化学、免疫组织化学以及real-time RT-PCR等方法检测2周龄同窝的WT和1α(OH)ase-/-小鼠下颌牙齿。结果:和2周龄WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-小鼠下颌磨牙的X线透光率明显增加;1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙及下颌切牙前期牙本质厚度与WT小鼠厚度有统计学差异。1α(OH)ase-/-小鼠下颌磨牙总胶原阳性面积与WT小鼠有统计学差异;1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙牙本质I型胶原阳性面积与WT小鼠有统计学差异(P<0.05);OCN在1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙的牙本质和牙髓相对阳性面积与WT小鼠相对阳性面积有统计学差异(P<0.01);Biglycan在1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙的牙本质相对阳性面积与WT小鼠相对阳性面积有统计学差异(P<0.01);OCN与ALP在1α(OH)ase-/-小鼠下颌切牙牙髓细胞中mRNA的表达水平较WT小鼠有明显降低,有统计学差异(P<0.05)。结论:内源性的1,25(OH)2D3缺乏导致哺乳期小鼠牙齿的牙本质矿化不良和牙本质的形成减少。     

Vitamin D and tissue non-specific alkaline phosphatase in dental cells

Dental epithelium comprises different cell populations, including ameloblasts and stratum intermedium cells. Ameloblasts are vitamin D targets, and at least five proteins undergo specific modulation of their expression following the addition of 1 α ,25(OH)₂ vitamin D₃[1 α ,25(OH)₂D₃]. Stratum intermedium cells have not been studied in any great detail regarding vitamin D impact. Interestingly, in these cells, the tissue non-specific alkaline phosphatase (TNAP) is overexpressed. On the other hand, TNAP is a reliable bone marker of vitamin D action, similar to calbindins in kidney and intestine, previously used for studies of vitamin D activity in ameloblasts. Here, TNAP expression and activity were investigated in vivo in the microdissected epithelium and mesenchyme of mandible incisors. Physiological doses of 1 α ,25(OH)₂D₃ injected in control rats failed to modify TNAP activity in both dental epithelium and mesenchyme. No significant differences were observed in the steady-state levels of TNAP mRNAs of dental tissues from wild-type and vitamin D nuclear receptor (VDRnuc)-deficient mice of the same litters. These data suggest that, in contrast to ameloblasts, stratum intermedium cells are not sensitive to 1 α ,25(OH)₂D₃. An explanation for such a responsiveness of stratum intermedium cells to 1α,25(OH)₂D₃ is proposed based on the respective expressions of both vitamin D receptors (VDRnuc and 1,25D₃-[MARRS]) and the Dlx2 homeobox gene.