血小板TLR4表达在脓毒症血小板减少症发病中的作用

目的 明确脓毒症血小板表达Toll样受体4(TLR4)变化与血小板活化的关系及对预后的影响.方法 前瞻、对照的临床试验设计.选天津市第一中心医院ICU 2008年5月至2009年12月收治的脓毒症患者64例,除外恶性肿瘤、免疫系统疾病、心肺复苏后、终末期肝或肾功能衰竭及入院24 h内死亡等患者.门诊查体健康志愿者15例为对照组,比较健康对照组和脓毒症组入院时和第3,5,9天外周静脉血血小板计数(PC)及参数(MPV,PDW)、血小板TLR4表达、血小板活化膜糖蛋白GPIⅠb/Ⅲa的PAC-1表达、血浆sCD40L及TNF-α浓度变化及关系;脓毒症组中分为血小板减少症即TCP组(至少1次低于150×109 L-1,27例)和非TCP组(37例),比较两组治疗前后(入院时及入院第9天)TLR4,PAC-1,sCD40L和TNF-α及APACHEⅡ评分、ICU住院时间、出血发生率以及28 d死亡率差异.基于时间测量组间数据比较采用可重复测量的单因素方差分析,两组间参数的比较采用独立样本t检验,计数资料进行x2检验.结果 与健康对照组比较,脓毒症组PC减低(P=0.006),伴随MPV,PDW增大(P=0.046,P＜0.001);血小板FLR4及PAC-1表达同时上调(P＜0.001),且两种受体变化正相关;血浆中sCD40L和TNF-α浓度显著上升(P＜0.001).TCP组PAC-1表达、TNF-α浓度治疗前后均高于非TCP组(P=0.023,P=0.011);治疗后TCP组sCD40L、血小板TLR4表达显著高于非TCP组(P=0.047,P=0.001).TCP组比非TCP组出血发生率高(P=0.024)、ICU住院时间长(P=0.013)、APACHEⅡ评分高(P＜0.01)、28 d病死率高(P=0.048).结论 脓毒症患者血小板TLR4表达上调及伴随的血小板活化与脓毒症血小板减少症发病密切相关,脓毒症并发TCP可能是预后不良标志.

Abstract：

Objective To unravel the relationship between Toll-like receptor 4 (TLR4) expression in platelets and the activation of platelet in thrombocytopenia (TCP) in case of sepsis. Method A total of 64 patients with sepsis were prospectively studied with control. Platelet count (PC), mean platelet volume (MPV),platelet distribution width (PDW),platelet TLR4 expression, platelet PAC-1 expression, sCD40L and TNF-α concentrations were compared between healthy control group (15 cases) and sepsis group on admission and 3 d,Sd,and 9 days after admission. The changes of MPV and PDW in TCP and non-TCP subgroups of sepsis before and after treatment were recorded. Prognostic index was analyzed. Results The PC was lower in sepsis group (P=0.006), and MPV and PDW were higher in sepsis group than those in healthy control group (P = 0.046, P =0.001). Platelet TLR4 and PAC-1 expressions, and sCD40L and TNF-α levels also increased more significantly in sepsis group (P ＜ 0.001). PAC-1 expression and TNF- level were higher in TCP group than those in non-TCP group before and after treatment (P = 0.023, P = 0.011). The sCD40L concentration and platelet TLR4 expression were significantly higher in treated TCP groups than in non-TCP group (P = 0.047, P = 0.001). Compared with non-TCP,the rate of bleeding was higher (P = 0.024) and the length of ICU stay was longer (P = 0.013).The APACHE Ⅱ score and the 28-day mortality were higher in TCP group (P ＜ 0.01, P = 0.048). Conclusions The elevation of platelet TLR4 expression in sepsis along with platelet activation is closely related to the incidence of thrombocytopenia. The occurrence of TCP is a poor prognosis sign of sepsis.     

血小板TLR4表达介导LPS诱导的血小板活化

本研究探讨人血小板Toll样受体4（toll—like receptor4,TLR4）表达及其在细菌内毒素脂多糖（lipopolysaccsharide,LPS）诱导血小板活化中的作用。对15例健康人肘静脉抽血各20ml,制备富含血小板血浆（PRP）和血小板悬液,在有或无凝血酶作用的基础上加入LPS（0．2μg/ml）孵育30分钟,分别用流式细胞术和免疫印迹（Western blot）方法检测LPS作用前后血小板TLR4、CD62P和CD40L的表达。结果表明：流式细胞术检测静止血小板TLR4表达为25．44％,凝血酶刺激后明显升高（32．34％,P〈0．05）,LPS继续作用后TLR4的表达进一步增高（39．16％,P〈0．01）;在无凝血酶刺激下,LPS作用血小板后TLR4的表达接近于凝血酶刺激后结果。Westernblot方法检测结果与流式细胞术相符;血小板CD62P和CD40L表达（流式细胞术）在静止血小板分别为6．39％和2．45％,凝血酶刺激后明显增高,分别为42．68％和14．8％,LPS进一步刺激后表达率进一步升高,分别为63．03％和13．94％,均明显高于仅用凝血酶的刺激组（P〈0．001）;抗TLR4抗体显著抑制了LPS诱导的血小板TLR4、CD62P、CD40L表达,但不影响凝血酶诱导的血小板膜CD62P、CD40L表达。结论：人血小板能够表达功能性TLR4,它直接参与了机体针对细菌的固有免疫反应。     

血小板参数在血小板减少症鉴别诊断中的价值探讨

目的 探讨血小板参数在鉴别骨髓性和非骨髓性血小板减少症中的作用.方法 使用Cell-Dyn3700血细胞分析仪检测血小板减少症(TP)76例、特发性(免疫性、原发性)血小板减少性紫癜(ITP)66例、继发性血小板减少性紫癜(STP)8例、获得性纯巨核细胞再生障碍性血小板减少性紫癜(AATP)8例、造血干细胞疾病(HSCD)(急性白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征)140例、健康体检者100例(对照组)的血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板压积(PCT)、血小板分布宽度(PDW).结果 ①与对照组相比,HSCD患者的MPV显著减少,PDW明显增加;STP患者MPV、PDW显著增大.②AATP患者MPV正常,PDW增大.③ITP组和TP组与对照组的MPV、PCT、PDW差异有统计学意义(均P＜0.01).④HSCD组与对照组、ITP组和TP组比较,MPV、PCT和PDW差异有统计学意义(均P＜0.01).⑤骨髓性TP组与非骨髓性TP组比较,其MPV和PDW均有统计学意义(均P＜0.01).⑥当ITP患者治疗有效时,PLT升高,其MPV和PDW下降.结论 通过观察MPV和PDW数值的升降,特别是MPV的变化可初步判断血小板减少是由骨髓病变(MPV＜参考值)还是由骨髓外病症(MPV＞参考值)所引起.另外,当ITP患者治疗有效时,可用PDW和MPV较早地(比PLT提前5 d)观察到疗效.血小板参数的动态观察有助于ITP的鉴别诊断、病情判断及疗效观察.     

脓毒症患者血小板参数与Toll样受体4表达的关系及中西医结合治疗研究

目的 观察西药联合加味凉膈散对脓毒症患者血小板参数变化及活化状态与血小板Toll样受体4(TLR4)表达、炎症反应变化的影响.方法 64例脓毒症患者依据“不平衡指数最小的分配原则”随机分为西医常规治疗组(X组,32例)和西医联合加味凉隔散组(L组,32例),比较两组患者入院时及治疗3、5、9d的血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血小板TLR4阳性表达率、血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa的半胱天冬酶原活化复合物-1(PAC-1)表位阳性表达率及血浆可溶性CD40配体(sCD40L)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度变化,以及急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHE Ⅱ)评分、重症监护病房(ICU)住院时间、出血事件及28d病死率.以同期15例健康体检者作为对照组(C组).结果 与C组比较,脓毒症患者PLT(×109/L)显著降低(211.37±77.84比272.33±34.23,P＜0.01),MPV(fL)、PDW (fL)均显著增大(MPV:10.24土0.81比9.64±0.66;PDW:17.79±1.68比15.61±1.54,P＜0.05和P＜0.01),伴有血小板TLR4及PAC-1表达上调[TLR4:(39.93±9.07)%比(23.50±4.68)%,PAC-1:(42.21±8.74)%比(21.02±3.49)%,均P＜0.01],血浆中sCD40L (μg/L)和TNF-α(ng/L)浓度显著上升(sCD40L:6.94±1.05比3.27±0.41;TNF-α:60.10±9.77比4.08±3.08,均P＜0.01).治疗后9d,L组肝肾功能、TLR4和PAC-1表达及血浆sCD40L、TNF-α浓度较X组显著降低[肌酐(μmol/L):106.2±34.4比127.5±43.7;丙氨酸转氨酶(U/L):31.7±12.5比41.9±19.9;天冬氨酸转氨酶(U/L):54.1±21.6比68.5土24.1;TLR4:(27.14±6.08)%比(30.92±5.47)%;PAC-1:(27.52±6.51)%比(31.24±5.77)%;sCD40L:3.86±0.69比4.38土0.73; TNF-α:22.06±7.19比28.25±8.99,P＜0.05或P＜0.01],PLT(×109/L)较X组显著升高(261.93±55.32比231.37土63.58,P＜0.05).相关性分析显示:脓毒症患者血小板PAC-1表达与PLT呈负相关(r=-0.409,P＜0.01),与MPV、PDW、血小板TLR4表达、血浆sCD40L水平呈正相关(r1=0.262,r2=0.318,r3=0.341,r4=0.519,均P＜0.01);sCD40L与TNF-α呈正相关(r=0.542,P＜0.01).L组ICU住院时间(d)明显短于X组(8.06±2.86比9.31±2.48,P＜0.05),出血发生率低于X组(12.5%比21.9%,P＜0.05),9 d APACHEⅡ评分(分)显著低于X组(12.75±4.56比14.59±3.97,P＜0.05).L组与X组28 d病死率差异无统计学意义(15.63%比18.75%,P＞0.05).结论 脓毒症炎症反应常伴有血小板TLR4表达上调、血小板活化及PLT减少;西医联合加味凉膈散可通过下调血小板TLR4表达、减少血小板活化及炎症介质的释放,从而改善脓毒症患者血小板减少状态.     

LPS刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体(TLR)4及肿瘤坏死因子α表达的变化

革兰阴性菌败血症休克的发生主要是因为免疫系统对细菌LPS应答,产生过量细胞因子和炎性介质从而引起组织和器官损害。研究发现与果蝇Toll蛋白类似的哺乳动物Toll样受体家族在宿主防御中起重要作用,其中TLR4介导针对LPS的免疫应答。它们对病原体的保守结构产生应答并且激活单核细胞和中性粒细胞产生细胞因子和炎性介质。本研究观察LPS刺激后体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR4表达及最重要的炎性细胞因子之一的肿瘤坏死因子α分泌水平的变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞（Mφ）,细胞分为6组,分别加入LPS使其终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml,5%CO2,37℃孵育2h。流式细胞术测定Mφ表面TLR4的表达。同时取培养液上清采用ELISA方法检测TNFα。实验重复三次。结果①经0.01μg/mlLPS刺激的MφTLR4-PE阳性率与0μg/mlLPS组相比,P〈0.05。其它浓度刺激组TLR4阳性率则与对照组无差异,P〉0.05。Mφ细胞TLR4MFI随着LPS浓度的升高而增强,除了10μg/mlLPS组,其余各组MFI与对照组相比,P〈0.05。②随着LPS浓度增加,TNFα分泌量逐渐升高,呈剂量依赖关系。但当LPS浓度达10μg/ml时,TNFα分泌量下降。结论LPS能够诱导Mφ胞膜表面TLR4表达和TNFα分泌升高,并且在一定浓度范围内呈量-效关系.     

TLR4基因的shRNA对内毒素刺激下RAW264.7细胞TLR2表达的影响及机制

目的 观察针对Toll样受体4的发夹结构RNA(short hairpin RNA,shRNA)对内毒素刺激后小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞Toll样受体2表达的影响,并探讨其机制.方法 将携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及shRNA克隆位点的质粒pEGFP/TLR4-siRNA,运用脂质体Lipofectamine2000转染至小鼠巨噬细胞系RAW264.7.转染24 h后予新霉素(G418)筛选获取稳定转染细胞株.然后将细胞分为三组:空白组(Blank group),未转染细胞LPS刺激组(LPS group)和稳定转染细胞LPS刺激组(LPS-TLR4-siRNA group),采用荧光定量PCR及流式细胞学方法检测各组细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达,Western blot检测NF-κB p65的表达,同时用ELISA方法检测细胞分泌的TNF-α水平的变化.结果 将pEGFP/TLR4-siRNA转染至RAW264.7细胞后,增强型荧光蛋白的表达为(45.25±9.23)%.LPS-TLR4-siRNA组细胞的TLR2mRNA及蛋白的表达均明显低于LPS组(P＜0.05),同时NF-κB p65表达下调及分泌TNF-α的水平下降(P＜0.01).结论 针对TLR4 mRNA的shRNA能降低LPS刺激下的RAW204.7细胞TLB2的表达.     

LPS刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体(TLR)4及肿瘤坏死因子α表达的变化(英文)

革兰阴性菌败血症休克的发生主要是因为免疫系统对细菌LPS应答,产生过量细胞因子和炎性介质从而引起组织和器官损害。研究发现与果蝇Toll蛋白类似的哺乳动物Toll样受体家族在宿主防御中起重要作用,其中TLR4介导针对LPS的免疫应答。它们对病原体的保守结构产生应答并且激活单核细胞和中性粒细胞产生细胞因子和炎性介质。本研究观察LPS刺激后体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR4表达及最重要的炎性细胞因子之一的肿瘤坏死因子α分泌水平的变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞(Mφ),细胞分为6组,分别加入LPS使其终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml,5%CO2,37℃孵育2h。流式细胞术测定Mφ表面TLR4的表达。同时取培养液上清采用ELISA方法检测TNFα。实验重复三次。结果①经0.01μg/mlLPS刺激的MφTLR4-PE阳性率与0μg/mlLPS组相比,P<0.05。其它浓度刺激组TLR4阳性率则与对照组无差异,P>0.05。Mφ细胞TLR4MFI随着LPS浓度的升高而增强,除了10μg/mlLPS组,其余各组MFI与对照组相比,P<0.05。②随着LPS浓度增加,...     

TLR4在肾移植受者中的表达及其临床意义

目的:研究肾移植患者术后早期外周血单核细胞中Toll样受体4(TLR4)的表达改变及其与急性排异反应的关系.方法:首次接受肾移植手术受者60例,流式细胞术测定受者肾移植术前及术后第7、14、21天外周血单核细胞TLR4、CD80表达的百分率;根据肾移植术后两周内发生排斥与否将患者分为排斥组(13例)和非排异组(47例).20例健康成年志愿者标本为正常对照组.急性排异反应诊断标准依据临床表现、实验室检查、超声及移植肾穿刺活检等综合判断.结果:术前外周血单核细胞中TLR4、CD80即有表达,TLR4与对照组相比有统计学意义;术后1周两者表达到达顶峰,其后逐渐下降,排斥组外周血单核细胞TLR4、CD80表达峰值较肾功能正常组明显升高(P＜0.05),且持续时间较长.结论:TLR4、CD80在肾移植术后早期表达升高,并可增加肾移植术后急性排斥反应发生的风险.     

MCV、RDW及血小板4项参数在肝病诊断价值中的评价

目的探讨肝病患者红细胞平均体积(MCV)、红细胞体积分布宽度(RDW)、血小板的4项参数变化与病情的关系.方法应用ABBOTT公司生产的CD-1600全自动血细胞分析仪检测181例肝病患者和100例健康者为对照组.结果(1)肝硬化组、慢乙肝组、急性肝炎组MCV、RDW、MPV均显著高于对照组(P＜0.01),PLT、PDW、PCT均显著低于对照组(P＜0.01);(2)MCV、RDw、MPV之间成正相关关系,PLT、PDW、PCT之间亦成正相关关系,MCV、RDW、MPV与PLT、PDW、PCT之间成负相关关系.结论(1)MCV、RDW可以反映肝病病情的轻重和肝功能损害程度;(2)血小板4项参数测定为肝病患者血小板功能的初步评价提供了简便、快速、可靠的方法.     

Role of platelet TLR4 expression in pathogensis of septic thrombocytopenia

BACKGROUND:

Infection-induced thrombocytopenia (TCP) is an independent risk factor for death of patients with sepsis, but its mechanism is unknown. This study aimed to explore the underlying mechanism of TCP based on the relationship between TLR4 expression and platelet activation in septic patients.

METHODS:

A total of 64 patients with sepsis were prospectively studied. Platelet count (PC), mean platelet volume (MPV), platelet distribution width (PDW), platelet TLR4 expression, platelet PAC-1 expression, sCD40L and TNF-α concentrations were compared between the healthy control group (15 volunteers) and sepsis group (64 patients) at admission and on the 3, 5, and 9 days after admission. The changes of MPV and PDW in the TCP and non-TCP subgroups of sepsis before and after treatment were recorded. Prognostic index was analyzed.

RESULTS:

PC was lower in the sepsis group (P=0.006), and MPV and PDW were higher in the sepsis group than those in the healthy control group (P=0.046, P=0.001). Platelet TLR4 and PAC-1 expressions, and sCD40L and TNF-α levels increased more significantly in the sepsis group (P<0.001). PAC-1 expression and TNF-α level were higher in the TCP group than in the non-TCP group before and after treatment (P=0.023, P=0.011). sCD40L concentration and platelet TLR4 expression were significantly higher in the treated TCP group than in the non-TCP group (P=0.047, P=0.001). Compared to the non-TCP group, the rate of bleeding was higher (P=0.024) and the length of ICU stay was longer (P=0.013). The APACHE II score and the 28-day mortality were higher in the TCP group (P<0.01, P=0.048).

CONCLUSIONS:

The elevation of platelet TLR4 expression in sepsis along with platelet activation is closely related to the incidence of thrombocytopenia. The occurrence of TCP is a sign of poor prognosis in sepsis patients.KEY WORDS: Sepsis, Thrombocytopenia, Toll-like receptor, Platelet activation, Glycoprotein IIb/IIIa, Soluble CD40 ligand, β-Thromboglobulin, Tumor necrosis factor-α, Interleukin-8     

阻断toll样受体对脂多糖致急性肺损伤的保护作用

目的：本文旨在探讨阻断toll样受体（TRL4）对脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法将60只健康雄性清洁级SD大鼠分为正常组、损伤组和阻断组,每组20只。损伤组大鼠采用尾静脉注射LPS（6mg/kg）复制ALI模型;阻断组同时注射TLR4抗体（10mg/mL）;正常组给予等容积生理盐水。3h后处死大鼠,采用凝胶滞留法检测核因子-κB（NF-κB）活性;Westernblot印记分析法检测抑制蛋白（IκB-α）水平;检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α细胞因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-10（IL-10）水平。结果与正常组相比,损伤组和阻断组肺组织湿质量/干质量比值增高,NF-κB活性升高,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平升高（P＜0．05）,而IL-10水平降低（P＜0．05）。而比较损伤组与阻断组发现,阻断组肺组织湿质量/干质量比值降低,NF-κB活性降低,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平明显低于损伤组（P＜0．05）,IL-10水平高于损伤组（P＜0．05）。结论采用抗TLR4单克隆抗体阻断TLR4介导的信号传导可明显降低NF-κB活性和IκB-α、TNF-α、IL-1β水平,同时提高IL-10水平阻断TLR4,对LPS致ALI有一定的保护作用。     

MCV、RDW及血小板4项参数在肝病诊断价值中的评价

目的 探讨肝病患者红细胞平均体积（MCV）、红细胞体积分布宽度（RDW）、血小板的4项参数变化与病情的关系。方法 应用ABBOTT公司生产的CD－1600全自动血细胞分析仪检测181例肝病患者和100例健康者为对照组。结果 （1）肝硬化组、慢乙肝组、急性肝炎组MCV、RDW、MPV均显著高于对照组（P＜0．01），PLT、PDW、PCT均显著低于对照组（P＜0．01）；（2）MCV、RDW、MPV之间成正相关关系，PLT、PDW、PCT之间亦成正相关关系，MCV、RDW、MPV与PLT、PDW、PCT之间成负相关关系。结论 （1）MCV、RDW可以反映肝病病情的轻重和肝功能损害程度；（2）血小板4项参数测定为肝病患者血小板功能的初步评价提供了简便、快速、可靠的方法。     

脂多糖对间充质干细胞Toll样受体4基因的表达水平及活性的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)对骨髓间充质干细胞(MSC)Toll样受体4(TLR-4)基因的表达及其功能的影响.方法 采用贴壁培养和密度梯度离心法从大鼠骨髓分离MSC,通过细胞形态、成骨分化潜能及流式细胞术检测表型以鉴定其纯度;半定量RT-PCR和流式细胞术分别检测MSC在不同浓度(1、10、100 μg/ml)LPS存在条件下培养24 h的TLR-4 mRNA相对表达量和共刺激分子(CD80、CD86、MHC-Ⅱ)的表达水平;ELISA法定量检测TNF-α的分泌水平.结果 骨髓MSC低表达TLR-4mRNA(相对表达量0.61±0.10),同时表达CD80[(9.56±0.69)%]、CD86[(22.03±2.03)%]、MHC-Ⅱ[(2.51±0.97)%],少量分泌TNF-α[(4.97±2.98)pg/ml].MSC经LPS处理后,其TLR-4mRNA、共刺激分子表达和TNF-oα分泌水平均升高,其中10 μg/ml LPS培养组升高显著,TLR-4 mRNA相对表达水平为1.55±0.02;CD80、CD86、MHC-Ⅱ阳性细胞率分别为(41.70±2.92)%、(59.72±2.00)%、(24.56±2.19)%;TNF-α分泌水平为(213.12±69.08)pg/ml,与对照组比较,P值均＜0.01.100μg/ml LPS处理组与10 μg/mlLPS处理组相比,各项检测指标均降低,但MHC-Ⅱ和TNF-α的降低水平无统计学意义(P＞0.05).结论 骨髓MSC低表达TLR-4,体外LPS可促进骨髓MSCTLR-4的表达,且与浓度相关.伴随TLR-4表达水平的升高,CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达水平及TNF-α水平同时升高.     

Regulatory mechanisms of C4b‐binding protein (C4BP)α and β expression in rat hepatocytes by lipopolysaccharide and interleukin‐6

Summary. Background: C4b‐binding protein (C4BP), a multimeric protein structurally composed of α chains (C4BPα) and a β chain (C4BPβ), regulates the anticoagulant activity of protein S (PS). Patients with sepsis have increased levels of plasma C4BP, which appears to be induced by interleukin (IL)‐6. However, it is not fully understood how lipopolysaccharide (LPS) and IL‐6 affect the plasma C4BP antigen level and C4BPα and C4BPβ expression in hepatocytes. Objectives: To assess the effect of LPS and IL‐6 on plasma C4BP, PS–C4BP complex levels, PS activity, and C4BP expression by rat liver in vivo and on C4BP expression by isolated rat hepatocytes in vitro. Results: Plasma C4BP antigen level transiently decreased from 2 to 12 h after LPS (2 mg kg^?1) injection, and then it abruptly increased up to 24 h after LPS injection. Plasma C4BP antigen level increased until 8 h after IL‐6 (10 μg kg^?1) injection, and then gradually decreased up to 24 h after IL‐6 injection. LPS significantly decreased the protein and mRNA expression of both C4BPα and C4BPβ in rat hepatocytes, and this effect was inhibited by NFκB and MEK/ERK inhibitors. IL‐6 mediated increase in C4BPβ expression in rat hepatocytes, which leads to increased plasma PS–C4BP complex level and to decreased plasma PS activity, was inhibited by inhibition of STAT‐3. Conclusion: LPS decreases both C4BPα and C4BPβ expression via the NFκB and MEK/ERK pathways, whereas IL‐6 specifically increases C4BPβ expression via the STAT‐3 pathway, causing an increase in plasma PS–C4BP complex, and thus decreasing the anticoagulant activity of PS.     

吡格列酮抑制肺组织TLR2、TLR4的mRNA表达进而减轻重症急性胰腺炎肺损伤的机制探索

目的:探讨吡格列酮减轻重症急性胰腺炎肺损伤的机制。方法:将30只健康雄性SD大鼠,随机（随机数字法）分为假手术组、模型组、吡格列酮组,每组10只。假手术组大鼠麻醉后,胰胆管逆行注射生理盐水。模型组麻醉后,胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠构建重症急性胰腺炎肺损伤模型。吡格列酮组腹腔注射吡格列酮后再构建模型。每组随机选择6只大鼠于手术后12 h剖杀,留取肺组织及静脉血。检测并比较三组大鼠血清淀粉酶水平及肺组织匀浆中TNF-α、NO水平;采用RT-PCR检测并比较三组肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达情况;比较三组间肺组织病理损伤评分和肺渗漏指数。分析TLR2和TLR4的mRNA表达情况与肺病理损伤评分、肺渗漏指数的相关性。结果:模型组血清淀粉酶及肺组织匀浆中TNF-α、NO水平均显著高于假手术组,吡格列酮组上述指标水平均显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。模型组肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平以及肺组织病理损伤评分、肺渗漏指数均显著高于假手术组,吡格列酮组上述指标均显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。由Spearman相关分析可见肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与肺组织病理损伤评分呈显著正相关关系（rs=0.959, P<0.001;rs=0.924, P<0.001）;由Pearson相关分析可见肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与肺渗漏指数均呈显著正相关关系（r=0.957, P<0.001;r=0.958, P<0.001）。 结论:吡格列酮可能通过抑制肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA的表达进而减轻重症急性胰腺炎肺损伤程度。     

吡格列酮抑制肺组织TLR2、TLR4的mRNA表达进而减轻重症急性胰腺炎肺损伤的机制探索

目的:探讨吡格列酮减轻重症急性胰腺炎肺损伤的机制。方法:将30只健康雄性SD大鼠,随机（随机数字法）分为假手术组、模型组、吡格列酮组,每组10只。假手术组大鼠麻醉后,胰胆管逆行注射生理盐水。模型组麻醉后,胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠构建重症急性胰腺炎肺损伤模型。吡格列酮组腹腔注射吡格列酮后再构建模型。每组随机选择6只大鼠于手术后12 h剖杀,留取肺组织及静脉血。检测并比较三组大鼠血清淀粉酶水平及肺组织匀浆中TNF-α、NO水平;采用RT-PCR检测并比较三组肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达情况;比较三组间肺组织病理损伤评分和肺渗漏指数。分析TLR2和TLR4的mRNA表达情况与肺病理损伤评分、肺渗漏指数的相关性。结果:模型组血清淀粉酶及肺组织匀浆中TNF-α、NO水平均显著高于假手术组,吡格列酮组上述指标水平均显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。模型组肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平以及肺组织病理损伤评分、肺渗漏指数均显著高于假手术组,吡格列酮组上述指标均显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。由Spearman相关分析可见肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与肺组织病理损伤评分呈显著正相关关系（rs=0.959, P<0.001;rs=0.924, P<0.001）;由Pearson相关分析可见肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与肺渗漏指数均呈显著正相关关系（r=0.957, P<0.001;r=0.958, P<0.001）。 结论:吡格列酮可能通过抑制肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA的表达进而减轻重症急性胰腺炎肺损伤程度。     

MSCs对辐射诱导小鼠胸腺瘤中T细胞CD4/CD8各亚群及各亚群中CD45比例变化的影响

目的观察MSCs对辐射诱导小鼠胸腺瘤中T细胞CD4/CD8各亚群及各亚群中CD45比例变化的影响,探讨MSCs对辐射诱发肿瘤的预防和治疗作用。方法应用Kaplan经典方法制备C57BL/6幼年鼠胸腺瘤模型[1],经小鼠尾静脉输注同系鼠MSCs,6个月后取胸腺组织,将胸腺细胞制成单细胞,标记CD4、CD8、CD45,流式细胞术分析T细胞亚群。结果流式细胞术分析结果显示：照射后CD4-CD8-亚群比例由正常组的（5.11±5.10）%降低到（0.01±0.01）%（P〈0.05）,MSCs治疗（0.61±0.39）%后有所恢复;MSCs治疗组（91.49±4.47）%中CD4＋CD8＋亚群比例与正常组（82.44±6.06）%接近,单纯照射组（99.09±0.49）%显著高于正常组（P〈0.05）;照射后CD4＋CD8-亚群由（7.72±3.37）%下降到（0.87±0.49）%,CD4-CD8＋亚群由（4.74±2.59）%下降到（0.02±0.01）%,MSCs治疗后CD4＋CD8-和CD4-CD8＋都有不同程度上调。正常组、单纯照射组、MSCs治疗组中CD45＋在CD4＋CD8＋中的比例分别为（86.09±2.24）%、（0.16±0.03）%、（97.35±3.23）%,差异有统计学意义（P〈0.05）;单纯照射组CD4-CD8-、CD4-CD8＋和CD4＋CD8-中CD45＋均有不同程度的降低,MSCs治疗组有不同程度升高,且具有统计学意义（P〈0.05）。结论 MSCs可使辐射诱导胸腺瘤模型组小鼠胸腺中T细胞CD4/CD8各亚群及各亚群中CD45比例增高或恢复,提示MSCs具有防治辐射诱发胸腺瘤的作用,并对辐射造成的胸腺损伤具有修复作用。