应用Ussing Chamber技术评价甘草与海藻的配伍对大鼠肠黏膜P-gp的影响

 目的 评价甘草海藻配伍对大鼠肠黏膜P-糖蛋白（P-gp）的影响。方法 通过对大鼠口服甘草煎液、海藻煎液、甘草海藻合煎液及其合并液、生理盐水1周后,使用Ussing Chamber技术,评价罗丹明123（R123）和荧光素钠（CF）经大鼠空肠黏膜的经时吸收方向和分泌方向的透过量和表观渗透系数。R123和CF在接受室的浓度用荧光分光光度计检测。结果 4种药液均具有增加R123经吸收方向透过性的趋势,但仅海藻使R123吸收方向的透过性显著增加（P<0.05,与生理盐水组比较）。同时,海藻也使R123分泌方向的透过性显著增加（P<0.01,与生理盐水组比较）。但海藻与甘草合用后,合煎组与合并组使R123分泌方向的透过性显著减少（P<0.01,与生理盐水组比较）;另外,海藻与甘草的单煎液、合煎液、合并液对CF经空肠黏膜转运的吸收方向及分泌方向的透过性与生理盐水比较,均无显著性差异。结论 海藻可能不对P-gp起抑制作用。海藻中的某些成分可能改变了细胞膜通透性,从而增加了跨膜转运药物R123吸收分泌双方向的渗透,但对细胞间的药物转运影响不大。海藻和甘草合用后对肠黏膜P-gp起到了一定抑制作用,引起海藻和甘草中P-gp底物的一些毒性成分吸收增加,这可能是两者配伍产生毒性的机制之一。     

芫花对P-糖蛋白底物罗丹明123肠内转运和吸收的影响

 目的 研究芫花水煎液对P-糖蛋白(P-gp)的底物罗丹明123(R123)在空肠内转运和吸收的影响,探讨芫花对肠黏膜P-gp的调控作用。方法 大鼠分组制模,利用体外扩散池法(Ussing chamber)评价芫花对R123和荧光素钠(CF)经空肠黏膜透过性的影响;利用在体实验测定R123和CF在血浆中药物浓度的变化和各种药动学参数。结果 一方面,0.5 g·mL-1的芫花水煎液降低了R123分泌方向的转运,同时提高了吸收方向的转运,而且对CF吸收和分泌方向的转运都有抑制作用;另一方面,在体实验芫花组R123的生物利用度和曲线下面积都显著大于对照组,CF则与对照组无明显差异。结论 实验表明,芫花某些化学成分抑制P-gp,另一些成分可能使细胞之间紧密连接加强,引起旁细胞途径药物CF渗透的降低。因此芫花是肠黏膜P-gp的一种抑制剂,但是哪种化学成分发挥作用有待于进一步研究。     

体外试验评价甘草对肠黏膜P-糖蛋白的影响

目的 :观察甘草对P-糖蛋白(P-gp)底物经大鼠不同区段肠黏膜透过性的差异,以评价其对肠黏膜P-gp功能的影响。方法:通过对大鼠口服甘草煎液、生理盐水一周后,使用体外扩散池(Ussing Chamber)技术评价罗丹明123(R123)和荧光素钠(CF)经大鼠空肠回肠结肠黏膜的经时吸收方向和分泌方向的透过量和表观渗透系数。R123和CF在接受室的浓度用荧光分光光度计检测。结果:R123的透过性比较中,甘草组与生理盐水组组内比较,差异有统计学意义(F=5.602,P=0.000)。CF的透过性比较中,甘草组组内比较,差异有统计学意义(F=20.140,P=0.000)。结论:甘草对底物药物R123的影响可能与存在于肠黏膜的P-gp有关,这可能是甘草与药物产生协同作用的机制之一。     

甘草与芫花对P-糖蛋白底物罗丹明123经 空肠黏膜透过性的影响

目的：观察甘草与芫花合用前后对P-糖蛋白(P-gp)的调控作用，探讨甘草、芫花及其合用影响药物经胃肠道渗透的可能作用机制。方法：将25只Wistar大鼠分为5组，分别给大鼠口服甘草液、芫花液、甘草芫花合煎液、合并液以及生理盐水，1周后用体外扩散池法(ussing chamber)评价各种药液对罗丹明123(R123)和荧光素钠(CF)经空肠黏膜透过性的影响，用荧光分光光度法测定R123和CF的浓度，并分析各组表观渗透系数(Papp)差异。结果：4种药液均具有增加R123经吸收方向的透过性，与生理盐水组比较，P<0.05，且芫花液、合煎液以及合并液还可减少分泌方向的透过(P<0.05，与生理盐水组比较)，甘草对分泌方向透过影响无统计学意义。甘草对CF透过无影响，而其他3组药液则可减少CF吸收和分泌方向的透过性。结论：甘草和芫花对P-gp均有抑制作用，但后者作用较强。芫花某些化学成分抑制P-gp，而另一些成分可能使细胞之间紧密连接加强，引起旁细胞途径药物CF渗透的降低。甘草与芫花合用后对P-gp抑制作用增强，可能是甘草对芫花有协同作用，使一些毒性成分吸收增加，这可能是两者配伍产生毒性的机制之一。     

黄连吴茱萸不同配比的大鼠在体肠吸收研究

目的:研究黄连吴茱萸不同配比的在体肠吸收,比较不同配比在不同肠段吸收系数的异同。方法:采用大鼠在体单向肠灌流模型,以HPLC测定灌流后药液浓度,考察黄连与吴茱萸不同配比对小肠吸收和转运的影响。结果:黄连吴茱萸6∶6在空肠的吸收常数比其他肠段要大,差异有显著性(P<0.05);黄连吴茱萸6∶1在空肠和回肠的吸收常数比其他肠段大,差异显著(P<0.05)。黄连吴茱萸1∶1在空肠、回肠及结肠的吸收速率常数Ka值比十二指肠大,在回肠的表观吸收系数Kapp值比其他肠段要大(P<0.05);黄连吴茱萸2∶1、黄连吴茱萸6∶1及吴茱萸单煎在回肠的吸收常数较其他肠要大(P<0.05)。在回肠中黄连吴茱萸2∶1吸收较其他2个比例药物要好(P<0.05);在结肠中黄连吴茱萸各比例吸收没有吴茱萸单煎好(P<0.05)。结论:黄连和吴茱萸无论单煎或不同比例组方在各肠段均有吸收,其中黄连∶吴茱萸为1∶1和6∶1时于空肠和回肠较易吸收;黄连∶吴茱萸为2∶1时较易于回肠吸收。     

双黄补煎液对三种常见牙周致病厌氧菌体外抑菌活性的研究

目的 :研究双黄补煎液与黄连、黄芩、骨碎补各单味药煎液对牙龈紫质单胞菌 (Pg)、中间普氏菌 (Pi)和核梭杆菌 (Fn)的体外抑菌活性。方法 :分别将中药双黄补复合剂型和单味黄连、黄芩、骨碎补制备成浓度为 1∶ 1的中药煎液。采用液体二倍稀释法 ,测定各种煎液对 Pg、Pi、Fn的最小抑菌浓度 (MIC) ,同时设立阳性对照和阴性对照。以 2 %碘甘油为对照药物 ,运用打孔琼脂扩散法 ,测定双黄补煎液对 Pg、Pi、Fn的抑菌环大小。结果 :双黄补煎液对 Pg、Pi、Fn的 MIC均为 1∶ 12 8,黄连煎液分别为 1∶ 2 5 6 ,1∶ 5 12和 1∶ 2 5 6 ,黄芩和骨碎补煎液显示出了一定的抑菌活性。打孔琼脂扩散法结果显示 ,双黄补煎液对 Pg、Pi、Fn的抑菌环明显大于 2 %碘甘油。结论 :双黄补煎液和黄连煎液对 Pg、Pi、Fn均有较明显的抑菌活性 ,优于单个黄芩煎液和骨碎补煎液     

运用Ussing chamber技术建立大鼠肠道内MRP2转运模型的实验研究

目的:建立研究药物与肠道内多药耐药相关蛋白2之间相互作用的Ussing chamber实验验证模型。方法:运用Ussing chamber技术评价存在于大鼠肠道内多药耐药相关蛋白中主要亚型MRP2的抑制剂环孢素A对底物普伐他汀经肠转运吸收方向(M-S)与分泌方向(S-M)的外排转运率及表观渗透系数的影响。采取LC-MS/MS法测定样品中普伐他汀含量,通过计算,比较对照组与抑制剂组之间的差异。结果:建模实验表明,对照组中普伐他汀经大鼠十二指肠、空肠、回肠外排转运率分别为1.06±0.31、1.73±0.41、2.10±0.67,加入50μg·mL~(-1)环孢素A之后减少了普伐他汀在各肠段的外排转运率,其中空肠(0.89±0.30)与回肠(0.81±0.13)段具有显著统计学差异;加入100μg·mL~(-1)环孢素A后也同样减少了普伐他汀在各肠段的外排转运率,其中空肠(0.82±0.24)段具有显著统计学差异。结论:运用Ussing chamber技术建立了研究肠道内MRP2与药物间相互作用的实验验证模型,为此后研究肠道内转运蛋白与药物两者之间的相互关系奠定了基础。     

应用Ussing Chamber技术评价芹菜素与柚皮素经大鼠肠黏膜透过特征

 目的 研究芹菜素与柚皮素经大鼠空肠、回肠与结肠黏膜的区段透过特征。方法 采用体外Ussing Chamber方法,分别评价50 μmol·L-1芹菜素及柚皮素经空肠、回肠和结肠黏膜经时吸收方向（M-S）与分泌方向（S-M）的累计透过率和表观渗透系数（P_app）,芹菜素与柚皮素在接收池的样品浓度用HPLC测定。结果 芹菜素与柚皮素在结肠的透过性显著高于空肠（P<0.01）和回肠（P<0.05）。比较M-S方向和S-M方向的透过性发现,芹菜素空肠与回肠经两个方向的透过性无显著差异,但经结肠透过时,吸收方向的透过性显著高于分泌方向的透过性（P<0.01）;柚皮素在空肠、回肠及结肠黏膜经两个方向的透过性均无显著差异。结论 芹菜素与柚皮素在大鼠肠黏膜中的透过性存在区段性差异,结肠部位吸收最好。芹菜素与柚皮素除被动扩散外,可能受到肠黏膜转运体的调控。     

在体单向灌流法研究Rho-123大鼠肠吸收特性

目的研究罗丹明123(Rho-123)在大鼠体内肠吸收特性,并分析P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)对Rho-123吸收影响关系。方法采用HPLC法建立大鼠Rho-123肠灌流液分析方法,根据所建立的分析方法对大鼠在体肠吸收影响因素进行考察。以吸收速率常数(Ka)和表观渗透系数(Papp)分析参数为指标,确定大鼠在体肠单向灌流条件,并进一步分析P-gp抑制剂和MRP2抑制剂对Rho-123肠道吸收影响关系。结果研究Rho-123在大鼠肠道药物吸收条件为:选择在空肠段进行灌流、灌流质量浓度为40 ng·m L~(-1),灌流体积流量为0.2 m L·min~(-1),肠道分析长度为10 cm,灌流初始平衡30 min后,恒速灌流105 min,P-gp抑制剂盐酸维拉帕米对Rho-123在大鼠体内肠吸收有影响,MRP2抑制剂吲哚美辛对Rho-123在大鼠肠道吸收无影响。结论 Rho-123可以作为研究P-gp肠道药物吸收特性的底物,方法可靠性好。     

知母黄柏配伍对芒果苷大鼠体内药物动力学的影响

目的:考察知母配伍黄柏对知母有效成分芒果苷在大鼠体内药物动力学的影响。方法:SD大鼠随机分为4组,分别单次灌胃(ig)芒果苷单体、知母单煎液、知母-黄柏1∶3和1∶1合煎液(剂量按芒果苷计算为35 mg·kg-1),采用液相色谱-串联质谱法测定血浆中芒果苷浓度,用DAS软件根据非房室模型法计算药物动力学参数。结果:知母单煎液组芒果苷血药浓度比单体组明显升高,配伍黄柏后有所下降。大鼠单次ig芒果苷单体、知母单煎液、知母-黄柏1∶3和1∶1合煎液后的主要药动学参数:药时曲线下面积(AUC0～t)分别为0.626,122.4,94.36,53.97 mg·L-1·h-1,峰浓度(Cmax)分别为0.149,21.52,16.26,8.27 mg·L-1,达峰时间(Tmax)分别为1.0,3.0,4.0,6.0 h,半衰期t1/2分别为3.41,1.46,1.65,1.77 h。结论:知母配伍黄柏后,芒果苷在大鼠体内的吸收随黄柏配伍比例的增加而减少,吸收速度减慢,t1/2未发生明显变化。     

几种表面活性剂对P-gp底物罗丹明123经肠黏膜透过性的影响

 目的观察低浓度表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油,Labrasol和聚山梨酯80对肠黏膜P-gp的调控作用。方法使用体外扩散池法评价罗丹明123(R123)经空肠、回肠和结肠黏膜的经时经吸收方向和分泌方向的透过量和透过系数(P_app),并测定不同浓度表面活性剂对R123和荧光素钠(CF)经肠黏膜透过性的影响。R123和CF在接受室中的浓度用荧光分光光度法测定。结果R123经肠道黏膜的透过性存在部位差,即以空肠、回肠和结肠的次序透过性依次减少。另一方面,R123经肠道分泌方向的透过性显著地高于其吸收方向的透过性。低浓度的CEL和Labrasol可显著增强R123经吸收方向的透过性,减少经分泌方向的透过性;而低浓度的聚山梨酯80可显著增强R123经吸收方向的透过性,但对经分泌方向的透过性无显著影响。但实验浓度的表面活性剂对CF的肠道转运没有影响。结论低浓度的聚氧乙烯蓖麻油、Labrasol和聚山梨酯80可通过对P-gp功能的抑制而用于改善受P-gp介导药物的吸收,有望提高此类药物的口服生物利用度。     

Effect of Baizhu(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae) extract on intestinal absorption of brucine and strychnine in vitro and in situ

OBJECTIVE: To investigate the antagonistic effect of the extract of Baizhu(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae)(RAM) on the intestinal absorption of brucine and strychnine in Strychnos nux-vomica(NUX) and propose the mechanism of these effects.METHODS: The apparent permeability value(Papp)and absorption rate constant(Ka) were chosen as indices. The everted intestinal sac model and in situ single-pass intestinal perfusion model were used to study the effects of the RAM extract on the absorption of brucine and strychnine. To confirm the results, the brucine and strychnine concentrations in hepatic portal venous blood were determined.Western blotting was used to study P-glycoprotein(P-gp) expression in the Caco-2 cell line.RESULTS: Pappand Kaof brucine and strychnine were significantly increased in the presence of a P-gp inhibitor, but no significant increase was noted in the presence of a tight junction regulator. The RAM extract inhibited the absorption of brucine and strychnine and enhanced P-gp expression.CONCLUSION: The primary absorption mechanism for brucine and strychnine is passive transport,which is affected by P-gp.     

Enhanced Oral Bioavailability of Diltiazem by the Influence of Gallic Acid and Ellagic Acid in Male Wistar Rats: Involvement of CYP3A and P‐gp Inhibition

The oral bioavailability of diltiazem is very low due to rapid first pass metabolism in liver and intestine. The purpose of the study was to investigate the effect of gallic acid and ellagic acid on intestinal transport and oral bioavailability of diltiazem in rats. The intestinal transport and permeability of diltiazem was evaluated by in vitro non‐everted sac method and in situ single pass intestinal perfusion study. The oral pharmacokinetics was evaluated by conducting oral bioavailability study. The intestinal transport and apparent permeability of diltiazem were significantly enhanced in duodenum, jejunum, and ileum of gallic and ellagic acid‐treated groups. The effective permeability of diltiazem was significantly enhanced in ileum part of gallic and ellagic acid‐treated groups. When compared with control group, the presence of these two phytochemicals significantly enhanced the area under plasma concentration‐time curve and the peak plasma concentration of diltiazem (C_max). Gallic acid and ellagic acid significantly increased the bioavailability of diltiazem due to the inhibition of both CYP3A‐mediated metabolism and P‐glycoprotein‐mediated efflux in the intestine and/or liver. Based on these results, the clinical experiments are warranted for the confirmation to reduce the dose of diltiazem when concomitantly administered with these phytochemicals. Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.     

佛手柑内酯在MDCK-MDR1细胞中所介导的调节长春新碱转运的机制

目的：研究白芷中佛手柑内酯对长春新碱转运的影响及其可能机制。方法用表观通透性系数（Papp）测定长春新碱经MDCK-MDR1细胞膜的转运,以观察佛手柑内酯对长春新碱转运的影响。采用分子对接预测佛手柑内酯与P-糖蛋白（P-gp）的结合力。通过罗丹明123（Rho123）的蓄积和活性分析,确定了佛手柑内酯对P-gp功能和P-gp ATP酶活性的影响。以1,6-二苯基-1,3- 5-己三烯（DPH）为研究对象,研究了佛手柑内酯对膜流动性的影响,并用Western blot和实时定量pcr 方法：分析了佛手柑内酯对P-gp蛋白和mRNA表达的影响。这些实验阐明了佛手柑内酯对长春新碱的转运的影响,并允许探索佛手柑内酯作用的可能机制。 结果：佛手柑内酯能抑制长春新碱在MDCK-MDR1细胞中的转运,而佛手柑内酯和P-gp之间的结合力较弱。佛手柑内酯能降低Rho123在MDCK-MDR1细胞中的蓄积,增加膜流动性,上调P-gp蛋白和mRNA的表达,但对P-gp ATP酶活性无影响。 结论：佛手柑内酯抑制长春新碱转运的可能机制与佛手柑内酯介导的P-gp蛋白上调、mRNA表达、膜流动性和P-gp酶活性有关。     

基于外翻肠囊模型研究荭草提取物在正常和心肌缺血模型大鼠中的肠吸收特征

采用大鼠外翻肠囊模型考察荭草提取物在正常和心肌缺血模型大鼠的肠吸收特征。收集荭草提取物(5.0,10.0,20.0 mg·mL^-1)在各肠段中的肠囊液,采用UPLC-TQD测定肠囊液中荭草素、异荭草素、牡荆素、原儿茶酸、山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮苷6个化学成分的含量,计算吸收速率和累积吸收量,同时考察P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对6种成分肠吸收的影响。结果发现,正常状态下,低、中、高浓度下,主要吸收部位分别是十二指肠、结肠和回肠;心肌缺血状态下,低浓度主要集中在回肠和空肠,中浓度在回肠,高浓度在十二指肠和回肠。与正常组相比,模型组中6种成分的吸收速率和累积吸收量均显著下降。P-gp抑制剂能显著提高模型组中6种成分的吸收速率和累积吸收量,推测荭草中的6种成分可能是P-gp的底物。外翻肠囊模型能有效评价荭草提取物中这6种成分在正常和心肌缺血状态下的肠吸收特征,该研究为荭草的临床用药和深入开发利用提供参考依据。     

银杏内酯A的BCS分类及吸收机制研究

目的:实验通过计算机模拟和体外快速实验研究银杏内酯A的生物药剂学分类(BCS)及其转运机制,分析其口服生物利用度不高的因素。方法:采用MOE、Discovery Studio、StarDrop软件对药物进行相关预测。采用2种不同的方法进行溶解度试验,以美国食品药品监督管理局(FDA)指导原则中的D0值和2015版《中华人民共和国药典》中的水中溶解度进行判断。渗透性采用体外细胞模型和人工渗透膜(PAMPA)模型,根据其表观渗透系数(Papp)和有效渗透率(Pe)的大小进行判断。结果:MOE预测结果显示银杏内酯A为难溶性药物;Discovery Studio预测结果表明银杏内酯A水溶性好,肠道吸收性质非常差;StarDrop预测银杏内酯A的溶解性为微溶,药物吸收率>30%,不受P-糖蛋白(P-gp)调控。选取pH 1.2、4.0、6.8磷酸缓冲液及水中银杏内酯A的D0值均大于1,可判断其为低渗透性药物。且其在水中的溶解度等于6×10^-3 g·mL^-1,为极微溶性药物。在Caco-2单层细胞模型中AP→BL转运实验中银杏内酯A的Papp为8.04×10^-6~13.99×10^-6 cm·s^-1,在BL→AP转运实验中银杏内酯A的Papp为11.79×10^-6~12.95×10^-6 cm·s^-1,因此可判断银杏内酯A为低渗透性药物。在PAMPA模型中,其Pe为0.089×10^-6~0.098×10^-6 cm·s^-1,可以判断其为低渗透性药物。在高、中、低3个不同浓度的转运中,银杏内酯A的外排系数(ER)为1.11、0.62、0.89,均小于等于1.5。随着P-gp抑制剂维拉帕米的加入,银杏内酯A的转运速率无显著变化,且差异无统计学意义,说明其的转运不受P-gp的调控,以被动转运为主。结论:银杏内酯A为BCSⅣ类药物,溶解性和渗透性均较差,导致其口服生物利用度较低。     

Inhibitory effect of Thai plant extracts on P-glycoprotein mediated efflux

Curcuminoids from Curcuma longa L. and extracts of Psidium guajava L., Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees, Phyllanthus emblica L. and Solanum trilobatum L. were investigated for their inhibitory effect on P-glycoprotein (P-gp) on the efflux transport of rhodamine 123 (Rho-123 ) in Caco-2 cells and rat ileum. Of the five tested samples, curcuminoids and an extract of P. guajava showed the highest inhibitory effect on P-gp mediated efflux of Rho-123 in Caco-2 cells. Additionally, they were found to have equal potential in inhibiting Rho-123 efflux transport from serosal to mucosal surfaces of the rat ileum.     

增免抑瘤方对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药相关基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响

目的研究增免抑瘤方(ZMYL)对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药调控基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响。方法采用顺铂耐药人卵巢癌细胞株COC1/DDP构建裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组,中药高、中、低剂量组,顺铂组(DDP),联合组(DDP联合中药),各组给予相应干预措施共3周。定期测量瘤体最大、最小径线,绘制肿瘤生长曲线,给药结束后处死裸鼠,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率,免疫组化测定瘤体HIF-1α、Glut1的表达,定量RT-PCR测定瘤体MDR1、P-gp的表达。结果①抑瘤率:联合组抑瘤率最高,达(59.26±6.86)%,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01);中药各剂量组均有一定的抑瘤作用,抑瘤率低于顺铂组(P<0.01)。②免疫组化结果:联合组HIF-1α的表达最低(P<0.01);中药高、中剂量组HIF-1α的表达较顺铂组降低(P<0.01);低剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组以及中药高剂量组Glut1的表达低于顺铂组(P<0.01);中剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组高于顺铂组(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。③定量RT-PCR结果:顺铂组MDR1、P-gp的表达较对照组升高(P<0.01);联合组以及中药各剂量组MDR1、P-gp的表达较顺铂组降低(P<0.01)。结论增免抑瘤方辅助化疗可逆转耐药卵巢癌裸鼠对顺铂的耐药性,增强其抑瘤作用;其作用机制可能通过下调瘤体内缺氧标记物Glut1、HIF-1α的表达,下调多药耐药基因MDR1、P-gp的表达,从缺氧介导的"药泵"耐药机制途径改善卵巢癌化疗耐药。