肝细胞核因子-1α和肝细胞核因子-4α在人肝细胞癌中的表达及意义

目的 检测肝细胞癌（HCC）标本中肝细胞核因子-1α(HNF-1α)和肝细胞核因子-4α(HNF-4α)的表达,探讨其在肝癌发生、发展中的作用。 方法 采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法检测HNF-1α、HNF-4α mRNA和蛋白质在肝癌组织和癌旁肝组织中的表达。 结果 HNF-1α mRNA在癌旁肝组织中的相对表达量0.818±0.371明显高于肝细胞癌组织0.383±0.102,差异有显著性（P＜0.05）。HNF-4α mRNA在癌旁肝组织中的相对表达量0.846±0.384明显高于肝细胞癌组织0.397±0.105,差异有显著性（P＜0.05）。HNF-1α和HNF-4α mRNA 的表达与肿瘤分化程度有关（P＜0.05）。HNF-1α 蛋白在癌旁肝组织中的阳性率（92.3%）明显高于肝细胞癌组织（42.3%）,差异有显著性（P＜0.05）。HNF-4α 蛋白在癌旁肝组织中的阳性率（96.2%）明显高于肝细胞癌组织（50.0%）,差异有显著性（P＜0.05）。HNF-1α和HNF-4α 蛋白的表达与肿瘤分化程度有关（P＜0.05）。在肝细胞癌组织中HNF-1α与HNF-4α mRNA表达水平呈负相关关系。 结论 HNF-1α和HNF-4α在肝细胞癌中表达下调,这可能与肝癌的发生、发展相关。     

Patched蛋白在肝癌发生发展过程中的表达及意义

目的观察肝脏组织中Patched(Ptc)蛋白的表达,探讨其在肝癌发生发展过程中的作用。方法利用二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)制备诱发性肝癌模型;在此模型的基础上,经苏木精-伊红(HE)染色后观察肝组织的形态学变化特点,免疫组织化学法检测Ptc蛋白的表达。结果根据形态学观察将诱癌过程分为肝细胞损伤期、肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期。胆管上皮、卵圆细胞、癌周组织中的细胞和少量癌细胞上均可见Ptc蛋白阳性表达,在对照组、肝细胞损伤期、肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期的阳性表达率分别是0%、23.33%、63.33%和75.00%(χ2=37.46,P<0.05)。结论Ptc蛋白阳性表达率随着肝癌的发生发展有逐渐增高的趋势,Ptc蛋白的异常表达在肝癌的发生发展过程中具有一定的作用。     

肝细胞癌组织中Glypican-3基因表达及其调控机制

目的：探讨肝细胞癌中Glypican-3（GPC3）基因表达及调控机制。方法:采用RT-PCR和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法分别检测48例肝细胞癌的癌组织、39例癌旁组织和31例正常肝组织中GPC3 mRNA的表达和基因突变；免疫组化S-P法检测GPC3、P53和PCNA蛋白的表达。结果:GPC3 mRNA在肝细胞癌的癌组织中的阳性表达率为77.1%，但其在癌旁和正常肝组织中不表达；肝细胞癌的癌组织中未发现GPC3基因突变；GPC3与P53蛋白表达无相关性（r＝-0.12574，P＞0.05），肝细胞癌的癌组织中GPC3 表达阳性和阴性的增殖细胞核抗原(PCNA)平均指数分别为（46.32±27.54）%、（39.83±21.47）%,P＞0.05。结论:肝细胞癌组织中GPC3 mRNA高表达与基因突变无关，没有直接影响P53和PCNA蛋白表达。     

组织因子在肝细胞癌的发生及侵袭转移中的研究

目的：检测组织因子（TF）在肝细胞癌患者中的表达并探讨其意义。方法:采用酶联免疫法检测肝细胞癌患者50例及对照组30例的血浆TF水平，采用RT-PCR法检测其中27例肝癌、癌旁、正常肝组织TF mRNA表达。结果:①肝细胞癌患者血浆TF显著高于对照组（P<0.05）。血浆TF在分化高低、肿瘤大小及是否合并肝硬化组间表达有显著差异（P<0.05），在有淋巴转移、肝外脏器转移及门脉癌栓组高于无转移及癌栓组(P<0.05)，而在不同癌灶数目及包膜情况组间无显著差异（P＞0.05）。②TF mRNA在肝癌组织中阳性率及相对表达强度分别为62.96%（17/27）、0.567±0.268，均显著高于癌旁组织及正常组织。阳性患者相对表达强度在肿瘤大小及部分侵袭转移指标中表达有显著差异（P<0.05） 。结论：TF在肝癌患者血浆及组织中升高且与部分侵袭转移指标相关，提示其TF可能促进了肝癌的发生与侵袭转移。     

病毒性肝炎、癌旁肝硬化和肝癌中bcl-2、c-myc及p63表达

目的：研究肝癌、癌旁肝硬化及病毒性肝炎3种病变中c-myc,bcl-2基因蛋白和p63的表达特征，探讨其对肝癌发生的影响。方法：采用免疫组化（S－P）法检测石蜡包埋组织中c-myc,bcl-2和p63的表达.结果：c-myc,bcl-2蛋白和p63均可表达于胞质和胞核中，c-myc在3种病变中的阳性表达率与表达强度均无差异；bcl-2在3种病变中的阳性表达率虽无差异，但在癌旁肝硬化中，其强阳性率高于肝癌与慢性病毒性肝炎，并在肝癌低分化组阳性表达呈降低趋势；p63阳性主要表达于癌旁肝硬化与肝癌中，并高于慢性病毒性肝炎；c-myc,bcl-2和p63在肝癌中阳性表达的相关性检验显示c-myc与bcl-2阳性率呈正相关（r-0.6742)。结论：c-myc在慢性病毒性肝炎、癌旁肝硬化及肝癌中的持续表达可引起肝细胞增殖和选择性的转化导致癌变。bcl-2的抗凋亡作用在肝癌形成早期并与c-myc具有协同作用。p63在肝癌形成早期可能起促癌作用。     

大鼠肝癌发生过程中胰岛素样生长因子-Ⅱ的表达及意义

目的:研究胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)在肝癌发生过程中的表达及意义.方法:采用二乙基亚硝胺(DEN)诱癌建立大鼠肝癌模型.应用放射免疫分析检测诱癌过程中血清IGF-Ⅱ浓度,应用免疫组织化学方法观察诱癌过程中大鼠肝组织IGF-Ⅱ的表达情况.结果:在大鼠肝癌的发生发展过程中,从肝细胞损伤期、增生-硬化期至癌变期3个阶段大鼠血清IGF-Ⅱ水平呈"高到低到高"的变化趋势;肝细胞损伤期嗜酸性变细胞中见IGF-Ⅱ阳性表达,癌变期癌灶中表达低于癌周增生灶、增生结节和非典型增生结节,而增生-硬化期阳性表达较少.结论:大鼠血清和肝中IGF-Ⅱ的高表达是肝癌发生发展过程中的早期及晚期事件,提示IGF-Ⅱ可能与肝细胞持续增殖及恶性转化有关.     

肝癌患者组织中凝血及纤溶因子的基因表达检测与分析

目的:检测组织因子（TF）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）及其受体（uPAR ）mRNA在肝细胞癌组织中的表达并探讨其临床意义。 方法:利用RT-PCR法分别检测27例肝细胞癌、癌旁及27例正常肝组织中TF、uPA、uPA mRNA表达阳性率及相对表达强度，并结合临床病理资料进行分析。 结果:TF、uPA、uPAR在肝细胞癌组织中阳性率及相对表达强度分别为62.96%（17/27）、70.37%（19/27）、77.78%（21/27）；0.567±0.268、0.964±0.458、0.784±0.322,均显著高于癌旁组织及正常组织，差异显著(P<0.05)。3者在肝癌组织中相对表达强度与肿瘤大小及部分侵袭转移指标有关，其中TF mRNA表达强度在肝内及肝外转移及门脉癌栓组高于无肝内及肝外转移及无门脉癌栓组(P<0.05) ，uPA mRNA在有包膜侵润、肝内转移及门脉癌栓组高于无包膜侵润、无肝内转移及门脉癌栓组(P<0.05)；uPAR mRNA在有肝内转移及门脉癌栓组高于无肝内转移及门脉癌栓组(P<0.05)。经Pearson检验肝细胞癌患者TF、uPA和uPAR mRNA表达呈正相关［TF-uPA：r=0.373(P<0.01)，TF-uPAR：r=0.534(P<0.01)，uPA-uPAR：r=0.365 (P<0.01)］。 结论:肝细胞癌组织中TF、uPA及uPAR的mRNA显著升高并与部分侵袭转移指标有关，提示3者可能在肝细胞癌的发生及侵袭转移起协同作用。     

TLR2和TLR4在原发性肝癌中的表达

目的：本研究通过检测原发性肝癌Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达，分析其与临床病理生理因素的关系，探讨TLR2，TLR4在原发性肝癌疾病过程中的可能作用。方法：采用免疫组化法和实时荧光定量PCR分别在蛋白水平及mRNA水平检测原发性肝癌组织和配对癌旁组织TLR2、TLR4的表达。结果：原发性肝癌组织在蛋白水平和mRNA水平TLR2和TLR4的表达均明显低于癌旁组织（P<0.01）。但免疫组化结果显示不论是肝癌组织还是癌旁组织，TLR2和TLR4的表达均明显高于正常肝组织（P<0.01，P<0.05），有门静脉分支癌栓的患者癌组织TLR4的表达强度低于无门静脉分支癌栓的患者（P<0.05）。结论：肝癌组织TLR2和TLR4的表达与癌旁组织相比受到相对抑制，但高于正常肝组织，TLR2和TLR4信号途径可能参与了原发性肝癌的病理过程。     

环氧合酶-2在原发性肝细胞癌中的表达及其与HCC 临床病理特征之间的关系

目的：探讨COX-2在原发性肝细胞癌组织、癌旁组织及正常肝组织中表达情况及其与临床病理特征之间的关系。方法：采用流式细胞术（FCM）及免疫组化（SP）法对30例肝癌组织、20例癌旁组织及10例正常肝组织中的COX-2蛋白进行定量检测,并对临床资料进行回顾性分析。结果：（1）COX-2在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织和正常肝组织,差异具有显著性（P〈0.05）。（2）COX-2蛋白的表达与肿瘤的大小、部位、包膜、AFP、镜下门静脉癌栓的有无均无关（P〉0.05）结论：COX-2在HCC组织中具有较高表达,其过表达是反应HCC生物学行为的有效指标,对HCC的发生发展具有一定作用有望成为HCC基因治疗的靶点,为肝癌的化学预防提供理论依据。     

慢性乙型肝炎组织病理学指标及病毒X基因变异与患者预后的相关性研究

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）相关组织病理学指标及病毒X基因变异与慢性乙型肝炎患者预后转归的关系。方法 对1986-1994年间慢性乙型肝炎肝穿刺活检病例进行预后随访，83例样本按患者有无肝细胞癌和肝硬化的发生分为3组：癌变组、硬化组和非硬化组。另取20例HBV相关性肝细胞癌作为对照研究。肝损伤活动程度用Seheuer评分表示；免疫组化二步法显示肝组织内HBsAg、HBcAg、HBeAg和HBx蛋白的表达；荧光实时定量PCR检测肝组织HBVDNA含量；PCR方法扩增HBVx基因nt1583～1793区段，目的条带经胶回收后直接双向测序。结果 HBV4种病毒蛋白在肝组织内均有不同程度的表达，以HBsAg最强，HBeAg最弱；核苷酸错义突变发生于nt1632—1636（从AA87/88）、1719（AA116）、1725～1730（AA118／119）、1752（AA127）、1762和1764（AA130／131）位点。统计学分析结果显示，Scheuer评分的G分级（P=0．001）和S分期（P=0．000）硬化组显著高于非硬化组；肝组织内HBsAg的表达硬化组也比非硬化组高（P=0．008）。nt1762／1764双突变在癌变组所占比例明显高于非癌变组（P=0．011）；nt1725～1730野生型（P=0．024）和nt1762／1764突变型（P=0．001）在肝癌组中所占比率均明显高于慢性肝炎组。结论 Scheuer评分和肝组织内HBeAg的表达与慢性乙型肝炎患者肝硬化的发生有关；nt1762／1764突变能显著增加慢性乙型肝炎患者肝细胞癌的发生率。     

奥曲肽调节自身受体2在肝癌上的表达及其影响

目的:观察奥曲肽(OCT)对Bel7402人肝癌细胞上生长抑素受体2(SSTR2)的调节,以及对OCT抑瘤作用的影响。方法: 以MTT法测量OCT对Bel7402细胞增殖的影响,光镜下观察细胞形态的变化。以细胞迁移实验和粘附实验观察细胞侵袭和粘附能力的影响。以流式细胞仪检测细胞表面SSTR2的表达和细胞周期的影响。以裸鼠人肝癌种植模型,观察OCT对种植瘤生长的影响,以免疫组化和半定量RT-PCR观察SSTR2mRNA和蛋白的表达。结果: OCT处理的7402细胞增殖能力和细胞形态无明显改变,细胞的侵袭和粘附能力明显下降,细胞生长静止期(G₀/G₁)的比例显著增加,但未见凋亡峰,细胞表面SSTR2蛋白的表达明显受抑,但SSTR2mRNA的表达与对照组比较无显著差异;裸鼠人肝癌原位种植瘤在OCT治疗后生长受到明显抑制,种植瘤内SSTR2mRNA和蛋白的表达显著增加。结论: SSTR2是OCT抑制肝癌的重要介导物,但它同样也受到OCT的调节,即短期OCT处理引起肝癌细胞上SSTR2脱敏、内化,OCT的功效受到部分抑制;长期持续的治疗可以导致肝癌细胞SSTR2表达的增加,有利于OCT抑制肝癌作用的更好发挥。     

Progression from cirrhosis to cancer is associated with early ubiquitin post‐translational modifications: identification of new biomarkers of cirrhosis at risk of malignancy

Cirrhosis is a lesion at risk of hepatocellular carcinoma (HCC). Identifying mechanisms associated with the transition from cirrhosis to HCC and characterizing biomarkers of cirrhosis at high risk of developing into cancer are crucial for improving early diagnosis and prognosis of HCC. We used MALDI imaging to compare mass spectra obtained from tissue sections of cirrhosis without HCC, cirrhosis with HCC, and HCC, and a top‐down proteomics approach to characterize differential biomarkers. We identified a truncated form of monomeric ubiquitin lacking the two C‐terminal glycine residues, Ubi(1‐74), the level of which increased progressively, from cirrhosis without HCC to cirrhosis with HCC to HCC. We showed that kallikrein‐related peptidase 6 (KLK6) catalysed the production of Ubi(1‐74) from monomeric ubiquitin. Furthermore, we demonstrated that KLK6 was induced de novo in cirrhosis and increased in HCC in parallel with accumulation of Ubi(1‐74). We investigated in vitro the possible consequences of Ubi(1‐74) accumulation and demonstrated that Ubi(1‐74) interferes with the normal ubiquitination machinery in what is likely to be a kinetic process. Our data suggest that de novo KLK6 expression during early liver carcinogenesis may induce production of Ubi(1‐74) by post‐translational modification of ubiquitin. Given the deleterious effect of Ubi(1‐74) on protein ubiquitination and the major role of ubiquitin machinery in maintenance of cell homeostasis, Ubi(1‐74) might severely impact a number of critical cellular functions during transition from cirrhosis to cancer. Ubi(1‐74) and KLK6 may serve as markers of cancer risk in patients with cirrhosis. Copyright © 2014 Pathological Society of Great Britain and Ireland. Published by John Wiley & Sons, Ltd     

Immunohistochemical detection of hcv in cirrhosis, dysplastic nodules, and hepatocellular carcinomas with parallel-tissue quantitative RT-PCR.

Hepatitis C virus is a major risk factor for hepatocarcinogenesis in humans. In situ detection of the virus in early sequential lesions of hepatocarcinogenesis could provide information about the role of the virus in the transformation and promotion process. Parallel in situ detection of HCV proteins and RNA in human tissues were performed in 55 posthepatitis C cirrhosis, 17 dysplastic nodules (DN), and 25 hepatocellular carcinomas (HCC), using immunohistochemistry and tissue quantitative RT-PCR. A consistent cytoplasmic hepatocellular staining was obtained in 73% of cirrhosis cases (with or without HCC) and in 55% DN cases. A few tumoral hepatocytes were unambiguously stained in 28% HCC. The percentage of positive cells and the intensity of immunostaining significantly decreased from cirrhosis to HCC through DN, whereas there was no difference in the prevalence of positivity or the number of viral copies between cirrhosis and HCC using tissue-quantitative RT-PCR. Finally, RT-PCR levels were found parallel with the immunostaining in cirrhosis but not in HCC. These results suggest that HCV protein synthesis may persist but be down-regulated during sequential hepatocarcinogenesis. A putative role of HCV proteins on cell proliferation and differentiation during the early steps of carcinogenesis cannot therefore be excluded.     

胰腺衍生因子（PANDER）在糖尿病小鼠胰腺中的表达变化

 目的 探讨PANDER蛋白在1型和2型糖尿病小鼠胰岛中的表达变化及其与胰岛素抵抗和高血糖的相关性。方法 以STZ诱导和自发性Akita 1型糖尿病小鼠及2型糖尿病db/db小鼠为动物模型,用实时定量PCR,免疫组化和Western Blot的方法检测胰腺中PANDER mRNA和蛋白指标。结果 相较于正常C57BL/6小鼠,STZ诱导和Akita 1型糖尿病小鼠胰腺组织中PANDER mRNA（STZ：1.00±0.17 vs. 0.25±0.06,P<0.01;Akita：1.00±0.19 vs.0.17±0.04,P<0.001）和蛋白（免疫组化灰度扫描STZ：1.00±0.18 vs. 0.16±0.11）水平均明显降低;相较于db/m小鼠,db/db小鼠胰腺组织中PANDER mRNA（1.00±0.05 vs. 2.13±0.46,P<0.05）和蛋白（1.00±0.28 vs. 3.58±0.36,P<0.01）水平均明显升高;罗格列酮灌胃db/db小鼠一个月后,胰岛肥大、胰岛素抵抗及高血糖症状得以缓解,同时胰腺中PANDER mRNA（1.00±0.13 vs. 0.28±0.06,P<0.01）和蛋白水平明显降低。结论 1型糖尿病小鼠胰腺组织中PANDER表达显著减少;2型糖尿病小鼠胰腺组织中PANDER明显升高。     

胰腺癌P53蛋白表达与AgNORs量及组织学分级的关系

目的：研究胰腺癌P53蛋白表达与癌细胞核仁组成区嗜银蛋白（AgNORs）量及组织学分级的关系。方法：用免疫组织化学法检测56例胰腺癌组织及25例正常胰腺组织中突变型P53蛋白的表达； AgNORs染色技术检测胰腺癌细胞的AgNORs含量；观察肿瘤的组织学分级。结果： 56例胰腺癌中P53蛋白表达阳性28例（50％），正常胰腺细胞均为阴性，P53蛋白在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达有显著差异(P<0.01)。28例P53蛋白阳性的胰腺癌组织，AgNORs计数为9.14±2.08；28例P53蛋白阴性的胰腺癌中，AgNORs计数为5.99±1.84，二者有显著差异（P<0.01）。P53蛋白表达与肿瘤组织学分级呈显著负相关。不同的组织学分级之间，AgNORs计数有显著差异（P<0.01）。结论：胰腺癌发生发展的过程包含了〖STBX〗p53〖STBZ〗基因的突变。P53蛋白表达和AgNORs含量可反映胰腺癌的恶性程度，是一个有效的判断胰腺癌预后的指标。     

Expression of TLR-2 in hepatocellular carcinoma is associated with tumour proliferation,angiogenesis and Caspase-3 expression

AimsUnlike other Toll-like receptors (TLRs), the role of toll like receptor 2 (TLR-2) in the pathogenesis of chronic liver disease and hepatocellular carcinoma (HCC) is not well studied. We, therefore, set out to investigate the expression of TLR-2 in different chronic liver disease states along with other markers of cell death, cellular proliferation and tissue vascularisationMethods and resultsImmunohistochemistry was performed on liver tissue microarrays comprising hepatitis, cirrhosis and HCC patient samples using antibodies against TLR-2, Ki-67, Caspase-3 and VEGF. This was done in order to characterise receptor expression and translocation, apoptosis, cell proliferation and vascularisation. Cytoplasmic TLR-2 expression was found to be weak in 5/8 normal liver cases, 10/19 hepatitis cases and 8/21 cirrhosis patients. Moderate to strong TLR-2 expression was observed in some cases of hepatitis and cirrhosis. Both, nuclear and cytoplasmic TLR-2 expression was present in HCC with weak intensity in 11/41 cases, and moderate to strong staining in 19/41 cases. Eleven HCC cases were TLR-2 negative. Surprisingly, both cytoplasmic and nuclear TLR-2 expression in HCC were found to significantly correlate with proliferative index (r = 0.24 and 0.37), Caspase-3 expression (r = 0.27 and 0.38) and vascularisation (r = 0.56 and 0.23). Further, nuclear TLR-2 localisation was predominant in HCC, whereas cytoplasmic expression was more prevalent in hepatitis and cirrhosis. Functionally, treatment of HUH7 HCC cells with a TLR-2 agonist induced the expression of cellular proliferation and vascularisation markers CD34 and VEGF.ConclusionsOur results demonstrate a positive correlation between the expression of TLR-2 and other markers of proliferation and vascularisation in HCC which suggests a possible role for TLR-2 in HCC pathogenesis     

肝细胞肝癌发病过程中HBVx及COX-2的作用

目的 研究HBVx和COX-2在肝细胞肝癌发病过程中的作用.方法 145例HCC、78例肝炎后肝硬化及16例来自尸检的正常肝组织标本经病理复查后制成组织芯片,进行HE及免疫组织化学染色,评定各指标的染色指数.结果 HCC组HBVx平均阳性表达指数高于肝硬化组(P<0.01).HBVx在高、中、低分化HCC组间表达差异有统计学意义.COX-2免疫组化染色在肝硬化组表达较强;在HCC组和正常人肝细胞胞质中表达较弱.HCC组肿瘤细胞胞质中COX-2阳性表达指数低于肝硬化组(P<0.01).COX-2在高、中、低HCC组间表达差异有统计学意义.相关性分析表明145例HCC中HBVx表达与COX-2表达存在正相关(P=0.000).结论HBVx可通过调节COX-2的表达参与HCC发病过程.