p27^kipl及相关分子Skp2在U937细胞增殖过程中的表达变化及相互关系

p27^kipl为CIP／KIP家族的主要成员，对细胞周期起负调节作用。由于p27^kipl的蛋白水平主要受到S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase—associated protein 2，Skp2）介导的细胞周期依赖性、底物特异性的泛素-蛋白酶体途径调节，因此p27^kipl降解水平的调节对其正常生物学功能的发挥至关重要。Skp2为人类F-box蛋白家族成员，介导p27^kipl的多聚泛素化及随后的蛋白水解。研究发现Skp2在人类多种肿瘤中都有表达，并且与肿瘤组织的分化程度及预后相关。我们旨在对Skp2参与介导的p27^kipl的泛素-蛋白酶体途径降解与p27^kipl的稳定性之间的关系进行探讨，运用目前比较公认的血清饥饿合并释放方法同步化处理U937细胞，结合Western blot、免疫荧光双标记及激光共聚焦技术检测在不同生长状态下p27^kipl、Skp2及其他细胞周期相关分子在U937细胞内的表达和定位情况。     

Skp2及Thr187磷酸化p27kip1蛋白在非霍奇金淋巴瘤中的表达及相关性分析

研究发现,p27kip1为细胞周期重要调控蛋白,其水平及功能异常参与了非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发生发展.S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)能够特异性识别第187位苏氨酸(Thr187)磷酸化的p27kip1,并介导其多聚泛素化及降解,这一过程的异常直接影响细胞内p27kip1蛋白的绝对含量,并可能与NHL的发病机制有关[1-2].我们检测了与p27kip1降解相关的Skp2及Thr187磷酸化p27kip1蛋白在NHL中的表达,以探讨二者的表达异常与NHL发生发展的关系.     

Skp2和p27kip1在浆液性卵巢肿瘤组织中的表达与临床意义

p27基因是近年来发现的一种抑癌基因,目前认为其编码的产物p27kip1蛋白为一种细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂,可以通过多种方式参与细胞周期调控,阻止细胞从G1期到S期的转变,最终抑制细胞分裂、增殖,促进细胞分化、凋亡.Skp2作为泛素蛋白酶体途径的底物识别序列,因能泛素化降解p27kip1而与肿瘤关系密切.二者的异常表达与肿瘤组织发生发展以及生物学行为有着密切的关系,是判断肿瘤恶性程度、转移与预后的重要参考指标.     

Skp2和p27kip1蛋白在B细胞性非霍奇金淋巴瘤中的表达、定位及意义

目的 探讨B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)组织中Skp2和p27kip1蛋白的表达、定位及意义.方法 用免疫组织化学方法检测72例B-NHL和14例反应性增生淋巴结组织Skp2、p27kip1蛋白及细胞增殖指标Ki-67的表达情况,结合病理资料进行统计分析;用免疫荧光双标记技术检测淋巴瘤Raji细胞株Skp2和p27kip1蛋白的定位情况.结果 Skp2蛋白在B-NHL组织中的表达高于反应性增生的淋巴结(不含生发中心),在侵袭性B-NHL组织中的表达高于惰性组;p27kip1蛋白在B-NHL组织中的表达低于反应性增生淋巴结(不含生发中心),在侵袭性B-NHL组织中的表达低于惰性组;skp2蛋白主要在Raji细胞的胞浆中表达,p27kip1蛋白主要表达于胞核.结论 在B-NHL组织中,Skp2的高表达和p27kip1的低表达可能与其发生发展有关;skp2和p27kip1在Raji细胞中的亚细胞定位与其生物学功能一致.     

肿瘤标志物JAB1、Akt和p27kip1的表达及对肿瘤细胞增殖的影响

细胞周期调控异常是肿瘤发生发展的重要机制之一,很多肿瘤标志物的异常表达均能影响细胞的正常增殖从而导致肿瘤的发生。C-JUN激活区结合蛋白1（JAB1）通过与多种蛋白相互作用,参与多种信号途径,在人多种癌症中JAB1表达增高,同时介导p27kip1出核转运及泛素化降解从而降低其在胞浆中的水平,促进肿瘤细胞增殖;Akt在细胞浆的表达增高,使p27kip1磷酸化并抑制p27kip1进入细胞核发挥其生物学功能,Akt也可能参与p27kip1的出核转运及蛋白降解,促进p27kip1降解,进而影响细胞周期的调控,促进肿瘤细胞增殖;抑癌基因p27kip1在肿瘤中表达降低,促使肿瘤细胞增殖;在JAB1介导的p27kip1出核转运中可能有Akt的参与;在HER2介导的PI3K/Akt/p27通路中又有JAB1的参与,三者相互作用形成复杂的网络,共同调节信号转导,促进肿瘤的发生发展。     

P27kip1在恶性肿瘤中的调控及其作用

P27kip1蛋白属于细胞周期调控蛋白Cip/Kip家族,是细胞周期负性调控因子,在人体多种恶性肿瘤细胞增值、分化及细胞凋亡中起着非常重要的作用,因此与p27kip1蛋白相关的研究成为近年研究热点,目前认为,p27kip1基因是一种抑癌基因,细胞内的许多蛋白及因子可以在各种水平参与p27kip1基因表达的调控.现就p27kip1的生物学功能及在恶性肿瘤中的调控及其作用研究进展进行综述.     

全反式维甲酸对人白血病细胞系U937细胞生长的影响及其机制分析

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)作用于人白血病细胞系U937细胞后,对细胞生长的影响及可能的机制.方法 收集1 μmol/L ATRA作用后的U937细胞,利用流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot法检测细胞周期相关蛋白(cyclinA、p16、021、027及p27相关分子skp2)表达水平的变化,采用免疫沉淀方法检测U937细胞中027与Skp2的结合情况.结果 流式细胞术分析显示,在1μmol/L ATRA作用72 h后,72%的U937细胞被阻滞在G0/G1期.Western blot分析显示,ATRA能诱导cyclinA、Skp2表达下凋,p21、p27表达上调.免疫沉淀法检测结果显示在U937细胞中p27与skp2存在相互结合的情况.结论 ATRA可能主要通过诱导p27表达上调引起U937细胞生长阻滞,其过程是由p27相关分子Skp2所介导的.     

泛素结合酶E2在肝细胞癌中的机制研究进展

泛素化在蛋白降解过程中发挥重要作用,参与基因转录和翻译、信号转导和细胞周期调控等生物学过程.泛素化由泛素激活酶E1-泛素结合酶E2-泛素连接酶E3级联依次介导.泛素结合酶E2可促进泛素与底物的结合,调节各种蛋白的稳定性以及蛋白间的相互作用.在肝细胞癌中,泛素结合酶E2参与DNA修复、细胞凋亡及细胞周期调节等,并可激活促...     

Skp2和p27Kip1表达异常与乳腺癌发生及临床病理特征的相关性研究

目的从蛋白水平研究Skp2和p27Kip1表达异常与乳腺癌发生及临床病理特征的相关性。方法采用En Vision两步法检测30例乳腺正常组织,30例导管上皮不典型增生组织(ADH)、30例导管原位癌(DCIS)和56例浸润性导管癌(非特殊类型)(IDC)中Skp2和p27Kip1的表达水平,并分析Skp2和p27Kip1表达异常与乳腺癌发生及临床病理特征的关系。结果 1ADH组、DCIS组及IDC组的Skp2阳性率均高于正常对照组(P0.05,P0.01,P0.01),IDC组和DCIS组高于ADH组(P0.01,P0.05),IDC组又高于DCIS组(P0.01)。ADH组、DCIS组和IDC组p27kip1阳性率均低于正常对照组(P0.05,P0.01,P0.01),IDC组和DCIS组均低于ADH组(P0.01,P0.05),IDC组又低于DCIS组(P0.01)。2IDC伴淋巴结转移组Skp2阳性率显著高于DCIS淋巴结转移组(P0.05);IDCⅢ级高于IDCⅠ~Ⅱ级(P0.01)。反之,p27kip1阳性率在IDC伴淋巴结转移组低于无淋巴结转移组(P0.05);IDCⅢ级低于Ⅰ~Ⅱ级(P0.01)。结论 Skp2与p27Kip1异常表达与乳腺癌发生、病理分级和淋巴结转移有密切相关性。     

细胞周期抑制蛋白p27kip1和周期蛋白表达与大肠癌发生预后

目的探讨细胞周期调控抑制因子p27kip1蛋白和周期蛋白E(cyclinE)在大肠腺癌发生发展中的作用。方法采用免疫组化技术SP法,检测p27kip1和cyclinE蛋白在37例大肠腺癌和26例正常大肠黏膜组织中的表达。结果p27kip1蛋白阳性表达率在大肠腺癌组织中为45.9%,显著低于正常大肠黏膜组织(χ2=4.590,P<0.05),并与大肠腺癌组织分化程度和淋巴结转移均有关(χ2=9.653,χ2=6.838,P<0.05);cyclinE蛋白阳性表达率在大肠腺癌组织中为64.9%,显著高于正常大肠黏膜组织(χ2=4.285,P<0.05),并与大肠腺癌组织分化程度和淋巴结转移均有关(χ2=8.397,χ2=5.261,P<0.05);p27kip1蛋白阳性表达组cyclinE蛋白阳性表达率低于p27kip1蛋白阴性表达组,但两者无相关(r=-0.1133,P>0.05)。结论p27kip1蛋白的低表达和/或cyclinE蛋白的高表达在大肠腺癌发生中发挥重要作用,并可能有助于预测其恶性程度及淋巴结转移,可能对大肠腺癌的治疗和生活质量的改善有指导作用。     

慢性低氧通过上调Skp2的生成而减少p27在大鼠肺动脉的表达

目的 研究慢性低氧对细胞周期抑制蛋白p27及S期蛋白相关激酶2的影响,探讨低氧性肺动脉高压的机制.方法 复制慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型,将大鼠分为常氧对照组(Normoxia)和低氧模型组(Hypoxia)两组.待模型复制完毕后,测定大鼠RVPSP和RV/LV+S,然后进行组织病理分析,测定MA%和MT%.利用Western-blot实验和RT-PCR实验检测p27、Skp2蛋白及RNA水平的变化.结果 慢性低氧显著增加大鼠RVPSP、RV/LV+S、MA%和MT%,引起大鼠肺动脉压力增高、右心室肥厚和肺中小动脉中膜增厚及外膜增生.Western-blot实验发现,低氧组大鼠肺动脉中p27蛋白表达显著减少,Skp2蛋白表达上调.结论 慢性低氧导致Skp2表达升高,p27表达减少.p27表达减少而对平滑肌细胞抑制作用减弱,进而导致细胞增殖.因此,把p27或Skp2作为靶点可能为治疗低氧性肺动脉高压提供新的思路.     

p57kip2和p27kip1在水泡状胎块中的表达及对比研究

目的观察父源性印迹基因p57kip2和细胞周期负性调控因子p27kip1在不同类型水泡状胎块中的表达情况,探讨p57kip2和p27kip1在水泡状胎块中的表达及两者对于鉴别不同类型水泡状胎块的意义。方法采用免疫组织化学染色方法,检测30例完全性水泡状胎块、86例部分性水泡状胎块及30例正常绒毛组织中p57kip2和p27kip1的表达情况,分析p57kip2和p27kip1在两种不同类型水泡状胎块中的表达及两者之间的差异和相关性。结果 p57kip2和p27kip1在完全性水泡状胎块组的表达均低于部分性水泡状胎块组和正常流产绒毛组,差异有统计学意义(P0.05),p57kip2和p27kip1在完全性水泡状胎块中表达呈正相关(r=0.750,P0.01),在部分性水泡状胎块中表达呈负相关(r=-1.000,P0.01)。结论 p57kip2和p27kip1在完全性水泡状胎块和部分性水泡状胎块中的表达差异对鉴别不同临床类型的水泡状胎块有一定指导价值,联合检测p57kip2和p27kip1可以对水泡状胎块的诊断和分型起到有效的辅助作用。     

对肿瘤细胞中p27kip1蛋白功能的再认识

p27kip1(以下简称p27)蛋白是一种调控细胞周期并抑制细胞分裂的重要因子,被认为是人类多种肿瘤独立的预后因子和未来可能的肿瘤治疗靶点.传统经典观点认为p27是细胞周期素依赖性激酶抑制因子(cyclin dependent kinase inhibitor,CDKI),参与细胞周期的负性调控,在多种肿瘤细胞内存在p27蛋白低水平表达,且错位分布于细胞核外.     

法舒地尔对人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用研究

目的:探讨法舒地尔对血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cell,HPASMC)增殖的抑制作用及机制。方法:以体外培养的HPASMC为研究对象,PDGF-BB诱导增殖,法舒地尔进行预处理,MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和p27kip1蛋白的表达。结果:细胞培养24 h后与空白组比较,PDGF组HPASMC细胞增殖比例,S期细胞比例和PCNA蛋白表达明显增加,p27kip1蛋白表达则明显降低;用法舒地尔预处理后,与PDGF组比较,细胞增殖比例,S期细胞比例和PCNA蛋白表达明显下降,p27kip1蛋白表达则明显增加。结论:法舒地尔可通过上调p27kip1蛋白表达来抑制PDGF诱导的HPASMC增殖和细胞周期进程。     

p27与造血调控的研究

p27是一种对细胞周期起重要负向调控作用的Cip/Kip家族分子.p27基因定位于12p12.0-12p13.1,编码198个氨基酸,主要通过基因转录后泛素-蛋白体酶途径调节.在正常造血过程中,p27的表达涉及到复杂的系列特异性,与巨核细胞的细胞周期终末退出有关.p27可调控造血祖细胞的增殖周期而对干细胞无明显影响;p27基因敲除使得利用小部分p27-/-的干细胞生成大量祖细胞和成熟血细胞成为可能,为提高干细胞移植成功率提供一条新的途径;同时还可提高p27-/-.干细胞被基因转染的敏感性,以期更好地发挥治疗性干细胞的作用.     

骨髓增生异常综合征细胞周期相关分子表达的初步研究

目的:研究骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者细胞周期负性调控因子(p21cip1、p27kip1、p57kip2)的表达水平及细胞周期改变。方法:采用流式细胞仪检测MDS患者骨髓单个核细胞(bone marrowmononuclear cell,BMNCs)细胞周期情况,应用实时荧光定量PCR检测其p21cip1、p27kip1、p57kip2 mRNA表达水平。结果:高危MDS组及MDS-AML组(包括10例MDS转白血病患者及8例AML患者)的p21cip1表达水平显著低于正常对照组(P值分别为0.008、0.029),而低危MDS组与正常对照组差异无统计学意义;p27kip1表达水平在各组间差异无统计学意义;低危MDS组、高危MDS组及MDS-AML组p57kip2表达均显著低于正常对照组(P<0.001);高危MDS组及MDS-AML组的S期细胞比例显著高于正常对照组(P     

慢性粒细胞白血病细胞中Skp2的表达及其临床意义

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)细胞中S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达及其与p27的关系.方法用免疫细胞化学染色和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测CML细胞中Skp2和p27蛋白水平及转录水平的表达.结果免疫细胞化学染色显示,CML细胞Skp2蛋白表达增高(14.3%±2.9%),与正常对照(8.6%±0.9%)相比有显著性差异(P＜0.05);CML细胞中Skp2蛋白和p27蛋白呈负相关(r=-0.75,P=0.001).但RT-PCR结果显示,Skp2蛋白过度表达的CML细胞中p27 mRNA未见明显变化.结论 Skp2在调控p27蛋白表达过程中起重要作用,Skp2表达异常可能与CML病程进展有关.     

p27与造血调控的研究

p27是一种对细胞周期起重要负向调控作用的Cip／Kip家族分子。p27基因定位于12p12.0-12p13．1，编码198个氨基酸，主要通过基因转录后泛素一蛋白体酶途径调节。在正常造血过程中，p27的表达涉及到复杂的系列特异性，与巨核细胞的细胞周期终末退出有关。p27可调控造血祖细胞的增殖周期而对干细胞无明显影响；p27基因敲除使得利用小部分p27^-/-的干细胞生成大量祖细胞和成熟血细胞成为可能，为提高干细胞移植成功率提供一条新的途径；同时还可提高p27^-/-干细胞被基因转染的敏感性，以期更好地发挥治疗性干细胞的作用。     

p38 Mitogen-Activated Protein Kinase Is Required for Central Nervous System Myelination

p38MAPKs是一个激酶家族,负责调节包括细胞迁移、增生和分化在内的多种细胞功能。本文主要介绍p38对少突胶质细胞分化的调节作用。采用PD169316和SB203580抑制p38后,不同分化阶段少突胶质细胞特异性标志物的蛋白和mRNA的聚集减少,包括髓鞘碱性蛋白、髓鞘相关糖蛋白、鞘糖脂、半乳糖酰基鞘氨醇和硫脂。同时,细胞周期调节因子p27kip1和转录因子Sox10的表达也有显著的下降。最为重要的是,p38抑制剂能够通过少突胶质细胞完全和不可逆地阻断背根神经节神经元的髓鞘形成,并阻止轴-胶粘附分子Caspr的轴膜组装。本实验结果提示p38 MAPKs在OLGs成熟和启动髓鞘形成的关键调控步骤中扮演了重要角色。     

Skp2和p27在扁桃体恶性肿瘤中的表达及意义

目的:探讨Skp2与p27在扁桃体恶性肿瘤组织中的表达及与扁桃体恶性肿瘤多项临床病理特征的关系,并探讨二者的相关性。方法:30例手术切除并经病理证实的扁桃体恶性肿瘤标本,同时收集慢性扁桃体炎标本18例。选乳腺癌作为阳性对照。常规HE染色和免疫组织化学S-P法检测各组Skp2和p27的表达,并进行统计学分析。结果:Skp2在扁桃体恶性肿瘤组织中的阳性表达明显高于其在慢性扁桃体炎组织中的阳性表达(P<0.05);p27在扁桃体恶性肿瘤组织中的阳性表达率明显低于其在慢性扁桃体炎组织中的阳性表达率(P<0.01);Skp2、p27的蛋白表达与扁桃体恶性肿瘤的组织类型有关(P<0.05),与年龄、性别、分化程度无关(P>0.05);Skp2、p27在扁桃体恶性组织中的表达呈负相关(P<0.01)。结论:扁桃体恶性肿瘤中Skp2蛋白表达与靶蛋白p27蛋白降解有关,联合检测Skp2、p27蛋白表达可作为判断扁桃体恶性肿瘤生物学行为的指标之一。