GATA-1和GATA-2基因在再障和正常骨髓基质细胞中的表达

目的 探讨转录因子GATA-1和GATA-2基因在再障和正常骨髓基质细胞中表达的情况。方法 体外扩增培养骨髓基质细胞，运用RT-PCR—ELISA方法检测GATA-1和GATA-2基因的表达情况，并对其相对表达水平进行半定量比较。结果 GATA-1和GATA-2基因在正常和再障的骨髓基质细胞中均有一定的表达。再障的骨髓基质细胞中GATA-1的表达水平较正常低；而GATA-2的表达水平与正常相比无显著性差异．正常和再障的骨髓基质细胞中均以GATA-2的表达占优势．结论 转录因子GATA-1和GATA-2基因可在正常和再障骨髓基质细胞中表达，并可能影响骨髓微环境的造血调控作用，对再障等血液疾病的发生发展起一定的作用。     

转录因子GATA-3 mRNA在哮喘模型小鼠体内的表达

目的:探讨转录因子GATA-3 mRNA在哮喘模型小鼠体内的表达。 方法:建立卵白蛋白（OVA）致小鼠哮喘模型，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞总数和分类，评价肺组织炎症细胞浸润；ELISA检测BALF和脾细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ浓度；RT-PCR检测脾细胞和肺组织GATA-3 mRNA表达水平。 结果:哮喘组BALF中炎症细胞总数及嗜酸粒细胞百分比明显高于对照组，支气管出现明显炎症细胞浸润、黏液分泌和支气管收缩，BALF和脾细胞培养上清液中IL-4明显高于对照组，肺组织和脾细胞GATA-3 mRNA表达水平均明显高于对照组。 结论:哮喘模型小鼠肺组织和脾细胞GATA-3 mRNA表达增加，可能在促进Th2细胞因子合成和介导气道炎症细胞浸润中具有重要作用。     

GATA-4过表达增加大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞

目的 研究GATA-4转染骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞及表达心肌细胞特异性标志物的能力.方法 分离培养MSCs及心肌细胞(CM).第3代MSCs转染GATA-4基因(MSCGATA-4)并通过实时定量聚合酶链反应(PCR)、Western blot和免疫组化鉴定GATA-4的表达.MSCGATA-4与CM嵌套式共培养1周,通过real-time PCR和Western blot检测其心肌基因BNP、α-actinin和Islet-1的表达,用免疫组化观察α-actinin的表达.与CM混合共培养后1周后,观察MSCs的搏动情况,并用流式细胞仪检测心肌分化率.结果 MSCGATA-4组GATA-4的表达明显高于对照组(只表达GFP).MSC与CM嵌套式共培养后,MSCGATA-4组的BNP、α-actinin和Islet-1的mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05).混合共培养后,可见部分MSCGATA-4的搏动,同时部分MSC的α-actinin染色阳性.用流式细胞仪检测心肌分化率,MSCGATA-4组的心肌分化率明显高于对照组(P＜0.05).结论 GATA-4过表达可以增加MSCs分化成心肌样细胞,高表达BNP、α-actinin和Islet-1.     

转录因子T-bet/GATA-3在致敏大鼠脾CD4+T细胞中失衡表达和调节的研究

目的 探讨转录因子T-bet/GATA-3在卵白蛋白(OVA)致敏大鼠脾CD4+T细胞中失衡表达,及地塞米松和咪喹莫特对其的调节作用.方法 从SD大鼠脾脏中分离获得CD4+T细胞,ELISA法测定细胞上清液中细胞因子IL-4、IL-5和IFN-γ含量;Western blot检测CD4+T细胞中T-bet和GATA-3表达.结果 在4个时间点培养细胞上清液中,空白对照组检测到低水平IFN-γ;随着培养时间延长,阳性对照组IL-4和IL-5持续增加,IFN-γ保持在低水平.地塞米松干预组IL-4、IL-5和IFN-γ低表达,均低于空白对照组(P＜0.01);咪喹莫特干预组IL-4和IL-5表达降低,IFN-γ表达增强.此作用从培养6 h开始,12 h达高峰,持续至24 h.在4个时间点培养细胞中,空白对照组检测到转录因子T-bet和GATA-3蛋白表达;随着细胞培养时间延长,阳性对照组T-bet表达降低,GATA-3表达增加.地塞米松干预组T-bet低表达,GATA-3在24 h内表达水平无明显变化;咪喹莫特干预组与阳性对照组比较,GATA-3表达降低,T-bet表达增强.此作用从细胞培养6 h开始,12 h达高峰,持续至24 h.结论 OVA致敏大鼠脾CD4+T细胞中,转录因子T-bet/GATA-3失衡表达,即T-bet低表达,GATA-3异常高表达;地塞米松抑制CD4+T细胞中T-bet表达,对GATA-3表达无明显作用;咪喹莫特通过调节CD4+T细胞中T-bet和GATA-3平衡表达,纠正TH1和TH2细胞的失衡,提示咪喹莫特可能在由TH2细胞介导免疫异常的哮喘中发挥作用.     

慢性阻塞性肺疾病的炎症反应与Foxp3、T-bet、GATA3表达失衡有关

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠调节性T细胞(Treg)、叉头状转录因子3(Foxp3)、T-bet、GATA连接蛋白3(GATA3)的变化。方法将30只大鼠随机分为对照组、模型组,每组15只。模型组大鼠采用烟熏加脂多糖(LPS)气管滴入方法建立COPD模型。模型复制成功第28天,采用ELISA检测大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)白介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平,流式细胞术检测外周血Treg表达,分别采用逆转录PCR及Western blot法检测肺组织Foxp3、T-bet、GATA3mRNA和蛋白表达。结果模型组大鼠肺泡腔及肺间质内大量炎性细胞浸润,肺组织结构破坏。与对照组比较,模型组大鼠血清IFN-γ表达升高(P0.01),IL-4、CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg降低(P0.05);模型组Foxp3、GATA-3mRNA、蛋白表达降低,T-bet mRNA和蛋白升高(P0.01)。相关性分析显示,T-bet、GATA-3、Foxp3基因和蛋白表达与IL-4、IFN-γ分泌相关(P0.05)。结论 COPD炎症反应与T-bet、GATA-3、Foxp3表达失衡有一定关系。     

结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用

目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/m L佛波醇酯(PMA)、500 ng/m L离子霉素(ionomycin)和2.5μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6 h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达。流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降。与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加。RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-bet mRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调。结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能。     

维药祖发奇尼对哮喘大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA表达水平的影响

目的:研究维吾尔药祖发奇尼对哮喘大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平的影响,探讨祖发奇尼治疗哮喘的免疫机制。方法:将大鼠随机分为正常对照组,哮喘模型组,地塞米松治疗组及祖发奇尼高、低剂量治疗组。采用卵清白蛋白(OVA)、氢氧化铝[Al(OH)3]及百白破疫苗联合致敏和OVA生理盐水雾化激发的方法制备哮喘模型。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平。结果:正常对照组与哮喘模型组、哮喘模型组与各治疗组大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,祖发奇尼治疗后哮喘大鼠肺组织GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05),而T-bet的表达水平显著增高(P<0.05);祖发奇尼高剂量治疗组大鼠肺组织GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平明显低于低剂量治疗组(P<0.05),而T-bet的水平明显高于低剂量治疗组(P<0.05)。各组大鼠肺组织T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达水平呈负相关关系(r=-0.696),STAT-3mRNA表达水平与T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达水平分别呈负、正相关(r=-0.767,r=0.772),P值均<0.05。结论:祖发奇尼可能在转录水平对Th1、Th2和Th17的分化进行调节,发挥抗炎作用。     

GATA-3在大鼠哮喘模型气道炎症中作用的实验研究

目的：探讨GATA-3在Wistar大鼠哮喘模型气道炎症中的作用。 方法： 按常用方法复制大鼠哮喘模型并分为哮喘组(A组)，地塞米松治疗组（D组），反义寡核苷酸治疗组（AS组），无意义寡核苷酸治疗组（NS组）和正常对照组（N组）5组，每组10只。反义寡核苷酸和无意义寡核苷酸经鼻气管内给药，地塞米松腹腔注射给药。HE染色方法观察气道炎症变化。免疫组化方法观察GATA-3阳性细胞数。用RT-PCR方法观察大鼠肺组织GATA-3 mRNA表达。用Western 蛋白印迹法检测肺组织中GATA-3蛋白质表达。 结果： A组GATA-3 mRNA和蛋白质的表达量及气道嗜酸性粒细胞浸润数量明显大于N组（P<0.01）。AS组和D组GATA-3 mRNA和蛋白质表达量及气道嗜酸性粒细胞浸润数量均明显低于A组（P<0.01）。NS组GATA-3 mRNA和蛋白质表达量和嗜酸性粒细胞浸润数量与A组相比差异无显著（P>0.05）。GATA-3的表达与大鼠支气管肺组织中嗜酸性粒细胞浸润数量呈正相关，r=0.995(P<0.01)。 结论： GATA-3反义寡核苷酸能特异性地抑制GATA-3基因的表达，减轻气道炎症反应。GATA-3 在Wistar大鼠哮喘模型效应阶段气道炎症中具有重要作用。     

烟草烟雾提取物影响主动脉平滑肌细胞GATA-2的表达

背景：吸烟是动脉粥样硬化形成的主要危险因素之一。 目的：观察烟草烟雾提取物对大鼠血管平滑肌细胞中GATA-2浓度的影响及早期生长反应因子1在其中的作用。 方法：体外培养大鼠血管平滑肌细胞,用不同浓度(0,5%,10%,20%)烟草烟雾提取物刺激,采用RT-PCR的方法检测烟草烟雾提取物对GATA-2的影响。用筛选出的最适合的烟草烟雾提取物浓度处理大鼠血管平滑肌细胞不同时间(0,4,8,12,24 h)后,检测GATA-2 mRNA的变化,以及加入生长反应因子1抑制剂后GATA-2 mRNA的变化。 结果与结论：与0浓度烟草烟雾提取物相比,5%低浓度烟草烟雾提取物刺激后,GATA-2 mRNA表达较10%中浓度和20%高浓度增加的更显著。不加烟草烟雾提取物组即0 h组血管平滑肌细胞中有少量GATA-2的mRNA,5%烟草烟雾提取物刺激后于4 h内开始增加,8 h达高峰。加入生长反应因子1抑制剂后5%烟草烟雾提取物诱导的血管平滑肌细胞GATA-2 mRNA表达明显降低。提示烟草烟雾提取物可通过生长反应因子1促进GATA-2增加,抑制生长反应因子1后,GATA-2的表达减少。     

低氧下K562细胞向红系分化进程中GATA-1与miR-451a表达的相关性研究

目的:探讨低氧下人慢性髓细胞性白血病K562细胞向红系分化进程中GATA结合蛋白1(GATA binding protein-1,GATA-1)与微小RNA-451a(microRNA-451a,miR-451a)表达的相关性。方法:将K562细胞分为常氧组和低氧(1%O₂)组,经40μmol/L氯化血红素分别诱导分化至48和72 h。RT-qPCR检测γ-珠蛋白(γ-globin)的mRNA表达,联苯胺染色观察细胞血红蛋白生成情况,流式细胞术检测CD235a的表达水平,验证K562细胞红系分化模型是否复制成功。在K562细胞向红系分化的不同时点,采用Western blot检测两组细胞GATA-1的蛋白表达情况;采用RT-qPCR检测两组细胞GATA-1 mRNA和miR-451a的表达水平并进行相关性分析。检测GATA-1过表达组、干扰组和阴性对照组K562细胞的红系分化指标,同时采用瑞氏-吉姆萨染色法分析上述组别细胞形态学的变化,明确GATA-1过表达和抑制后K562细胞的红系分化情况。RT-qPCR检测GATA-1过表达和抑制后miR-451a的表达变化。...     

EP_2A体外可促进人CD34~+细胞归巢而不能促进其增殖

目的:探讨前列腺素E_2受体2激动剂(EP_2A)在体外对人CD34~+细胞的归巢与增殖作用。方法:收集健康供者经粒细胞集落刺激因子动员后的外周血,免疫磁珠法分选出人CD34~+细胞;同时收集健康供者动员前骨髓液,分离单个核细胞,并行骨髓间充质干细胞(BMMSC)培养。人CD34~+细胞和BMMSC经前列腺素E_2(阳性对照)、DMSO(阴性对照)、EP_2A和EP_2A+前列腺素E_2受体2拮抗剂(EP_2AA)处理后,对人CD34~+细胞用CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测集落形成数目,流式细胞术检测G_2/M期细胞比例,Western blot检测细胞中survivin、β-catenin及CXC趋化因子受体4(CXCR4)的蛋白表达;ELISA法检测BMMSC中基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的含量。结果:EP_2A组与阴性对照组相比,人CD34~+细胞在细胞活力、集落形成数目、G_2/M期比例及survivin和β-catenin蛋白表达方面均无明显差别。但EP_2A组人CD34~+细胞CXCR4及BMMSC SDF-1α的表达均明显高于阴性对照组。结论:EP_2A体外可促进人CD34~+细胞归巢但不能促进其增殖。     

骨髓间充质干细胞调节心脏移植大鼠的免疫功能

BACKGROUND:Heart transplantation is an effective method for treatment of end-stage heart failure, but immune rejection that seriously impact therapeutic effacicy is easy to occur after transplantation. OBJECTIVE:To investigate the regulatory effect of bone marrow mesenchymal stem cells on the immune function of rats undergoiong heart transplantation. METHODS:Twenty Lewis rats were enrolled as donors, and 20 Wistar rats as recipients. Heart transplantation models were established in the Wistar rats. These 20 model rats were randomized into cell transplantation and control group with 10 rats in each group. Forty-eight hours after heart transplantation, rats in the cell transplantation group were given bone marrow mesenchymal stem cell suspension (1 mL, 2×10⁸ cells/L) via the tail vein, while rats in the control group were given normal saline in the same dose. Then, the expression levels of serum interleukin-2, interleukin-10 and percentage of CD4⁺, CD8⁺, CD4⁺/CD8⁺, CD4⁺CD25^high, CD4⁺CD25^high Foxp3⁺ T cells in the venous blood were detected in the two groups at 7 days after cell transplantation. Additionally, rat myocardial tissues were taken and observed pathologically. RESULTS AND CONCLUSION:The survival time of the cell transplantation group was significantly longer than that of the control group (P < 0.05). The expression level of interleukin-2 showed no significant difference between the two groups (P > 0.05), but the level of interleukin-10 in the cell transplantation group was significantly higher than that in the control group (P < 0.05). Compared with the control group, the percentage of CD4⁺/CD8⁺, CD4⁺CD25^high, CD4⁺CD25^high Foxp3⁺ and CD4⁺ T cells was significantly higher, and the percentage of CD8⁺ T cells was significantly lower in the cell transplantation group (P < 0.05). Histopathological findings showed that there were a small amount of infiltrated lymphocytes in the cell transplantation group with the presence of slight bleeding and edema, and these inflammatory reactions were milder than those in the control group. These findings indicate that bone marrow mesenchymal stem cell transplantation can effectively reduce the rejection in rats undergoing heart transplantation.     

Toll样受体1对间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用

背景：课题组前期研究表明间充质干细胞具有免疫调节Th17细胞的作用,但内在的调节机制尚待阐明,为此,针对Toll样受体1在其中的作用进行探讨,为今后潜在的细胞治疗策略提供可能的实验依据。目的：探讨Toll样受体1对间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用。方法：贴壁法分离人胚胎骨髓来源间充质干细胞,免疫磁珠法分离正常人CD4⁺ T细胞。CD4⁺ T细胞单独培养或与间充质干细胞共培养4 d。实时定量聚合酶链反应测定白细胞介素17、Toll样受体1相关基因的表达水平;流式细胞仪检测Th17细胞的数量。结果与结论：CD4⁺ T细胞及间充质干细胞均表达Toll样受体1。相对于CD4⁺单独培养组,间充质干细胞共培养组(间充质干细胞+CD4)白细胞介素17明显升高(3.59±0.11,1.14±0.08,P < 0.01);进一步发现Toll样受体1 mRNA表达水平亦相应升高(6.07±1.79,1.53±0.63,P < 0.01)。流式细胞仪检测发现,共培养组(间充质干细胞+CD4)Th17细胞数量明显高于CD4⁺ T细胞组[(4.53±1.27)%,(2.39±0.80)%,P < 0.01)。研究结果表明Toll样受体1可能参与间充质干细胞免疫调节人Th17细胞的作用。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

骨髓间充质干细胞对肾病综合征大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响

背景：CD4⁺CD25⁺调节性T细胞功能降低、数量下降已被公认为是肾病综合征患儿免疫失调的重要表现。骨髓间充质干细胞具有免疫调节功能,可上调CD4⁺CD25⁺调节性T细胞,抑制淋巴细胞增殖,并已在许多免疫性疾病方面成功应用。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植对原发性肾病综合征大鼠外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞的影响。 方法：自SD大鼠分离骨髓间充质干细胞,经体外传代培养及鉴定后制备细胞悬液。30只SD大鼠随机均分为3组,生理盐水组和干细胞移植组尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型,干细胞移植组注射阿霉素当日尾静脉射干细胞1×10⁷;正常组不做处理。 结果与结论：①与正常组比较,生理盐水组大鼠均出现肾病综合征表现,以腹水、大量蛋白尿、低蛋白血症、高胆固醇血症为特征;干细胞移植组较生理盐水移植组则有明显改善(P < 0.05)。②造模第28天,干细胞移植组和生理盐水组大鼠造模后外周血CD4⁺CD25⁺Treg/ CD4⁺ Treg均明显高于正常组(P < 0.05);干细胞移植组与生理盐水组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。③造模第28天,干细胞移植组大鼠外周血单个核细胞FoxP3mRNA的表达显著高于生理盐水组和正常组(P < 0.05)。提示骨髓间充质干细胞移植对阿霉素肾病综合征模型有一定的治疗作用,其机制可能与上调FoxP3在组织局部的表达而诱导CD4⁺CD25⁺Treg产生有关。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

血红素加氧酶1在间充质干细胞上调哮喘患者外周血调节性T细胞中的作用

背景：上调CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞是目前治疗哮喘的新靶点。骨髓间充质干细胞在体外可上调正常人外周血的调节性T细胞,但机制尚未明确。 目的：观察血红素加氧酶1对间充质干细胞上调哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞的影响。 方法：分别加入0,15,30,45,60 μmol/L氯化高铁血红素和0,5,10,15,20 μmol/L锌-原卟啉对骨髓间充质干细胞进行预处理,荧光定量PCR检测各组间充质干细胞中血红素加氧酶1 mRNA的表达量。密度梯度离心法分离哮喘急性发作期患者和健康对照者的外周血单个核细胞,分别与经氯化高铁血红素预处理、经锌-原卟啉预处理、不经预处理的间充质干细胞共孵育,加入植物血凝素反应72 h,流式细胞仪检测各组CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞占CD4⁺T细胞的比例。 结果与结论：人骨髓间充质干细胞中有血红素加氧酶1表达,其表达在体外可被诱导和抑制。间充质干细胞中血红素加氧酶1 mRNA的表达量随氯化高铁血红素浓度增加而增加(P < 0.05),随锌-原卟啉浓度增加而减少(P < 0.05),具有剂量依赖性。间充质干细胞在体外可提高哮喘患者和健康对照者CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞的水平(P < 0.01),诱导间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞水平提高(P < 0.01),抑制间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞的水平降低(P < 0.01),但仍高于对照组(P < 0.01)。提示骨髓间充质干细胞部分通过血红素加氧酶1上调哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞。     

Differential STAT5 activation and phenotypic marker expression by immune cells following low levels of ethanol consumption in mice

Ethanol has been recognized as an immunosuppressive agent for many years. Effects of high levels of ethanol consumption on immune functions have been extensively studied, but little is known about the effects of low levels (scuh as 5% ethanol) of ethanol consumption. Herein we report that exposure of mice to 5% ethanol for 4-8 weeks decreases IL-2-augmented splenic NK cell activity, decreases the numbers of NK cells in spleen and liver, decreases the number of granulocytes (Gr-1⁺) in bone marrow and spleen, and decreases the percentages of B cells in liver. In contrast, the percentages of CD4⁺CD8⁺ thymocytes, CD4⁺CD8^- splenocytes, CD4⁺CD8^- liver nonparenchymal cells, CD3⁺ splenocytes, and CD3⁺ bone marrow cells were increased. Furthermore, exposure to 5% ethanol increases STAT5 activation in T cells and liver cells while decreases STAT5 activation in NK cells. Taken together, these findings suggest that low levels of ethanol consumption can differentially modulate immune cells in thymus, spleen, bone marrow and liver, which may be due to differential regulation of STAT5 activation by ethanol.     

miR-1231对结肠癌干细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

BACKGROUND:Previous studies have found that miR-1231 is down-regulated in colon cancer stem cells (CCSCs), but the effect of miR-1231 on CCSCs remains unclear. OBJECTIVE:To explore the effect of miR-1231 on the proliferation, apoptosis and invasion of CCSCs (CD133⁺CD44⁺). METHODS: CD133⁺CD44⁺ cells and CD133^-CD44^- cells were separated from SW1116 cells by immunomagnetic bead separation. The expression level of miR-1231 in CD133⁺CD44⁺ and CD133^-CD44^- cells was detected by qRT-PCR. miR-1231-overexpressing CD133⁺CD44⁺ cells were transfected with miR-1231 mimics or miR-control by lipofection transfection. The effects of miR-1231 on CD133⁺CD44⁺ cell proliferation, apoptosis and invasion were investigated by MTT, flow cytometry and Transwell assays, respectively. In addition, the expression levels of Ki67, Bax, Bcl-2, MMP-2 and MMP-9 protein in miR-1231-overexpressing CD133+CD44+ cells and control cells were detected by western blot. RESULTS AND CONCLUSION:CD133⁺CD44⁺ and CD133^-CD44^- cells were obtained by the immunomagnetic bead separation. The expression level of miR-1231 in CD133⁺CD44⁺ cells was significantly lower than that in CD133^-CD44^- cells. miR-1231 suppressed CD133⁺CD44⁺ cell proliferation and invasion, but promoted the apoptosis in these cells. Western blot analysis showed that miR-1231-overexpressing CD133⁺CD44⁺ cells had obvious decreases in Ki67, Bcl-2, MMP-2 and MMP-9 protein expression and a significant increase in Bax protein expression compared with control cells. All these results further confirm that miR-1231 inhibits the proliferation and invasion but promotes the apoptosis in CD133⁺CD44⁺ cells. These findings suggest that miR-1231 can be a suppressor of CCSCs, which offers a novel potential therapeutic target for CCSCs and colon cancer.     

Cx43在造血调控及重建中的作用

目的:采用条件性基因敲除技术构建造血系统间隙连接蛋白43(Cx43)基因敲除(Cx43~(-/-))小鼠模型,并探讨Cx43在维持造血细胞自我更新及功能稳定中的作用。方法:将引进的2对转基因小鼠Cx43 loxP/loxP和Lyz-Cre/+杂交,选取F1雌性子代Cx43 loxP/-_Lyz-Cre/+与雄性Cx43 loxP/loxP合笼回配,提取所获得子代小鼠鼠尾组织基因组DNA,采用PCR方法鉴定小鼠基因型,RT-PCR方法筛选Cx43~(-/-)小鼠,同时分析小鼠不同器官中Cx43基因的表达差异;该类小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU;125 mg/kg)处理,在化疗前及化疗后第5、10和15天经眼球取血分析其血象变化。Cx43~(-/-)及Cx43~(+/+)小鼠予7.5 Gy(~(60)Co-γ)的致死量照射,剂量率1 Gy/min,照射后6 h分别给予事先准备就序的骨髓细胞,每只3×10~6细胞于尾静脉注入,2周后处死小鼠检测造血是否重建:分离股骨切片后,收集骨髓细胞进行细胞表型分析(选用的单抗为CD45R、Gr-1、CD4、 CD8a、TCRαβ、Mac-1、抗sIgM、TER119、Sca-1及CD117);同时进行体外造血细胞集落实验观察造血细胞的体外增殖能力。结果:本研究通过2种转基因小鼠间杂交和回交,成功获得造血系统选择性Cx43基因敲除小鼠;该类小鼠骨髓及外周血细胞无Cx43表达,参与造血的组织,如肝脏和脾脏中Cx43表达也显著下调(P0.01),而心脏和肾脏的Cx43表达则无影响,小鼠成年后外周血象分析并无明显异常,但应急代偿能力下降,经5-FU处理后,其造血功能恢复显著减缓,处理15 d后,Cx43~(+/+)小鼠造血功能已接近正常水平,而Cx43~(-/-)小鼠仍无明显的恢复迹象,血红蛋白、白细胞及血小板仍处低位,2者差别有统计学显著性(P0.01);体外集落试验也证实Cx43~(-/-)小鼠造血干/祖细胞的增殖能力下降,其CFU-GM或CFU-E集落数均明显少于Cx43~(+/+)小鼠(P0.01),但流式细胞术结果显示,Cx43~(-/-)小鼠骨髓中Lin~-/c-Kit~+/Sca-1~+细胞亚群数量与Cx43~(+/+)小鼠相比差异并无统计学显著性;Cx43~(-/-)小鼠在化疗或移植后其骨髓造血功能重建均延迟,且化疗15 d后骨髓切片及涂片均证实其骨髓中造血细胞增生程度明显降低,脂肪组织显著增多,而且T、B细胞发育也有异常。此外,其外周血中CD4~+CD8~+细胞比例比野生型小鼠增多(P0.05),但CD4~+T细胞显著减少(P0.01),尤其是TCRαβ亚群细胞减少最为明显(P0.01)。同样,Cx43~(-/-)小鼠外周血中CD45R~+sIgM~-细胞亚群比例与野生型小鼠相比显著减少(P0.01)。结论:骨髓中Cx43基因表达在造血干/祖细胞发育(尤其是应急状态时)具重要作用,敲除Cx43基因后造血干/祖细胞增殖减缓,造血及免疫重建功能受损。     

骨髓间充质干细胞SCA-1+/CD45+/CD31+亚群的归巢能力

背景：自2003年,美国 FDA率先批准自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死性疾病以来,已有大量临床及基础研究报道,但报道结果却不尽相同,其中很重要的一点就是干细胞无法有效到达心肌损伤部位(即干细胞归巢)。 目的：探讨小鼠骨髓间充质干细胞各亚群在心肌修复中的归巢能力。 方法：以小鼠心肌干细胞表面分化抗原筛查小鼠骨髓间充质干细胞,再以CD45、CD31为标准分选得到小鼠骨髓间充质干细胞4个亚群。采用Transwell小室检测各亚群组细胞的归巢能力。将各亚群细胞注入心肌梗死48 h小鼠体内,注射后48,96 h及7 d处死小鼠取其心脏完成小动物活体成像并检测其荧光强度。 结果与结论：小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群归巢能力优于其他亚群。小动物活体成像提示干细胞注射48 h,96 h及7 d时SCA-1⁺/CD45⁺/CD31⁺亚群平均荧光强度优于其他亚群,SCA-1⁺/CD45⁺/ CD31⁺亚群迁移率最高,说明SCA-1⁺/CD45^-/CD31^-群体有向受损心肌归巢的趋势。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程