姜黄素衍生物B50对不同辐射抗拒的同源鼻咽癌细胞增殖及凋亡的作用

目的: 比较姜黄素衍生物(B50)抑制不同辐射抗拒的同源鼻咽癌细胞CNE-2与CNE-2R作用的差异。方法: 采用MTT法和克隆形成实验检测B50对细胞活力及增殖的影响,以流式细胞仪检测B50对细胞周期分布、细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。结果: B50可抑制CNE-2R细胞的活力 ,且呈时间浓度依赖性,其抑制作用明显优于对CNE-2细胞的作用 ,P<0.01; 同时B50抑制CNE-2R细胞增殖的作用明显优于对CNE-2的作用 vs (0.82±0.01)μmol/L],P<0.01;药物作用48 h后,B50使CNE-2R细胞G₂/M期的比例升高(7.1%→34.9%),明显优于CNE-2细胞 (12.4%→35.7%)(P<0.01);B50作用于CNE-2R细胞24 h后早期凋亡率升高(3.7%→19.5%),明显优于CNE-2细胞(4.4%→14.8%)(P<0.01);B50作用24 h后,CNE-2R细胞线粒体膜电位下降了(43.17±3.11)%,明显优于对CNE-2细胞的降低率 (P<0.01)。结论: 与CNE-2相比,B50能更显著地抑制辐射抗拒CNE-2R细胞的细胞活力及增殖能力,且更明显地调控细胞周期停滞于G₂/M期,诱导细胞凋亡及降低线粒体膜电位。这些结果提示B50具有逆转辐射抗拒的潜在价值。     

阿司匹林增强TRAIL诱导的HepG-2细胞凋亡

目的:研究阿司匹林能否增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的HepG-2细胞凋亡,并初步探讨其作用机制。方法:HepG-2细胞放入含15%胎牛血清的DMEM培养液中培养,改良苯酚-品红染色观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,RT-PCR检测细胞中survivinmRNA的表达水平,FCM检测细胞凋亡率和细胞周期。结果:不同浓度的阿司匹林联合TRAIL实验组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组及TRAIL和阿司匹林单独用药组,且细胞凋亡指数也明显提高,凋亡率与阿司匹林的浓度呈现剂量依赖关系,联合用药组凋亡相关基因survivin的表达与空白对照组和TRAIL和阿司匹林单用组相比明显下调。结论:阿司匹林能够增强TRAIL诱导的HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与survivin基因的表达下调有关。     

姜黄素衍生物T83对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞凋亡的作用

 目的：比较4-芳甲叉类姜黄素衍生物T83对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞凋亡的作用差异。方法：采用MTT法、Hoechst 33342染色法、流式细胞术、Western blotting和qRT-PCR 检测和比较T83对CNE-2R和CNE-2细胞活力、细胞凋亡及线粒体膜电位、细胞procaspase-3/procaspase-9/Cyt-C蛋白表达和细胞PTEN/Akt/p27 mRNA水平的影响。结果：T83可抑制CNE-2R细胞的活性（24 h、48 h和72 h的IC50分别为0.9、0.4和0.2 μmol/L）,其抑制作用明显优于对CNE-2细胞的作用（24 h、48 h和72 h的IC50分别为1.8、0.5和0.4 μmol/L;P＜0.05）;T83作用48 h后,CNE-2R和CNE-2细胞中均观察到染色质浓缩、边集和分割成块状;T83作用48 h后,CNE-2R细胞晚期凋亡率升高（1.57%→27.26%）,明显高于CNE-2细胞（1.74%→8.15%;P＜0.05）;T83作用36 h后,CNE-2R细胞线粒体膜电位下降百分率（87.71%）明显高于CNE-2细胞（50.47%;P＜0.05）;T83作用48 h后,CNE-2R细胞中procaspase-3和procaspase-9蛋白表达明显低于CNE-2细胞,CNE-2R中Cyt-C蛋白表达明显高于CNE-2细胞。T83作用24 h后,PTEN和p27 mRNA水平明显上调,而Akt mRNA水平明显下调（P＜0.05）,且CNE-2R细胞的变化更加显著。结论：与CNE-2细胞相比,T83能更加明显地抑制PTEN/Akt/p27信号转导通路,启动线粒体凋亡途径,加速诱导CNE-2R细胞凋亡。     

同源不同辐射抗拒NPC细胞间总甲基化水平及基因甲基化表达差异的探讨

目的:比较同源不同辐射抗拒能力的鼻咽癌细胞CNE2R/CNE2间总甲基化水平及其区域的差异。方法:采用赵存友博士改良的基于甲基化敏感酶全基因组甲基化法检测CNE2R/CNE2细胞全基因组甲基化水平;同时采用Me DIP-Seq测序法对CNE2R/CNE2细胞进行测序,分析比较DNA甲基化区域(主要包括6个基因功能元件即CDS、intron、downstream2k、upstream2k、3’UTR及5’UTR)的差异。结果:CNE2R细胞全基因组甲基化水平比CNE2细胞低约30%;在CNE2R和CNE2细胞中,虽然分布在6个基因功能元件上的峰值个数和峰值在各基因元件上的覆盖度均无明显差异,但2种细胞的6个基因功能元件上基因甲基化存在差异。结论:同源不同辐射抗拒能力的鼻咽癌细胞间总甲基化水平及基因甲基化存在差异,推测DNA甲基化的差异可能与鼻咽癌辐射抗拒相关。     

NDRG2对肝癌细胞HepG2凋亡的诱导作用

目的：探讨NDRG2对肝癌细胞HepG2凋亡的诱导作用。方法：用RT-PCR获取NDRG2基因。测序判断正确后，将其克隆入含绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pIRES2-EGFP中，并转染NDRG2表达阴性的HepG2细胞。用光镜观察转染细胞的形态变化；荧光显微镜观察NDRG2蛋白的定位；流式细胞仪分析细胞周期的改变；透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果：获得了NDRG2基因，成功地构建了pIRES2-EGFP-NDRG2真核表达载体。转染HepG2细胞后，细胞生长受抑，结构破坏并死亡。荧光显微镜观察到NDRG2在胞质中表达，流式细胞仪检测出现G1期阻滞和凋亡峰，透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征。结论：NDRG2基因具有诱导HepG2细胞凋亡的作用，其机制有待进一步研究。     

hTR反义寡核苷酸对不同鼻咽癌细胞生长分化的影响

目的 :研究端粒酶反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的影响。方法 :脂质体介导反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株 ,用细胞体外增殖实验、免疫组织化学S P法 ,观察细胞生长分化的变化情况。结果 :针对端粒酶RNA模板区的反义寡核苷酸可抑制CNE1和CNE2Z细胞的增殖并呈剂量和时间依赖性 ,反义寡核苷酸组细胞角蛋白表达高于其它处理组及空白对照组 (P <0 0 1) ,细胞形态趋向分化成熟。结论 :端粒酶反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞的生长 ,并促进细胞分化。     

阿司匹林促进宫颈癌HeLa细胞凋亡

阿司匹林(acetysalicylicacid,ASA)是非类固醇抗炎药(nonsteroidal antiinflammatory drugs,NSAIDs)的代表药物.最近研究证实,阿司匹林具有高效降低直肠结肠肿瘤发病率的作用~([1]);文献报道普通阿司匹林应用在半年以上,可有效降低宫颈癌的发病率~([2]).本研究对阿司匹林抑制宫颈癌HeLa细胞增殖作用及相关机制进行研究,为宫颈癌的预防与治疗提供有益的探索.     

姜黄素影响鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡能力及机制研究

探讨姜黄素对鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡的影响及作用机制。以人鼻咽癌细胞为研究对象,分别用0、5、10、20、40μmol/L的姜黄素作用于鼻咽癌细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,并计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的姜黄素作用于鼻咽癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病2(B-cell lymphoma/Leukemia 2,Bcl-2)、β连环蛋白(β-catenin)、c-Myc表达水平。5、10、20、40μmol/L的姜黄素作用后细胞的存活率明显降低,与0μmol/L姜黄素作用组相比有明显差异(P0.05)。计算半数抑制浓度为(17.83±1.25)μmol/L,后续实验中选用18μmol/L的姜黄素继续研究。18μmol/L的姜黄素作用后的鼻咽癌细胞凋亡率明显高于0μmol/L姜黄素作用组(P0.01)。18μmol/L的姜黄素作用后的鼻咽癌细胞中Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达水平均明显低于0μmol/L姜黄素作用组(P0.01)。由此姜黄素能够抑制人鼻咽癌细胞增殖,促进癌细胞凋亡,作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

姜黄素类似物B67诱导细胞凋亡和G2/M期 阻滞增强对鼻咽癌辐射抗拒细胞的抑制作用

目的: 研究姜黄素类似物B67对鼻咽癌(NPC)辐射抗拒细胞(CNE-2R)活性和增殖的作用,及其对细胞周期和凋亡的影响。方法: 采用MTT和平板克隆形成实验检测B67对CNE-2R细胞及其母细胞CNE-2活性和增殖的抑制作用,采用荧光显微镜和流式细胞仪观测凋亡细胞的形态学变化、细胞凋亡百分率、细胞周期分布和线粒体膜电位的改变,采用裸鼠皮下成瘤实验检验B67作用于CNE-2R细胞后的成瘤性。 结果: B67作用于NPC细胞24、48和72 h后,MTT检测细胞活性的IC₅₀分别为3.96、2.59和0.89 μmol/L(CNE-2R)以及8.84、3.55和1.10 μmol/L(CNE-2),B67作用48 h后平板克隆形成实验检测NPC细胞增殖的IC₅₀分别为0.55 μmol/L(CNE-2R)和0.73 μmol/L(CNE-2),B67作用24 h后NPC细胞的G₂/M期比例的上升分别为5.32%上升到40.01%(CNE-2R)和9.07%上升到15.73%(CNE-2),B67作用48 h后NPC细胞凋亡率的改变分别为5.49%上升到38.06%(CNE-2R)和4.99%上升到35.74%(CNE-2),B67作用48 h后NPC细胞线粒体膜电位的下降分别为66.76%(CNE-2R)和72.09%(NE-2),B67作用24 h后NPC细胞在裸鼠皮下的成瘤率分别为0%(CNE-2R)以及低浓度组100%、高浓度组0%(CNE-2)。 结论: 姜黄素类似物B67可较特异地诱导CNE-2R细胞G₂/M期阻滞和促进细胞凋亡和线粒体膜电位的改变,引起裸鼠皮下成瘤性的差异,以增强其对鼻咽癌辐射抗拒细胞的抑制作用。     

Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒的鼻咽癌细胞微小RNA表达的影响

目的:在明确Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒鼻咽癌(nasopharygycarcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2治疗作用的基础上,检测Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2细胞中差异表达的微小RNA(microRNA,miRNA)的影响,探索CNE-1和CNE-2细胞中miRNA差异表达与NPC放射敏感性差异的关系.方法:用Ad-14-3-3σ转染CNE-1和CNE-2细胞;采用Paraflo microfluidic microRNA芯片检测,用激光扫描器收集杂交的图像,经LOWESS滤器规范信号后分析数据差异,根据Targetscan3.1数据库资料(http://www.targetsean.org)探索Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2中的miRNA差异表达的影响,预测其差异表达与NPC放射敏感性差异的关系.结果:Ad-14-3-3σ处理细胞以后,CNE-1与CNE-2相比较,有37个microRNA有明显差异,CNE-1中有17个上调,20个下调.其中倍数变化在3倍以上且2者检测量数量差异达到1000以上的有6个:hsa-miR-152、hsa-miR-205、hsa-miR-203、hsa-miR-7、hsa-miR-636和hsa-mjR-100.结论:Ad-14-3-3σ能够改变微小RNA(microRNA,miRNA)在CNE-1和CNE-2中的表达模式,缩小CNE-1和CNE-2之间miRNA的表达差异,而这些miRNA可能跟肿瘤的发生和放疗敏感性有关.     

鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白1的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨治疗前鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ－１）的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集未经治疗的鼻咽癌活检组织标本５５例,采用原位分子杂交和免疫组化检测ＥＢＵ病毒编码的小ＲＮＡｓ和ＬＭＰ－１以及癌细胞增殖细胞核抗原指数和癌组织中凋亡要关基因产物ｂｃｌ－２的表达,以末端标记原位细胞死亡指数（ＴＵＮＥＬ ｉｎｄｅｘ ＴＩ）表示癌细胞的凋亡程度。结果（１）５５例末治疗鼻咽癌组织中２７例呈ＬＭＰ     

顺铂激活的低分化鼻咽癌细胞氯电流

目的： 研究抗癌药顺铂对低分化鼻咽癌细胞（CNE-2Z）氯通道的激活作用以及该电流的特性。方法：采用膜片钳技术记录顺铂激活的CNE-2Z细胞全细胞电流;离子置换法等方法分析通道的特性。结果：细胞外灌流5 μmol/L的顺铂诱发CNE-2Z细胞产生一个有明显外向优势的电流,电流的翻转电位为(-6.69 ± 0.51) mV,接近氯离子平衡电位(-0.9 mV)。该电流的激活依赖于细胞内ATP。顺铂激活的细胞膜氯通道对阴离子的通透性顺序为：I-≥Br->Cl->gluconate。氯通道阻断剂tamoxifen完全抑制该电流。结论：抗癌药顺铂可以激活一个电流特征与容积激活性氯通道相似的氯通道。     

阿司匹林对胰腺癌细胞周期的影响及其机制

目的： 观察阿司匹林及其催化产物前列腺素E2（PGE2）对胰腺肿瘤细胞周期及细胞周期相关蛋白p21Wafl/cipl、p27Kipl/pic2表达的影响，探讨阿司匹林抗胰腺癌的作用机制。 方法： 以阿司匹林和PGE2处理胰腺癌细胞后，分别采用MTT检测细胞活力、ELISA检测细胞内PGE2浓度、流式细胞仪检测细胞周期变化、Western blotting检测细胞周期相关蛋白p21Wafl/cipl和p27Kipl/pic2的表达水平。 结果： 阿司匹林可抑制胰腺癌细胞生长并呈剂量依赖性减少细胞内PGE2的生成；阿司匹林可诱导细胞周期相关蛋白p21Wafl/cipl和p27Kipl/pic2表达升高并引起细胞阻滞在G0/G1期。但外源性PGE2并不能拮抗阿司匹林对细胞活力、细胞周期及细胞周期相关蛋白的影响。 结论： 阿司匹林抑制胰腺癌细胞的生长可能并非完全通过环氧合酶途径；诱导p21Wafl/cipl和p27Kipl/pic2表达的升高、进而诱导细胞周期的阻滞可能是其作用机制之一。     

吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响及可能的机制.方法 以含0.1、1、10、100、1000mg/L吗啡的培养液作用于体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞,等体积培养基作为对照组.MTT法检测吗啡作用24、48和72 h的细胞增殖抑制率,并在不同浓度吗啡作用细胞48 h后,用Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Western免疫印迹检测Bc1-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达.结果 相同作用时间点0.1～100 mg/L吗啡并不影响CNE-2细胞的增殖.而在1000 mg/L吗啡作用下细胞增殖受到明显的抑制,在24、48、72 h CNE-2细胞增殖抑制率随作用时间延长而增加,分别达到(15.0±4.4)%、(30.7±4.9)%和(50.0±4.4)%.48 h后,荧光显微镜下对照组CNE-2细胞未见明显凋亡,0.1～100mg/L吗啡组仅见少量凋亡,而在1000mg/L吗啡组,可见到大量细胞出现典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测结果显示0.1～100 mg/L吗啡组细胞凋亡率与对照组差异并无统计学意义(P>0.05),而1000mg/L吗啡组细胞凋亡率则明显增加[(39.33±6.03)%比(9.36±1.57)%,P<0.05].Western免疫印迹检测显示在1000 mg/L吗啡作用CNE-2细胞48 h后,Bcl-2蛋白的表达量较对照组明显下降,Bax表达增多,caspase-3活性升高,cleaved-caspase-3表达增多.而其他浓度作用下CNE-2细胞Bcl-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达未见明显变化.结论 大剂量吗啡可诱导鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡,其机制可能与吗啡上调CNE-2细胞Bax蛋白表达,下调其Bcl-2蛋白表达,引起caspase-3活化有关.     

牛蒡子苷元诱导人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及其作用机制

 目的: 探讨牛蒡子苷元(arctigenin,ARG)对人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响及其分子作用机制。方法: 经不同浓度的ARG处理CNE-1细胞后,采用CCK-8法检测ARG对CNE-1细胞活力的影响;caspase-3及caspase-9活性检测法检测CNE-1细胞caspase-3及caspase-9活性的变化;流式细胞术分析CNE-1细胞凋亡率的变化; real-time PCR法检测PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子mRNA表达水平的变化;Western blot法检测PI3K/AKT/XIAP通路蛋白水平的变化。结果: 随浓度和时间的增加,ARG可抑制鼻咽癌CNE-1细胞的活力(P<0.01);caspase-3及caspase-9活性的增加及细胞凋亡率的升高表明ARG可显著促进CNE-1细胞的凋亡;与对照组相比,PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子对mRNA表达均明显下调(P<0.01);ARG可明显下调PI3K/AKT/XIAP各蛋白水平(P<0.05)。结论: ARG可诱导鼻咽癌细胞凋亡,降低PI3K/AKT/XIAP相关分子水平可能是其促进细胞凋亡的机制。     

他莫昔芬对不同生长周期鼻咽癌细胞容积激活性电流的作用

 目的：研究Cl-通道抑制剂他莫昔芬（tamoxifen）对G₁期和S期鼻咽癌细胞容积激活性电流的抑制效应。方法：运用血清饥饿法或化学药物双阻断法分别将鼻咽癌低分化上皮细胞（CNE-2Z）同步化至G₁或S期，用膜片钳技术研究不同细胞周期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性及他莫昔芬对CNE-2Z细胞容积激活性电流的作用。结果：47%低渗刺激下，G₁期和S期细胞产生容积激活性电流，G₁期的电流密度大于S期。10-30 μmol/L他莫昔芬能完全抑制G₁期和S期容积激活性电流，但随浓度升高，达到完全抑制效应所需要的时间缩短。G₁期或S期细胞电流被完全抑制的时间有明显差异，在相同浓度他莫昔芬作用下，G₁期细胞达到最大抑制效应时间明显短于S期细胞。 G₁期与S期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性均为I->Cl->葡萄糖酸根离子，但G₁期细胞对I-的通透性高于S期，S期细胞对葡萄糖酸的通透性高于G₁期。结论：CNE-2Z细胞G₁期与S期的容积激活性电流密度及对阴离子的通透性有差异， G₁期和S期细胞对他莫昔芬敏感性不同，提示CNE-2Z细胞对他莫昔芬敏感的容积激活性氯通道在不同生长周期中表达有差异。     

EB病毒感染对鼻咽癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨EB病毒(EBV)感染对鼻咽癌细胞系生长和细胞凋亡的影响。方法:用EBV直接感染人鼻咽癌细胞系CNE1;用免疫组化(LSAB)法检测EBV-LMP1和bcl-2蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力;用流式细胞术和TUNEL法检测癌细胞凋亡。结果:感染EBV的鼻咽癌细胞系(E-CNE1)的EBV-LMP1表达阳性,生长能力较未感染EBV的CNE1明显增强(P<0.01),2种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生,而均仅有2%~3%的细胞表达bcl-2蛋白。结论:EBV感染和LMP1表达可促进鼻咽癌细胞生长,但对鼻咽癌细胞的bcl-2表达和细胞凋亡无影响。