miR-1调控胃癌细胞SGC-7901迁移能力的实验研究

目的探讨微小RNA-1(miR-1)对胃癌细胞系SGC-7901迁移能力的调控作用。方法脂质体转染寡核苷酸片段NCmimics及miR-1-mimics、NC-inhibitor及miR-1-inhibitor至SGC-7901细胞,定量RT-PCR检测转染后SGC-7901细胞中miR-1的表达水平,Transwell实验观察转染后细胞迁移能力,western blot检测转染后细胞上皮间质转化(EMT)指标。结果miR-1-mimics转染组miR-1的表达水平(900.10±240.40)明显高于NC-mimics转染组(1.01±0.18),差异有统计学意义(t=6.48,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组miR-1的表达水平(0.65±0.04)明显低于NC-inhibitor转染组(1.01±0.14),差异具有统计学意义(t=4.19,P0.05)。miR-1-mimics转染组迁移细胞数量[(362±10)个]明显高于NC-mimics转染组[(112±10)个],差异有统计学意义(t=21.65,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组迁移细胞数量[(64±8)个]明显低于NC-inhibitor转染组[(133±14)个],差异有统计学意义(t=17.07,P0.01)。与NC-mimics转染组比较,miR-1-mimics转染组上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)表达减弱(t=19.28,P0.01),神经钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达增强(t=5.43,P0.01;t=23.14,P0.01);与NC-inhibitor转染组比较,miR-1-inhibitor转染组E-cadherin表达增强(t=6.14,P0.01),N-cadherin和Vimentin表达减弱(t=6.78,P0.01;t=7.94,P0.01)。结论 miR-1过表达可促进胃癌细胞的迁移;miR-1低表达能可抑制胃癌细胞的迁移;miR-1可能通过EMT转化增强胃癌细胞的迁移能力。     

胃癌间质干细胞活化Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞增殖及迁移作用的探讨

目的探讨胃癌间质干细胞(gastric-cancer-derived mesenchymal stem cells,GC-MSCs)活化Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞增殖、迁移的作用。方法采用贴壁培养法从胃癌组织中分离GC-MSCs,成骨、成脂培养基诱导GC-MSCs分化。收集GC-MSC上清,胃癌细胞系HGC-27分别经L-DMEM培养液(Control组)、GC-MSC上清(GC-MSC组)、GC-MSC上清及20μmol/L ICG001(GC-MSC+ICG001组)处理24 h,克隆形成试验和Transwell迁移试验分别检测细胞增殖、迁移能力,免疫荧光染色或western blot检测Wnt/β-catenin信号相关蛋白(β-catenin、CD44、CyclinD3)的表达水平。结果 GC-MSC上清处理组HGC-27细胞增殖形成的克隆数[(203.700±8.762)个]显著高于Control组[(33.670±1.856)个](t=18.98,P0.01),且其迁移细胞数[(349.700±7.881)个]较Control组[(145.000±3.712)个]亦显著增多(t=23.46,P0.01)。GC-MSC上清可促进HGC-27细胞β-catenin入核,诱导Wnt/β-catenin信号下游蛋白CD44、CyclinD3的表达。Wnt/β-catenin信号抑制剂ICG001可下调上述分子的表达,逆转GC-MSC上清对HGC-27细胞的促增殖、促迁移作用。与GC-MSC组[(203.000±3.606)个]相比,GC-MSC+ICG001组的克隆细胞数[(70.667±2.603)个]显著减少(q=39.24,P0.01),且迁移细胞数[(166.000±3.215)个]较GC-MSC组[(352.700±4.096)个]显著降低(q=47.73,P0.01)。结论 GC-MSCs活化Wnt/β-catenin信号并促进胃癌细胞增殖及迁移。     

LncRNA NPSR1-AS1在胃癌中的表达及作用机制

目的探讨LncRNA NPSR1-AS1在胃癌(gastric cancer, GC)中的表达及临床意义,分析其对胃癌细胞生物学行为的影响和作用机制。方法收集86例胃癌患者癌组织及癌旁组织,另收集21例胃癌患者及体检健康者血浆标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组LncRNA NPSR1-AS1的表达水平,并与患者临床病理资料进行相关性分析。siRNA敲减NPSR1-AS1后,采用细胞增殖试验、Transwell试验、流式细胞术检测癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡能力,并用RT-qPCR检测肿瘤相关基因表达量的变化。结果 LncRNA NPSR1-AS1在胃癌组织中的表达水平显著升高,且与肿瘤大小(t=11.02,P0.01)、淋巴结转移(t=2.30,P0.05)、TNM分期(t=3.55,P0.01)、肿瘤血管或神经侵袭(t=3.10,P0.05)显著相关;血浆LncRNA NPSR1-AS1筛查胃癌的ROC曲线下面积(AUC~(ROC))为0.696。LncRNA NPSR1-AS1敲减后可使GSK-3β(t=16.15,P0.01)和E-cadherin(t=10.17,P0.01)表达上调,β-catenin(t=4.869,P0.05)、N-cadherin(t=3.77,P0.05)、Snail(t=9.372,P0.01)和MMP2(t=15.57,P0.01)表达下调。结论 LncRNA NPSR1-AS1敲减可抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭并诱导其凋亡,其作用机制与上皮-间质转化(EMT)有关。     

过表达上皮剪接调控蛋白1抑制胃癌细胞SGC-7901迁移能力的研究

目的探讨上皮剪接调控蛋白1(ESRP1)对胃癌SGC-7901细胞迁移能力的影响及其作用机制。方法利用脂质体介导法转染ESRP1真核表达载体于SGC-7901细胞后,采用划痕实验检测细胞迁移能力的变化;实时荧光定量PCR检测上皮间充质转化(EMT)过程相关标志物E-cadherin、N-cadherin分子的表达情况,采用t检验分析。结果与转染空载体对照组相比,过表达ESRP1后SGC-7901细胞迁移能力下降;伴随ESRP1表达增加,N-cadherin表达下调为对照组0.25倍、E-cadherin表达上调为对照组2.42倍。结论过表达ESRP1可能通过抑制EMT进程降低胃癌细胞SGC-7901的迁移能力。     

LncRNA FTH1P3通过调控PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移能力

目的 研究长链非编码RNA铁蛋白重链1伪基因3(LncRNA FTH1P3)在胃癌组织中的表达及临床意义,并探讨LncRNA FTH1P3通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移的作用机制。方法 收集胃癌和癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测LncRNA FTH1P3在胃癌组织中的表达,分析LncRNA FTH1P3的表达与胃癌患者病理参数和预后的关系。常规培养胃癌细胞,分为si-NC组和si-LncRNA FTH1P3-1组、si-LncRNA FTH1P3-2组,采用LncRNA FTH1P3 siRNA转染胃癌细胞,qRT-PCR检测各组细胞中LncRNA FTH1P3的表达;CCK8实验检测各组细胞增殖能力;Transwell实验检测各组细胞迁移能力;体内成瘤实验检测各组细胞体内成瘤能力;Western blot检测各组细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化PI3K(pPI3K)、磷酸化AKT(pAKT)的表达。结果 LncRNA FTH1P3在胃癌组织中表达上调(P<0.05)。LncRNA F...     

长链非编码RNA LINC00473对人胃癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨LINC00473在人胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测胃癌细胞中LINC00473的表达水平;转染靶向LINC00473的siRNA片段或LINC00473过表达载体以构建敲减或过表达的胃癌细胞系;通过CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移实验、western blot实验检测细胞的增殖和迁移能力以及EMT相关蛋白标志物表达水平的变化。结果与GES-1细胞相比,LINC00473在胃癌细胞中的表达水平明显降低(P0.05)。与siNC转染对照组相比,敲减LINC00473表达后,靶细胞的增殖能力(F=163.10,P0.01)、克隆形成(t=3.29,P0.05)和迁移能力(t=4.68,P0.05)明显增加;E-cadherin表达减弱(t=4.08,P0.05),N-cadherin(t=5.06,P0.01)、Snail(t=7.69,P0.01)和Vimentin(t=3.82,P0.05)蛋白的表达水平升高。与Vector转染对照组相比,上调LINC00473表达后靶细胞的增殖能力(F=186.00,P0.01)、克隆形成(t=3.22,P0.05)和迁移能力(t=5.52,P0.01)明显下降;E-cadherin表达升高(t=2.90,P0.05),N-cadherin(t=7.44,P0.01)、Snail(t=2.78,P0.05)和Vimentin(t=4.64,P0.01)蛋白的表达水平降低。结论敲减LINC00473的表达可促进胃癌细胞的增殖、迁移的能力,可能通过调控EMT参与胃癌细胞的迁移。     

miR-374-5p调控微环境间质干细胞促进胃癌增殖与迁移

目的探讨mi R-374-5p调控人胃组织来源间质干细胞(MSCs)体外促进胃癌细胞增殖和迁移的作用。方法体外分离培养获得人胃癌组织来源间质干细胞(GC-MSC)和配对的癌旁组织来源间质干细胞(GCN-MSC);体外采用GCN-MSC和GC-MSC培养上清液处理胃癌细胞,平板克隆实验检测胃癌细胞增殖能力,划痕实验检测胃癌细胞迁移能力;采用mi R-374-5p模拟物和抑制剂分别过表达和抑制GCN-MSC及GC-MSC中mi R-374-5p的表达水平,收集转染后MSC的培养上清,体外处理胃癌细胞,观察胃癌细胞增殖和迁移能力的改变。结果 GC-MSC培养上清处理组形成的单细胞集落数目[(112±7)个]多于GCN-MSC组[(48±6)个],细胞间距[(6.5±0.5)cm]小于GCN-MSC组[(15±1)cm],可明显促进胃癌增殖(t=12.02,P0.01)和迁移(t=13.17,P0.01)。GCN-MSC过表达mi R-374-5p后,其培养上清可增加单细胞集落形成数目[(115±12.1)个],缩小细胞间距[(7.83±1.08)cm],促进胃癌增殖(t=9.31,P0.01)和迁移(t=4.88,P0.01)。抑制剂组中培养上清处理组单细胞集落数目[(60±10.2)个]减少,细胞间距[(12.17±1.47)cm]增加,mi R-374-5p抑制剂可逆转GC-MSC促进胃癌增殖(t=5.47,P0.01)和迁移(t=4.95,P0.01)能力。结论 mi R-374-5p是调控微环境MSC促进胃癌增殖与迁移的重要分子。     

沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的探讨沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法将卵巢癌细胞分为Blank组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(siRNA-NC)组和携带wee1基因片段(siRNA-wee1)组,利用siRNA技术在卵巢癌细胞中沉默wee1基因,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法(WB)检测3组卵巢癌细胞wee1 RNA及蛋白表达水平,采用细胞划痕试验、Transwell试验观察卵巢癌细胞平板集落形成数及卵巢癌细胞迁移、侵袭能力,采用WB观察卵巢癌细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况。结果siRNA-wee1组卵巢癌细胞wee1 RNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05),卵巢癌细胞集落形成数少于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),卵巢癌细胞迁移、侵袭能力低于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、Cyclin-D1和MMP-7表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05)。结论沉默wee1基因可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,进而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

咪达唑仑通过下调circASXL1抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨咪达唑仑对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的可能机制。方法 体外培养胃癌HGC-27细胞,用不同剂量(10、20、40μmol/L)咪达唑仑干预24 h后,CCK-8法、克隆形成实验、Transwell分别检测细胞增殖抑制率、克隆数、迁移及侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,qRT-PCR法检测细胞中circASXL1表达。分别以53例癌旁组织、胃黏膜上皮细胞GES-1为对照,qRT-PCR法检测53例胃癌组织和HGC-27细胞中circASXL1表达。同时,咪达唑仑干预HGC-27细胞24 h后,qRT-PCR法检测细胞中circASXL1表达。转染circASXL1小干扰RNA或过表达载体至HGC-27细胞,上述相同方法观察circASXL1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与对照组比较,HGC-27细胞经不同剂量咪达唑仑干预后,细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),细胞克隆数、迁移数、侵袭数及N-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05)。胃癌组织中circASXL1的表达明...     

钠钙交换器1对肝细胞肝癌增殖与侵袭的影响

目的:探讨钠钙交换器1(NCX1)在肝细胞肝癌(简称肝癌)侵袭和增殖中的作用及分子机制,为肝癌的临床诊治提供新思路。方法:采用荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western印迹法检测不同肝癌细胞系中NCX1的表达情况。构建NCX1干扰慢病毒载体和过表达慢病毒载体,并转染肝癌细胞。采用细胞迁移、侵袭实验观察NCX1对肝癌细胞迁移、侵袭的影响;采用细胞增殖实验观察NCX1对肝癌细胞增殖的影响;ELISA、Western印迹法检测NCX1相关蛋白的表达。结果:高转移潜能肝癌细胞系(MHCC97H、HCCLM3)NCX1表达高于低转移潜能肝癌细胞系(HepG2、Huh7、SMMC-7721),差异有统计学意义(P0.05)。转染NCX1后,肝癌细胞侵袭及增殖能力明显增加(P0.05);细胞因子(TGF-β_1、IL-6、TNF-α)分泌明显增多(P0.05);肝癌上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:NCX1体外可能通过升高肝癌细胞EMT相关蛋白表达促进肝癌生长、侵袭及转移,是潜在的肝癌诊治靶标。     

SOX9在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞HGC-27生物学功能的影响

目的分析性别决定区域Y盒(SOX9)在胃癌中的表达及功能,并初步探讨其作用机制及其临床应用价值。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌患者肿瘤组织中SOX9的表达水平。通过平板克隆、Transwell迁移试验观察SOX9基因敲减后对人胃癌细胞系HGC-27细胞增殖和迁移的影响。采用qRT-PCR检测干细胞相关基因Nanog、SOX2和OCT4以及分化指标CK18和MUC1基因的表达水平;western blot检测SOX9、SOX2、Oct-4、Nanog及E-cadherin蛋白的表达水平。结果SOX9在胃癌患者肿瘤组织(3.84±5.08)中呈高表达(t=2.115,P=0.040)。经慢病毒转染敲减SOX9基因后,可显著抑制HGC-27细胞增殖能力(F=699.3,P<0.01)及迁移能力(F=1166,P<0.01)。此外,SOX9基因敲减可下调干细胞相关基因Nanog、SOX2和OCT4等的表达,并且促进E-cadherin蛋白的表达(P均<0.05)。结论SOX9基因在胃癌组织中高表达,具有促进胃癌发生发展的作用,可能成为胃癌诊断和预后评估的标志物。     

Sema3C promotes hepatic metastasis and predicts poor prognosis in gastric adenocarcinoma

ObjectiveSemaphorin 3C (Sema3C) may regulate tumor metastasis and prognosis. We determined the biological roles of Sema3C in the hepatic metastasis of gastric adenocarcinoma and evaluated its clinical significance as a potential biomarker.MethodsSema3C expression in gastric cancer (GC) cell lines and tissues was measured using RT-qPCR and western blotting. Moreover, Sema3C functions were analyzed using Transwell assays and in vitro metastasis assays in gain- and loss-of-function experiments. Furthermore, the impact of Sema3C on the prognosis of 80 randomly selected patients with GC was investigated by immunohistochemistry. Additionally, the expression of epithelial-mesenchymal transition (EMT) indicators was verified by immunohistochemistry in GC tissues.ResultsSema3C expression was significantly upregulated in highly metastatic GC cell lines and tissues. Additionally, Sema3C promoted invasion, migration and hepatic metastasis in GC cells. Moreover, Sema3C expression was positively correlated with clinicopathological features in GC and paired hepatic metastatic tissues, and Sema3C expression was an independent prognostic factor. Finally, Sema3C expression was associated with node metastasis, hepatic metastasis and EMT marker expression.ConclusionsSema3C may play roles in regulating the EMT and metastasis of gastric adenocarcinoma, highlighting its potential use as a prognostic factor for hepatic metastasis and poor prognosis in gastric adenocarcinoma.     

肿瘤相关巨噬细胞促进非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的研究

目的研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对非小细胞肺癌增殖、转移的影响。方法免疫组化方法分析肺癌组织中巨噬细胞浸润情况。CCK-8法和Transwell法分别检测单核巨噬细胞系THP-1(构建为M2型TAMs后)对肺癌细胞系A549细胞增殖和侵袭能力的影响。结果免疫组化结果显示,TAMs浸润数在肺癌组织中显著多于癌旁组织。激活诱导的TAMs细胞促进A549细胞的增殖和侵袭。结论巨噬细胞浸润增加造成的肿瘤周围炎症微环境可能是肺癌发展的机制之一。     

外泌体转运linc-UFC1促进胃癌细胞增殖和迁移

目的探讨外泌体(exosome)来源linc-UFC1对胃癌细胞增殖和迁移的作用及机制。方法采用linc-UFC1高表达的胃癌细胞系BGC-823来源的外泌体处理胃癌细胞系MKN-45 48 h后,q RT-PCR检测linc-UFC1含量变化,细胞生长曲线和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;采用sh RNA敲减BGC-823细胞来源的外泌体中的linc-UFC1,作用于MKN-45细胞系,检测MKN-45细胞的linc-UFC1含量、增殖和迁移能力。结果与胃黏膜上皮细胞GES-1来源的外泌体相比,BGC-823细胞来源的外泌体中linc-UFC1的水平明显升高(q=56.12,P0.01),而MKN-45来源的外泌体中linc-UFC1表达水平明显降低(q=5.98,P0.01);经BGC-823外泌体处理后,与PBS组相比,MKN-45细胞内linc-UFC1水平明显升高(q=20.03,P0.01),细胞增殖速率加快(q=25.84,P0.01),平板克隆形成能力(q=48.73,P0.01)和细胞迁移能力也明显增强(q=57.95,P0.01);Linc-UFC1经敲减后,BGC-823外泌体中linc-UFC1水平明显降低(t=11.67,P0.01);与对照外泌体处理组相比,外泌体上调胃癌细胞内linc-UFC1水平的作用被减弱(q=14.08,P0.01),促进细胞增殖(q=14.45,P0.01),平板克隆形成(q=18.58,P0.01)及迁移(q=16.61,P0.01)的作用被抑制。结论外泌体可通过转运linc-UFC1促进胃癌细胞增殖及迁移。     

幽门螺杆菌L 型感染对胃癌侵袭和转移能力的影响

目的：探讨幽门螺杆菌L型（H p‐L型）感染对胃癌侵袭和转移能力的影响。方法选取胃癌患者80例,每例患者采集癌组织及癌旁正常组织各1份,制作切片标本,采用革兰染色、免疫组化染色、透射电镜对组织标本进行 Hp‐L型、基质金属蛋白酶‐9（MMP‐9）、血管内皮生长因子（VEGF）检测。结果癌组织标本 Hp‐L 型阳性率为67．50％,高于癌旁正常组织的23．75％（P＜0．05）。癌组织标本MMP‐9、VEGF阳性率均高于癌旁正常组织（P＜0．05）。 Hp‐L型阳性癌组织VEGF、MMP‐9阳性率均高于 Hp‐L型阴性癌组织（P＜0．05）。胃癌组织Hp‐L型阳性率与癌细胞局部和远处淋巴结转移及侵袭深度相关,与肿瘤大小无关。结论 Hp‐L型感染与胃癌的发生密切相关,也有可能对胃癌转移和侵袭产生影响。