KLF15在人肺腺癌中表达的临床意义

目的:Krüppel样因子15(Krüppel-like factor 15,KLF15)参与肿瘤的增殖、侵袭和转移,但在肺腺癌中的表达和作用尚不明确。本研究探索KLF15蛋白在肺腺癌患者中的表达及其临床意义。方法:收集我院4例肺腺癌组织及匹配的癌旁组织,Western blot分析这些组织中KLF15蛋白表达的差异。同时收集我院72例肺腺癌患者的肿瘤组织标本及临床资料,免疫组织化学染色分析患者肺癌标本中KLF15蛋白的表达,分析其表达与患者临床特征包括预后的关系。另外,采用质粒转染的方法上调肺腺癌A549细胞中KLF15的表达,CCK-8法分析KLF15蛋白对肺腺癌细胞增殖能力的影响。结果:在4例肺腺癌及匹配的癌旁组织中,肺腺癌组织中KLF15蛋白表明显低于癌旁组织。在72例肺腺癌病理标本中,KLF15蛋白低表达或不表达者53例,占73.6%,KLF15高表达者19例,占26.4%。KLF15蛋白高表达的患者,其5年生存率明显优于KLF15低表达的患者(P0.01);KLF15蛋白表达与肺腺癌患者的病理分期(P0.01)及T分期明显相关(P0.01),KLF15蛋白低表达是肺腺癌患者不良预后的重要危险因素。上调肺腺癌细胞中KLF15蛋白的表达可明显抑制肺腺癌细胞的生长。结论:KLF15抑制肺腺癌细胞的生长,有望成为肺腺癌患者的治疗靶点和预后分子标志物。     

KLF17对裸鼠移植瘤生长的影响及其在体调控靶基因的筛选和功能分析

目的:研究Krüppel样因子17(Krüppel-like factor 17,KLF17)在裸鼠移植瘤中的作用并分析KLF17在体调控的靶基因及其功能和参与的信号通路。方法:慢病毒转染技术稳定上调人肺腺癌A549细胞及下调人肺腺癌H322细胞中KLF17的表达。11只BLAB/c nu/nu裸鼠分为上调组5只和下调组6只,分别通过左、右侧躯体皮下注射KLF17上调和下调的相应细胞及其对照细胞,观察KLF17对裸鼠移植瘤生长的影响;Real-time PCR及免疫组织化学染色分析裸鼠移植瘤组织中KLF17 mRNA及蛋白的表达,转录组测序技术分析上调KLF17表达后裸鼠移植瘤中差异表达的基因,通过The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库分析KLF17调控的差异基因的功能,Gene Ontology和KEGG PATHWAY富集分析差异基因的功能和可能参与的信号通路。结果 :上调A549细胞中KLF17的表达后,其裸鼠移植瘤生长速率显著低于空载体对照组(P0.05),下调H322细胞中KLF17表达后,其裸鼠移植瘤生长速率及移植瘤重量均显著高于空载体对照组(P0.01,P0.05)。在裸鼠移植瘤组织中,过表达组KLF17 mRNA及蛋白显著高于对照空载体组。转录组测序结果显示KLF17可能调控的基因有ras基因同源家族成员V(ras homolog family member V,RHOV)和冠蛋白1C(coronin 1C,CORO1C)等。TCGA数据库中肺腺癌患者10年累计生存时间在RHOV和CORO1C mRNA不同表达组明显不同,高表达RHOV及CORO1C的肺腺癌患者生存时间显著低于其低表达组。Gene Ontology和KEGG PATHWAY富集分析提示KLF17调控的靶基因(差异基因)可能与肿瘤细胞的刺激应答、生长及黏附有关,并且参与了细胞趋化性、黏附及细胞外基质受体相关的信号通路。结论:KLF17抑制裸鼠移植瘤的生长,并下调RHOV和CORO1C等癌基因,参与调控肿瘤黏附及生长相关信号通路。     

肺腺癌表达TRPM8蛋白的意义

目的:探讨肺腺癌表达瞬时受体电位阳离子通道M亚家族成员8(TRPM8)蛋白的意义。方法:收集112例肺腺癌患者的肿瘤组织标本,对其进行4～5年临床随访。免疫组织化学染色检测肿瘤组织中TRPM8蛋白的表达,分析TRPM8蛋白表达与肺腺癌患者临床特征及预后的关系。培养A549肺腺癌细胞,通过感染慢病毒上调细胞中TRPM8蛋白的表达,CCK-8法及集落形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,划痕实验及Transwell实验观察细胞迁移和侵袭。培养H1299肺腺癌细胞,通过感染慢病毒上调细胞中TRPM8表达后,分别在免疫缺陷小鼠左右臀部皮下注射对应空载体细胞及上调TRPM8的细胞,分析TRPM8对移植瘤生长的影响。结果:肺腺癌组织存在TRPM8表达。TRPM8蛋白高表达的肺腺癌患者,其4～5年累积生存率高于TRPM8蛋白低表达的患者(P=0.017),且其肿瘤最大径小于低表达的患者(P=0.028)。上调A549细胞中TRPM8的表达后,细胞活力较空载体组和亲本细胞组显著减弱,形成的集落数显著减少,处于S期的细胞比例显著升高,迁移和侵袭能力显著下降(P0.01)。与空载体对照细胞株比较,上调H1299细胞中TRPM8的表达后,其在免疫缺陷小鼠皮下的移植瘤生长速率显著下降,肿瘤重量显著降低(P0.01)。结论:TPRM8在肺腺癌中具有抑癌作用,低表达TRPM8蛋白的肺腺癌患者预后不良。     

HMGB2对肺腺癌细胞周期和增殖的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白B2(HMGB2)对肺腺癌细胞周期和增殖的影响。方法:从Cancer RNA-Seq Nexus (CRN)数据库分析肺腺癌组织HMGB2表达情况;从OncoLnc数据库分析HMGB2与肺腺癌患者预后的相关性;从肿瘤单细胞数据库(CancerSEA)分析HMGB2与肺腺癌细胞14种功能状态的相关性;利用siRNA技术下调人肺腺癌A549细胞中HMGB2表达,通过real-time PCR和Western blot验证沉默效果,CCK8和EdU实验检测细胞的增殖。结果:HMGB2在肺腺癌中高表达;HMGB2高表达组肺腺癌患者的总生存期明显低于HMGB2低表达患者(log-rank检验P=0.017 3);HMGB2表达与肺腺癌细胞周期和增殖呈正相关;敲减HMGB2表达后A549细胞的活力和增殖能力显著降低(P<0.05)。结论:HMGB2的表达与肺腺癌细胞周期和增殖显著正相关,可以作为潜在的评估肺腺癌患者预后的标志物和治疗靶标。     

TNF-α通过调控KLF4抑制口腔鳞癌细胞CAL27增殖

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）通过上调口腔鳞癌细胞CAL27中Krüppel样因子4（KLF4）表达对细胞增殖的影响。方法：用不同浓度的TNF-α（0、25、5、10、20 ng/ml）处理CAL27细胞24 h,免疫印迹试验（Western blot）检测KLF4表达变化;用20 ng/ml TNF-α处理细胞,分别于24 h、48 h、72 h用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖变化;构建过表达KLF4的CAL27细胞,MTT检测其对细胞增殖的影响;MTT检测沉默KLF4（siKLF4）及siKLF4联合TNF-α 处理对细胞增殖能力的影响。结果：MTT检测发现TNF-α可抑制细胞增殖;TNF-α可呈剂量依赖性地诱导CAL27细胞中KLF4表达;Western blot和qPCR检测显示成功构建过表达KLF4的CAL27细胞;过表达KLF4可抑制细胞增殖;沉默KLF4可部分恢复TNF-α对CAL27细胞增殖的抑制作用。结论：TNF-α可诱导口腔鳞癌细胞CAL27中KLF4表达增加,KLF4可能参与了TNF-α对CAL27细胞增殖的抑制作用。     

卵巢浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21表达及其预后意义

目的探讨不同级别卵巢浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21蛋白表达的差异和预后意义。方法应用免疫组化EliVision法检测卵巢低级别和高级别浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21蛋白的表达,Kaplan-Meier单因素和Cox多因素生存分析其与患者预后的关系。结果 SP1、KLF4和p21蛋白在高级别浆液性腺癌中的阳性率分别为74.5%、17.0%和11.7%,低级别浆液性腺癌中的阳性率分别为65.2%、34.8%和26.1%,与对照组相比,SP1表达均明显升高(P0.05),而KLF4和p21表达均明显降低(P0.05)。三者在高、低级别液性腺癌中的表达差异无显著性(P0.05)。SP1、KLF4和p21蛋白表达与高级别液性腺癌FIGO分期密切相关,且SP1还与术后有无残留灶密切相关(P0.05)。卵巢高级别液性腺癌中SP1表达与KLF4、p21的表达均呈显著负相关(P0.05)。高级别液性腺癌中SP1蛋白阳性者的5年生存率明显低于阴性者,而KLF4和p21蛋白阳性者的5年生存率明显高于阴性者(P0.05)。Cox多因素分析显示,FIGO分期和SP1高表达是影响高级别浆液性腺癌预后的独立因素。结论 SP1蛋白过表达以及KLF4和p21蛋白低表达,参与了高、低级别浆液性腺癌的发生,三者表达与高级别浆液性腺癌的预后有关,且SP1是独立预后因素。     

C-erbB2过度表达对肺腺癌预后的临床观察

目的：前瞻性探讨C-erbB2表达等指标对肺腺癌的复发及生存期的影响。方法：采用免疫组化等方法检测70例肺腺癌的病理标本C-erbB2表达等，并长期随访患者。结果：患者的KPS评分、肿块大小、有无远处转移、TNM分期以及C-erbB2表达等与肺腺癌复发及生存期有关（P〈0．05）。结论：患者的KPS评分、肿块大小、有无淋巴结转移、TNM分期以及C-erbB2表达等指标可以预测肺腺癌的预后。     

非小细胞肺癌中Naked1的表达及意义

目的探讨Naked1(NKD1)蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达与预后的关系。方法采用RT-PCR、Western blot法对35例新鲜肺癌组织进行检测;采用免疫组化SP法对100例NSCLC石蜡标本进行检测。结果在79%的新鲜肺癌标本中,NKD1的蛋白水平明显低于相对应的癌旁正常肺组织,而mRNA水平明显高于正常肺组织(P<0.01)。在78%的NSCLC免疫组化标本中,NKD1的表达明显低于正常肺组织(P<0.01)。在肺鳞癌中NKD1的表达低于腺癌,并与分化程度呈正相关(P<0.01),与淋巴结转移(P<0.05)和TNM分期(P<0.01)呈负相关,NKD1低表达者的术后生存时间明显低于正常表达者(P=0.01)。结论在NSCLC中,NKD1 mRNA上调,而蛋白水平下调,其蛋白的下调程度与临床病理因素和不良预后相关。     

Expression and significance of NKD1 in non-small cell lung cancer

目的 探讨Naked1(NKD1)蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达与预后的关系.方法 采用RT-PCR、Western blot法对35例新鲜肺癌组织进行检测;采用免疫组化SP法对100例NSCLC石蜡标本进行检测.结果 在79%的新鲜肺癌标本中,NKD1的蛋白水平明显低于相对应的癌旁正常肺组织,而mRNA水平明显高于正常肺组织(P<0.01).在78%的NSCLC免疫组化标本中,NKD1的表达明显低于正常肺组织(P<0.01).在肺鳞癌中NKD1的表达低于腺癌,并与分化程度呈正相关(P<0.01),与淋巴结转移(P<0.05)和TNM分期(P<0.01)呈负相关,NKD1低表达者的术后生存时间明显低于正常表达者(P=0.01).结论 在NSCLC中,NKD1 mRNA上调,而蛋白水平下调,其蛋白的下调程度与临床病理因素和不良预后相关.     

PLCE1通过调控p53抑制肺腺癌A549细胞凋亡

目的:探讨磷脂酶Cε1(PLCE1)抑制肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法:选用人肺腺癌细胞株A549作为研究对象。采用real-time PCR和Western blotting法分别检测PLCE1抑制剂U-73122处理前、后肺腺癌细胞株A549中PLCE1和p53 mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:肺腺癌细胞株A549高表达PLCE1,低表达p53;抑制PLCE1表达后A549细胞中p53表达上调,细胞凋亡明显增加。结论:PLCE1通过抑制肺腺癌A549细胞株中p53的表达,从而抑制A549细胞凋亡。     

miRNA-181a在人肺腺癌细胞中的表达及对细胞功能的影响

目的:研究微小RNA-181a(mi RNA-181a)在不同人肺腺癌细胞中的表达及其转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP后对其细胞功能的影响及机制。方法:利用实时荧光定量PCR方法检测mi RNA-181a在人正常肺上皮细胞系BEAS-2B、人肺腺癌细胞系A549、人肺腺癌耐药细胞系A549/DDP中的表达;利用p Genesil-mi RNA-181a真核表达质粒转染A549/DDP细胞,同时设置未转染组和空载组;分别采用实时荧光定量PCR、MTT法、流式细胞术、Transwell实验以及Western blot法检测mi RNA-181a转染前后的表达情况、对A549/DDP细胞活力、细胞周期、细胞侵袭能力和顺铂(DDP)作用下的细胞生长抑制率、细胞凋亡率的影响以及对A549/DDP细胞中mi RNA-181a的靶基因bcl-2和p53蛋白表达的影响。结果:mi RNA-181a在A549和A549/DDP中的表达量显著低于BEAS-2B(P0.05),且在A549/DDP中表达量最低;mi RNA-181a转染A549/DDP细胞后其表达显著升高(P0.05)且能够抑制A549/DDP细胞活力、细胞周期和细胞侵袭能力(P0.05),同时升高DDP作用下A549/DDP细胞的生长抑制率和细胞凋亡率(P0.05);mi RNA-181a转染A549/DDP细胞后抑制Bcl-2蛋白的表达而促进P53蛋白的表达(P0.05)。结论:mi RNA-181a可能参与了肺腺癌的发生发展,mi RNA-181a可作为人肺腺癌治疗的新靶点。     

过表达miR-10b促进肺癌细胞系A549增殖

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌及癌旁组织中miR-10b(miR-10b)表达水平及miR-10b是否通过调控锌指转录蛋白基因(KLF4)对肺癌细胞系A549恶性化的影响。方法 40例NSCLC患者病理切片,原位杂交检测肺癌及癌旁组织中miR-10b的表达量;对肺癌细胞系A549转染miR-10b mimics后,CCK-8法检测肺癌细胞增殖;real-time PCR及Western blot检测KLF4 mRNA及蛋白水平;软琼脂克隆形成实验检测过表达miR-10b对A549细胞的肿瘤恶性化程度的影响。结果肺癌细胞A549及肺癌组织中miR-10b的表达量分别高于正常肺上皮细胞16HBE及癌旁组织;过表达miR-10b模拟物的A549细胞中,KLF4蛋白水平显著下降(P0.05);过表达的miR-10b可显著增加A549细胞的增殖速度及在软琼脂内的成瘤性。结论 miR-10b在不同类型细胞及组织中具有分布差异性、可能是通过抑制KLF4的表达促进肺癌细胞增殖及恶性化。     

BAG2基因影响A549细胞增殖的机制研究及其临床意义

目的:研究Bcl-2相关抗凋亡基因2(Bcl-2-associated athanogene,BAG2)对人肺腺癌A549细胞增殖能力的影响及作用机制,并探讨其临床意义。方法:以Western blot法分析BAG2在A549细胞与正常上皮细胞系HBE中的蛋白表达水平;在体外以RNA干扰(RNAi)技术敲低A549细胞中BAG2基因的表达,并采用CFSE染色结合流式细胞术、WST-1法和Western blot法对A549细胞增殖和细胞周期相关蛋白进行评价。此外,我们利用q PCR检测BAG2在肺癌组织c DNA芯片中的表达情况,同时分析了GEO数据库中BAG2表达与肺癌患者预后之间的关系。结果:与HBE细胞比较,A549细胞中BAG2的表达显著升高(P0.05);干扰BAG2基因后,A549细胞在48 h和72 h时点时增殖均被抑制;在48 h时点,干扰BAG2可导致细胞周期蛋白cyclin B1与cyclin E1表达显著下调(P0.05)。在人肺癌组织中,BAG2基因表达显著高于癌旁组织,并与肺癌患者生存预后呈显著负相关(P0.01)。结论:BAG2基因可能通过上调细胞周期蛋白cyclin B1与cyclin E1影响A549细胞的增殖,其表达量与肺癌患者预后呈显著负相关。     

MADD在肺腺癌组织中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨MADD在肺正常组织及肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:收集肺临床病理组织标本,免疫组化法检测肺正常组织和肺癌组织MADD表达;培养人肺腺癌A549细胞,逆转录PCR检测其IG20基因表达;用携带MADD基因的质粒和能够沉默MADD表达的慢病毒载体分别转染A549细胞,Western blot、MTT分析和流式细胞术检测其MADD表达、增殖及凋亡。结果:肺腺癌组织MADD表达水平明显高于肺正常组织和肺鳞癌组织;A549细胞能够表达MADD;高表达MADD能抑制A549细胞凋亡,提高其增殖活力,而沉默MADD表达则能促进A549细胞凋亡,降低其增殖活力。结论:肺腺癌组织MADD表达明显增高;MADD可通过抑制凋亡来促进肺腺癌细胞生存。     

重组P16蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其功能研究

【摘 要】： 目的 在原核细胞中表达P16蛋白并纯化,研究外源性P16蛋白对肿瘤细胞周期的影响。方法 构建外源性P16融合蛋白的原核表达载体pQE31-p16。IPTG诱导大肠杆菌BL21菌株表达P16融合蛋白,通过亲和层析柱纯化目的蛋白,经Western-blot鉴定后, 将P16蛋白转导入人肺腺癌细胞系A549中, 利用免疫细胞化学方法对蛋白进行细胞内定位, 同时绘制细胞生长曲线,并用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果 所构建P16融合蛋白的原核表达载体pQE31-p16,可在大肠杆菌中稳定表达,通过纯化获得P16融合蛋白。利用lipofectamine2000转染试剂可将P16蛋白转入A549细胞中,生长曲线与流式细胞术结果显示P16蛋白可抑制肿瘤细胞增殖。结论 原核细胞表达的P16蛋白经纯化,转导进入A549细胞,可影响其生长周期,抑制A549细胞的增殖。     

人肺腺癌细胞系与支气管上皮细胞系差异蛋白质组学研究

目的:通过对肺腺癌细胞系A549细胞和正常上皮细胞系HBE蛋白组成差异的分析,寻找与肺癌发生、发展相关的差异蛋白,为进一步阐明肺癌发病机制提供更多有价值的信息;为诊断或者预后提供候选分子标记物。方法:运用固相pH梯度双向电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI/TOF/TOF/MS)分析技术筛选出A549细胞和支气管上皮细胞系HBE间表达水平显著差异的蛋白,并且利用免疫印迹方法对筛选的标记物蛋白进行验证。结果:筛选出21个差异蛋白,涉及到细胞的代谢、蛋白质修饰、细胞运动,通道蛋白和信号转导调控等方面。鉴定并且验证在A549细胞中显著高表达热休克蛋白27(HSPB1)。结论:肺腺癌细胞系与正常支气管上皮细胞系蛋白质表达存在显著差异,其中肺腺癌中高表达HSPB1可能在肺腺癌癌变过程中发挥重要作用,本结果为进一步寻找肺腺癌癌变蛋白标志物奠定了基础。     

Μolecular impact of bone morphogenetic protein 7, on lung cancer cells and its clinical significance

The aim of this study was to investigate the expression of bone morphogenetic protein 7 (BMP7), in human pulmonary cancer tissues/cells and to evaluate the cellular impact of bone morphogenetic proteins on pulmonary cancer cells. BMP7 expression was determined in human lung cancer cell lines. The invasiveness and growth of cells transfected with BMP7, in vitro, were evaluated using the in vitro invasion assay and in vitro tumour models. Cellular migration was analysed using wounding assays. BMP7-positive tumours correlated with the absence of bone metastasis (P=0.040). In this analysis, we identified that 4 of 4 small cell lung cancer (SCLC) tissue specimens had no BMP7 expression, which illustrated that BMP7 may have no role in SCLC. BMP7 expression was not correlated with the overall survival time in lung cancer patients. Downregulation of BMP7 expression significantly inhibited the invasiveness of SPC-A1 cells (P<0.001) and forced-expression of BMP7 dramatically increased the motility of A549 cells. Overexpression of BMP7 in A549 cells and its knockdown in SPC-A1 cells did not significantly alter proliferation compared with the control cells (P>0.5 respectively). In conclusion, we have demonstrated that BMP7 has an important role in controlling lung cancer cell motility and invasiveness, without affecting the growth process, cell proliferation and cell apoptosis. A higher BMP7 expression may be an indicator for bone metastasis. The therapeutic role of BMP7 warrants further investigation.