尿液分离产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及耐药机制分析

目的探究尿液分离产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学特征及其耐药机制。方法收集南京大学医学院附属鼓楼医院2016年1—12月尿液分离大肠埃希菌308株,通过药敏试验筛选产ESBLs及磷霉素耐药菌株;PCR扩增ESBLs基因及磷霉素相关耐药基因;采用多位点序列分型(MLST)对菌株进行遗传相关性分析,采用接合试验验证耐药基因的转移性。结果 308株尿液分离大肠埃希菌中产ESBLs菌株168株(54.54%);产ESBLs菌株中检出磷霉素耐药菌株18株(10.71%,18/168)。其中,ESBLs耐药基因携带率分别为bla_(SHV) 88.9%(16/18)、bla_(CTX-M) 77.8%(14/18)、bla_(TEM-208) 5.6%(1/18);bla_(TEM-1b) 61.1%(11/18);fosA3基因的携带率为83.3%(15/18)。MLST分型主要为ST131(27.78%)。接合试验表明,fosA3阳性菌株的耐药性均具有可转移性。结论产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素的耐药率仍处于较低水平。fosA3基因是造成磷霉素耐药的主要机制,该基因位于可接合的质粒上,易于水平传播,需要高度重视。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及其基因分析

目的了解临术分离菌中产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌发生率，分析其耐药表型，探讨其ESBLs基因类别。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的纸片扩散法，对364株大肠埃希菌和71株肺炎克雷伯菌进行产ESBLs菌株初筛试验，并用双纸片确证试验和双纸片协同试验进行产ESBLs菌株确证。按照NCCLS文件标准，用Kirby-Bauer纸片扩散法进行产ESBLs株21种抗生素药敏试验。用PCR方法扩增168株ESBLs表型阳性菌中blaTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组、TOHO-1组等4种基因。结果（1）大肠埃希菌和克雷伯菌中产ESBLs的检出率分别为46．7％和32．4％。（2）产ESBLs菌对青霉素类100％耐药；对第1、2代头孢菌素耐药率达85％～100％；对除头孢他定以外的第3代头孢菌素，产ESBLs大肠埃希菌耐药率为80％以上，产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率为65％～75％以上；产ESBLs菌对复方新诺明的耐药率为75％～85％；产ESBLs大肠埃希菌对环丙沙星耐药率为80％～90％、庆大霉素耐药率为50％～75％；产ESBLs菌对阿米卡星、头孢替坦、亚胺培南有较好的敏感性（80％～90％以上）。（3）产ES-BLs大肠埃希菌中，blaTEM-1、blasSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为93．9％、7．4％和53．4％。51．4％的菌株同时携带2种耐药基因，2．7％的菌株同时携带3种耐药基因。产ESBLs肺炎克雷伯菌中blatTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为50．0％、95．0％和20．0％。同时携带2种耐药基因的菌株占35．0%，同时携带3种耐药基因的菌株占15．0％。两种细菌中均未检出TOHO-1组基因。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的检出率较高，大肠埃希菌中产ESBLs菌比例有逐年上升趋势。产ESBLs菌对头孢噻肟的耐药率远高于头孢他定，且多数菌株对青霉素类，第1、2、3代头孢菌素、喹诺酮类、磺胺类、氨基糖甙类等抗生素呈多重耐药。大肠埃希菌中以TEM型和CTX-M型基因为主。肺炎克雷伯菌以SHV型基因为主，同时存在TEM型和CTX-M型基因。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床分布与耐药分析

目的了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药情况。方法对2010年1～12月临床标本中分离的967株大肠埃希菌和988株肺炎克雷伯菌的临床分布和药敏试验结果用WHONET 5.4软件进行统计分析。结果大肠埃希菌主要从尿液（32.9%）中检出,主要来自普外科（21.9%）和重症监护病房（17.5%）,产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株检出率为58.9%;肺炎克雷伯菌主要从痰液标本中检出,主要来自重症监护病房（21.7%）和神经外科（17.3%）,产ESBLs菌株检出率为35.0%;除哌拉西林/他唑巴坦、头孢替坦、亚胺培南、呋喃妥因外,两种细菌中产ESBLs菌株对其他抗菌药物的耐药率均高于其非产ESBLs菌株。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是临床上的常见致病菌,加强产ESBLs菌株检测和细菌耐药监测对指导临床用药具有重要意义。     

1株血标本分离的碳青霉烯类、磷霉素耐药大肠埃希菌耐药机制研究

目的探究复旦大学附属华山医院2010年12月血标本分离的1株碳青霉烯类、磷霉素耐药大肠埃希菌的耐药机制及耐药基因可能的传播方式。方法对该株大肠埃希菌进行药敏试验、多位点序列分型(MLST)、耐药基因筛选、质粒分型、PCR mapping基因环境分析。结果该菌株对碳青霉烯类、磷霉素耐药,超广谱β内酰胺酶(ESBL)阳性。MLST属ST46型。碳青霉烯类耐药基因blaKPC-2和磷霉素耐药基因fos A3存在~70 kb接合型质粒上,分别介导碳青霉烯类、磷霉素耐药。β内酰胺酶耐药基因blaTEM、blaCTX-M存在~150 kb接合型质粒上,介导菌株对β内酰胺类药物耐药。PCR mapping结果显示blaKPC-2位于Tn1721-blaKPC-2-Tn3样结构内,fos A3位于IS26-fos A3-IS26移动元件。结论此株来源于血标本菌株携带blaKPC-2、fos A3、blaTEM、blaCTX-M等多种临床常见耐药基因,其耐药机制及耐药基因可能的传播方式,应引起医院感控高度重视。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型研究

目的 了解我院临床分离的大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型和基因型分布情况.方法 对88株大肠埃希菌进行耐药分析,并用筛选试验和确证试验确认产ESBLs菌株,对耐药基因进行聚合酶链反应（PCR）扩增分析,选部分产物测序.结果 88株大肠埃希菌中共检出31株产ESBLs（35.2%）菌株.产ESBLs菌株对头孢他啶的敏感率为58.1%,对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为3.2%.PCR结果显示,产ESBLs大肠埃希菌基因主要是CTX-M型（90.3%）,其中以CTX-M-14、CTX-M-3型为主;TEM基因均为TEM-1型,SHV基因均为SHV-1型.结论 我院产ESBLs大肠埃希菌检出率为35.2%,其耐药性明显高于非产ESBLs菌株;其基因均为CTX-M型,其中以CTX-M-14和CTX-M-3型为主;TEM-1型广谱酶广泛存在于产ESBLs的大肠埃希菌中,则SHV-1型少见.     

临床分离大肠埃希菌耐药机制和基因分型研究

目的研究临床分离大肠埃希菌的耐药机制及遗传多态性。方法用WHONET5.4分析菌株药敏情况。PCR检测大肠埃希菌I类整合酶基因、插入序列共同区（ISCR/orf513）和产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因;以肠杆菌科间的重复序列（ERIC）-PCR检测基因型,SPSS分析多态性。结果除亚胺培南、美洛培南、四环素和哌拉西林/他唑巴坦,产ESBLs菌的耐药率明显高于不产ESBLs菌（P〈0.05）。72株产ESBLs株中I类整合酶,ISCR,blaTEM,blaSHV,blaCTX-M的阳性率分别为51.4%,12.5%,80.6%,0%和36.1%;而27株不产ESBLs株中的阳性率分别为37.0%,3.7%,81.5%,3.7%和3.7%。根据指纹图谱把99株大肠埃希菌基因型分为79种,经SPSS系统聚类分析,可归为18个大泪。结论我院产ESBLs大肠埃希菌主要是CTX-M型;产ESBLs株的I类整合酶阳性率明显高于不产ESBLs株,整合子和ISCR可以共存;ERIC-PCR是一种效果较好的基因分型方法,我院大肠埃希菌散发存在。     

运用多重PCR技术检测CTX-M型耐药基因的研究

目的了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的阳性率、耐药性以及基因型分布。方法采用K-B琼脂扩散法,检测临床分离的85株大肠埃希菌和41株肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用双纸片增效试验检测产ES-BLs菌株,用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果检测菌株中,ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%。所有检测菌株对亚胺培南敏感。产ESBLs的菌株对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等的耐药率为100.0%;质粒接合试验证实,CTX-M型ESBLs介导的耐药可以水平转移;ESBLs阳性菌株中有48株扩增到CTX M型耐药基因,其中CTX-M-3型11株,CTX-M-9型7株,CTX-M-14型25株。结论产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高,以CTX-M-14型为多。碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs最有效药物。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌qnrB基因的检测

目的:了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌株qnrB基因的存在情况及与细菌耐药的关系。方法:收集福建省福州市三家"三甲"医院临床分离的菌株,菌株药敏试验检测采用K-B法,聚合酶链反应对42株产ESBLs肺炎克雷伯菌和44株产ESBLs大肠埃希菌进行qnrB基因筛查。结果:42株产ESBLs肺炎克雷伯菌有5株检出qnrB基因,检出率为11.90%,44株产ESBLs大肠埃希菌中有7株检出qnrB基因,检出率为15.91%。检出qnrB基因的5株肺炎克雷伯菌和7株大肠埃希菌对两种喹诺酮药物均耐药。结论:在福州地区产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中存在qnrB基因,携带qnrB基因的12株细菌对左氟沙星和环丙沙星均耐药。     

社区及院内感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药及耐消毒剂基因分析

目的了解本地区社区获得性和医院内感染大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的发生率，分析和研究其耐药基因和耐消毒剂基因的携带情况。方法收集从临床标本分离的大肠埃希菌95株，经ESBLs确证试验将其中38株阳性菌株分为医院与社区获得性感染2组，用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因TEM、SHV、CTX-M-1以及耐消毒剂基因qacE△1-sull。结果社区获得性大肠埃希菌ESBLs的检出率为30％，医院内感染大肠埃希菌ESBLs的检出率为55％。17株社区获得性感染产ESBLs大肠埃希菌耐药基因TEM的检出率为71％，CTX-M-1的检出率为35％，SHV的检出率为6％，耐消毒剂基因qacE△1-sull的检出率为53％。21株医院内感染产ESBLs大肠埃希菌耐药基因TEM的检出率为71％，CTX-M-1的检出率为43％，SHV的检出率为14％，耐消毒剂基因qacE△1-sull的检出率为62％。结论本地区医院内感染大肠埃希菌ESBLs的检出率明显高于社区获得性感染大肠埃希菌ESBLs的检出率。社区获得性和医院内感染ESBLs大肠埃希菌耐药基因均以TEM型为主，耐消毒剂基因的携带率2组没有组间差异。     

广州地区泌尿系统感染的产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药特征和基因分型

目的了解本地区泌尿系统感染的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌耐药特征及其基因型分布。方法收集广州地区13家医院2001~2003年间自尿培养分离的大肠埃希菌623株,用NCCLS规定的ESBLs初筛和确证试验检测ESBLs,用K-B琼脂扩散法进行药物敏感试验,用PCR方法对分离的产ESBLs菌株进行SHV、CTX-M基因型检测。结果产ESBLs大肠埃希菌检出率为33.4%(208株),其中53.8%(112株)携带CTX-M基因,20.7%(43株)携带SHV型基因,并有2.8%(6株)同时携带CTX-M基因和SHV型基因。产酶株的耐药率显著高于非产酶株,产ESBLs细菌对青霉素类、环丙沙星及头孢菌素类抗生素耐药率较高(高达84.1%~97.6%),对加用酶抑制剂克拉维酸或他唑巴坦的耐药率较低。结论广州地区泌尿系统感染的产ESBLs大肠埃希菌具有多重耐药的特点,其中CTX-M型是流行的基因型。     

胆道感染大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药分析

目的：探讨胆道感染患者中大肠埃希菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及耐药分析。 方法：采用改良的酶提取物三维试验法检测ESBLs和AmpC酶，采用纸片扩散(K-B)法检测大肠埃希菌对18种抗生素的耐药率。结果： 110株大肠埃希菌中检出单产ESBLs 42株，AmpC酶12株，同时产AmpC酶和ESBLs共6株，检出率分别为38.2％、10.9％和5.5％；产酶菌株对抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株。结论：胆道感染大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs，对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素。     

产ESBLs的大肠埃希菌耐药性的转移与基因型的研究

目的 证实临床分离的部分产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌可以把耐药基因转移给敏感的受体菌.方法 用PCR及DNA测序方法检测16株产ESBLs的大肠埃希菌的耐药基因类型,通过接合试验了解耐药基因在细菌间的传递,分别对供体菌和转移接合子进行抗生素药敏试验.结果 从16株产ESBLs的大肠埃希菌中共检出TEM,SHV,OXA-1群和CXT-M-1群4种β-内酰胺酶基因,检出率分别为100%(16/16),93.75%(15/16),12.5%(2/16)和37.5%(6/16).接合试验中得到了4株转移接合子,均携带了blaCTX-M-1基因,经测序分析与供体菌同源性为100%.转移接合子与供体菌具有相似的药敏试验结果.结论 临床分离的产ESBLs大肠埃希菌可以把耐药基因传递给敏感的受体菌,有效控制细菌耐药基因的转移对临床具有重要意义.     

上海发现同时产CYM-2型质粒AmpC酶及CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌

目的研究大肠埃希菌同时产质粒型头孢菌素酶（AmpC酶）及超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的耐药表型及基因型特点。方法在242株大肠埃希菌中用多重聚合酶链反应（PCR）检测质粒AmpC酶;对确认为产CIT群质粒AmpC酶的菌株进行PCR、克隆、测序;接合试验证实耐药基因的可传递性;PCR及测序确定ESBL的基因;等电聚焦电泳检测细菌β-内酰胺酶等电点（PI）;微量稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）。结果12株产CIT群酶细菌所携带AmpC酶基因均为blaCMY-2（PI 9.0）,且均携带blaTEM-1（PI 5.4）,9株同时携带blaCTX-M-14（PI8.0）,无菌株携带blaSHV-like;12株产CMY-质粒AmpC酶细菌有4株接合实验阳性,经PCR证实接合子均传递了blaCMY-2,并有1株同时传递了blaCTX-M-14;多数产CMY-2型酶的细菌呈多重耐药,并有1株菌对碳青霉烯类药物耐药。结论在上海地区首次发现同时产CMY-2型质粒AmpC酶及CTX-M-14型ESBL的大肠埃希菌。     

208例尿路感染大肠埃希菌耐药性分析

【目的】探讨本地区尿路感染大肠埃希菌检出率及耐药情况,为临床合理用药提供依据。【方法】对2010年1月至2011年12月本院尿路感染的住院患者中段尿分离培养出的208株大肠埃希菌的耐药性及超广谱β-内酰胺酶（ ESBLs）菌株进行统计分析。【结果】分离鉴定208株大肠埃希菌,其中产ESBLs株109株,占52．4％,产ESBLs大肠埃希菌对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦及头孢西丁保持较高的敏感性,产ESBLs大肠埃希菌耐药率明显高于非ESBLs株。【结论】尿路感染大肠埃希菌耐药现象比较严重,特别是产ESBLs株,应当加强对产ESBLs菌株及耐药情况的监测,对临床用药和控制耐药菌株的传播有重要意义。     

2株不同序列分型耐黏菌素大肠埃希菌耐药机制分析

目的探讨2株黏菌素耐药大肠埃希菌的耐药机制。方法采用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定药敏系统鉴定细菌及检测常见抗菌药物敏感性,并检测菌株是否产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs);用三维试验检测菌株是否产AmpC酶;用微量肉汤稀释法测定菌株对黏菌素的最低抑菌浓度(MIC);用PCR及测序检测耐药基因;多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株的分子分型和同源性;接合试验和S1酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)对菌株的质粒特征进行分析。结果2株菌均对碳青霉烯类药物敏感,对黏菌素耐药,其中N408对头孢类药物耐药;PCR扩增和测序分析显示2株菌均携带mcr-1基因,且N408和N433分别携带blaCIT和blaTEM-1基因;2株菌质粒接合试验均成功,接合子均检测到mcr-1基因;MLST分析显示N408为ST453型,N433为ST8900型,PFGE显示为不同条带。S1-PFGE显示N408有2个质粒,N433有1个质粒。结论本地区已出现携带mcr-1基因黏菌素耐药大肠埃希菌,且可通过质粒在不同菌株间水平播散,应引起临床的重视,加强此类菌株的检测。     

大肠埃希菌和克雷伯菌临床分离株中整合子介导的多重耐药性的相关性分析Ⅰ

目的研究整合子介导的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的多重耐药性。方法采用聚合酶链反应（PCR）对临床分离的135株大肠埃希菌和59株克雷伯菌进行Ⅰ型和Ⅱ型整合酶基因的检测。结果在135株大肠埃希菌和59株克雷伯菌中，大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）率为50．4％，克雷伯菌产ESBLs率为37.3％，共检出105株细菌携带Ⅰ类整合酶基因，72株为大肠埃希菌，占53.33％（72／135），33株肺炎克雷伯菌，占55.93％（33／59）；其中携带Ⅱ类整合酶基因3株，全部为大肠埃希菌，此3株同时携带Ⅰ类整合酶基因并产ESBLs。结论Ⅰ类整合子在大肠埃希菌和克雷伯菌中分布广泛。整合子与大肠埃希菌和克雷伯菌的耐药有关，即整合子阳性菌比整合子阴性菌更容易产生耐药。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的检测及耐药性分析

目的研究产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的发生及耐药性，为临床抗感染治疗合理使用抗生素提供指导。方法用美国临床实验室标准化研究所推荐的初筛试验和表型确证试验检测ESBLs产生株，使用最低抑菌浓度法和K—B法检测临床各类标本中分离的216株大肠埃希菌对22种抗生素的耐药情况。结果216株大肠埃希菌ESBLs检出率为59．3％，产ESBLs大肠埃希菌对大多数β-内酰胺类药物明显耐药，并对氨基糖苷类、氟喹诺酮类多数耐药，耐药率明显高于非产ESBLs大肠埃希菌，但对亚胺培南100％敏感。结论产ESBLs大肠埃希菌大多为多重耐药菌，其耐药性明显高于非产ESBLs大肠埃希菌，临床微生物实验室应加强对产ESBLs菌株的监测。     

128株大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶及耐药性分析

目的分析大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及其耐药情况。方法对临床标本分离的大肠埃希菌用细菌鉴定药敏分析仪进行细菌鉴定及药敏分析。结果 128株大肠埃希菌中90株产ESBLs,90株产ES-BLs菌株与38株不产ESBLs菌株的耐药情况比较,差异有统计学意义。结论大肠埃希菌产ESBLs率高,应引起临床高度重视。     

95株致泌尿道感染大肠埃希菌耐药性及耐药基因表型分析

目的了解广东医科大学附属医院泌尿系感染患者大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶型(ESBLs)基因型特征和临床耐药情况。方法收集2015年1~10月该院住院或门诊患者的泌尿系感染患者尿液标本中分离培养获得的大肠埃希菌菌株,双纸片协同试验确定产ESBLs大肠埃希菌,PCR扩增技术进行基因分型。结果 95株大肠埃希菌以CTX-M-14型46例最多;TEM型32例;SHV型30例;CTX-M-1型26例;OXA-1型7例;OXA-2型4例;OXA-10型3例。ESBLs阴性菌株TEM型仅5例阳性,其余基因型别为阴性。ESBLs阳性株对多种抗菌药物的耐药率(碳青霉烯类除外)明显高于ESBLs阴性株,而CTX-M-14、CTX-M-1、TEM、SHV四种基因型别大肠埃希菌对18种抗菌药物的耐药性之间差异无统计学意义(P0.05)。结论广东医科大学附属医院泌尿系感染患者产ESBLs大肠埃希菌以CTXM型为主,对常用抗菌药物耐药率高于ESBLs阴性菌株。不同基因型别产ESBLs大肠埃希菌对抗菌药物耐药率没有明显差异。     

山东省滨州市某社区来源产ESBLs大肠埃希菌及mcr-1阳性菌株耐药基因分析

目的 分析城市社区居民肠道来源产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）大肠埃希菌和多黏菌素耐药基因mcr-1阳性菌株的分子流行病学特征。方法 本研究对山东省滨州市某城市社区居民粪便样本中分离的16株产ESBL大肠埃希菌进行药物敏感性试验、全基因组测序（WGS）分析和单核苷酸多态性分析（SNPS）。对多黏菌素耐药的产ESBL大肠埃希菌进行S1-PFGE和Southern杂交确定耐药基因的位置,并用接合试验判断基因的可转移性。结果 某城市社区居民肠道来源产ESBL大肠埃希菌的检出率为40.00%,多重耐药菌占75.00%。WGS分析显示,16株ESBL大肠埃希菌携带多种耐药基因、毒力基因。SNPS分析显示16株产ESBL大肠埃希菌聚集成4个簇。mcr-1阳性产ESBL大肠埃希菌携带的耐药基因mcr-1和blaCTX-M均位于质粒上,且均可随质粒发生水平转移。结论 城市社区居民中可检出多黏菌素耐药ESBL大肠埃希菌,基因mcr-1存在水平传播的可能性。