血红素氧合酶-1 提高无氧无血清条件下骨髓间充质干细胞的生存

目的： 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)是否提高骨髓间充质干细胞(MSCs) 在无氧无血清条件下的存活率。方法：取大鼠骨髓,体外分离扩增培养 MSCs;HO-1腺病毒转染 MSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白 (GFP) 的表达;DAPI 染色观察无氧无血清条件下 HO-1-MSCs、MSCs 细胞核变化;流式细胞仪检测无氧无血清条件下HO-1-MSCs、MSCs 的凋亡率;ELISA 检测无氧无血清条件下 HO-1-MSCs、MSCs 细胞因子的分泌。用无氧无血清条件下 HO-1-MSCs、MSCs 的培养上清液对无氧无血清条件下的心肌细胞进行培养,Western blotting 检测凋亡蛋白 caspase-3 的变化,分光光度计检测 caspase-3 酶活性。结果： HO-1 转染的 MSCs 可稳定高效地表达 GFP; DAPI 染色后,MSCs 细胞核为典型的凋亡形态,HO-1-MSCs 为较均匀蓝色荧光;HO-1-MSCs 在无氧无血清条件下的凋亡率显著低于 MSCs (P<0.01),且在无氧无血清条件下分泌肝细胞生长因子（HGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、血管内皮生长因子 (VEGF) 水平显著增高 (P<0.01);HO-1-MSCs、MSCs 培养上清液在无氧无血清条件下分别培养心肌细胞,HO-1-MSCs 组caspase-3 蛋白和 caspase-3 活性都显著降低 (P<0.01)。结论：无氧无血清条件下,HO-1 提高 MSCs 的存活率;HO-1-MSCs 分泌更多的细胞因子,且对无氧无血清条件下的心肌细胞有保护作用。     

内源性HO-1/CO系统在动脉粥样硬化发病中的作用

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)/一氧化碳(CO)系统在动脉粥样硬化(AS)中的变化、对AS进程的影响及其可能的作用机制。方法家兔予以高胆固醇饮食以及在高胆固醇(n=8)饮食的同时经腹腔注射血红素-L-赖氨酸盐(n=8)或ZnPP-IX(n=8)共10周。结果与正常对照组比较,胆固醇饮食各组血清TC及ox-LDL显著升高(P均<0.01),但血清TC和ox-LDL在胆固醇组、ZnPP-IX组、血红素-L-赖氨酸盐干预组之间均无显著性差异。与对照组比较,胆固醇组主动脉CO生成量显著增加,HO-1表达升高(P均<0.01),主动脉斑块面积达(40.2±8.9)%。与胆固醇组比较,外源性血红素-L-赖氨酸盐干预组的主动脉内膜斑块面积(26.6±9.2)%明显缩小(P<0.01),主动脉HO-1表达及CO的生成量显著升高;与胆固醇组比较,血红素-L-赖氨酸盐干预组的主动脉组织内c-myc及c-fos的mRNA和蛋白表达均显著降低(P均<0.01),而ZnPP组与胆固醇组之间则无明显差异。结论HO-1/CO系统具有抗动脉粥样硬化作用,这种作用并非通过其对血浆TC及ox-LDL的调节实现,可能与该系统干预动脉组织内原癌基因表达从而抑制血管平滑肌细胞增殖有关。     

血红素加氧酶-1过表达延长肝脏低温保存时间的研究

目的 研究血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)过表达延长肝脏低温保存的时间及其机制.方法 利用大鼠肝脏离体再灌注模型,用钴-原卟啉(cobalt protoporphyrin,CoPP)和锌-原卟啉(zincprotoporphyrin,ZnPP)特异地诱导和抑制HO-1,观察肝脏保存0、6、24h,灌注2h后的胆汁生成量,灌流液AST、LDH、TNF-α和IL-6的活性,肝脏MDA的含量,肝组织HO-1蛋白表达的Western印迹,细胞凋亡情况等.结果 CoPP诱导了肝组织HO-1的表达,与未诱导24h保存组相比,CoPP诱导组的肝脏灌流液AST、LDH、TNF-α和IL-6的活性以及肝脏MDA含量显著降低,胆汁生成量明显增加,凋亡细胞数量减少(P<0.05),并与未诱导6h保存组接近.给予ZnPP后,这些保护作用消失.结论 HO-1过表达延长了肝脏低温保存时间,原因可能与抗氧化应激、抑制炎性因子的表达和细胞凋亡有关.     

钴-原卟啉诱导大鼠血红素加氧酶-1适度过表达的研究

目的研究钴-原卟啉(CoPP)诱导大鼠血红素加氧酶-1(HO-1)的适度过表达,并观察其抗肝缺血/再灌注损伤(IRI)的作用。方法建立大鼠肝脏IRI模型,按体重给予不同诱导剂量的CoPP(5、2.5mg/kg及2.5mg/kg体重2次),关用锌原卟啉(ZnPP)来抑制HO-1的活性。观察血浆谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肝组织丙二醛(MDA)的变化,肝组织光镜和电镜下的改变,肝组织HO-1蛋白表达的Western印迹。结果CoPP诱导组中均有明显的HO-1蛋白表达;与缺血/再灌注(IR)组比较,CoPP诱导组动物血浆AST、LDH活性以及肝MDA含量明显降低,肝组织损伤减轻。3个剂量组中以2.5mg/kg体重诱导2次效果最佳。ZnPP的加入阻断了CoPP诱导组的这些保护作用。结论CoPP诱导HO-1适度过表达的诱导剂量为2.5mg/kg体重2次,在这一诱导剂量下HO-1过表达对肝IRI具有重要的保护作用。     

HO-1过表达载体对2型糖尿病肾病大鼠模型的保护作用

目的 探究慢病毒介导HO-1过表达载体转染BMSCs对2型糖尿病肾病大鼠模型的保护作用.方法 以鼠源骨髓间充质干细胞(BMSCs)为研究对象,流式细胞仪鉴定BMSCs,构建糖尿病肾病大鼠模型,根据实验目的,将SD大鼠分成3组,其中干预组大鼠构建DN模型成功后,通过尾静脉注射HO-1过表达载体修饰的BMSCs,模型组大鼠...     

HO-1/CO系统抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞凋亡

目的 探讨血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)系统对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 原代培养新生Wistar大鼠心肌细胞,随机分为:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+氯化血红素(hemin)(HO-1诱导剂)组和AngⅡ+锌原卟啉-9(ZnppIX)(HO-1抑制剂)组.用real-time PCR及Western blot检测心肌细胞HO-1mRNA和蛋白的表达,比色法测定细胞培养上清液中碳氧血红蛋白(COHb)含量,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 AngⅡ组心肌细胞HO-1 mRNA、蛋白、COHb含量和细胞凋亡均明显高于对照组(P＜0.05),AngⅡ+hemin组HO-1mRNA、蛋白、COHb含量进一步升高(P＜0.05),而细胞凋亡回降(P＜0.05),但仍高于对照组(P＜0.05),AngⅡ+ZnPPIX组仅细胞凋亡湿著升高(P＜0.05),其他指标无显著变化.结论 HO-1/CO系统对AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡具有抑制作用.     

银杏叶提取物诱导大鼠主动脉平滑肌细胞HO-1的表达及细胞信号通路研究

目的： 旨在研究银杏叶提取物（Ginkgo Biloba Extract,EGB761）对大鼠主动脉平滑肌细胞(RVSMC)血红素氧合酶-1（HO-1）蛋白的影响,并探讨其中涉及的细胞信号通路。方法: 大鼠主动脉平滑肌细胞株复苏、传代培养到第6代，再复孔培养用于实验，分别给予空白对照、单纯EGB761、EGB761＋锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)或不同的细胞内信号途径特异性阻断剂进行处理，采用Western blotting法定量检测HO-1蛋白表达。结果: EGB761能呈剂量依赖性诱导HO-1蛋白表达，加用ZnPPⅨ（血红素氧合酶特异性阻断剂）及酪氨酸蛋白激酶(TPK)阻断剂木黄酮均能显著抑制EGB761诱导的HO-1蛋白表达（均P<0.01），但calphostin-C（蛋白激酶C阻断剂）、LY294002（磷脂酰肌醇-3激酶阻断剂）及Bay11-7082（核因子-κB阻断剂）对EGB761诱导的HO-1蛋白表达无明显影响（均P>0.05）。结论: (1) EGB761能显著诱导RVSMC中HO-1蛋白的表达，并且这种诱导作用能被血红素氧合酶的特异性阻断剂ZnPPⅨ所阻断。（2）EGB761通过TPK途径介导大鼠主动脉平滑肌细胞HO-1蛋白的表达。     

HO-1对DXR免疫反应影响的实验研究

目的 探讨HO-1对延迟性异种心脏移植免疫反应的影响。方法 应用NIH小鼠-Wistar大鼠颈部异位心脏移植模型,用CoPP（cobalt protoporphyrin,CoPP）诱导HO-1并结合免疫抑制剂Cyclosporine A（CSA）及Cyclophosphamid（CYP）处理受体。比较移植心脏存活时间并分别用免疫组化、Westem- blot蛋白印迹杂交等检测移植心脏HO-1、IL-1β、INF-γ、TNF-α和STAT-3表达,免疫组化检测并计数分析CD68细胞,比较不同处理因素之间的差异。结果 单用CoPP诱导HO-1后移植心脏存活时间较CSA组及空白对照组长（t=2．6936,P〈0．05）,CSA＋CoPP组移植心脏存活时间和CYP＋CoPP组均长于单用CSA组和CYP组（t=2．8511,P〈0．05）,CoPP＋CSA＋CYP组移植心脏存活时间优于其余任何组（t=3．8644,P〈0．001）。CoPP组TNF-α、LI-1β低于在空白对照组的表达（t=2．6364,P〈0．05）,但INF-γ除外。三者在CoPP＋CSA＋CYP组表达均低于其余各组。CoPP及CSA、CYP组间STAT-3表达无差异（t=1．0854,P〉0．05）,但均高于空白对照组（t=10．1254,P〈0．001）。CoPP与CSA及CYP联合应用时STAT-3表达高于单用CoPP组（t=2．8164,P〈0．05）,三者联合使用时高于任何组（t=2．5605,P〈0．05）。CoPP组移植心肌组织中CD68阳性细胞数低于空白对照组（t=3．1837,P〈0．01）,CoPP＋CSA＋CYP组最低（t=2．5099,P〈0．05）。结论 HO-1并联合免疫抑制剂CSA、CYP可能通过上调STAT-3蛋白表达,减少CD68细胞对移植心脏的浸润,降低心脏移植后炎症细胞因子IL-1β、TNF-α和IFN-γ的产生,并可能由此推迟了DXR的发生。     

血红素氧合酶-1对移植入急性梗死区心肌骨髓间充质干细胞的保护作用

目的:观察血红素氧合酶-1(HO-1)体内外对缺血环境下骨髓间充质干细胞(MSCs)的保护作用及梗死后心脏血流动力学的影响。方法:取大鼠骨髓,体外分离扩增培养MSCs;HO-1腺病毒转染MSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达;流式细胞仪检测无氧无血清条件培养的HO-1-MSCs、MSCs的凋亡率。建立心梗模型,分别将DAPI-HO-1-MSCs、DAPI-MSCs多点注射到大鼠心脏梗死区周边,对照组注射等量PBS,比较各组MSCs存活率;4周后测定血流动力学指标。结果:HO-1转染的MSCs可稳定高效地表达GFP;在无氧无血清条件下,HO-1-MSCs的凋亡率显著低于MSCs(P<0.01);细胞移植到梗死后心肌,HO-1-MSCs组存活MSCs计数在第7天明显高于MSCs组(P<0.05),且血流动力学各项指标较MSCs组明显改善(P<0.05)。结论:HO-1可在体内、体外实验中提高缺血环境下MSCs的存活率,并改善心肌梗死后血流动力学和心功能,为优化干细胞治疗提供了新思路。     

CCK-8上调LPS诱导的大鼠肺组织HO-1表达的信号转导机制

目的： 旨在研究八肽胆囊收缩素（CCK-8）上调脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺组织中血红素氧合酶（HO）-1表达的信号转导机制。方法: 将42只雄性SD大鼠随机分为7组（每组6只）,即对照组、LPS组、LPS+SP600125（JNK特异性抑制剂）组、CCK-8+LPS组、CCK-8+LPS+SP600125组、CCK-8组、CCK-8+SP600125组。注药后6 h放血处死动物留取肺组织,应用RT-PCR、Western blotting和免疫荧光流式细胞术（FCM）等技术分别检测各组肺组织HO-1 mRNA和蛋白表达。结果: 与正常对照组相比,LPS组可见肺组织中出现明显的HO-1 mRNA表达的阳性信号,CCK-8可使LPS诱导的阳性表达信号进一步增强,CCK单独作用也可上调HO-1表达。信号密度扫描结果显示,LPS组、CCK-8+LPS组和CCK-8组HO-1 mRNA表达强度分别是正常对照组3.01（P<0.01）、5.88（P<0.01）和3.45倍（P<0.01）;JNK特异性抑制剂SP600125抑制了CCK-8和（或）LPS诱导的HO-1 mRNA表达;Western blotting、免疫荧光FCM检测结果显示,肺组织HO-1蛋白表达变化与其mRNA表达一致。结论: JNK/c-Jun通路在CCK-8上调LPS诱导肺组织HO-1表达过程中发挥重要作用。     

经肝动脉同种异体脂肪干细胞移植治疗小鼠自身免疫性肝炎的实验研究

目的: 探讨同种异体脂肪干细胞经肝动脉移植对刀豆素A(Con A)诱导的小鼠自身免疫性肝炎的治疗价值。方法: Con A注射法建立小鼠自身免疫性肝炎模型。将40只小鼠随机分为4组:阴性对照组、经肝动脉移植组、经尾静脉移植组(移植脂肪干细胞2×10⁶)和阳性对照组。阳性对照组应用环磷酰胺腹腔注射。观察移植前后肝脏组织病理病变情况、血清炎症指标和肝功能指标的改变。结果: 经肝动脉移植组和经尾静脉移植组行脂肪干细胞移植后全部存活,未发生明显并发症;经肝动脉移植组血清炎症指标(IFN-γ、IL-4和IL-5)及血清天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶及碱性磷酸酶明显下降(P<0.05);经尾静脉移植组血清炎症指标及血清肝功能指标有所下降,但无显著差异。经肝动脉移植组及阳性对照组病理学上改善最明显,肝内炎症细胞浸润及肝细胞坏死均明显减少。结论: 同种异体脂肪干细胞移植有助于改善Con A介导的小鼠自身免疫性肝炎,经肝动脉途径可提高脂肪干细胞肝移植的效能。     

大鼠肢体缺血-再灌注后脑HO-1表达的变化及意义

目的:观察肢体缺血-再灌注(I-R)后脑组织内诱导型血红素氧合酶(HO-1)表达的变化及意义。方法:夹闭大鼠双侧股动脉根部4h、开放2-24h复制肢体I-R模型。反转录多聚酶链反应检测脑内HO-1mRNA表达的变化;免疫组化染色法标记HO-1蛋白的组织分布;用锌原卟啉抑制HO-1活性后,光镜观察脑组织的病理学变化。结果:肢体I-R后脑组织HO-1mRNA表达水平明显高于各对照组,再灌12h表达至峰值,再灌至24h仍显著高于各对照组(P＜0.01)。肢体I-R组大脑皮质、海马等区出现大量弥散分布的HO-1免疫阳性胶质细胞,皮质及海马部分锥体细胞呈HO-1免疫阳性;抑制HO-1活性,I-R组脑组织损伤加重。结论:肢体I-R后,脑组织内胶质细胞及神经元HO-1基因表达上调,所诱生的HO-1对神经元具有保护效应。     

大鼠肢体缺血-再灌注后肾内HO-1表达的变化及意义

目的:观察肢体缺血-再灌注(I-R)后肾组织内诱导型血红素氧合酶(HO-1)表达的变化及意义。方法:夹闭大鼠双侧股动脉根部4h、开放2-24h复制肢体I-R模型。反转录-多聚酶链反应检测肾内HO-1mRNA表达的变化;免疫组化染色法标记HO-1蛋白的组织分布;用锌原卟啉抑制HO-1活性后,光镜观察肾组织的病理变化。结果:肢体I-R后肾组织HO-1mRNA表达水平明显高于各对照组,再灌注18h表达至峰值,再灌至24h仍显著高于各对照组(P＜0.01);肢体I-R组近曲小管、髓袢粗段小管上皮细胞内出现密集的颗粒状HO-1免疫阳性产物;抑制HO-1活性使肢体I-R所引发的肾组织损伤明显加重。结论:肢体I-R后肾小管上皮细胞HO-1基因表达上调,所诱生的HO-1对肾组织具有保护效应。     

骨髓间充质干细胞介导的血红素氧合酶-1促进大鼠心肌梗死后血管再生简

 目的 探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs) 介导的血红素氧合酶-1 (HO-1) 对心肌梗死后心 脏血管再生及左心室功能的影响。方法 取大鼠骨髓,体外分离扩增培养 MSCs,HO-1 腺病毒转染。结扎左前降支 1 h 后,分别将 HO-1-MSCs、MSCs 多点注射到大鼠心肌梗死区周边,对照组注射等量 PBS。 结果 MSCs 介导的HO-1能在体外及体内获得稳定表达;HO-1-MSCs组促血管生长因子VEGF、FGF2的表达及毛细血管密度明显高于 MSCs 组和对照组 (P < 0.01);但促血管再生的作用可被HO抑制剂阻断。HO-1-MSCs组心肌细胞凋亡及纤维化明显低于MSCs 组和对照组 (P < 0.01);HO-1-MSCs组左室收缩功能各项指标明显优于其他两组(P < 0.01)。HO-1-MSCs组心室壁变厚,心室腔明显缩小。结论 MSCs介导的血红素氧合酶-1能促进心肌梗死后心脏血管再生,改善左心室功能。     

血红素氧合酶-1对心肌相对缺血再灌注损伤的延迟保护作用

目的：探讨血红素氧合酶-1（HO-1）在运动预适应（EP）中对大鼠心肌相对缺血再灌注（rI/R）损伤的延迟保护作用及机制。 方法:40只Wistar大鼠随机分为5组：正常对照组（CN）、相对缺血再灌注组（IR）、运动预适应+相对缺血再灌注组（EI）、Hemin(HO-1诱导剂)+相对缺血再灌注组（HE）和运动预适应+ZnPP(HO-1抑制剂)+相对缺血再灌注组（EZ）。测定大鼠再灌注期心率脉压乘积（PRP）、冠脉流出液MDA含量、HO-1活性等。 结果:心肌HO-1活性：EI组和HE组较IR组显著升高，EZ组则显著降低。EZ组较EI组显著降低，EI组和HE组间亦有显著差异。再灌注后60 min时点PRP恢复率：EI组较IR组显著增高；IR组与HE组未见显著差异，但30 min时点HE组显著增高；EZ组较EI组显著降低。冠脉流出液MDA含量：EI组、EZ组和HE组MDA含量较IR组皆显著降低；EZ组较EI组显著升高。 结论:EP可以诱导HO-1合成，进而通过HO-1对24 h后发生的rI/R损伤产生延迟保护作用。     

大鼠缺氧性肺动脉高压过程中缺氧诱导因子1α和血红素氧合酶1的变化

目的：观察缺氧大鼠肺小血管壁缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血红素氧合酶1（HO-1）基因表达。方法： 40只雄性Wistar大鼠随机分成缺氧0、3、7、14和21 d组。测平均肺动脉压（mPAP），血管形态学指标，右室肥大指数(RVHI)，HO-1活性和HIF-1α, HO-1 基因表达。结果： 缺氧7 d mPAP高于对照组，缺氧14 d达到高峰并维持于此水平。肺血管重塑，RVHI改变在缺氧14 d后出现。HIF-1α蛋白在对照组表达不明显，各缺氧组血管内膜均为阳性。在中膜，HIF-1α蛋白缺氧3 d开始增高，第7 d达到高峰，14 d和21 d后下降，HIF-1α mRNA缺氧14 d增高, 此后维持于高水平。HO-1蛋白在缺氧7 d后增高，14 d后达到高水平，并持续于高水平。HO-1 mRNA缺氧3 d增高，7 d达高峰，之后下降。结论： HIF-1α和HO-1 均在大鼠缺氧性肺动脉高压的发病机制中发挥作用，且HIF-1α与HO-1基因表达可能有相互调控。     

甲醛炎性痛诱导脊髓后角HO-1蛋白表达改变及其对脊髓神经元凋亡的影响

目的:观察甲醛炎性痛大鼠脊髓后角HO-1蛋白表达改变以及HO-1对炎性痛大鼠脊髓神经元凋亡的影响。方法:采用Western blotting方法检测左、右两侧脊髓后角HO-1蛋白的表达,采用流式细胞技术检测脊髓神经元凋亡率。结果:与对照组相比,足底注射甲醛后HO-1蛋白表达明显上调,其中以注射甲醛后24 h升高最为明显,72 h仍高于对照组水平。左、右两侧脊髓后角HO-1蛋白表达无明显差异。与对照组比较,甲醛组大鼠脊髓神经元凋亡率明显升高;鞘内预先注射HO-1抑制剂ZnppIX可使甲醛诱导的自发痛反应程度明显降低,并可使甲醛炎性痛大鼠脊髓神经元凋亡率进一步升高。结论:甲醛炎性痛可诱导大鼠脊髓后角HO-1蛋白表达升高,并可诱导脊髓神经元发生凋亡,甲醛炎性痛诱导的HO-1表达增强在脊髓伤害性信息传递过程中起促进作用;在炎性痛诱导的脊髓神经元凋亡过程中起抑制作用。     

HO-1参与葛根素对抗高糖诱导的大鼠血管舒张功能下降

目的： 研究葛根素对抗急性高糖刺激引起的血管舒张功能的下降,并分析血红素加氧酶（HO-1）在其中的作用。方法: 采用血管环灌流装置,观察大鼠胸主动脉环的舒张效应。结果: ①与空白对照组（含11 mmol/L葡萄糖）相比,经44 mmol/L葡萄糖（高糖）孵育血管2 h后,主动脉环对ACh引起的内皮依赖性血管舒张反应下降。②葛根素（10-10-10-8 mol/L）与高糖联合孵育,可剂量依赖性地改善高糖诱导的血管ACh舒张反应的下降。③葛根素孵育血管后可引起血管HO-1活性增高;用ZnPPIX抑制HO-1的活性后,葛根素抗高糖损伤的作用被取消。结论: 葛根素可以对抗高糖引起的血管舒张功能的下降,其机制可能是通过诱导HO-1而实现的。