TNF-α在CCD模型大鼠背根神经节中的表达及机制

目的:探讨TNF-α和NF-κB在背根神经节慢性压迫(CCD)模型大鼠背根神经节(DRG)中的表达变化及其对疼痛学行为的影响。方法:建立CCD大鼠模型,采用von Frey纤维丝监测机械痛阈的改变;通过Western blotting检测TNF-α和NF-κB在DRG中的表达变化趋势,分析其与疼痛行为之间的相关性;并采用免疫荧光双染技术研究TNF-α在DRG中的表达位置。结果:CCD组的50%机械缩足阈值在术后1 d即开始明显下降(P0.01),7~14 d达到高峰,其后逐渐上升,直至术后35 d仍明显低于术前及sham组(P0.01)。而DRG上的TNF-α及NF-κB于造模后各时点均显著增多(P0.01),且TNF-α的表达趋势与50%机械缩足阈值显著相关(P0.05)。结论:DRG慢性压迫可促进其上的TNF-α和NF-κB的合成和分泌,进而诱发机械痛觉过敏。因此,TNF-α/NF-κB信号通路可能是CCD模型疼痛形成的重要通路之一。     

齐墩果酸抗矽肺大鼠TNF-α和胶原表达的实验研究

目的:观察齐墩果酸对矽肺大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)和胶原表达的影响及其可能作用机制。方法:80只SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为对照组、模型组、齐墩果酸组和溶剂组,每组20只。除对照组外,其余组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入Si O2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺模型。齐墩果酸组自注射Si O2后每天给予齐墩果酸60 mg/kg灌胃,溶剂组每天用0.6%羧甲基纤维素钠溶液(10 m L/kg)灌胃,对照组用生理盐水(10 m L/kg)灌胃,连续56 d。动物分别在注射Si O2后第7、14、28和56天处死(每次每组5只)。处死后检测各组大鼠肺系数,并观察形态学变化;应用ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量;试剂盒检测肺组织中总胶原蛋白含量;免疫组织化学法检测肺组织核因子κB(NF-κB)表达。结果:(1)与对照组比较,模型组和溶剂组大鼠肺系数和总胶原蛋白含量明显升高,结合形态学变化,矽肺模型造模成功。齐墩果酸组各时点肺系数和总胶原蛋白含量比模型组和溶剂组相应时点低,但比对照组高。(2)模型组和溶剂组大鼠血清中的TNF-α含量各时点明显升高,高峰在第14天,之后稍降,但明显高于对照组,差异有统计学意义;模型组与溶剂组各时点比较,差异无统计学意义。齐墩果酸组TNF-α含量与模型组相比均降低,各时点比较差异有统计学意义。(3)模型组和溶剂组大鼠肺组织中NF-κB表达量逐渐升高,至第28天达高峰,各时点与对照组比较差异均有统计学意义。齐墩果酸组的NF-κB阳性表达趋势与模型组相同,但明显低于模型组而高于对照组,各时点与对照组比较差异有统计学意义。结论:齐墩果酸通过抑制TNF-α和胶原表达减缓矽肺纤维化的发生,可能与NF-κB通路有关。     

4-HNE通过抑制TNF-α介导的NF-κB活化诱导酒精性肝损伤

 目的：通过体外细胞及体内动物实验,研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的4-羟基壬烯酸（4-HNE）致敏肝细胞发生死亡的作用及机制。方法：以人肝细胞株HepG2及小鼠原代肝细胞为细胞模型,通过乳酸脱氢酶（LDH）释放及MTT比色法检测4-HNE对TNF-α诱导的肝细胞死亡的作用,利用Western blotting技术检测细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平,通过Western blotting和ELISA技术检测细胞核内NF-κB（p65）的表达及其与DNA结合活性。以C57BL/6小鼠为动物模型,利用HE染色、ELISA、Western blotting及TUNEL等技术,检测长期摄入酒精前后动物肝组织形态、甘油三酯（TG）水平、4-HNE水平、TNF-α水平及血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性的变化。结果：（1） 4-HNE可以显著增加HepG2细胞及小鼠原代肝细胞对TNF-α杀伤作用的敏感性,从而使TNF-α诱导4-HNE致敏的肝细胞死亡。（2） 4-HNE可显著提高HepG2细胞内4-HNE-蛋白质加合物的水平。（3） 4-HNE抑制HepG2细胞内TNF-α介导的NF-κB活化。（4） 长期摄入酒精导致小鼠肝细胞内4-HNE和TNF-α水平升高,引起肝细胞内TG水平升高,血浆ALT活性升高,肝细胞死亡增多。结论：长期摄入酒精使肝细胞发生氧化应激,其产物4-HNE可作为一种肝细胞致敏因子,通过抑制肝细胞内TNF-α介导的NF-κB抗细胞凋亡信号通路,诱导酒精性肝损伤。这可能是一种新的酒精性肝病发病机制。     

替莫唑胺对胶质瘤侵袭性的影响及可能机制

目的：探讨肿瘤坏死因子-α( tumor necrosis factor-α, TNF-α)在替莫唑胺( temozolomide, TMZ)降低胶质瘤侵袭性过程中的作用及机制。方法对数生长期的C6胶质瘤细胞随机分为TMZ处理10、30、60、120、180和240 min组,每组各15例,动态监测培养液中TNF-α的含量(放射免疫法)、C6细胞内 p53蛋白的表达( Western blot法)和细胞凋亡水平( AnnexinV-FITC法)。制备体外胶质瘤的侵袭模型,利用结晶紫染色法检测胶质瘤的侵袭性。结果 TMZ作用于C6细胞后,培养液中TNF-α的含量明显增加,于120 min时含量最多(P<0．01),其后开始减少。 C6细胞内p53蛋白的表达于处理后120 min达高峰(P<0．01),其后逐渐减少。 TMZ作用于体外胶质瘤侵袭模型后,胶质瘤细胞的侵袭性降低。结论 TNF-α介导TMZ降低胶质瘤侵袭性,此作用可能是由于TMZ促进C6细胞释放TNF-α,增加的TNF-α又促进胶质瘤细胞凋亡所致。     

CD163/TWEAK通路对动脉粥样硬化的作用

目的:探讨CD163/肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子(TWEAK)途径对小鼠动脉粥样硬化的影响。方法:以8～10周的载脂蛋白E基因敲除(APOE~(-/-))及野生型(WT)C57BL/6小鼠为研究对象,分为以下4组(n=10):APOE~(-/-)+普食(ND)组、APOE~(-/-)+高脂饮食(WD)组、WT+ND组和WT+WD组。喂养16周后检测血脂水平,主动脉油红O染色测定主动脉斑块面积以明确成功建立动脉粥样硬化模型;Western blot法检测各组小鼠主动脉CD163和TWEAK的蛋白表达水平;免疫组化法明确动脉粥样硬化斑块CD163与TWEAK的表达及空间分布特征;细胞实验研究CD163对1型巨噬细胞(M1)及泡沫细胞TWEAK的调节作用及其可能的下游作用途径。结果:血脂检测及主动脉油红O染色结果显示,APOE~(-/-)+ND及APOE~(-/-)+WD组小鼠成功建立动脉粥样硬化模型。免疫组化可见CD163主要表达于远离脂质核心的部位,而TWEAK可见于动脉粥样硬化斑块的所有部位。主动脉Western blot检测结果显示,与WT小鼠相比,APOE~(-/-)小鼠主动脉CD163的表达水平显著增加(P0.05),与之相对应的是APOE~(-/-)小鼠主动脉中TWEAK表达水平较WT小鼠亦显著升高(P0.05)。细胞实验结果显示CD163可显著抑制TWEAK的蛋白表达,明显下调核因子κB(NF-κB)的水平(P0.05)。结论:CD163可通过抑制TWEAK/NF-κB途径而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

干扰素抗MGMT阳性胶质瘤干细胞替莫唑胺的耐药机制

背景：临床对胶质瘤患者进行治疗的过程中容易出现耐药现象,研究发现,MGMT是胶质瘤表达的一种多药耐药基因。目的：探讨干扰素增加替莫唑胺对MGMT阳性胶质瘤干细胞的增敏作用。方法：采用“悬浮克隆球形成法”对胶质瘤细胞株U251、SKMG-4进行诱导,获得MGMT阳性的胶质瘤干细胞U251G、SKMG-4G。应用CCK-8法检测干扰素α/β联合替莫唑胺对MGMT阳性胶质瘤干细胞的杀伤效应;RT-PCR和Western blot检测预用干扰素α/β后MGMT阳性胶质瘤干细胞MGMT、NF-κB表达情况。结果与结论：经Western blot检测,胶质瘤干细胞U251G、SKMG-4G中MGMT蛋白呈阳性表达。采用预用干扰素α/β,然后添加替莫唑胺方式,提高了替莫唑胺的化疗敏感性,杀伤效应显著提高。使用干扰素α/β之后,SKMG-4G和U251G MGMT、NF-κB mRNA和蛋白表达均显著降低,联合替莫唑胺之后下降情况更明显。结果表明对于MGMT阳性胶质瘤干细胞,干扰素α/β可以显著增强替莫唑胺的杀伤效应,逆转替莫唑胺的耐药性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

真武汤对链脲佐菌素所致大鼠糖尿病肾病的保护作用

 目的：探讨真武汤对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法：腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病大鼠模型,将成模大鼠随机分为糖尿病肾病(DN)模型组和真武汤治疗组（真武组）,另设正常组。采用生化、HE染色观察真武汤对糖尿病肾病大鼠肾功能、肾组织形态学变化及脂质过氧化相关参数的作用;采用蛋白免疫印迹方法探讨真武汤对肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和NF-κB表达的影响。结果：模型组大鼠肾系数、24 h尿蛋白定量、血尿素氮、肌酐、血糖和丙二醛(MDA)均显著升高(P<0.05),体重、超氧化物歧化酶(SOD)及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）显著降低(P<0.05);真武组大鼠的肾系数、24 h尿蛋白、尿素氮、肌酐、血糖和MDA明显低于模型组(P<0.05),iNOS显著高于模型组（P<0.05）;模型组大鼠肾小球肥大、毛细血管基底膜增厚,系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡样变,可见蛋白管型;真武组病变轻于模型组。模型大鼠肾组织α-SMA及NF-κB蛋白的水平明显高于正常组（P<0.05）,真武组大鼠肾组织α-SMA及NF-κB蛋白水平明显低于模型组（P<0.05）。结论：真武汤能减轻糖尿病肾病肾脏局部氧化应激反应,改善糖尿病肾病大鼠肾功能,减轻病理损伤,其发挥肾脏保护作用可能与抑制α-SMA及NF-κB蛋白的表达有关。     

miR-146a在大鼠缺血再灌注肝损伤中的表达及作用

目的:评价肝组织微小RNA-146a(miR-146a)表达变化与大鼠缺血再灌注(I/R)炎性肝损伤的关系。方法:72只SD大鼠随机分为非手术组(N组)、假手术组(S组)及I/R组,按分组处理后分别检测各组大鼠0、2、12和24 h(每组各时点n=6)血浆丙氨酸转氨酶(ALT)活性及白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,real-time PCR检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、IL-6、TNF-α和miR-146a表达,Western blot分析肝组织中TLR4、IL-6和TNF-α表达。结果:N组大鼠各时点血浆ALT活性及IL-6和TNF-α含量与肝组织中TLR4、IL-6和TNF-α表达量无显著差异。S组大鼠血浆IL-6和TNF-α含量升高(P0.01),但血浆ALT活性与肝组织TLR4、IL-6和TNF-αm RNA及蛋白的表达量却无明显变化。I/R后,大鼠血浆ALT活性及IL-6和TNF-α含量明显升高(P0.01),肝组织TLR4、IL-6和TNF-αm RNA及蛋白的表达量亦显著升高(P0.01),且随着时间延长,各指标仍持续升高;肝组织miR-146a表达量显著下降,其中在缺血12 h时下降最为明显,到24 h表达量再次升高,但始终低于I/R前(P0.01)。N组及S组大鼠各时点肝组织miR-146a表达量显著高于I/R组I/R后相应时点的表达(P0.01)。结论:I/R大鼠肝组织miR-146a表达下降的同时存在TLR4信号通路的激活及炎性肝损伤的发生。     

NF-κB在脓毒症血浆诱导的内皮细胞损伤和凋亡中的作用

 目的：探讨核因子κB（NF-κB）在脓毒症血浆诱导的内皮细胞损伤和凋亡中的作用。方法：应用脓毒症患者血浆刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,健康对照者血浆作为阴性对照。用酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫荧光法检测NF-κB的核移位,流式细胞术检测内皮细胞凋亡。结果：脓毒症患者血中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和von Willebrand因子(vWF)明显高于正常人。在一定范围和时间内,脓毒症血浆刺激HUVECs释放vWF呈时间、剂量依赖关系,应用NF-κB拮抗剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）阻断后,vWF降低。脓毒症血浆刺激HUVECs时,NF-κB活化,从胞浆移位入胞核。脓毒症血浆引起内皮细胞凋亡增加,加入NF-κB拮抗剂PDTC后HUVECs凋亡明显增加。结论: NF-κB参与了脓毒症引起的内皮细胞损伤,抑制了内皮细胞凋亡。     

大肠杆菌DNA诱导全身性炎症反应综合征的作用机制研究

目的: 探讨细菌DNA是否参与全身性炎症反应综合征(SIRS)的发生及其可能机制。方法: 碱裂解法抽提纯化大肠杆菌DNA(EC DNA); 观察EC DNA攻击小鼠的死亡率及大鼠血清TNF-α、IL-6的变化情况; 体外培养小鼠单核细胞株ANA-1细胞, 采用不同终浓度的EC DNA、LPS刺激ANA-1细胞,测定细胞培养上清中TNF-α、IL-6的释放情况, 并检测人单核细胞株THP-1细胞表面Toll样受体9(TLR9)和Toll样受体4(TLR4)表达以及核转录因子κB(NFκB)的活化情况。结果: EC DNA可导致小鼠死亡, 并具有明显的量效关系, 小牛胸腺DNA和DNA酶消化的EC DNA则不能引起小鼠死亡; EC DNA与LPS均可导致大鼠血清TNF-α、IL-6水平升高,变化趋势相似, 但EC DNA所致的TNF-α峰值早于LPS组1 h出现。在体外实验中, 不同浓度的EC DNA、LPS可诱导ANA-1细胞大量释放TNF-α、IL-6, 以及THP-1细胞表面TLR9和TLR4的高表达, 但EC DNA诱导NFκB活化的能力远小于LPS。结论: EC DNA可以和LPS一起参与SIRS的发生, 可能机制与诱导单核细胞TNF-α、IL-6的释放有关, 但EC DNA诱导细胞因子释放的信号转导过程中可能尚有其它途径的存在。     

miR-21通过下调PTEN增强人脑胶质瘤细胞对卡莫司汀耐药

目的:探讨微小RNA-21(miR-21)在增强人脑胶质瘤细胞对卡莫司汀(BCNU)耐药中的作用及其可能的作用机制。方法: 用jetPRIME将miR-21mimics及阴性对照序列转入人脑胶质瘤细胞SWOZ2,用实时荧光定量PCR法检测BCNU敏感株SWOZ2与BCNU耐药株SWOZ2-BCNU、SWOZ2-miR-21mimics细胞与对照组细胞中miR-21表达差异,用CCK-8检测这两对细胞对BCNU敏感度的差异,用Westernblotting检测这两对细胞中第10号染色体同源缺失性磷酸酶及张力蛋白(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的差异。结果:SWOZ2-BCNU细胞miR-21的表达水平明显高于SWOZ2细胞,转染组SWOZ2-miR-21mimics细胞中miR-21的表达量明显高于对照组;SWOZ2-BCNU细胞BCNU的半数抑制浓度(IC₅₀)明显高于SWOZ2细胞,转染组细胞BCNU的IC₅₀明显高于对照组;与SWOZ2细胞相比,SWOZ2-BCNU细胞中PTEN蛋白的表达明显降低,p-Akt和P-gp蛋白的表达都明显升高;转染后,与对照组相比,转染组细胞中PTEN蛋白的表达明显降低,而p-Akt和P-gp蛋白的表达皆明显升高。结论:miR-21可能通过下调PTEN蛋白表达,增强人脑胶质瘤细胞对BCNU耐药。     

利用TCGA数据库分析miR-196b在结直肠癌患者中的临床表达特征并探索miR-196b的体外抗5-FU作用

目的:研究微小RNA(miR)-196b在结直肠癌患者中的表达及其临床意义,探讨过表达miR-196b的结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性。方法:在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库下载结直肠癌患者miRNA测序数据及其对应的临床病理资料,运用SPSS 17.0分析miR-196b在结直肠癌患者中的表达水平以及临床特征;采用瞬时转染的方法在人结直肠癌HCT116细胞中过表达miR-196b,并用MTS法分析过表达miR-196b的细胞对5-FU药物敏感性的变化。结果:miR-196b高表达与结直肠癌患者淋巴结转移及TNM分期相关(P0.05),与年龄和性别等无相关性。淋巴结转移和远处转移是直肠癌患者生存的独立影响因子(P0.05),miR-196b的表达水平与患者生存状况无关。过表达miR-196b的HCT116细胞在不同浓度的5-FU作用下,细胞存活率均明显高于对照组(P0.05)。结论:miR-196b可能是结直肠癌患者肿瘤分期和淋巴结转移的分子标志物,并可降低结直肠癌细胞对5-FU的敏感性。     

miR-130b促进小鼠胚胎发育过程中大脑皮质神经元的迁移

目的通过胚胎在体电转染技术,在胚胎小鼠大脑皮质神经元中过表达miR-130b,探讨其对神经元迁移的影响。方法利用miR-130b过表达载体,在昆明小鼠E15.5胚胎大脑中电转染,并于E17.5处死母鼠,取胚胎进行冰冻切片,于荧光显微镜下观察阳性神经元的迁移情况。结果过表达miR-130b的小鼠胚胎,大脑皮质神经元的迁移速率上升,最终迁移到达MZ层的神经元占总阳性神经元的75.1%,远高于对照组的22.1%;且停留在VZ/SVZ层的神经元(7.9%)远低于对照组(69.3%)。结论 miR-130b在神经发育过程中能够促进神经元的迁移。在未来的研究中需要进一步探索其深层机制。     

miR-221通过调节PTEN影响肺癌细胞对吉非替尼的耐药性

目的:探讨微小RNA-221(miR-221)在人肺癌细胞对吉非替尼耐药中的作用及其相关机制。方法:RT-qPCR检测人肺腺癌吉非替尼敏感细胞PC9和吉非替尼耐药细胞PC9/GR中miR-221的表达;通过脂质体试剂Lipofectamine 2000把miR-221 inhibitor转染入肺癌PC9/GR细胞内,CCK-8法检测细胞对吉非替尼敏感度的变化,Western blot检测第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)的蛋白表达。构建含PTEN 3’-UTR的萤光素酶报告载体,验证miR-221对PTEN的靶向调控作用。结果:PC9/GR细胞的miR-221表达水平明显高于PC9细胞(P0.05)。PC9/GR细胞中PTEN表达水平低于PC9细胞(P0.05)。转染miR-221 inhibitor后,吉非替尼对PC9/GR细胞的IC_(50)明显降低,PTEN的蛋白表达增加(P0.05)。萤光素酶活性检测实验显示抑制miR-221表达能增强PTEN的萤光素酶活性(P0.05)。结论:miR-221可能通过抑制PTEN的表达,增强肺癌细胞对吉非替尼的耐药性。     

miR-193b在宫颈癌中的表达与功能及其对化疗敏感性的影响

目的:探讨微小RNA-193b(miR-193b)在不同宫颈组织中的表达以及其对顺铂作用于宫颈癌细胞敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(qPCR)检测不同宫颈组织中miR-193b的表达水平。采用脂质体将miR-193b-inhibitor转染至HeLa细胞,Transwell法、CCK-8法和免疫蛋白印迹法分别检测细胞迁移数、细胞对顺铂的敏感性以及细胞中PTEN、Akt、p-Akt和P-糖蛋白(P-gp)的蛋白水平。结果:qPCR结果显示miR-193b在正常宫颈组织及宫颈糜烂组织中呈低表达,在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达明显上升;转染miR-193b-inhibitor后,HeLa细胞迁移数明显减少(P0.05),顺铂对HeLa细胞活力的抑制作用进一步增强(P0.05),细胞中PTEN的蛋白表达明显上调(P0.05),Akt的蛋白表达无明显变化,p-Akt和P-gp的蛋白水平明显下调(P0.05)。结论:miR-193b在宫颈癌组织中呈高表达,沉默miR-193b可增加HeLa细胞对顺铂的敏感性,作用机制可能与PTEN-PI3K/Akt通路有关。     

Serum miR-130b level,an ideal marker for monitoring the recurrence and prognosis of primary hepatocellular carcinoma after radiofrequency ablation treatment

Objective

This study was aimed to explore the potential roles of miR-130b for the efficacy of radiofrequency ablation (RFA) in patients with primary hepatocellular carcinoma (PHC).