越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞MMP2和collagenⅠ表达的影响

目的:探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞(HFSF)基质金属蛋白酶2(MMP2)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法:取不同浓度(0,10~(-6),10~(-5),10~(-4),10~(-3),10~(-2),10~(-1) and 1 g/L)越橘花青素作用于HFSF,应用MTT法检测越橘花青素作用不同时间(6 h、8 h、12 h、24 h和48h)对HFSF活力的影响;流式细胞术检测HFSF活力最高时(10-1g/L越橘花青素作用12 h)的细胞周期和凋亡情况;RT-q PCR检测HFSF中MMP2、COL1A1和COL1A2的mRNA表达;Western blot检测其MMP2和collagen I的蛋白表达。结果:MTT法结果显示HFSF在10-1g/L的越橘花青素作用12 h时活力最高;与空白对照组比较,流式细胞术显示10-1g/L越橘花青素组S和G2期的细胞比例增加(P0.05),凋亡率差异无统计学意义;RT-q PCR显示MMP2的mRNA表达量下降(P0.05),COL1A1的mRNA表达量增加(P0.05),COL1A2的mRNA表达量差异无统计学意义;Western blot显示MMP2蛋白表达下降(P0.05),collagen I蛋白表达增加(P0.05)。结论:越橘花青素对HFSF和具有抑制MMP2和增加collagen Ⅰ表达的作用。     

大黄素通过抑制NF-κB信号通路改善骨关节炎的软骨降解分析

目的：探讨大黄素在改善骨关节炎软骨降解中的作用及机制。方法：大黄素（20μmol/L）预处理SD大鼠软骨细胞2 h,IL-1β(10 ng/ml)孵育24 h。MTT检测不同处理组细胞活力,RT-PCR和Western blot分析aggrecan、collagenⅡ、MMP-13、ADAMTS-4、NF-κB p65、IKK-β、IκB-α表达。结果：与IL-1β组相比,IL-1β+大黄素组大鼠软骨细胞aggrecan和COL2A1 mRNA水平显著升高（P<0.05）,MMP-13、ADAMTS-4、NF-κB p65和IKK-β mRNA水平显著降低（P<0.05）,而IκB-α mRNA水平显著升高（P<0.05）。结论：大黄素通过抑制NF-κB途径抑制MMP和ADAMTS表达,从而发挥软骨保护作用。     

双氢睾酮对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素表达的影响

目的 探讨双氢睾酮（DHT）对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素（AMH）表达的影响。方法 从95只21 d SD雌性大鼠中提取颗粒细胞原代培养48 h后,先用HE染色检测细胞形态,卵泡刺激素受体（FSHR）细胞免疫荧光检测细胞纯度;然后根据干预方法和实验的不同,随机将细胞分为对照组（无药物干预）、10^-8mol/L DHT组、10^-5mol/L DHT组,2×10^-5mol/ L蛋白激酶B(Akt)抑制剂（MK-2206 2Hcl）组和10^-8mol/L DHT+2×10^-5mol/L MK-2206 2Hcl组,分别使用相应浓度的试剂干预细胞3 h。干预完成后,细胞免疫荧光染色观察AMH表达的部位和变化;Western blotting测定不同组的AMH、Akt、p-Akt蛋白表达量。结果 大鼠原代卵泡颗粒细胞的纯度为93.33%±3.09%,AMH表达在大鼠原代卵泡颗粒细胞膜和细胞质中;与对照组相比,10-8 mol/L DHT和10-5 mol/L DHT均可使颗粒细胞AMH表达增加（P<0.05）,但这两个浓度的DHT对颗粒细胞AMH的表达影响差异无显著性（P>0.05）;与对照组相比,10^-8 mol/L DHT可以使p-Akt、AMH表达升高,2×10^-5 MK-2206 2Hcl使AMH表达降低（P<0.05）;与2×10^-5MK-2206 2Hcl相比,10^-8mol/L DHT+2×10^-5 MK-2206 2Hcl处理组AMH表达升高（P<0.05）。结论 DHT可以上调大鼠原代卵泡颗粒细胞AMH的表达,这种作用可能与Akt信号通路有关。     

IL-13和乙醇促进人肺成纤维细胞胶原的表达

目的:研究乙醇和/或白细胞介素13(IL-13)对人肺成纤维细胞(HFL-1)Ⅰ、Ⅲ型胶原α1链基因(COL1A1、COL3A1)以及Ⅰ型胶原蛋白(CoⅠ)表达的影响,探讨肺纤维化的机制。方法:培养HFL-1,通过实时定量荧光RT-PCR检测乙醇和/或IL-13对HFL-1细胞IL-13受体(IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-4Rα)mRNA、COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA表达的影响,ELISA的方法检测乙醇和/或IL-13对HFL-1分泌CoⅠ的影响。结果:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)作用HFL-1后,与对照组相比IL-13Rα1 mRNA与IL-4Rα mRNA水平比对照组显著增高(P<0.05),而IL-13Rα2 mRNA水平比对照组显著降低(P<0.05)。单独低浓度乙醇(25、50、100、200 mmol/L)对HFL-1的COL1A1 mR-NA和COL3A1 mRNA表达无影响(P>0.05)。IL-13(10、20、50μg/L)可以促进HFL-1的COL1A1 mRNA和COL3A1 mR-NA的表达(P<0.05),且存在浓度依赖性。乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同作用刺激HFL-1促进COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA的表达比IL-13(10、20、50μg/L)单独作用强(P<0.05)。IL-13组(10、20、50μg/L)和乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同刺激组HFL-1均有CoⅠ的分泌,但共同刺激组HFL-1分泌CoⅠ量显著增加(P<0.05)。结论:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)不影响HFL-1细胞的COL1A1和COL3A1表达,但可以影响HFL-1细胞IL-4Rα、IL-13Rα1和IL-13Rα2的表达,而乙醇与IL-13共同刺激与单独IL-13刺激相比对HFL-1的COL1A1和COL3A1以及CoⅠ的表达有显著的促进作用。     

干扰素γ抑制IL-13对成纤维细胞的纤维化作用

 目的：研究干扰素γ（IFN-γ）抑制白细胞介素13（IL-13）对成纤维细胞纤维化作用的影响。方法：将成纤维细胞分为实验组和空白对照组,实验组加入IFN-γ（4×105 U/L）和IL-13（100 μg/L）,共同作用24、48和72 h后,分别用羟脯氨酸法、RT-PCR和Western blotting检测成纤维细胞分泌胶原蛋白、I型胶原α1(Col 1A1)mRNA表达和I型胶原蛋白的表达水平。另外对比空白对照组、IFN-γ组、IL-13组和IFN-γ+IL-13组72 h后Col1A1 mRNA表达和I型胶原蛋白的表达水平。结果：MTT结果表明IFN-γ浓度增加到4×105 U/L后可显著抑制成纤维细胞的增殖（P<0.01）。羟脯氨酸法检测显示48 h和72 h实验组成纤维细胞分泌的胶原蛋白含量显著低于空白对照组（P<0.05）;RT-PCR分析结果揭示48 h和72 h实验组的Col1A1 mRNA表达水平显著低于空白对照组（P<0.05）;Western blotting检测也进一步证实了48 h和72 h实验组成纤维细胞分泌I型胶原蛋白的水平显著低于空白对照组。另外各因素组对比结果显示, 72 h后IFN-γ组Col1A1 mRNA和蛋白的表达水平显著低于空白对照组（P<0.05）,IL-13组显著高于空白对照组（P<0.05）,而IFN-γ+IL-13组显著低于显著低于其它组（P<0.01）。结论：IFN-γ可抑制IL-13对成纤维细胞的纤维化作用。     

力生长因子E肽对前交叉韧带成纤维细胞活力、迁移与侵袭的影响

目的研究力生长因子(mechano-growth factor,MGF)E肽对前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)成纤维细胞活力、迁移与侵袭的影响。方法以ACL成纤维细胞为研究对象:(1)经不同浓度(0、10和100μg/L)MGF E肽处理细胞24 h后,去除培养基,换成1%血清浓度DMEM低糖培养基培养6和30 h后,检测细胞活力、DNA含量、细胞凋亡、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性变化及I型胶原(COL I)、III型胶原(COL III)mRNA表达;(2)使用不同浓度(0、5、10、20、50和100μg/L)MGF E肽处理ACL成纤维细胞48 h后,检测细胞活力与MMP-2活性,并利用划痕实验与Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭能力。结果 (1)6 h时,10μg/L浓度MGF E肽显著促进MMP-2、MMP-9活性,对细胞活力、增殖、凋亡及COL I、COL III mRNA表达无影响。100μg/L浓度MGF E肽显著促进MMP-2、MMP-9活性,并提高了COL I、COL III mRNA表达,但对细胞活力、增殖、凋亡无影响。30 h时,10μg/L浓度MGF E肽显著促进MMP-9活性及COL I、COL III mRNA表达,对细胞活力、增殖、MMP-2活性及细胞凋亡无影响。100μg/L浓度MGF E肽显著促进MMP-9活性及COL III mRNA表达,但对细胞活力、增殖、MMP-2活性、细胞凋亡、COL I mRNA表达无显著性调控作用。(2)MGF E肽显著促进ACL成纤维细胞的迁移与侵袭,且呈一定程度浓度依赖性;迁移与侵袭过程可能依赖于MMP-2活性。结论 MGF E肽能够促进ACL成纤维细胞胞外基质的合成与降解,进一步提高了细胞的迁移与侵袭,有助于组织损伤修复过程中成纤维细胞向损伤部位迁移,对ACL组织修复再生与术后康复具有积极的调控作用。     

组胺对星形胶质细胞Egr-1表达的调节作用

 目的: 探讨组胺对星形胶质细胞早期反应生长因子-1(Egr-1)表达是否具有调节作用。方法: 将野生型(WT)和组氨酸脱羧酶敲除(HDC-KO)小鼠及组胺处理的HDC-KO小鼠取脑,并提取皮层组织总RNA。将原代培养的大鼠皮层星形胶质细胞分别给予不同浓度的组胺(10^-8、10^-7、10^-6、10^-5或10^-4 mol/L)处理15、30、60、120或240 min。组胺H₁、H₂受体拮抗剂分别于组胺给药前15 min加入。组胺处理完毕后,提取细胞总RNA或蛋白。利用real-time PCR和Western blot测定Egr-1的表达。结果: 与WT小鼠相比,HDC-KO小鼠大脑皮层Egr-1的mRNA表达量显著降低,而外源性给予组胺则能促进其Egr-1的mRNA表达。在培养的星形胶质细胞上,组胺可促进Egr-1的mRNA表达,其中10^-5 mol/L的组胺作用最强,而组胺(10^-5 mol/L)处理30 min时Egr-1的mRNA表达量达到峰值,相应的Egr-1蛋白表达于60 min时显著增高,该作用可被组胺H₁受体拮抗剂而非H₂受体拮抗剂显著抑制。结论: 组胺对大脑皮层组织及培养的星形胶质细胞Egr-1表达具有上调作用,该作用与激动组胺H₁受体有关。     

唑来膦酸对大鼠成骨细胞护骨素及肿瘤坏死因子α mRNA表达的影响

背景：唑来膦酸属于第3代双瞵酸盐类药物,在临床上被广泛应用于治疗骨吸收增加类疾病,其对破骨细胞的作用及影响已取得了共识,而对于成骨细胞的影响尚有争议。 目的：观察唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖、分化和护骨素及肿瘤坏死因子α mRNA表达的影响。 方法：体外培养新生24 h内SD大鼠颅盖骨来源的成骨细胞,用10^-5~10^-9 mol/L唑来膦酸进行干预,分别于干预后第3,5,7天采用MTT法来测吸光度值,以检测唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖的影响;硝基苯基质动力学法和RT-PCR在干预后72 h,测量细胞碱性磷酸酶活性和护骨素及肿瘤坏死因子α mRNA的表达。 结果与结论：较高浓度(10^-5 mol/L)的唑来膦酸明显抑制成骨细胞增殖, 10^-7~10^-9 mol/L唑来膦酸不影响成骨细胞的分化。10^-5~10^-9 mol/L唑来膦酸能使成骨细胞护骨素mRNA表达增加,肿瘤坏死因子α mRNA表达下降。说明唑来膦酸在低浓度时不影响成骨细胞的增殖及分化,其可通过调节成骨细胞护骨素、肿瘤坏死因子α mRNA的表达,来发挥其抗骨吸收的作用。     

PI3K/CTGF信号通路在TGF-β1诱导A549细胞表达collagen I过程中的作用

 目的： 研究磷脂酰肌醇3-激酶/结缔组织生长因子（PI3K/CTGF）信号通路在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肺腺癌A549细胞表达I型胶原蛋白（collagen I）过程中的分子机制。方法： 体外培养A549细胞,予TGF-β1刺激,观察CTGF和collagen I的mRNA和蛋白表达及PI3K信号通路的活化;PI3K抑制剂LY294002预先处理A549细胞后,观察TGF-β1刺激下CTGF和collagen I mRNA和蛋白表达的变化;CTGF特异性siRNA干扰A549细胞中CTGF的表达后,观察TGF-β1刺激下collagen I mRNA和蛋白表达的变化和PI3K信号通路的活化。结果： TGF-β1可以诱导A549细胞中CTGF和collagen I的mRNA和蛋白表达以及PI3K信号通路的活化;PI3K特异性抑制剂LY294002可以部分逆转TGF-β1诱导的A549细胞中CTGF和Collagen I mRNA和蛋白表达的升高。干扰CTGF可以降低TGF-β1诱导的A549细胞collagen I mRNA和蛋白表达,而不影响PI3K信号通路的活化。结论： CTGF是TGF-β1/PI3K信号通路调控的即刻早期反应效应蛋白,参与了TGF-β1诱导的A549细胞中collagen I表达。     

白杨素对大鼠主动脉舒张作用的影响

 目的: 研究白杨素(chrysin)对离体大鼠主动脉肌源性反应的影响,并探讨其作用机制。方法: 分离SD大鼠主动脉,采用离体血管环灌流装置观察chrysin对血管环的基础张力及对60 mmol/L KCl预收缩血管的舒张作用,并结合不同抑制剂处理,探讨其作用于血管环的可能机制。结果: Chrysin(10^-6 mol/L、3×10^-6 mol/L、10^-5 mol/L、3×10^-5 mol/L和10^-4 mol/L)对基础状态血管无明显影响,但对60 mmol/L KCl预收缩的血管环具有浓度依赖性舒张作用,并且去内皮组舒张作用弱于内皮完整组(P<0.05)。NOS抑制剂L-NAME(10^-4 mol/L)处理血管后,chrysin的舒张血管作用部分被抑制(P<0.05),COX抑制剂吲哚美辛(10^-5 mol/L)处理血管后无明显抑制作用。钾通道阻滞剂4-氨基吡啶(10^-3 mol/L)、氯化钡(10^-4 mol/L)、格列苯脲(10^-5 mol/L)和四乙胺(10^-3 mol/L)预孵后,chrysin舒张血管作用均被部分抑制(P<0.05)。Chrysin(10^-6 mol/L、10^-5 mol/L和10^-4 mol/L)可浓度依赖性抑制2.5 mmol/L CaCl₂引起的主动脉收缩。结论: Chrysin能够浓度依赖性舒张大鼠主动脉,其作用机制可能与促进一氧化氮释放、激活4种K⁺通道及减少细胞内钙离子浓度有关。     

虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响

背景：虎杖多年来一直是烧伤、创伤创面愈合治疗方剂中的一味主药,因成分复杂,具体药理作用难以进一步研究,对于虎杖苷促愈合作用目前未见文献报道。 目的：分析不同浓度虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响。 方法：取烧伤后行瘢痕切除植皮4例患者剩余小中厚皮片,原代培养人成纤维细胞。用含有10^-6,10^-5,10^-4,10^-3,10^-2 mol/L不同浓度虎杖苷培养液作用第2代人成纤维细胞,未加虎杖苷的培养液作为对照。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;ELISA法检测上清中纤维结合蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达情况。 结果与结论：10^-5、10^-4 mol/L组促进成纤维细胞增殖最明显,10^-2 mol/L组吸光度值显著下降,细胞生长受抑制。10^-3 mol/L组G1期细胞大幅度下降,细胞有S期阻滞现象。10^-2 mol/L组有明确的促凋亡作用。10^-2 mol/L组上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较其他各组显著增高(P < 0.05);纤维结合蛋白较对照组显著增高(P < 0.05),较其他各组有所下降(P < 0.05)。说明低浓度虎杖苷有促进成纤维细胞增殖、保护细胞免于凋亡及促进纤维结合蛋白的表达与合成分泌的作用,促进成纤维细胞增殖的最适浓度应为10^-5~10^-4 mol/L。     

AngⅡ/AT_1R通路下调内皮型一氧化氮合酶磷酸化的机制研究

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT_1R)通路通过激活蛋白磷酸酶2 A(protein phosphatase 2 A,PP2 A)导致大鼠肠系膜动脉中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)磷酸化水平下调的机制。方法:采用体重160~180 g成年雄性SD大鼠90只,在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉。首先明确AngⅡ下调大鼠肠系膜动脉中e NOS(Ser1177)磷酸化的效应,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组和AngⅡ组,AngⅡ组用浓度为1×10~(-7)mol/L、1×10~(-6)mol/L和1×10~(-5)mol/L AngⅡ分别孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h;然后进一步探讨AngⅡ使eNOS(Ser1177)发生磷酸化下调的分子机制,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组、AngⅡ组和坎地沙坦(candesartan,CAN;AT_1R特异性抑制剂)+AngⅡ组(用1×10~(-5)mol/L CAN预处理大鼠肠系膜动脉血管1 h后,再用1×10~(-7)mol/L AngⅡ继续孵育12 h)。采用Western blot法检测肠系膜动脉中eNOS蛋白表达和eNOS(Ser1177)磷酸化水平,以及PP2Ac的蛋白表达、PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I~2~(PP2A)的表达水平,并用PP2A活性检测试剂盒测定大鼠肠系膜动脉PP2A活性变化。结果:(1)与control组比较,AngⅡ孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平均明显降低(P0.05),且12 h组和24 h组eNOS(Ser1177)磷酸化水平下降均出现明显浓度依赖性,但不同浓度组间eNOS蛋白表达水平差异均无统计学显著性;(2)与control组比较,1×10~(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平降低(P0.05);CAN预处理可明显上调eNOS(Ser1177)磷酸化水平(P0.05),且各组间eNOS蛋白表达水平差异无统计学显著性;(3)与control组比较,1×10~(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和I_2~(PP2A)蛋白表达均降低(P0.05);CAN预处理可使PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和IPP2A2蛋白表达均增加(P0.05),但各组间PP2Ac蛋白表达的差异无统计学显著性;(4)与control组比较,1×10~(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2A活性增高(P0.05);CAN预处理可明显抑制AngⅡ对PP2A的激活作用(P0.05)。结论:AngⅡ可通过AT1R通路激活PP2A,从而介导大鼠肠系膜动脉eNOS(Ser1177)磷酸化水平下调,其分子机制可能与PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I_2~(PP2A)表达降低有关。     

瘦素对HepG2细胞中BSEP蛋白表达及信号通路的影响

目的:探讨瘦素(leptin)对人肝癌细胞(Hep G2)胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)蛋白表达及信号通路的影响。方法:体外培养Hep G2细胞,不同瘦素浓度(10-8、10-7和10-6mol/L)作为刺激因子,分别培养24 h、48 h和72 h后用Western blotting法检测Hep G2细胞的AMPKa、BSEP蛋白表达及AMPKa磷酸化(pAMPKa)水平;筛选BSEP蛋白表达的最佳培养时间及瘦素浓度点,加入10μmol/L AMPK阻断剂compound C进行细胞培养,用Western blotting法检测BSEP蛋白表达。结果:(1)不同浓度瘦素干预Hep G2细胞72 h时,随瘦素浓度增高AMPKa蛋白表达量逐渐增高,在瘦素浓度为10-6mol/L时AMPKa蛋白表达最强(P0.01);(2)不同浓度瘦素干预Hep G2细胞24 h后,AMPKa磷酸化水平与瘦素浓度呈剂量依赖逐渐增强(P0.01),相同瘦素浓度组AMPKa磷酸化水平随时间逐渐增加(P0.01);(3)不同浓度瘦素干预Hep G2细胞24 h后,BSEP蛋白表达水平与瘦素浓度呈剂量依赖逐渐增强(P0.01),相同瘦素浓度组BSEP蛋白表达量随时间逐渐增加(P0.01);(4)72 h测得10-6mol/L瘦素组和10-6mol/L瘦素+10μmol/L compound C组BSEP蛋白表达较正常对照组均增加(P0.01),compound C可降低BSEP蛋白的表达(P0.01)。结论:瘦素可通过"leptin-AMPK-BSEP"途径促进Hep G2细胞BSEP蛋白表达;瘦素可促进Hep G2细胞AMPKa蛋白表达及AMPKa磷酸化水平。     

维生素D通过下调谷氨酰胺合成酶抑制乳腺癌细胞增殖

目的 探究维生素D对非三阴性乳腺癌(non-triple negative breast cancer, Non-TNBC)和TNBC癌细胞增殖的影响及分子机制。方法 收集TNBC和Non-TNBC患者乳腺组织,原代培养TNBC和Non-TNBC患者乳腺细胞;免疫荧光检测乳腺细胞雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和HER2蛋白表达;免疫荧光检测Non-TNBC和TNBC乳腺癌组织和乳腺细胞中VDR蛋白表达;CCK-8检测细胞活力变化;流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期的变化;光学比色法检测细胞谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)活力的变化;ELISA检测细胞培养上清和胞内谷氨酰胺的水平;Western blot检测细胞GS和VDR蛋白表达的变化;CHIP-PCR检测VDR对GS的转录调控。结果 TNBC患者外周血中维生素D水平和癌组织VDR蛋白表达明显低于Non-TNBC患者(P<0.05)。相比于原代Non-TNBC乳腺癌细胞,原代TNBC患者乳腺癌细胞低表达雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和HER2蛋白表达;TNBC乳腺癌细胞VDR表达水...     

PKC和ROCK对硝苯地平舒张血管作用的影响

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)及Rho相关激酶(ROCK)对硝苯地平舒张大鼠离体胸主动脉血管环作用的影响。方法:采用离体血管环灌流装置观察硝苯地平对基础状态血管环及去甲肾上腺素(NE,10~(-6)mol/L)或KCl(60mmol/L)预收缩血管环的张力变化,并利用PKC抑制剂和ROCK抑制剂等工具药观察对硝苯地平舒血管作用的影响并探讨可能机制。结果:系列浓度硝苯地平对基础状态血管环张力无明显影响,对NE和KCl预收缩的血管环具有浓度依赖性舒张作用(P 0. 05),去内皮组舒张作用与内皮完整组比较无明显差异。预孵PKC抑制剂星孢菌素(STA,10~(-8)mol/L)及激动剂佛波酯(PMA,10~(-7)mol/L)后,STA能增强硝苯地平对血管的舒张作用,而PMA能减弱硝苯地平对血管的舒张作用(P 0. 05);预孵ROCK抑制剂法舒地尔(fasudil,10~(-6)mol/L)及激动剂血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ,10-9mol/L)后,fasudil能增强硝苯地平对血管的舒张作用,而Ang-Ⅱ能减弱硝苯地平对血管的舒张作用(P 0. 05);钾通道阻滞剂BaCl_2(10~(-4)mol/L)、四乙胺(10~(-3)mol/L)、格列本脲(10~(-5)mol/L)和4-氨基吡啶(10~(-3)mol/L)对硝苯地平的舒张血管作用无明显影响。在无钙且含高浓度KCl的溶液中,硝苯地平可浓度依赖性地抑制累积浓度的CaCl_2对大鼠离体主动脉环的收缩作用(P 0. 05)。在无钙液中,硝苯地平对NE所引起的收缩无明显影响。结论:硝苯地平能够呈浓度依赖性地舒张大鼠主动脉,其舒张血管作用为非内皮依赖性,且与抑制细胞外钙内流密切相关,其舒张血管作用部分与抑制PKC和ROCK作用相关。     

吡格列酮对前脂肪细胞分化及GILZ蛋白表达的影响

目的:探讨吡格列酮在3T3-L1前脂肪细胞分化及糖皮质激素诱导亮氨酸拉链(GILZ)蛋白表达调节方面的作用。方法:形态观察3T3-L1细胞分化过程,不同浓度吡格列酮(1×10~(-4)mmol/L~1×10~(-2)mmol/L)处理细胞48 h,然后于分化的第2、4、6天用油红O染色测定细胞甘油三酯相对含量,实时荧光定量PCR法检测过氧化物增殖活化受体(PPAR)γ2和脂蛋白酶(LPL)的mRNA表达。不同浓度药物处理细胞48 h后,Western blot检测GILZ蛋白表达。结果:油红O法显示甘油三酯相对含量随药物处理浓度的增加而增加,与对照组比,1×10~(-3)mmol/L和1×10~(-2)mmol/L组甘油三酯含量显著性增加(P0.05)。实时荧光定量PCR检测显示PPARγ2、LPL的mRNA表达也是随着药物处理浓度的增加而增加。与对照组比,吡格列酮高于1×10~(-3)mmol/L浓度时,PPARγ2、LPL的mRNA表达显著性增加(P0.01)。Western blot显示GILZ蛋白表达随着药物处理浓度的增加而降低。结论:吡格列酮可下调GILZ表达,上调PPARγ2及下游LPL的表达。     

血管紧张素Ⅱ 1型受体自身抗体通过上调自噬诱导INS-1胰岛β细胞凋亡

目的:本研究旨在探究血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)能否引起胰岛β细胞的凋亡,自噬是否参与其中以及其所发挥的作用。方法:10-6mol/L AT1-AA处理INS-1细胞24 h后,用流式细胞术、Western blot及Hoechst 33258染色检测细胞的凋亡水平;Western blot检测自噬相关蛋白LC3和beclin 1的蛋白水平。使用血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂替米沙坦以及经典的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理细胞1 h之后再加入AT1-AA处理24 h,检测细胞凋亡、自噬及存活率的变化情况。结果:10-6mol/L AT1-AA处理INS-1细胞24 h可明显降低细胞存活率(P0.05)。与阴性Ig G对照组相比,AT1-AA分别处理细胞12 h、24 h和36 h后细胞凋亡水平明显增高(P0.05);此外,LC3及beclin 1的蛋白水平也随处理时间的延长逐渐升高,且凋亡和自噬水平的升高均可被替米沙坦所阻滞。使用自噬抑制剂3-MA预处理之后,细胞的凋亡率较单独给予AT1-AA处理组明显降低(P0.05)。结论:AT1-AA可通过血管紧张素Ⅱ1型受体上调自噬来诱导INS-1胰岛β细胞凋亡。     

促性腺激素释放激素类似物对人乳腺癌细胞的影响

目的:探讨促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)类似物曲普瑞林(triptorelin)对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231细胞生长及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)和磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路中重要信号分子ERK1/2和Akt活化的影响。方法:使用不同浓度、不同时间的曲普瑞林刺激人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞株,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blotting检测Akt和ERK1/2的磷酸化程度。结果:曲普瑞林(10-5mol/L)作用人乳腺癌MCF-7细胞192 h、曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MCF-7细胞168 h、192 h或曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MDA-MB-231细胞192 h可明显抑制细胞生长(P0.05);曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞192 h,ERK1/2的磷酸化程度均较正常对照组低,Akt的磷酸化程度较正常对照组高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:GnRH类似物曲普瑞林对人乳腺癌细胞的抑制作用,不仅仅是通过对垂体激素的降调节机制,还可能产生直接抑制作用。但该抑制作用未涉及ERK/MAPK和PI3K/Akt信号通路。