Lnc RNA-XIST对鼻咽癌细胞CNE-1增殖、侵袭的影响

目的研究Lnc RNA-XIST对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法选择对数生长期的鼻咽癌CNE-1细胞,采用脂质体转染法进行XIST、si-XIST瞬时转染,通过实时荧光定量PCR技术确认Lnc RNA-XIST在细胞中表达水平,分别采用CCK8、平板克隆检测Lnc RNA-XIST转染后CNE-1细胞增殖能力的变化,Western blot法检测CNE-1细胞中Notch1的蛋白含量,侵袭小室实验检测侵袭能力的变化。结果鼻咽癌CNE-1细胞转染XIST后,si-XIST组CNE-1细胞内的Lnc RNA-XIST mRNA表达降低,XIST组CNE-1细胞内的Lnc RNA-XIST mRNA表达升高。与对照组相比,Lnc RNA-XIST高表达显著增加肿瘤细胞的增殖能力,激活Notch1通路,显著增加肿瘤细胞的侵袭能力(P0.05)。结论 Lnc RNA-XIST通过激活Notch1通路显著增加鼻咽癌CNE-1细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

ClC-3氯通道在二甲双胍抑制鼻咽癌细胞周期进程中的作用

目的:探讨ClC-3氯通道在二甲双胍抑制鼻咽癌细胞周期进程中的作用。方法:采用不同浓度二甲双胍处理低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot法检测ClC-3氯通道蛋白表达,全细胞膜片钳技术检测细胞氯电流。构建高表达ClC-3氯通道蛋白的质粒pEZ-M03-ClC-3转染CNE-2Z细胞,流式细胞术检测ClC-3氯通道对细胞周期分布的影响。结果:5、10和20 mmol/L浓度的二甲双胍均可有效抑制CNE-2Z细胞的活力。10 mmol/L二甲双胍可阻抑CNE-2Z细胞周期于G0/G1期,并抑制CNE-2Z细胞氯电流及ClC-3氯离子通道蛋白的表达。ClC-3氯通道蛋白高表达可逆转二甲双胍对CNE-2Z细胞周期分布的影响。结论:二甲双胍抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞周期进程可能与抑制ClC-3氯通道功能和蛋白表达有关。     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞端粒酶活性的影响

目的:研究口虾蛄提取物(EOS)对人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)端粒酶活性的抑制作用及其可能机制。方法:MTT法检测不同浓度的EOS对CNE-2Z细胞增殖能力的影响;端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)检测各组细胞端粒酶活性,RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达,Western blotting检测c-Myc蛋白表达。结果:EOS对CNE-2Z细胞增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性(P0.01);EOS处理组CNE-2Z细胞端粒酶的活性、hTERT mRNA和c-Myc蛋白的表达水平均低于对照组(P0.01),也呈剂量依赖性,并且hTERT mRNA的下调与c-Myc的抑制存在相关性(P0.05)。结论:EOS可能通过下调细胞c-Myc表达而抑制了hTERT mRNA的转录,以致端粒酶的活性降低而抑制CNE-2Z细胞增殖。     

Notch3诱导人小细胞肺癌H446细胞G_0/G_1期阻滞及其机制

目的探究Notch3对人小细胞肺癌H446细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制。方法将人Notch3真核表达质粒、人HES1真核表达质粒、人鼠双微基因2(MDM2)基因沉默表达质粒及其空质粒分别转染H446细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,采用RT-PCR法检测Notch3和MDM2的mRNA水平,采用Western blotting方法检测Notch3、HES1、MDM2、Rb和P21蛋白表达水平。结果 Notch3可抑制H446细胞增殖并导致G_0/G_1期阻滞(P0.05),上调HES1蛋白表达水平和下调MDM2蛋白表达水平(P0.05);HES1高表达也能使MDM2蛋白表达水平下降(P0.05),但对其mRNA水平无影响;沉默MDM2基因可抑制H446细胞增殖(P0.05),并使H446细胞中Rb和P21蛋白表达水平升高(P0.05)。结论 Notch3可通过HES1抑制MDM2蛋白表达,进而上调Rb和P21蛋白表达水平,抑制H446细胞增殖并阻滞H446细胞于G_0/G_1期。     

miR-122a 抑制人喉癌细胞株Hep2 细胞增殖的研究

目的:研究miR-122a 对人喉癌细胞株Hep2 细胞增殖、细胞周期以及相关蛋白表达量的影响。方法:人喉癌细胞株Hep2 细胞分别转染miR-122a 寡聚核苷酸(A 组)和miR-122a inhibitor(阻遏物)(B 组),同时设立阻遏物阴性对照( inhibitor negative control,miR-NC inhibitor)(C 组)和空白对照(D 组)。用RT-PCR、MTT 法、流式细胞仪和Western blot 技术评价各组细胞增殖和细胞周期的生物学特征。结果:转染miR-122a 寡聚核苷酸后,Hep2 细胞中miR-122a 表达显著增加。同D 组相比,A 组细胞增殖水平明显受到抑制,miR-122a 寡聚核苷酸能够有效诱导Hep-2 细胞周期阻滞在G1/ G0 期,A 组细胞分裂周期蛋白42 表达水平明显下调,细胞周期调控因子蛋白CDK4 及细胞周期素D1 蛋白表达水平明显降低。结论:miR-122a 寡聚核苷酸能够显著抑制喉癌细胞Hep2 的增殖,miR-122a 是潜在的人喉癌细胞基因治疗的候选靶点。     

靶向PCNA基因的小干扰RNA对鼻咽癌CNE2细胞周期的影响

目的： 研究小干扰RNA抑制PCNA基因表达后对鼻咽癌CNE2细胞株增殖及细胞周期的影响。方法: 利用体外合成法合成针对PCNA基因的小干扰RNA(siRNA)序列,应用脂质体转染鼻咽癌CNE-2细胞,实时定量PCR(real-time PCR) 和免疫组织化学法观察siRNA干扰后细胞中PCNA mRNA水平和PCNA蛋白表达,倒置相差显微镜观察转染前后CNE2细胞的生长变化,流式细胞仪检测siRNA干扰后的细胞周期。结果: 在siRNA转染CNE2细胞后,细胞增殖受到抑制,蛋白表达不同程度降低,对PCNA mRNA水平的抑制达98.5%,细胞周期在G0/G1停滞。结论: siRNA可在鼻咽癌中有效发挥RNA干扰效应,抑制PCNA mRNA及蛋白表达,降低PCNA活性,抑制鼻咽癌细胞增殖,为鼻咽癌基因治疗提供了新的方法。     

miR-342-3p对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及可能机制

目的探讨Aβ1-42对小鼠巨噬细胞RAW264.7向炎症性细胞转变的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2、HNE-1、5-8F、HONE-1中miR-342-3p的表达水平。采用脂质体介导法向CNE-2细胞转染miR-342-3p模拟物记为miR-342-3p mimic组,转染模拟物对照的CNE-2细胞记为NC组,不行转染的CNE-2细胞记为Control组。以qRT-PCR检测转染效果,四甲基偶氮唑盐(MTT)法和克隆形成实验检测转染对细胞增殖的影响,Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染色法检测转染对细胞凋亡的影响,Western blot检测细胞中caspase-3、Ki-67及NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果与鼻咽上皮细胞NP69相比,miR-342-3p在鼻咽癌细胞中的表达水平显著降低。与Control组和NC组相比,miR-342-3p mimic组细胞miR-342-3p的表达水平显著升高,细胞OD值明显降低,克隆形成率显著下降,凋亡显著升高(P0.05),细胞中caspase-3激活水平升高,Ki-67、p-IKKα、p-IKKβ蛋白水平降低(P0.05)。结论 miR-342-3p在鼻咽癌细胞中呈低表达,上调鼻咽癌CNE-2细胞中miR-342-3p的表达能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用与抑制NF-κB信号通路的激活相关。     

塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞株CD44v6表达水平的影响

目的 研究塞来昔布(COX-2选择性抑制剂)对鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭能力的影响及可能机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖活性的影响.不同浓度塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h后,通过重组人工基膜实验检测细胞侵袭力的改变;RT-PCR检测鼻咽癌细胞CD44v6 mRNA的表达情况;用Western blot和免疫细胞化学检测鼻咽癌细胞CD44v6蛋白表达变化.结果 MTT法结果显示,塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖有明显抑制作用,呈剂量依赖性关系(P<0.01).塞来昔布作用细胞24 h后,肿瘤细胞的侵袭力明显下降(P<0.05).RT-PCR结果显示,塞来昔布可以明显抑制CD44v6 mRNA的表达水平(P<0.01).Western blot和免疫组化结果显示,随着药物浓度的增加,CD44v6蛋白表达水平逐渐减少(P<0.01).结论 塞来昔布可能通过下调CD44v6表达而降低鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭能力.     

miR-221促进神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞N-MYC表达和细胞增殖

目的探讨过表达miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中N-MYC表达及其细胞增殖能力的影响。方法构建miR-221过表达慢病毒载体并建立稳定转染细胞系,实验设未处理组、空载组和miR-221组,以实时定量荧光PCR(RT-q PCR)检测miR-221表达;以RT-q PCR和Western blot检测N-MYC mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期;CCK8法检测细胞增殖。结果经测序证实慢病毒载体构建成功,与未处理的SH-SY5Y细胞相比,稳定表达miR-221的SH-SY5Y细胞(miR-221组)miR-221表达升高约7倍(P0.01);miR-221组N-MYC mRNA和蛋白表达水平较未处理组显著增多(P0.01);miR-221组G0/G1期细胞比例明显减少(P0.05),S期细胞比例显著增多(P0.05);miR-221组细胞增殖能力明显增强(P0.01)。结论过表达miR-221能够上调神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中N-MYC的表达,并可能通过促发细胞从G0/G1期向S期转化促进细胞增殖。     

下调miR-210增加放射抗拒鼻咽癌细胞系CNE-2R的放射敏感性

目的研究下调miR-210对鼻咽癌放射抗拒细胞的放射敏感性的影响。方法用剂量梯度法建立鼻咽癌放射抗拒细胞CNE-2R。用microRNA基因芯片检测CNE-2和CNE-2R细胞的miRNAs,用q PCR验证miR-210的相对表达量。用LV-hsa-miR-210-inhibition慢病毒感染CNE-2R细胞,q PCR检测鼻咽癌细胞系210-inhibition中miR-210的相对表达量,用FCM测CNE-2R和210-inhibition细胞的凋亡和周期,用克隆形成实验测CNE-2R和210-inhibition的存活分数。结果诱导成功的CNE-2R与CNE-2细胞比较,有93个表达差异2倍的miRNAs。下调CNE-2R中的miR-210后,与CNE-2R比较,210-inhibition凋亡比例明显增加(P0.05),处于G2/M期的比例明显增加(P0.05),S期的比例明显减少(P0.05),210-inhibition细胞较CNE-2R细胞的存活分数降低。结论下调miR-210可增加鼻咽癌放射抗拒细胞的放射敏感性,其可能作为治疗放射抗拒的新靶点。     

Niflumic acid exhibits anti-tumor activity in nasopharyngeal carcinoma cells through affecting the expression of ERK1/2 and the activity of MMP2 and MMP9

Niflumic acid (NFA) was known to inhibit cell proliferation or migration in several types of cancer. However, the function of NFA in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells was not clarified. The proliferation of NPC cell line CNE-2Z cells with NFA treatment was detected using the cell counting kit-8 method and transwell assay was employed to assess the effect of NFA on the CNE-2Z cell migration and invasion. The activity of MMP2 and MMP9 was detected by Gelatin Zymography. Cell cycle distribution and apoptosis were detected using flow cytometry. In vitro pull-down assay, western blot, and computational technique were applied to investigate the NFA regulating signaling pathway. Our results indicated that the growth capacity and colony formation potential of CNE-2Z cells in soft agar were significantly suppressed by treatment with NFA. NFA inhibited the proliferation of CNE-2Z cells in a concentration and time-dependent manner. NFA exerted an S phase arrest on the CNE-2Z cells in a concentration-dependent manner, while promoting apoptosis in a dose-dependent manner. Migration and invasion potential of CNE-2Z cells were decreased by NFA treatment in vitro. In vitro pull-down assay and molecular modeling indicated that NFA directly bound with early respond kinase 1 (ERK1). Finally, the anti-tumor effect of NFA was suggested to be mediated by inhibiting early respond kinases (ERK) expression and the MMP2 and MMP9 activities. NFA has proliferation-inhibiting, invasion-suppressing, cell cycle-blocking and apoptosis-promoting effects on CNE-2Z cells through regulation of ERK/MAPK and our results indicates that NFA may serve as a candidate of anticancer drug for NPC.     

Notch1/Hes1信号调控C/EBPα表达对AECII细胞增殖与分化的影响

目的:探讨Notch1/Hes1信号通路能否通过调控CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达从而影响肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的增殖与分化功能。方法:体外培养人AECⅡ,将细胞随机分为对照组、激活剂组(加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500μg/L)和抑制剂组(加入Notch通路抑制剂DAPT 10μmol/L),于干预后24 h收获各组细胞。采用RT-qPCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1及C/EBPα的mRNA与蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞活力;细胞计数检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及分化。结果:与对照组相比,激活剂组Notch1、Hes1和C/EBPα的mRNA和蛋白表达显著增加(P0.05),促进AECⅡ从S期进入G_2/M期,增殖增加而分化减少(P0.05);抑制剂组Notch1、Hes1和C/EBPαmRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05),AECⅡ被阻滞于G_0/G_1期,增殖减少而分化增加(P0.05)。结论:Notch1/Hes1信号可调控C/EBPα表达并能影响AECⅡ增殖与分化。     

miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响

 目的: 研究微小RNA-141(miR-141)在人肝癌细胞和正常胎肝细胞中的表达,同时分析miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响。方法: 分别提取人肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞HL-7702的总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141的表达。采用脂质体介导的转染方法分别将miR-141 mimic转染SMMC-7721细胞,将miR-141 inhibitor转染HL-7702细胞;MTS试剂盒和BrdU-ELISA检测细胞增殖能力,流式细胞术检测转染前后细胞周期和凋亡率的变化。Transwell实验检测miR-141表达变化对细胞体外迁移能力的影响。结果: miR-141在SMMC-7721细胞中的表达较HL-7702细胞明显下降。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比,转染25 nmol/L miR-141 mimic的SMMC-7721细胞中,细胞增殖速度减慢,S期细胞比例降低,凋亡细胞比例上升,细胞体外迁移能力下降;转染50 nmol/L miR-141 inhibitor的HL-7702细胞中,细胞增殖速度加快,S期细胞比例上升,凋亡细胞比例下降,细胞体外迁移能力增强。结论: miR-141在人肝癌细胞中表达下降,上调miR-141表达可抑制肝癌细胞体外增殖活性和迁移能力,影响细胞周期和凋亡。在肝癌发病进程中,miR-141可能扮演抑癌基因的角色。     

小檗碱增强表柔比星诱导T24细胞G_0/G_1期阻滞的作用机制

目的:探讨小檗碱联合表柔比星对膀胱癌T24细胞周期的影响及相关作用机制。方法:实验将膀胱癌T24细胞分为4组:对照组、表柔比星组、表柔比星+小檗碱组和小檗碱组,采用MTT法检测细胞的活力,检测药物处理后对膀胱癌T24细胞增殖的抑制情况。用流式细胞术分析T24细胞周期分布并用Western blot法测定cyclin D1、CDK2、CDK4、P21和P27蛋白的表达水平。结果:小檗碱联合表柔比星显著抑制T24细胞的活力,存在时间依赖性,联合用药组的G_0/G_1期细胞比例增高,S期和G_2期细胞比例降低,与单用药物组及对照组比较有显著性差异(P0.05)。联合用药上调细胞周期依赖性激酶抑制蛋白P27和P21蛋白的表达水平,同时下调cyclin D1、CDK2及CDK4细胞周期蛋白的表达水平。结论:小檗碱增强表柔比星对膀胱癌T24细胞增殖的抑制及G_0/G_1期阻滞,其作用机制可能与上调P27及P21蛋白和抑制cyclin D1、CDK2及CDK4蛋白表达有关。     

基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌细胞株并分析其增殖特性

目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析。方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2高表达细胞系CNE1。应用CRISPR/Cas9技术敲除CNE1细胞中的SETD2基因,筛选SETD2稳定敲除细胞株。采用CCK-8和平板集落形成实验分析SETD2基因敲除前后CNE1细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:与NP-69细胞相比,随着细胞分化程度的降低,SETD2在CNE1、CNE2Z和C666-1细胞中的表达逐渐下降(P 0. 01)。基于CRISPR/Cas9方法成功地从15个转染了小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的CNE1细胞单克隆中筛选出2个SETD2稳定敲除的细胞株CNE1-SETD2-KO-#5和#9。CCK-8及平板集落形成实验结果证实,相对于CNE1-WT细胞,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞的增殖能力增强(P 0. 05);流式细胞术分析表明,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞G1期减少而G2/M和S期均增加(P 0. 05); Western blot证实,SETD2敲除后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和CDK4表达增加,p21表达减少(P 0. 05)。结论:基于CRISPR/Ca9技术成功构建SETD2基因敲除NPC细胞株。NPC细胞中SETD2表达与细胞分化程度有关; SETD2表达缺失通过上调cyclin D1、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、CDK2和CDK4并下调p21表达而促进细胞增殖。     

MicroRNA-1284在胃癌中的表达及其作用机制研究

目的:探讨microRNA-1284(miR-1284)与胃癌的相关性及分子机制。方法:Real-time PCR检测63例胃癌患者的胃癌组织和匹配周围正常胃组织中miR-1284的表达水平及分析其与临床病理特征之间的关系。通过慢病毒载体的构建及包装生成上调miR-1284慢病毒载体并转染胃癌SGC-7901细胞,上调miR-1284后采用realtime PCR验证细胞miR-1284表达水平,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,生物信息学软件预测miR-1284潜在的靶基因,real-time PCR测定靶基因JAG1表达水平,Western blotting检测JAG1、Notch1和NF-κB的表达水平。结果:66.67%胃癌患者胃癌组织miR-1284表达明显低于正常胃组织(P0.05),miR-1284的表达在不同年龄、性别、TNM分期和淋巴结转移情况患者间的差异无统计学意义(P0.05),但在不同组织学分级患者间的差异有统计学意义(P0.05)。与LV-NC-GFP组和control组比较,LV-miR-1284组的miR-1284表达水平和细胞凋亡显著升高,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞活性和细胞迁移能力减弱,JAG1、Notch1和NF-κB的表达水平降低,均有显著差异(P0.05)。结论:miR-1284可能通过调控其靶基因JAG1而发挥抑制胃癌发生发展的作用。     

氯喹对人肺癌A549细胞周期阻滞及增殖抑制的机制

目的 探讨氯喹抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期的作用及其分子机制。 方法 应用MTT法和流式细胞术分别检测氯喹对A549细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting检测氯喹对A549细胞周期蛋白(cyclin E1)和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK2）、肿瘤抑制蛋白PTEN以及细胞周期抑制蛋白P21、P27表达水平的影响。 结果 氯喹能够抑制A549细胞增殖,并且具有时间-剂量依赖性。氯喹可以诱导细胞凋亡,不同浓度的氯喹作用于A549细胞24h后,细胞凋亡率随着作用剂量的增加而升高。进一步的研究发现,氯喹还能够阻滞细胞周期于G₀/G₁期,降低cyclinE1和CDK2表达水平,明显提高PTEN、P21和P27的表达水平。 结论 氯喹具有抑制肺癌细胞增殖、促进其凋亡和阻滞细胞周期的作用,其机制可能与其抑制CyclinE1和CDK2表达,并且上调PTEN、P21和P27蛋白的表达有关。     

Ikaros的3种亚型对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的:探讨Ikaros的3种亚型对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。方法:利用逆转录病毒转染人卵巢癌SKOV3细胞,分别表达Ikaros的3种亚型(IK1、IK2和IK6);采用CCK-8法分析表达不同亚型后SKOV3细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞周期的改变;Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:CCK-8结果显示IK1和IK2能明显抑制SKOV3细胞的增殖;细胞周期结果表明IK1和IK2能诱导SKOV3细胞发生G1期阻滞,IK6则对SKOV3细胞的增殖能力和细胞周期则无明显影响;Western blot检测结果显示,IK1和IK2明显降低cyclin D1和cyclin D2蛋白的表达水平,同时升高p21蛋白的表达水平。IK6则对SKOV3细胞的cyclin D1、cyclin D2及p21蛋白表达水平无明显改变。结论:IK1和IK2这2种亚型能明显抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,其机制可能是由于IK1和IK2能降低细胞周期促进蛋白cyclin D1和cyclin D2的表达及增加细胞周期抑制蛋白p21的表达,从而诱导细胞周期发生G1期阻滞。而IK6亚型对SKOV3细胞增殖能力及细胞周期无明显影响。     

HMBA对人舌癌Tca8113细胞增殖和KLF6及相关蛋白表达的影响

目的: 研究六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisacetamide, HMBA)对人舌癌Tca8113细胞增殖和Kruppel样因子6(Kruppel-like factor 6, KLF6)及相关蛋白表达的影响。方法: HMBA处理Tca8113细胞后,观察细胞生长和细胞形态;流式细胞术观察细胞周期;RT-PCR检测KLF6 mRNA的表达;免疫细胞化学技术检测KLF6、p53、cyclin D1及c-Jun的蛋白表达。结果: HMBA处理后贴壁细胞的数量随浓度增加明显减少;MTT实验显示其生长抑制作用呈浓度/时间-效应关系;镜下观察显示处理后Tca8113细胞出现向正常细胞形态逆转演变的特征。流式细胞术检测结果显示,对照组Tca8113细胞G₁期比例为(52.00±0.02)%,S期为(34.00±0.08)%,G期为(14.00±0.10)%;HMBA处理后,随作用时间增加,G₁期细胞显著增加,S期细胞显著减少,G₂期细胞也减少,细胞明显被阻滞于G₁期(P<0.05);出现凋亡峰。 RT-PCR结果显示HMBA处理后KLF6 mRNA的表达上调(P<0.05); 免疫组化检测显示HMBA处理后KLF6和p53蛋白表达上调(P<0.05),cyclin D1和c-Jun表达下调(P<0.05)。结论: HMBA对Tca8113细胞增殖具有抑制作用;其作用机制一方面可能通过p53上调p21的表达和活性,另一方面可能通过上调表达的KLF6解除c-Jun对p21的抑制作用,下调cyclin D1,抑制CDK4/6和cyclin D1复合物活性,将Tca8113细胞阻滞于G₀/G₁期,诱导Tca8113细胞向正常细胞分化,恢复正常细胞的表型和功能,并促进细胞凋亡。     

MicroRNA-140-5p通过蛋白激酶C亚型ε促进肾癌细胞增殖

目的 探讨microRNA-140-5p(miR-140-5p)在肾癌发生中的作用。 方法 Real-time PCR方法检测肾癌细胞（Caki-1、ACHN、OS-RC-2和786-O）中miR-140-5p的表达。MTS,流式细胞术和Western blotting检测细胞增殖,细胞周期和相关蛋白的改变。 结果 降低Caki-1细胞中miR-140-5p的水平后,细胞增殖被抑制,G₀/G₁期细胞数量显着增加,cyclin D、cyclin E和CDK2、CDK4也随之减少;此外,增加786-O细胞中miR-140-5p的水平后,促进体外细胞增殖和体内肿瘤发生。基因芯片结果发现,蛋白激酶C亚型ε（PKCε)基因在改变Caki-1和786-O的细胞中显著性升高。siPKCε在降低肾癌细胞（RCC)中PKCε蛋白表达的同时,还能显著性反转抑制物/模拟物诱导的细胞增殖和细胞周期的改变。 结论 miR-140-5p通过PKCε促进肾癌细胞增殖。