NF-κB在发育鼠戊四氮反复点燃癫痫形成中的作用

目的：用NF-κB阻滞剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)阻断NF-κB的表达，探讨核因子κB(NF-κB)在发育鼠戊四氮(PTZ)点燃癫痫形成过程中的作用。方法:生后10 d（P10）Wistar大鼠72只，随机分为PTZ组、PDTC＋PTZ组及生理盐水对照组3组，制备戊四氮反复点燃癫痫模型。观察各组大鼠行为学改变、海马各区细胞形态及细胞计数、NF-κB表达、5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数和苔藓纤维发芽等指标。结果:(1)NF-κB表达，PTZ组显著高于对照组及PDTC+PTZ组（P<0.01）；(2)海马神经细胞计数，PTZ组齿状回（DG）区颗粒细胞较对照组显著增加(P<0.05)；PDTC+PTZ组CA1、CA3和门区神经元数较PTZ组均明显减少（P<0.05）；(3)DG区BrdU阳性细胞数，PTZ组和PDTC+PTZ组均较对照组显著增加（P<0.01）；PDTC＋PTZ组DG区BrdU阳性细胞数目明显较PTZ组少（P<0.01）；NF-κB吸光度值与BrdU阳性细胞数/颗粒细胞数相关性分析呈正相关，具有统计学意义（P<0.01）；（4）苔藓纤维发芽，PDTC＋PTZ组和PTZ组均有苔藓纤维发芽，两组比较没有显著差异。结论:NF-κB在发育鼠癫痫中发挥重要作用，促进海马神经元发生，保护海马神经细胞，但对苔藓纤维发芽无明显作用。     

癫痫发作后成鼠及幼鼠海马神经发生的改变

目的:观察幼鼠及成鼠癫痫发作后海马神经发生的变化。方法:选用3周龄和成年雄性SD大鼠,氯化锂-匹罗卡品药物点燃造模,造模成功后根据溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)注射时间点分为24 h组、2周组,并设相应的对照组。通过免疫荧光染色技术在激光共聚焦显微镜下观察幼鼠及成年鼠海马齿状回颗粒细胞层神经细胞的增殖情况。结果:(1)幼鼠24 h及2周实验组海马齿状回颗粒细胞层BrdU阳性细胞数均显著高于相应对照组(P<0.05),且24 h组较2周组显著增多(P<0.05);(2)成年鼠24 h实验组的BrdU阳性细胞数明显多于相应对照组(P<0.05),而2周组则相反(P<0.05)。结论:癫痫发作可导致海马神经发生的改变,幼鼠癫痫发作后海马齿状回颗粒细胞层神经细胞增殖显著升高,但随着时间延长呈下降趋势。慢性癫痫发作可引起成年鼠海马神经细胞增殖的降低。     

大黄素调节HMGB1/NF-κB信号通路对宫内炎症致早产大鼠脑损伤的保护作用

目的 探讨大黄素调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对宫内炎症致早产大鼠脑损伤的保护作用机制。方法 制备孕鼠后腹腔内注射脂多糖建立宫内炎症致早产大鼠模型,随机分为模型组、大黄素低剂量（25 mg/kg）组、大黄素高剂量（50 mg/kg）组、空载质粒组、大黄素高剂量（50 mg/kg）+HMGB1过表达组,每组10只,另制备10只孕鼠腹腔内注射等剂量生理盐水作对照组,每组孕鼠所产的仔鼠随机选出10只,采用大黄素和质粒分组处理各组孕鼠和仔鼠后,检测各组孕鼠所生仔鼠活产数及出生体质量;H-E染色检测各组孕鼠子宫及胎盘病理形态变化;斜坡实验及圆筒实验检测各组仔鼠神经行为学能力;TUNEL染色检测各组仔鼠海马及脑皮质神经元凋亡;酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组仔鼠脑组织与血清促炎因子环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹法检测各组仔鼠脑组织HMGB1/NF-κB通路蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组子宫及胎盘病理评分、转头所用时间、海马及脑皮质神经元凋亡率、脑组织与血清COX-2、IL-6水平、脑组织HMGB1蛋白...     

NF-KB在发育鼠戊四氮反复点燃癫痫形成中的作用

目的:用NF-KB阻滞剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)阻断NF-KB的表达,探讨核因子KB(NF-KB)在发育鼠戊四氮(PTZ)点燃癫痫形成过程中的作用.方法:生后10 d(P10)Wistar大鼠72只,随机分为PTZ组、PDTC PTZ组及生理盐水对照组3组,制备戊四氮反复点燃癫痫模型.观察各组大鼠行为学改变、海马各区细胞形态及细胞计数、NF-KB表达、5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数和苔藓纤维发芽等指标.结果:(1)NF-KB表达,PTZ组显著高于对照组及PDTC PTZ组(P<0.01);(2)海马神经细胞计数,PTZ组齿状回(DG)区颗粒细胞较对照组显著增加(P<0.05);PDTC PrZ组CAI、CA3和门区神经元数较PTZ组均明显减少(P(0.05);(3)DG区BrdU阳性细胞数,PTZ组和PDTC PTZ组均较对照组显著增加(P<0.01);PDTC PTZ组DG区BrdU阳性细胞数目明显较PTz组少(P<0.01);NF-KB吸光度值与BrdU阳性细胞数／颗粒细胞数相关性分析呈正相关,具有统计学意义(P<0.01);(4)苔藓纤维发芽,PDTC PTz组和PTZ组均有苔藓纤维发芽,两组比较没有显著差异.结论:NF-KB在发育鼠癫痫中发挥重要作用,促进海马神经元发生,保护海马神经细胞,但对苔藓纤维发芽无明显作用.     

小鼠诱导性多能干细胞移植治疗宫内缺氧新生鼠脑损伤

目的:研究小鼠诱导性多能干细胞(iPSCs)移植对宫内缺氧新生鼠脑损伤的治疗作用及机制。方法:于孕14 d开始孕鼠置于动物缺氧培养箱中,制作胎鼠宫内缺氧模型。孕鼠分娩后新生鼠经侧脑室注入BrdU标记的iPSCs悬液移植组和PBS缺氧组,对照组不治疗,H-E染色观察脑组织形态学变化、八臂迷宫测试动物记忆功能、免疫组织化学检测脑BrdU阳性细胞和神经颗粒素(Ng)和神经元烯醇化酶(NSE)的表达、原位杂交检测血管内皮生长因子mRNA(VEGF mRNA)的表达。结果:移植组小鼠的学习记忆能力和脑皮质区细胞结构较缺氧组均明显改善;脑切片检出BrdU阳性细胞存在,缺氧组Ng和NSE阳性细胞表达较对照组显著减少,而VEGF mRNA的表达较对照组显著增加;移植组Ng、NSE和VEGF mRNA表达均较缺氧组显著增加。结论:小鼠iPSCs移植于宫内缺氧的新生小鼠脑中,可减轻缺氧神经元的损伤和提高学习能力,其机制可能通过上调VEGF mRNA和Ng的表达有关。     

孕期亚硝酸盐暴露对仔鼠海马损伤的影响

目的 探讨孕期亚硝酸盐暴露对海马损伤的作用。 方法 利用C57BL/6J小鼠建立孕期亚硝酸盐暴露模型,分为对照组（生理盐水）、低剂量亚硝酸盐组（60mg/kg）和高剂量亚硝酸盐组(120mg/kg)。收集出生当日（P0）、P7、P14及P30各年龄点仔鼠大脑,用于免疫荧光染色、彗星实验、Western blotting蛋白半定量分析,对海马损伤进行研究。 结果 不论是亚硝酸盐暴露组还是对照组,仔鼠齿状回增殖的神经干细胞数目均随着年龄的增长逐渐减少;在P0、P7、P14和P30年龄点,暴露组仔鼠增殖的神经干细胞的数量明显比对照组少,且具有剂量依赖性（P<0.05,n=96）。为了鉴别这种抑制作用是否具有选择性,我们对P0仔鼠室管膜下区神经干细胞的增殖情况进行了观察。结果发现,亚硝酸盐暴露组室管膜下区的神经干细胞增殖较对照组也减少,同样具有剂量依赖性（P<0.05）;亚硝酸盐暴露组仔鼠门区炎症损伤细胞和凋亡细胞的数目比对照组多,具有剂量依赖性（P<0.05）;彗星实验结果显示,亚硝酸盐暴露组P0仔鼠海马细胞的彗尾比对照组长,具有剂量依赖性(P<0.01);与对照组P0仔鼠相比,亚硝酸盐暴露组仔鼠海马组织内Caspase-8和核因子κB（NF-κB）蛋白的表达量较高（P<0.05）。
结论 孕期亚硝酸盐暴露可通过抑制神经干细胞增殖,促进细胞损伤和凋亡而对仔鼠海马造成损伤。     

孕鼠宫颈注射脂多糖对仔鼠脑细胞GFAP、MBP表达的影响

目的： 研究脂多糖致宫内感染仔鼠脑细胞中胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)含量的变化以及对仔鼠脑重和体重发育的影响。方法: 经宫颈在受孕第10 d（E10组）、15 d（E15组）和20 d（E20组）注射脂多糖建立宫内感染模型,于仔鼠出生后7 d、14 d和21 d断头取脑,测量脑重和体重。采用免疫组化法测定GFAP、MBP含量。结果: 脂多糖致宫内感染后仔鼠脑组织中GFAP和MBP的含量逐步增高（P<0.01,P<0.05）,且21 d组GFAP明显高于7 d组（P<0.01）、21 d组MBP高于7d组（P<0.05）。感染后仔鼠的体重大于对照组（P<0.05）,而生后7 d和14 d仔鼠的脑重大于对照组（P< 0.01,P<0.05）。结论: 脂多糖致宫内感染可导致仔鼠脑细胞GFAP、MBP含量升高。     

静脉移植脐血干细胞可抑制脑缺血大鼠的神经细胞凋亡

背景：已有实验证实脐血干细胞移植后可迁移至脑损伤区域,存活并分化为神经细胞。 目的：探讨经静脉移植脐血干细胞治疗大鼠脑缺血的疗效以及对神经细胞凋亡的影响。 方法：改良线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,48只大鼠随机数字表法分成治疗组和对照组,分别在造模1 d后经尾静脉注射脐血干细胞和PBS进行观察。 结果与结论：治疗后3,7 d两组神经功能评分比较,差异无显著性意义(P > 0.05);14,21 d治疗组神经功能评分明显低于对照组(P < 0.05)。对照组未见BrdU阳性细胞,治疗组大鼠脑组织切片中可见BrdU阳性细胞,对侧半球也可见少量BrdU阳性细胞。对照组大鼠缺血侧凋亡细胞显著多于治疗组(P < 0.05)。提示经静脉移植的脐血干细胞可迁移至大鼠缺血侧脑组织,抑制神经细胞凋亡,并显著改善大鼠神经功能。     

γ-分泌酶抑制剂对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经保护作用

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂（3,5-二氟苯乙酰基）-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯（DAPT）对脑缺血大鼠神经干细胞（NSCs）移植后的神经保护作用。 方法 SD大鼠33只,脑缺血模型制造成功后,随机平均分为3组：模型组、神经干细胞移植组（移植组）、DAPT+移植组。另假手术组11只仅在麻醉状态下分离暴露血管。NSCs移植后7d观察各组大鼠神经行为学改变;TTC染色观察脑梗死体积;尼氏染色观察脑组织病理形态学变化;免疫荧光双标检测BrdU/神经元核抗原（NeuN）阳性细胞表达。 结果 假手术组神经功能学评分为零,无脑梗死灶,细胞形态完好,尼氏小体丰富,BrdU/NeuN阳性细胞表达阴性;与假手术组相比,模型组神经功能学评分增加,有明显神经功能缺损症状,可见明显脑梗死灶,神经细胞排列紊乱,可见核固缩,尼氏小体稀少,存活神经元数量显著减少(P＜0.05),有少量BrdU/NeuN阳性细胞表达(P＜0.05);与模型组比较,移植组和DAPT+移植组都有不同程度神经功能评分减低,脑梗死体积缩小,神经细胞存活数量增加( P＜0.05),BrdU/NeuN阳性细胞表达增多(P＜0.05),以DAPT+移植组各项指标恢复最为明显。 结论 DAPT能够促进移植的NSCs向神经元分化,对脑缺血大鼠神经干细胞移植后有神经保护作用。     

脂多糖处理的孕期SD大鼠所产仔鼠下海马区皮质激素受体的变化及机制北大核心CSCD

目的观察脂多糖(LPS)介导的宫内感染对仔鼠海马盐皮质激素受体(MR)与糖皮质激素受体(GR)表达的影响。方法 10周龄雌雄SD大鼠1∶1配对,将孕鼠随机分为对照组(10只)和LPS处理组(20只),孕第10天时,在LPS处理组大鼠腹腔内注射LPS(66μg/kg),对照组注射相同体积生理盐水。取48日龄仔鼠,采用旷场实验检测仔鼠对新环境的探索能力,采用HE染色观察仔鼠海马组织的病变情况,免疫荧光组织化学染色法检测仔鼠海马组织MR和GR的表达,地塞米松抑制实验研究孕期感染对仔鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴调节功能的影响。结果与对照组相比,LPS处理组仔鼠对新环境的探索能力减低,海马组织CA1区、齿状回(DG)区神经元排列杂乱,多处可见细胞核固缩、碎裂、溶解,CA1区MR和GR的表达降低、DG区GR表达增加,CA3区MR、GR及海马DG区MR表达无明显变化;仔鼠注射生理盐水和注射地塞米松后的血清皮质酮(COR)水平无明显变化,与应用生理盐水相比,应用地塞米松后LPS处理组和对照组子代大鼠的COR水平降低。结论 LPS处理的孕鼠可引起子代大鼠对新环境的探索能力减退,与子代大鼠海马各区MR、GR表达量改变及伴随的MR/GR比率降低有关。     

宫内感染后低龄大鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白的表达变化

目的:探讨胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在宫内感染后低龄大鼠脑组织中的表达变化及其意义。方法: 对孕大鼠子宫内注入大肠杆菌建立宫内感染的大鼠模型,以子宫内注入生理盐水为对照组。两组分别于生后1、3、7、14及21 d取幼鼠脑组织,应用免疫组化方法检测脑组织中不同脑区GFAP的表达。结果: 生后1、3 d龄大鼠仅脑室旁白质区可见少许GFAP阳性细胞,两组细胞数无显著差异(P>0.05),其余脑区未见明显GFAP表达。感染组7日龄大鼠脑室旁白质和海马区GFAP阳性细胞数增多,与对照组比较差异显著(脑室旁白质区:9.73±3.55 vs 5.67±1.90,P<0.05;海马区:7.81±3.61 vs 2.16±1.11,P<0.05)。感染组14 d龄大鼠脑室旁白质、胼胝体及皮层区GFAP阳性细胞数增多,与对照组比较均有显著差异(脑室旁白质区:12.72±1.81 vs 9.00±0.93,P<0.01;胼胝体区:10.98±3.26 vs 4.44±1.15,P<0.01;皮层区:5.43±1.79 vs 2.71±0.67,P<0.01)。两组21 d龄大鼠各脑区GFAP阳性细胞数无显著差异(P>0.05)。结论: 宫内感染后低龄大鼠脑组织中GFAP表达增加。     

5'-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷标记人巨细胞病毒感染SD大鼠脑组织神经元模型的建立

目的 用5'-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的人巨细胞病毒(HCMV)进行脑内定位注射,建立SD大鼠脑组织感染模型;研究大鼠脑组织海马部位神经元对HCMV的容许性及HCMV在其内的感染特点. 方法 运用BrdU标记HCMV基因组,并测定病毒滴度.将21只SD大鼠随机分为病毒感染组(n=18)及对照组(n=3),病毒感染组根据感染时间分为感染24、48及96 h组.每个感染时间组再分为2μl及4μl两个剂量组,每个剂量组包括3只动物,均以脑内注射途径将BrdU标记的HCMV直接注入大脑海马部位;对照组大鼠注射不含病毒的细胞培养上清液(4μl).感染大鼠术后分笼饲养,于各感染时间点处理大鼠取脑组织,冰冻切片;对海马周围部位脑组织分别运用抗BrdU及抗微管相关蛋白2(MAP-2)抗体进行免疫荧光双标染色检测标记病毒;抗pp65抗体免疫组化染色及Nissil复染检测病毒蛋白pp65. 结果 病毒感染后24 h,两个剂量组均未在神经元内检测到标记病毒及pp65.病毒感染后48h和96 h,两个剂量组在海马部位神经元中均检测到了标记病毒阳性荧光及pp65的阳性着色;而且2μl组的受感染神经元细胞数较4μl组少,但同-剂量组在镐h和96 h受感染神经元细胞数未见明显变化. 结论 成功建立了BrdU标记HCNV感染SD大鼠脑组织的模型.大鼠脑组织海马部位神经元是HCMV的半容许细胞,HCMV在其内仅表现为潜伏性感染.     

非结核分枝杆菌感染患者外周血免疫细胞改变及其临床意义

目的分析非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacterium,NTM)感染患者外周血免疫细胞表达率的改变以及临床意义.方法选择2016年4月至2017年4月期间苏州市第五人民医院住院的69例NTM感染患者作为病例组,选取同期本院健康体检者66例作为对照组.采用流式细胞术对健康对照组和NTM感染患者(NTM组)外周血免疫细胞表达率进行检测,并比较各组之间的差异.进一步根据感染部位的差异将NTM组分为单侧感染组(29例)和双侧感染组(40例),比较两组之间免疫细胞表达水平的差异.结果与对照组相比较,NTM组的总的T淋巴细胞表达率没有显著改变,而B淋巴细胞与单核细胞表达率出现显著上调[(10.50±0.56)%比(12.26±0.57)%,(5.61±0.24)%比(6.72±0.32)%,t值分别为2.209和2.774,P值均<0.05],自然杀伤(natural killer,NK)细胞表达率出现显著下调(21.87±0.98)%比(18.63±0.98)%,t=2.341,P<0.05).对T细胞亚群的分析发现,NTM组的CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD8+CD28-T细胞的表达率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),而CD4+CD25HT细胞的表达率较对照组显著上调[(8.05±0.35)%比(3.69±0.19)%,t=11.000,P<0.05],CD8+CD28+T细胞表达率较对照组显著下调[(23.76±0.90)%比(27.07±0.74)%,t=3.039,P<0.05].进一步依据患者感染部位比较分析发现,单侧感染组与双侧感染组的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞在外周血中表达率的差异均无统计学意义(P>0.05).T细胞亚群的结果分析显示,CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25HT细胞在单侧感染组与双侧感染组之间的表达率差异无统计学意义(P>0.05),而双侧感染组的CD8+CD28+T细胞表达比例较单侧感染组显著下降[(21.99±1.02)%比(26.21±1.52)%,t=2.397,P<0.05]、CD8+CD28-T细胞表达比率较单侧感染组显著上调[(24.48±1.90)%比(18.19±1.60)%,t=2.404,P<0.05].结论NTM感染患者外周血中一些免疫细胞的表达率出现了显著改变,可能对疾病的发生与发展产生了重要影响.     

孕期酒精暴露诱导神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠海马苔藓细胞凋亡

目的 探讨神经酰胺对孕期酒精暴露所诱导的小鼠神经细胞凋亡的影响.方法 建立神经鞘磷脂合成酶2基因敲除(SMS-/-2)小鼠和野生型(WT)小鼠的孕期酒精暴露模型,将出生后的不同基因型仔鼠(共360只)分为对照组和酒精组.用酶学法检测生后0 d(P0)仔鼠血清神经鞘磷脂(SM)含量,利用免疫荧光染色法观察对照组与模型组各年龄点仔鼠齿状回苔藓细胞凋亡数量的变化,免疫印迹法检测P7、P14仔鼠海马组织Caspase-8、Caspase-3激活蛋白的相对表达量.结果 酒精暴露后仔鼠血清SM水平降低,且具有剂量依赖性(F=41.08,P<0.05);SMS-/-2仔鼠血清SM水平低于同组WT仔鼠(F=53.34,P<0.01).酒精诱导WT和SMS-/-2仔鼠苔藓细胞凋亡(F=15.61,P<0.05),有剂量依赖性和长时程效应,与同年龄、相同处理条件的WT仔鼠相比,SMS-/-2仔鼠苔藓细胞凋亡数量较多(F=11.72,P<0.05).Western blotting检测结果 与免疫荧光结果 一致.结论 SMS2基因缺失使血清SM水平降低,可引起神经酰胺在体内蓄积;神经酰胺促进酒精暴露诱导神经细胞凋亡的过程;孕期酒精暴露主要通过死亡受体途径诱导神经细胞凋亡的发生.     

Crucial role for Ser133-phosphorylated form of cyclic AMP-responsive element binding protein signaling in the differentiation and survival of neural progenitors under chronic cerebral hypoperfusion

Various stimuli, such as ischemia/hypoxia enhance newborn cell survival in the subventricular zone and their migration tangentially in chains toward the olfactory bulb. The present study assessed the fate of newborn neurons from subventricular zone to olfactory bulb under conditions of chronic cerebral hypoperfusion, and examined the role of cAMP-responsive element binding protein signaling on the survival of these neurons by using cilostazol, a potent inhibitor of type III phosphodiesterase. Rats underwent bilateral common carotid artery ligation. They were divided into sham-operated (n=70), vehicle- (n=70), and type III phosphodiesterase inhibitor–treated (n=70) groups. Immunohistochemically-stained section for 5-bromodeoxyuridine and a series of neuronal and glial markers were analyzed at days 7, 14, 21 and 28 after hypoperfusion. The reduction of olfactory bulb size gradually progressed in the vehicle group (P<0.05), but not in the sham-operated and type III phosphodiesterase inhibitor-treated group. The subventricular zone of the vehicle-treated rats contained significantly larger numbers of newborn neuroblasts after hypoperfusion, compared with sham-operated rats (P<0.05), but significantly lower numbers in the rostral migratory stream and olfactory bulb (P<0.05). Treatment of rats with type III phosphodiesterase inhibitor increased the number of neuroblasts and enhanced the survival and differentiation of cells (P<0.05). Phosphorylated cAMP-responsive element binding protein within neuroblasts was markedly decreased in the subventricular zone, rostral migratory stream, and olfactory bulb of vehicle-treated rats (P<0.05), but treatment with type III phosphodiesterase inhibitor resulted in recovery of this expression throughout hypoperfusion, leading to enhanced neurogenesis (P<0.05). These effects were abrogated by protein kinase A and C inhibitor. Our results indicated that cAMP-responsive element binding protein signaling is a key mediator of neurogenesis after prolonged hypoperfusion and provide the basis for new regenerative therapies for ischemic brain injury.     

Cilostazol attenuates ischemic brain injury and enhances neurogenesis in the subventricular zone of adult mice after transient focal cerebral ischemia

Evidence suggests that neurogenesis occurs in the adult mammalian brain, and that various stimuli, for example, ischemia/hypoxia, enhance the generation of neural progenitor cells in the subventricular zone (SVZ) and their migration into the olfactory bulb. In a mouse stroke model, focal ischemia results in activation of neural progenitor cells followed by their migration into the ischemic lesion. The present study assessed the in vivo effects of cilostazol, a type 3 phosphodiesterase inhibitor known to activate the cAMP-responsive element binding protein (CREB) signaling, on neurogenesis in the ipsilateral SVZ and peri-infarct area in a mouse model of transient middle cerebral artery occlusion. Mice were divided into sham operated (n=12), vehicle- (n=18) and cilostazol-treated (n=18) groups. Sections stained for 5-bromodeoxyuridine (BrdU) and several neuronal and a glial markers were analyzed at post-ischemia days 1, 3 and 7. Cilostazol reduced brain ischemic volume (P<0.05) and induced earlier recovery of neurologic deficit (P<0.05). Cilostazol significantly increased the density of BrdU-positive newly-formed cells in the SVZ compared with the vehicle group without ischemia. Increased density of doublecortin (DCX)-positive and BrdU/DCX-double positive neural progenitor cells was noted in the ipsilateral SVZ and peri-infarct area at 3 and 7 days after focal ischemia compared with the vehicle group (P<0.05). Cilostazol increased DCX-positive phosphorylated CREB (pCREB)-expressing neural progenitor cells, and increased brain derived neurotrophic factor (BDNF)-expressing astrocytes in the ipsilateral SVZ and peri-infarct area. The results indicated that cilostazol enhanced neural progenitor cell generation in both ipsilateral SVZ and peri-infarct area through CREB-mediated signaling pathway after focal ischemia.     

Neonatal inflammatory pain increases hippocampal neurogenesis in rat pups

Preterm infants undergo several painful procedures during their stay in neonatal intensive care units. Previous studies suggest that early painful experiences may have an impact on brain development. Here, we used an animal model to investigate the effect of neonatal pain on the generation of new neurons in the dentate gyrus region of the hippocampus. Rat pups received intraplantar injections of complete Freund's adjuvant (CFA), a painful inflammatory agent, on either P1 or P8 and were sacrificed on P22. We found that rat pups injected with CFA on P8 had more BrdU-labeled cells and a higher density of cells expressing doublecortin (DCX) in the subgranular zone of the dentate gyrus. No change in BrdU-labeling or DCX expression was observed in pups injected with CFA on P1. These findings indicate that neonatal pain can increase hippocampal neurogenesis, suggesting that early painful experiences may shape brain development and thereby influence behavioral outcome.     

孕期酒精暴露诱导仔鼠胰岛素抵抗与海马应激损伤

目的 探讨在孕期酒精暴露模型中胰岛素抵抗与海马应激损伤的相关性及其机制。方法 利用C57BL/6J小鼠建立孕期酒精暴露模型,分为对照组、中剂量组和高剂量组;对各组出生第7天（P7）、P14、P30仔鼠进行空腹血糖和空腹血胰岛素测定并计算胰岛素抵抗指数;利用免疫荧光染色法观察各组年龄点仔鼠海马CA1区细胞应激损伤指标c-Fos、核因子-κB（NF-κB）及炎症因子环氧合酶-2（COX2）的阳性细胞数;免疫印迹法检测P7、P14仔鼠海马组织c-Fos、NF-κB激活蛋白的相对表达量以印证免疫荧光染色结果。结果 酒精暴露后仔鼠胰岛素抵抗指数升高,且具有酒精剂量依赖性（P <0.05,n=90）;酒精暴露后各年龄点仔鼠海马组织CA1区应激损伤指标c-Fos、NF-κB和炎症因子COX2阳性细胞数增多,存在酒精剂量依赖性（P <0.05, n=90）和长时程效应;孕期酒精暴露后海马组织c-Fos、NF-κB激活蛋白表达量增多（P <0.05,n=30）,同时存在酒精剂量依赖性和长时程效应,与免疫荧光结果一致。结论 孕期酒精暴露可诱导仔鼠产生胰岛素抵抗,其原因可能是氧化应激的结果;胰岛素抵抗可能参与胎儿酒精综合症大脑损伤及其发病机制,c-Fos、NF-κB通路可能是胰岛素抵抗损伤大脑的分子机制之一。     

Postischemic exercise decreases neurogenesis in the adult rat dentate gyrus

Running exercise enhances neurogenesis in the normal adult and aged hippocampus. However, the effect of exercise on neurogenesis in the ischemic hippocampus is unclear. Here, we show that running exercise has different effects on ischemic and non-ischemic brain. Young (3-4-month-old) normotensive Wistar rats were used for this study. We administered bromodeoxyuridine (BrdU) to rats 7 days after the induction of transient forebrain ischemia or sham operation. BrdU-labeled cells were increased in the ischemic subgranular zone (SGZ) and granule cell layer (GCL) and double immunofluoresence showed approximately 80% of BrdU-labeled cells expressed neuronal markers. To assess the effect of running exercise on neurogenesis, BrdU-labeled cells in these regions were quantified after 1 day and 14 days. In sham-operated rats, the numbers of BrdU-labeled cells were significantly increased (2.2-fold) in the SGZ and GCL in response to running exercise. The numbers of BrdU-labeled cells were increased in response to ischemia, however, they were decreased 14 days after BrdU administration and running exercise accelerated the reduction in BrdU-labeled cells in ischemic rats. These findings suggest that running exercise has a negative effect on neurogenesis in the ischemic hippocampus. This may be important with respect to assessment of therapeutic approaches for functional recovery after stroke.     

Toll样受体4在新生小鼠常压高氧脑损伤中的作用

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在新生小鼠常压高氧脑损伤中的作用。方法新生3 d(P3)的TLR4野生型(W)和TLR4突变型(M)小鼠各36只,随机分为:100%高氧暴露组(WO2组,MO2组)及空气对照组(WA组,MA组),每组18只。高氧暴露组置于100%高氧箱中2 d,以空气中常规饲养的同龄小鼠作为空气对照组。各组于P6随机取12只小鼠脑组织,用于检测TLR4 mRNA表达及石蜡切片,染色观测神经细胞密度,并检测细胞凋亡情况;其余小鼠饲养至28 d,Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习记忆能力。结果 RT-PCR提示WO2组TLR4 mRNA表达较WA组明显增加(P<0.05);染色WO2组在前额叶皮质区平均光密度低于WA组(P<0.05)及MO2组(P<0.05),在海马CA1区小于WA组(P<0.05),在两区凋亡细胞指数均较WA组及MO2组增高(P<0.05);MO2组与MA组比较,各个脑区神经细胞密度及凋亡指数均无明显差异(P>0.05)。Morris水迷宫WO2组与WA组比较,逃避潜伏期延长(P<0.05),目标象限停留时间缩短(P<0.05),穿越虚拟平台次数减少(P<0.05)。MO2组与MA组比较,上述各项指标均无明显差异。结论 TLR4功能缺失可减少高氧导致的未成熟神经细胞凋亡,降低新生期高氧暴露对远期学习记忆能力的损害。