BDNF在APP/PS1转基因小鼠皮层和海马内的表达及其对学习记忆能力的影响

目的:探究脑源性神经生长因子(BDNF)在野生型小鼠和APP/PS1双转基因小鼠大脑内的表达变化及其对学习记忆能力的影响。方法:选择野生型小鼠和APP/PS1双转基因小鼠作为研究对象,刚果红染色标记Aβ斑,TUNEL法检测细胞凋亡,采用免疫荧光和Western blot方法检测BDNF在野生型和APP/PS1双转基因小鼠皮层和海马内的表达,Morris水迷宫检测小鼠的空间学习记忆能力。结果:APP/PS1双转基因小鼠皮层和海马区都形成Aβ斑,且12月龄小鼠Aβ斑的数量多于6月龄(P0.05)。12月龄APP/PS1双转基因小鼠皮层和海马区神经元凋亡的数量多于野生型小鼠(P0.01)。野生型小鼠皮层和海马区BDNF的表达量高于APP/PS1双转基因小鼠(P0.01)。水迷宫检测显示,APP/PS1双转基因小鼠的逃逸潜伏期长于野生型小鼠,而60 s内穿越平台所位象限的次数少于野生型小鼠,且游泳轨迹杂乱无章。结论:APP/PS1双转基因型小鼠皮层和海马区BDNF的表达量低于野生型小鼠,并伴随着神经元凋亡的增加,且空间学习记忆能力降低。这些结果提示APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的降低可能与BDNF表达减少导致神经元凋亡增加有关,这也许是阿尔茨海默病的病理机制之一。     

高压氧通过调节BACE1蛋白水平改善APP/PS1模型小鼠Aβ相关病理改变及认知功能

目的:探索高压氧(HBO)治疗对阿尔茨海默病APP/PS1转基因(TG)小鼠脑β-淀粉样蛋白(Aβ)相关病理改变及认知障碍的治疗作用。方法:取4月龄的APP/PS1转基因小鼠30只随机分为2组(TG组和TG+HBO组),野生对照小鼠15只(WT组),分别进行高压氧治疗和对照治疗6个疗程。治疗结束后用水迷宫实验检测各组小鼠认知功能;取小鼠脑标本进行免疫荧光检测小鼠脑老年斑表达情况;高尔基染色检测树突棘密度;通过酶联免疫吸附实验检测Aβ40和Aβ42的水平;Western blot法检测Sirt1、BACE1、APP、α/β-CTF和synaptophysin的蛋白表达水平。结果:与TG组相比,高压氧治疗能减少TG+HBO组小鼠脑中Aβ的产生和老年斑的形成(P0.01);与TG组相比,高压氧治疗能增加TG+HBO组小鼠脑中Sirt1的蛋白水平,降低BACE1的蛋白水平,从而减少β-CTF的产生(P0.01);与TG组相比,HBO治疗能增加TG+HBO组小鼠脑神经棘突数量与synaptophysin蛋白水平(P0.01),从而明显改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆功能。结论:高压氧治疗能通过增加Sirt1蛋白表达、降低BACE1蛋白水平而减少APP裂解产生Aβ及老年斑形成,进而减轻Aβ的神经毒性损伤,最终发挥神经保护作用。     

法舒地尔通过促进APP/PS1双转基因小鼠神经再生改善认知功能

目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)在治疗阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型——淀粉样前体蛋白/早老素1双转基因(amyloid precursor protein/presenilin 1 double transgenic,APP/PS1 Tg)小鼠中促进神经再生并改善认知功能的作用。方法:将8月龄雄性APP/PS1 Tg小鼠作为AD模型,随机分为fasudil组(腹腔注射fasudil 25 mg·kg~(-1)·d~(-1))和生理盐水(normal saline,NS)组(腹腔注射等体积生理盐水),取同月龄同性别野生型(wild type,WT)小鼠为WT组,连续治疗2个月;应用Morris水迷宫(Morris water maze,MWM)实验和SMART 3.0行为学记录系统检测、记录并分析各组小鼠空间认知功能;免疫荧光组织化学染色法检测小鼠脑内海马齿状回和CA3区及大脑皮层p-Tau、ChA T、BrdU和nestin的蛋白表达水平和分布;Western blot法检测小鼠脑组织p-APP(Thr668)和p-Tau的蛋白水平。结果:在MWM实验中,与WT组小鼠相比,NS组10月龄APP/PS1 Tg小鼠从入水点到达平台的时间增加,在平台所在象限活动时间占总活动时间的比例及在平台所在象限游泳距离占总路径的比例减少;而fasudil治疗明显拮抗上述行为学指标,改善APP/PS1 Tg小鼠认知功能。此外,与NS组小鼠相比,fasudil明显减少小鼠p-Tau蛋白水平,增加p-APP蛋白水平,使海马区胆碱能神经元数量增多,促进神经元的轴突再生,动员脑内海马齿状回颗粒下区和脑室下区的内源性神经干细胞增殖。结论:Fasudil通过促进APP/PS1 Tg小鼠中枢神经系统p-Tau蛋白水平下调,增加可溶性APP水平,促进胆碱能神经元再生,动员内源性神经干细胞增殖,从而改善APP/PS1双转基因小鼠空间认知功能。     

激活APP/PS1小鼠β_2-AR增强海马神经元再生并改善记忆缺失

目的:研究β_2-肾上腺素受体(β_2-AR)对阿尔茨海默病(AD)APP/PS1转基因小鼠海马神经元再生和学习记忆的作用。方法:12只AD小鼠随机分为APP/PS1组和APP/PS1+Clen组,另选6只野生型小鼠作为对照组(WT)。APP/PS1+Clen组于第8月龄起行腹腔注射β_2-AR激动剂Clenbuterol(Clen)2 mg/kg/d,持续2个月。APP/PS1组和WT组均接受等量的0.9%生理盐水稀释的DMSO。给药后对小鼠进行Morris水迷宫试验检测小鼠的学习记忆能力,后取脑切片进行PSA-NCAM免疫组织化学染色。结果:与APP/PS1组相比,APP/PS1+Clen组逃避潜伏期明显缩短,而目标象限停留时间及经过平台次数明显增加(P0.05)。免疫组织化学法显示APP/PS1+Clen组小鼠海马区PSA-NCAM表达增强。结论:通过Clenbuterol激活APP/PS1小鼠β_2-AR可增强海马神经元再生并改善记忆缺失。     

上调星形胶质细胞中PP2A对APP/PS1双转基因小鼠的神经保护作用

目的:探讨上调星形胶质细胞中蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)对APP/PS1双转基因小鼠的神经保护作用。方法:构建带胶质细胞原纤维酸性蛋白启动子的e GFP-wt PP2A慢病毒,特异性上调星形胶质细胞中的PP2A。将实验小鼠随机分为野生对照+慢病毒空载体组(Con组)、APP/PS1双转基因小鼠+慢病毒空载体组(APP/PS1组)和APP/PS1双转基因小鼠+慢病毒感染组(PP2A组),各组小鼠经侧脑室注射慢病毒4周后,采用脑片免疫荧光检测β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)的水平,通过Golgi染色观察树突棘密度和形态学变化,电镜检测突触后致密物(postsynaptic density,PSD)的厚度,Morris水迷宫定位航行实验检测感染慢病毒后对学习和记忆的影响。结果:上调星形胶质细胞中PP2A降低APP/PS1双转基因小鼠Aβ的水平,增加树突棘密度、有突触功能的蘑菇状树突棘比例和PSD厚度,缩短寻找平台逃避潜伏期。结论:上调星形胶质细胞中PP2A改善APP/PS1双转基因小鼠AD样Aβ聚集的病理改变,具有重塑突触结构与功能和改善学习记忆能力的作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对APP/PS1双转基因小鼠神经元突触可塑性和神经细胞黏附分子表达的影响

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG) 对淀粉样前体蛋白（APP）/早老素1(PS1)双转基因小鼠空间学习记忆能力、海马 CA1 区突触超微结构和神经细胞黏附分子表达的影响。方法 选用 8 周龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、EGCG组、盐酸多奈哌齐组,另以同窝阴性小鼠设立正常组,每组 12 只。连续灌胃给药 6 个月后进行相关指标检测。采用 Morris 水迷宫实验观测APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力;透射电子显微镜观察小鼠海马CA1区突触超微结构; 分别采用免疫荧光法及免疫印迹法检测APP/PS1转基因小鼠海马CA1区神经细胞黏附分子（NCAM）和唾液酸转移酶（ST8Sia Ⅱ）的蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组逃避潜伏期延长;与模型组比较,EGCG组、盐酸多奈哌齐组小鼠逃避潜伏期下降 (P＜0.05)。电子显微镜结果显示,与模型组比较,EGCG组和盐酸多奈哌齐组突触界面曲率变化不明显;突触间隙宽度变窄,突触后致密物厚度增加（P＜0.05）。免疫荧光结果显示,海马CA1区NCAM、ST8Sia Ⅱ蛋白表达在神经元的胞体内,EGCG组和盐酸多奈哌齐组NCAM、ST8Sia Ⅱ蛋白表达明显增加 (P＜0.05),免疫印迹实验发现其含量亦呈高表达水平(P＜0.05)。结论 EGCG对 APP/PS1 转基因小鼠的空间学习记忆功能具有改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高小鼠海马神经黏附分子表达有关。     

β淀粉样蛋白及代谢酶类在阿尔茨海默病和糖尿病模型小鼠脑内的表达

目的观察阿尔茨海默病(AD)和糖尿病模型小鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)及代谢相关酶类的表达情况,以便从分子水平找到糖尿病并发AD的实验室依据。方法 5月龄双转基因痴呆症模型小鼠(APP/PS1双转基因小鼠)、ob/ob T2DM肥胖模型小鼠和野生型C57BL/6J小鼠为对照,分别用免疫组化染色、ELISA和Western blot检测脑内老年斑(SP)、Aβ含量及Aβ代谢酶类的表达情况。结果 APP/PS1小鼠大脑皮质及海马均可见一定数量的SP;ob/ob小鼠大脑皮质内偶可见SP,而对照组未见SP。与对照小鼠相比,APP/PS1与ob/ob小鼠脑内Aβ40、Aβ42的含量明显升高(P0.05);但APP/PS1小鼠脑内Aβ水平显著高于ob/ob小鼠(P0.05)。APP在APP/PS1小鼠脑内的表达显著高于其他两组小鼠;在ob/ob小鼠脑内的表达要强于对照小鼠(P0.05)。Aβ生成的关键酶BACE1在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著高于对照小鼠(P0.05),但其在APP/PS1小鼠脑内的表达要强于ob/ob小鼠(P0.05)。Aβ降解的关键酶IDE在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著低于对照小鼠(P0.05),且在ob/ob小鼠脑内表达最低。结论 Aβ生成与降解的异常以及其异常聚集沉积不仅发生在早期AD脑内,同时也发生在T2DM脑内,提示Aβ过表达可能是促进2型糖尿病并发AD的重要原因之一。     

三百棒通过调控TLR4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的RAW264.7细胞极化的影响

目的：探讨三百棒醇提物(TAAE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7极化趋向以及其对炎症反应的影响。方法：用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型。CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10)的水平;Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的分泌情况;荧光染色双标法观察巨噬细胞的极化状态;免疫荧光染色检测NF-κB定位及表达;Transwell检测TAAE对RAW264.7细胞迁移和趋化性的影响;RT-qPCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、Arg-1、NF-κB和TLR4的mRNA水平;Western blot检测iNOS、COX-2、TLR4、NF-κB、p-NF-κB、IκBα和p-IκBα蛋白水平。使用TLR4通路抑制剂TAK-242进一步验证TAAE对TLR4/NF-κB信号通路的影响。结果：与模型组相比较,TAAE降低LPS诱导的炎症模型RAW264.7细胞中M1型促炎因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)及NO水平,促使M2型抑炎因子(IL-10和Arg-1)分泌...     

外源性NGF对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力的影响

目的观察外源性神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力的影响和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element bling protein,CREB)蛋白的调节作用。方法实验分为野生组(雄性5月龄C57BL/6小鼠6只,鼻腔给予生理盐水),AD组(雄性5月龄APP/PS1小鼠6只)和AD+NGF组(雄性5月龄APP/PS1小鼠6只,鼻腔给予小鼠NGF治疗14w),应用Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力变化,应用Western blot检测小鼠脑内CREB蛋白、p-CREB蛋白的表达。结果 AD+NGF组小鼠的潜伏期和找到平台前所经过的总路程均显著低于AD组小鼠,经过目标平台位置的次数明显高于AD组小鼠,游泳总路程和平均游泳速度均明显低于AD组小鼠。外源性NGF上调APP/PS1转基因小鼠脑内CREB蛋白和p-CREB蛋白的表达。结论外源性NGF改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力可能与上调CREB和p-CREB蛋白的表达相关。     

β-蜕皮甾酮对APP/PS-1转基因小鼠学习记忆能力及海马Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的观察β-蜕皮甾酮对APP/PS-1转基因小鼠学习记忆能力及海马Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法取C57小鼠6只及APP/PS-1转基因小鼠12只,C57小鼠为对照组(Control)、APP/PS-1小鼠12只随机分为模型组(APP/PS-1)和实验组(APP/PS-1+20HE),实验组APP/PS-1转基因小鼠按14.4mg/kg的剂量灌胃β-蜕皮甾酮,每日一次,对照组及模型组小鼠灌胃等量蒸馏水,连续灌胃8周,Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,尼氏染色观察各组小鼠海马组织病理学变化,免疫组化法观察海马Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果模型组小鼠与对照组小鼠相比,认知能力明显下降(P<0.01),海马Bcl-2和Bax蛋白表达均增加。实验组与模型组相比,学习记忆能力明显改善(P<0.01),Bcl-2蛋白的表达增加,Bax蛋白的表达减少。结论β-蜕皮甾酮能够改善转基因小鼠的学习记忆能力,可能与促进海马Bcl-2蛋白表达和抑制Bax蛋白表达有关。     

盐酸多奈派齐对APP/PSl双转基因AD小鼠海马PI3K表达的影响美满霉素对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的本实验利用APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AIzheimer disease,AD)小鼠模型,观察盐酸多奈派齐对AD小鼠学习记忆能力及海马磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI3K)表达的影响。方法 APP/PS1双转基因模型小鼠20只,随机分为AD模型组(10)和盐酸多奈派齐组(10),再取同窝阴性小鼠10只,作为对照组。经跳台试验和水迷宫试验进行行为学测试,用免疫组化方法检测各组小鼠海马PI3K的表达变化。结果与对照组相比,AD模型组小鼠的学习和记忆成绩明显降低(<0.05);相比于AD模型组小鼠,盐酸多奈哌齐组小鼠的学习和记忆成绩明显提高(<0.05)。免疫组化检测结果证明,盐酸多奈哌齐组小鼠和对照组小鼠海马PI3K蛋白阳性表达明显增加,平均光密度值分别为(0.48±0.19)和(0.74±0.22),显著高于AD模型组(0.31±0.10,<0.05)。Western blot结果发现,盐酸多奈哌齐组小鼠和对照组小鼠海马PI3K蛋白的平均光密度值分别为(0.39±0.09)和(0.61±0.21),显著高于AD模型组(0.26±0.07,<0.05)。结论 AD小鼠海马区PI3K的表达上调可能是盐酸多奈哌齐改善AD小鼠学习和记忆功能的机制之一。     

蛇床子素对转染APP595/596基因的SH-SY5Y细胞的保护作用

目的:研究蛇床子素对转染APP595/596基因的SH-SY5Y细胞的作用,以探讨其可能的作用机制。方法:体外培养SH-SY5Y细胞,并转染APP595/596基因,体外构建研究Aβ致病作用的细胞模型。采用CCK-8法检测细胞存活率;检测LDH评价细胞的损伤程度;流式细胞术检测细胞凋亡;用RT-PCR和Western blot法检测β-分泌酶(又称β位点APP裂解酶1,β-site APP cleaving enzyme 1,BACE 1)的mRNA及蛋白的表达;采用免疫荧光细胞化学和Western blot法检测Aβ的表达。结果:蛇床子素对转染APP595/596基因的SH-SY5Y神经细胞有保护作用,可增加细胞的存活率,降低LDH的释放,抑制细胞的凋亡,减少BACE1的mRNA与蛋白的表达,抑制Aβ的生成。结论:蛇床子素可保护转染APP595/596基因的SH-SY5Y神经细胞,其保护机制可能与减少BACE l的mRNA与蛋白表达有关。     

姜黄素减弱Aβ_(25-35)致大鼠原代小胶质细胞的神经炎症反应

目的:研究姜黄素(Cur)对β-淀粉样蛋白(Aβ)刺激下大鼠原代小胶质细胞活力及高迁移率族蛋白1(HMGB1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:取新生SD大鼠大脑皮层行混合胶质细胞原代培养,摇床振摇法分离小胶质细胞并行Iba-1免疫细胞化学鉴定。在培养的小胶质细胞中加入Aβ_(25-35)作用24 h后,观察细胞形态并用CCK-8实验确定造模浓度及Cur的治疗浓度。将大鼠原代小胶质细胞分为5组:正常组、Aβ_(25-35)模型组、Cur组、Aβ_(25-35)+Cur治疗组、Aβ_(25-35)+DMSO组;用Western blot法检测细胞内HMGB1、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、NF-κB的表达情况,取上清液用ELISA检测HMGB1、IL-1β、TNF-α的表达。结果:Iba-1的阳性率在95%以上,培养的大鼠原代小胶质细胞可用于实验。Western blot实验结果示Aβ_(25-35)活化诱导后,细胞内的HMGB1、RAGE和NF-κB表达明显升高(P0.05),加入姜黄素后细胞内的HMGB1、RAGE和NF-κB表达明显减少(P0.05)。ELISA结果示Aβ_(25-35)活化诱导后,细胞上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α明显升高(P0.05),加入姜黄素后上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α明显下降(P0.05)。结论:姜黄素可明显抑制Aβ_(25-35)刺激下大鼠原代小胶质细胞的神经炎症反应。     

芍药苷对APP/PS1小鼠的神经细胞保护作用及机制研究

目的:探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)通过抑制细胞凋亡通路而产生神经细胞保护作用的机制。方法:分别选用15只5月龄雄性APP/PS1非显性小鼠作为正常对照组,15只5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠为模型组和15只5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠为给药组(5 mg/kg的PF腹腔注射)。采用水迷宫实验检测各组小鼠的学习和记忆能力。采用TUNEL荧光染色法检测脑内神经细胞凋亡情况。采用Western Blot检测脑内皮层及海马区PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平,并用免疫组化分析caspase-3和caspase-9的蛋白表达水平及分布情况。结果:(1)与正常对照组相比,APP/PS1模型组小鼠的学习和记忆能力明显下降;与APP/PS1模型组相比,PF明显改善小鼠的学习和记忆能力。(2)与正常对照组相比,APP/PS1模型组小鼠脑内神经细胞凋亡明显增多,分布区域较广,而PF给药组小鼠凋亡细胞明显减少。(3)与APP/PS1模型组相比,PF给药组能显著下调促凋亡因子caspase-3、caspase-9和Bax的表达水平(P0.05),同时上调抑凋亡因子pPI3K、p-Akt和Bcl-2的表达水平(P0.05)。结论:PF可能通过激活PI3K/Akt通路而上调Bcl-2,下调caspase-9、caspase-3和Bax的蛋白表达水平,从而抑制神经细胞凋亡和保护神经细胞,以治疗神经退行性疾病。     

APP/PS1双转基因AD小鼠早期内质网应激诱导的凋亡

目的观察APP/PS1双转基因AD小鼠神经细胞凋亡,及内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白（GRP78）和内质网促凋亡因子半胱氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）表达的改变,探讨APP/PS1双转基因AD小鼠早期内质网应激诱导的凋亡。方法选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和同月龄同背景的野生型小鼠（WT）,分为5月龄WT组、5月龄APP/PS1组、7月龄WT组和7月龄APP/PS1组,每组6只,应用原位细胞凋亡检测法（TUNEL）检测凋亡细胞,免疫组织化学方法检测其脑内GRP78和Caspase-12的表达水平。结果 TUNEL检测凋亡率分别为7月龄APP/PS1鼠（35.0±6.31）%、5月龄APP/PS1鼠（9.0±2.78）%、7月龄WT鼠（4.0±1.89）%、5月龄WT鼠（4.0±1.83）%,其中7月龄APP/PS1鼠凋亡率显著升高（P〈0.05）;免疫组织化学检测GRP78阳性率分别为7月龄APP/PS1鼠（30.0±5.43）%、5月龄APP/PS1鼠（10.0±2.12）%、7月龄WT鼠（2.0±1.71）%、5月龄WT鼠（3.0±1.41）%,7月龄APP/PS1鼠GRP78表达明显升高（P〈0.05）;免疫组织化学检测Caspase-12阳性率分别为7月龄APP/PS1鼠（33.0±5.98）%、5月龄APP/PS1鼠（12.0±2.60）%、7月龄WT鼠（4.0±2.56）%、5月龄WT鼠（2.0±1.79）%,7月龄APP/PS1鼠Caspase-12表达明显升高（P〈0.05）。结论 7月龄的APP/PS1双转基因小鼠出现了内质网应激诱导的凋亡。本实验结果为临床AD早期预防和治疗提供了重要依据。     

高迁移率族蛋白1对Aβ_(25-35)刺激下BV-2细胞NF-κB表达的作用

目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对β-淀粉样蛋白(Aβ)_(25-35)刺激下的小鼠小胶质细胞系BV-2中核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:将对数期生长的BV-2细胞分为4组:正常细胞组(不做任何处理)、模型组(加入40μmol/L Aβ_(25-35))、RNA干扰组(采用RNA干扰HMGB1后加入40μmol/L的Aβ_(25-35))和溶剂对照组(加入终浓度为0.1%的DMSO)。各组细胞孵育72 h后(Aβ_(25-35)处理24 h)采用Western blot法检测HMGB1和NF-κB p65的蛋白表达情况。结果:CCK-8结果显示40μmol/L Aβ_(25-35)为最佳造模浓度。选择30 nmol/L带GFP荧光基团的HMGB1-siRNA转染BV-2细胞,转染效率约为80%~90%。Western blot实验结果显示,HMGB1-siRNA片段干扰后BV-2细胞中HMGB1的表达明显降低(P0.05);Aβ_(25-35)刺激BV-2细胞后,胞内HMGB1和核内NF-κB p65表达均明显升高(P0.05),HMGB1-siRNA作用后,HMGB1和核内NF-κB p65表达均明显下降(P0.05)。结论:RNA干扰HMGB1表达可减少Aβ_(25-35)刺激的BV-2细胞核内NF-κB的表达。     

过表达脑红蛋白抑制双转基因AD小鼠脑中Aβ诱导的凋亡

目的:研究AD双转基因(APPswe/PS1d E9)小鼠侧脑室注射质粒p NGB后,过表达脑红蛋白(neuroglobin,NGB)对Aβ诱导的AD小鼠脑中细胞凋亡的影响及其潜在机制。方法:将24只鉴定后的13月龄AD双转基因阳性小鼠(雌雄各半)随机分为对照组、侧脑室注射生理盐水+pc DNA3.1(1 g/L)组和侧脑室注射pc DNA3.1(1 g/L)+p NGB组。采用免疫组化检测鼠脑Aβ1-42表达情况,TUNEL染色检测脑内细胞的凋亡情况;Western blot检测鼠脑内与凋亡密切相关的cleaved caspase-3、caspase-9以及PI3K、p-Akt、Akt的蛋白水平。结果:与对照组和注射生理盐水组比较,注射p NGB组小鼠脑内Aβ1-42的表达明显受到抑制(P0.01),TUNEL染色阳性细胞数也明显减少(P0.01);过表达NGB能够明显抑制脑组织内cleaved caspase-3和caspase-9的蛋白表达(P0.01),促进Akt磷酸化水平的增强(P0.01)。结论:p NGB过表达能够明显抑制Aβ的生成并抑制Aβ诱导的细胞凋亡,其机制可能与激活PI3K/Akt通路进而抑制与凋亡密切相关的cleaved caspase-3和caspase-9的表达有关。     

BMSCs脑内移植改善AD小鼠学习记忆功能的分子机制研究

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)脑内移植对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力及病理改变的影响,并对其分子机制进行探讨。方法:将C57/BL6野生型(WT)小鼠和C57/BL6 APP/PS1转基因(Tg)小鼠随机分为4组:WT/PBS组、WT/BMSCs组、Tg/PBS组及Tg/BMSCs组,侧脑室注射法将PBS或BMSCs注入小鼠脑内。术后第3天起进行持续8 d的Morris水迷宫实验以检测小鼠认知能力。术后第10天取材,组织免疫荧光染色检测小鼠脑内小胶质细胞的激活;real-time PCR检测CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)、CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)、IL-1β、TNF-α、Nurr1、YM1、胰岛素降解酶(IDE)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA表达;ELISA检测脑组织匀浆CX3CL1和Aβ42的含量;Western blot检测突触后致密蛋白95(PSD95)、突触小泡蛋白(SYP)、p85和p110蛋白表达以及Akt磷酸化水平的变化。结果:术后第10天,在APP/PS1小鼠海马区附近观察到移植的BMSCs。水迷宫实验结果显示,与WT/PBS组小鼠相比,Tg/PBS组小鼠逃避潜伏期明显延长(P0.01),BMSCs移植治疗后APP/PS1小鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05);与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组CX3CL1在海马区的mRNA水平(P0.01)及皮质区的蛋白水平(P0.05)明显增加;BMSCs移植可以促进WT和Tg小鼠脑内小胶质细胞的激活,同时M2型小胶质细胞表面标志物YM1的mRNA表达上调(P0.05)。Tg/PBS组与WT/PBS组相比,皮质区和海马区TNF-α的mRNA表达明显升高(P0.05),皮质区Nurr1的mRNA表达降低(P0.01);而与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组皮质区的TNF-α(P0.01)mRNA表达降低,CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显上调(P0.05),海马区TNF-α和IL-1β的mRNA明显下调(P0.05),CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显增加(P0.05)。此外,Tg/BMSCs组的PSD95、p85和p110蛋白表达及Akt的磷酸化水平均较Tg/PBS组明显增加(P0.05)。与Tg/PBS组比,BMSCs移植降低了APP/PS1小鼠脑内Aβ42蛋白的水平(P0.05),增加了海马区Aβ清除相关酶IDE和MMP9的表达(P0.05)。结论:BMSCs移植可以调控神经炎症因子分泌,促进神经保护因子和突触蛋白的表达,从而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力,其分子机制可能是BMSCs移植上调CX3CL1后激活了PI3K/Akt通路。