硫化氢对高糖诱导的小鼠足突细胞损伤的影响*

 目的： 观察硫化氢对高糖诱导的小鼠足突细胞损伤的影响并探讨其作用机制。方法: 将体外培养的小鼠足突细胞系MPC5分为高糖组、正常糖组、正常糖+DL-炔丙基甘氨酸(PPG)组和高糖+NaHS组。处理后,用Western blotting检测各组细胞胱硫醚γ-裂解酶（CSE)、紧密连接蛋白2（ZO-2）、裂孔蛋白（nephrin）及β-连环蛋白（β-catenin）蛋白水平表达差异。结果: （1）高糖显著降低CSE、nephrin和ZO-2表达（P＜0.05）,而β-catenin的水平明显增高（P＜0.05）,4种蛋白变化均表现出时间依赖性;（2）正常糖培养加不同浓度PPG可显著抑制ZO-2和nephrin的表达（P＜0.05）,显著提高β-catenin的水平（P＜0.05）,3种蛋白变化呈浓度依赖性;（3）高糖诱导的足突细胞加NaHS培养后,ZO-2和nephrin表达可部分恢复（P＜0.01）,β-catenin表达可被部分抑制（P＜0.01）。结论: 本研究结果提示高糖诱导的足突细胞CSE表达降低可能是足突细胞损伤的重要机制之一。而外源性硫化氢对高糖诱导的足突细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与增加ZO-2表达、抑制Wnt/β-catenin通路有关。     

TGFBR1基因调控Wnt/β-catenin信号通路对结缔组织病相关的肺间质病变中抗纤维化的机制研究

目的：探讨TGF-β受体Ⅰ（TGFBR1）基因调控Wnt/β-catenin信号通路对结缔组织病相关的肺间质病变（CTD-ILD）的抗纤维化作用。方法：以肺癌的癌旁组织作为正常对照组,Western blot检测CTD-ILD患者肺组织TGFBR1的蛋白表达;人胚肺成纤维细胞系MRC-5分为空白对照组、TGF-β1组、阴性对照组和TGFBR1-siRNA组,各组细胞培养48 h,Western blot检测TGFBR1、Ⅰ型胶原、结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cad）及Wnt/β-catenin信号通路β 连环蛋白（β-catenin）和c-Myc的蛋白表达;CCK8法检测各组细胞的活力。结果：TGFBR1在CTD-ILD肺组织中的表达显著高于正常肺组织（P<0.05）;与空白对照组比较,TGF-β1组细胞活力、TGFBR1、Ⅰ型胶原、CTGF、α-SMA、β-catenin和c-Myc的蛋白表达均显著升高,E-cad蛋白表达显著降低（P<0.05）;TGF-β1组和阴性对照组细胞活力、TGFBR1、Ⅰ型胶原、CTGF、α-SMA、E-cad、β-catenin和c-Myc的蛋白表达差异均无统计学意义（P＞0.05）;与TGF-β1组比较,TGFBR1-siRNA组细胞活力、TGFBR1、Ⅰ型胶原、CTGF、α-SMA、β-catenin和c-Myc的蛋白表达均显著降低,E-cad蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论：TGFBR1基因在CTD-ILD肺组织中表达升高,抑制TGFBR1的表达可通过下调Wnt/β-catenin信号通路降低CTD-ILD纤维化的发生。     

葛根素注射液对糖尿病KKAy小鼠肾小管上皮细胞的影响

 目的：观察葛根素治疗糖尿病小鼠肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis,RIF）过程中肾小管上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白表达的变化,为临床药物治疗糖尿病RIF提供实验依据。方法：将16只2型糖尿病模型KKAy小鼠随机分为模型组（n=8）和葛根素注射液治疗组（n=8）。8只C57BL/6J小鼠作为正常组。用药组小鼠14周龄开始以腹腔注射的方式给药,观测小鼠日常状态及血糖变化,于24周龄处死小鼠,取肾脏分别观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin, α-SMA)、转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）和转化生长因子β I型受体（TGF-β-RI）蛋白的表达。结果：形态学观察可见模型组发生明显的纤维化改变,而经葛根素注射液治疗后,小鼠肾间质基质轻度增多,病变较轻微。治疗组KKAy小鼠肾组织中较模型组小鼠肾组织中α-SMA、TGF-β1和TGF-β-RI蛋白的表达减少。结论：葛根素注射液可在一定程度上减少α-SMA的表达,抑制KKAy小鼠肾脏组织中TGF-β1和TGF-β-RI蛋白表达,阻断并逆转EMT的过程,延缓肾间质纤维化的发生和发展。     

SIRT1通过降低NF-κB p65乙酰化减轻高糖应激引起的大鼠肾小球系膜细胞损伤*

 目的： 研究沉默信息调节因子1（SIRT1）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞NF-κB p65蛋白乙酰化影响及其保护作用。方法: 培养大鼠肾小球系膜细胞,实验分为5组：正常对照组、甘露醇组、高糖组、白藜芦醇组和SIRT1 RNAi组。MTT比色法检测细胞活性;以实时荧光定量PCR检测SIRT1、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、血管黏附分子1（VCAM-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA水平;Western blotting检测SIRT1和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达水平,ELISA检测MCP-1、VCAM-1、TNF-α、TGF-β1和丙二醛（MDA）的含量。结果: 高糖刺激使肾小球系膜细胞的活力降低,超氧化物岐化酶（SOD）活性降低,MDA含量增加;SIRT1 mRNA及蛋白表达降低,NF-κB p65蛋白乙酰化水平增高,MCP-1、VCAM-1、TNF-α、TGF-β1 mRNA和蛋白水平增高。白藜芦醇可逆转高糖引起的变化,而沉默SIRT1基因使高糖诱导的系膜细胞NF-κB p56乙酰化水平、MCP-1、VCAM-1、TNF-α、TGF-β1 mRNA和蛋白水平升高。结论: 高糖可降低SIRT1水平,增加炎症因子的表达。SIRT1的激活可使NF-κB 的亚单位RelA/p65去乙酰化,从而抑制炎症因子的产生。SIRT1可作为治疗DN的潜在靶点。     

慢性酒精摄入所致的肝细胞上皮-间充质转化参与小鼠肝纤维化形成

 目的：探讨慢性酒精摄入对肝组织病理学改变的影响及上皮-间充质转化对肝纤维化形成的作用。方法：将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组：对照组灌胃给予与酒精组等体积的蒸馏水,低剂量和高剂量酒精组分别灌胃给予2.0 g·kg -1·d -1和 4.0 g·kg -1·d -1酒精5个月。肝组织病理学改变和纤维化分别用HE和 Masson三染色观察;荧光标记的TUNEL法检测肝组织细胞凋亡;自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;肝组织成纤维细胞特异性蛋白1（FSP-1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏素表达采用免疫荧光观察;E-钙黏素、α-SMA、FSP-1、转化生长因子β 1 (TGF-β 1) 和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白表达水平用Western blotting 检测。结果：与对照组相比,小鼠酒精灌胃5个月后,血清ALT和AST活性升高;肝组织细胞凋亡增加;低剂量酒精组呈现肝脂肪变性和轻度的肝纤维化,高剂量酒精组呈现出严重的肝纤维化;肝组织丙二醛（MDA）含量升高,超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）下降;肝细胞E-钙黏素表达下降,α-SMA表达增加;低剂量酒精组肝细胞内白蛋白和FSP-1共定位,而高剂量酒精组肝细胞内只表达FSP-1;Western blotting检测结果显示,E-钙黏素表达下降,而α-SMA、FSP-1、TGF-β 1和HIF-1α蛋白表达水平升高,但是HIF-1α蛋白表达水平在高、低酒精组之间无差别。结论：慢性酒精摄入可诱导肝纤维化,部分成纤维细胞来源于肝细胞上皮-间充质转化,其机制可能与肝细胞氧化状态、TGF-β 1及HIF-1α升高有关。     

IL-1β通过加重脂质诱导的内质网应激导致人系膜细胞损伤

 目的： 探讨白细胞介素1β（IL-1β）加重脂质诱导的内质网应激（ERS）而导致人肾小球系膜细胞（HMCs）损伤的分子机制。方法：将HMCs分为对照组、高脂组（LDL）、IL-1β+高脂组（IL-1β+LDL）及4-苯基丁酸(4-PBA)干预组（4-PBA+IL-1β+LDL）。油红O染色检测HMCs胞内脂质沉积;real-time PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） mRNA水平;免疫细胞化学分析GRP78蛋白水平; Western blotting检测NF-κB p65水平;ELISA法测定细胞培养上清IL-6和TGF-β1含量。结果：与LDL组相比,IL-1β+LDL组胞内脂质沉积、GRP78 mRNA与蛋白水平、PERK mRNA水平、NF-κB p65水平及IL-6分泌量均显著增高（均P＜0.05）;4-PBA可减少胞内脂质沉积,降低GRP78 mRNA与蛋白及PERK mRNA水平,抑制NF-κB p65的表达,减少IL-6的分泌（均P＜0.05 vs IL-1β+LDL组）。与LDL组相比,IL-1β+LDL组α-SMA mRNA表达增高（P＜0.05）,4-PBA可显著降低其表达（P＜0.05 vs IL-1β+LDL组）。结论：IL-1β可加重脂质诱导的ERS,从而导致细胞损伤。     

吉非替尼通过增加Foxo3a活性抑制肺纤维化小鼠上皮-间质转分化

 目的：研究吉非替尼对肺纤维化小鼠转录因子叉头框蛋白O3a(Foxo3a)活性、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平及相关通路的影响,探讨吉非替尼抑制肺上皮-间质转分化的可能机制。方法：将30只SPF级雌性昆明小鼠随机分为3组：对照组（生理盐水气管内雾化）、博来霉素组（博来霉素3 mg/kg溶于100 μL生理盐水气管内雾化）和吉非替尼处理组（博来霉素气管内雾化后,每天吉非替尼20 mg/kg溶于100 μL生理盐水灌胃）。实验第14天收集样本,将小鼠肺组织置于10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片后行HE与Masson染色;RT-PCR法检测Foxo3a和α-SMA mRNA表达水平;Western blotting法检测表皮生长因子受体（EGFR）、Akt、Foxo3a和α-SMA蛋白表达水平。结果：吉非替尼处理组小鼠肺组织病理损伤较博来霉素组明显减轻,胶原沉积明显减少,炎症损伤评分及纤维化评分明显下降（均P<0.01）,Foxo3a mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,α-SMA mRNA表达水平明显下降（P<0.05）,总Foxo3a蛋白表达增加,但Foxo3a磷酸化水平显著下降(P<0.01),胞核Foxo3a蛋白明显增加（P<0.05）;同时,EGFR和Akt磷酸化水平也显著下降（P<0.01,P<0.05）,上皮-间质转分化标志蛋白α-SMA表达水平明显降低（P<0.05）。结论:吉非替尼抑制博来霉素诱导的肺纤维化,其机制可能与抑制EGFR/Akt通路活化、增强转录因子Foxo3a活性、从而抑制上皮-间质转分化密切相关。     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化的影响

目的: 观察血管紧张素-(1-7) 对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化及细胞外基质分泌的影响并初步探讨其机制。方法: 体外培养正常大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F), 分为对照组和Ang-(1-7)组、AngⅡ组和Ang-(1-7)+AngⅡ组, 培养72 h后, 细胞免疫化学染色法检测细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β₁(TGF-β₁)和胰岛素样生长因子I(IGF-I)表达; 酶联免疫吸附实验(ELISA)检测上清液中TGF-β₁、IGF-I及细胞外基质成分Ⅰ型胶原(ColⅠ)的含量。结果: 对照组仅有基础水平的α-SMA表达, 几无Col I、TGF-β₁和IGF-I表达, Ang-(1-7)组与之类似; AngⅡ组细胞α-SMA及ColⅠ、TGF-β₁、IGF-I表达较对照组显著增加(P<0.05); AngⅡ+Ang-(1-7)组与AngⅡ组比较, 细胞α-SMA及Col I、TGF-β₁、IGF-I表达明显减少(P<0.05)。结论: Ang-(1-7)可抑制AngⅡ诱导的肾间质成纤维细胞活化, 减少细胞外基质成分ColⅠ的合成, 其机制可能是通过下调致纤维化细胞因子TGF-β₁和IGF-I的表达。     

巨噬细胞移动抑制因子经Rho激酶途径促进人胚肺成纤维细胞表型转化

 目的：观察重组巨噬细胞移动抑制因子（rMIF）对人胚肺成纤维细胞（MRC-5）表型转换的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法：不同浓度的rMIF (25~100 μg/L)分别作用于MRC-5细胞24 h或48 h,RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）  mRNA表达,Western blotting检测α-SMA蛋白合成;100 μg/L rMIF刺激MRC-5细胞48 h,刺激前0.5 h加入Rho拮抗剂Y27632,RT-PCR法检测α-SMA mRNA表达,Western blotting法检测α-SMA表达;100 μg/L rMIF分别刺激MRC-5 6 h、12 h、24 h或48 h,Western blotting检测磷酸化肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1（p-MYP1）蛋白合成。结果：刺激MRC-5 24 h,不同浓度的rMIF对α-SMA mRNA转录未见显著影响（P>0.05）。刺激MRC-5细胞48 h,rMIF可呈剂量依赖地促进α-SMA mRNA （r=0.697,P<0.01）和蛋白（r=0.957,P<0.01）表达。Y27632预刺激后,显著抑制rMIF100 μg/L促进α-SMA mRNA和蛋白表达的作用（均P<0.01）。rMIF刺激6 h后,p-MYPT1表达显著增加（P<0.01）,12 h达到高峰（P<0.01）,24 h开始下降,但24 h和48 h其水平仍高于对照组（均P<0.01）。结论：rMIF通过Rho信号通路刺激成纤维细胞表型转化,可能在哮喘气道重塑的发病机制中发挥关键作用。     

氧化苦参碱抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮-间充质转化及其机制研究

 目的：探讨氧化苦参碱(OM)对高糖诱导的大鼠肾小管上皮-间充质转化（EMT）的抑制作用及其可能机制。方法：体外培养大鼠近端肾小管上皮NRK52E细胞,随机分为：对照组、高糖组、高糖+OM不同浓度组和高糖+0.50 g/L OM动态观察组。采用real-time PCR和Western blotting方法检测转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad7、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏素（E-cadherin）mRNA和蛋白的表达。结果：（1）与对照组相比,高糖组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达水平均进行性增高,Smad7蛋白表达进行性降低,E-cadherin mRNA和蛋白表达进行性降低,呈时间依赖性（P＜0.05）,而Smad7 mRNA表达进行性增高（P＜0.05）;（2）与高糖组相比,高糖+ OM不同浓度组随OM剂量增加,TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达均逐渐降低,Smad7蛋白表达水平逐渐增高,E-cadherin mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,且呈剂量依赖性（P＜0.05）,而Smad7 mRNA表达无明显差异;（3）与高糖组相比,高糖+0.50 g/L OM动态观察组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达持续降低,Smad7蛋白表达持续增高,E-cadherin mRNA和蛋白表达持续增高（P＜0.05）,而Smad7 mRNA表达无明显差异。结论：OM可抑制高糖诱导的NRK52E细胞发生EMT,其机制可能与OM下调TGF-β1表达及上调Smad7蛋白表达,进而抑制TGF-β1/Smads信号通路的致纤维化效应有关。     

胰岛素控制血糖对糖尿病大鼠肾组织Smad7表达及纤维化病变的影响

 目的：观察胰岛素控制糖尿病大鼠血糖后是否能上调肾组织Smad7的表达,减轻或延缓糖尿病肾病(DN)肾纤维化病变的发生发展。方法：链脲菌素复制大鼠糖尿病模型,随机分为糖尿病组(DM组) 和胰岛素治疗组(INS组) (n=8);INS组于成模13周起用胰岛素将血糖控制在4~7 mmol/L;同时设正常对照组(NC组)(n=8)。17周处死大鼠,检测相应生化指标,观察胰腺和肾组织病理学改变,免疫组化和Western blotting检测各组大鼠肾组织组织转化生长因子β1 (transforming growth factor β1, TGF-β1)、Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitin regulatory factor 2, Smurf2)、Smad7、 E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、层连蛋白(fibronectin, FN)和胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)的蛋白表达。结果：与NC组比较,DM组大鼠体重显著减轻,24 h尿蛋白、血糖和甘油三酯显著升高(P<0.05),病理检查显示胰岛被破坏,肾组织TGF-β1、Smurf2、α-SMA、FN和collagenⅠ蛋白的表达均显著增加(P<0.05),并伴有肾小管Smad7和E-cadherin的表达减少(P<0.05);而经胰岛素控制血糖后,INS组大鼠较DM组体重逐渐增加,24 h尿蛋白和血糖均显著降低 (P<0.05),肾纤维化病变明显改善,TGF-β1、Smurf2、α-SMA、FN和collagenⅠ蛋白的表达均显著减少(P< 0.05),Smad7和E-cadherin的表达显著上调(P<0.05)。结论：控制血糖能恢复糖尿病大鼠肾组织Smad7蛋白表达水平,减少细胞外基质的沉积,延缓DN的纤维化进展,其机制可能与肾组织中TGF-β1和Smurf2表达降低、Smad7蛋白的泛素化降解减少有关。     

糖尿病大鼠肾小球蛋白激酶Cα表达与肾病发病关系的研究

目的:观察四氧嘧啶诱发的糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶Cα(PKCα)、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的动态变化, 探讨3者之间相互关系以及与肾损害之间的关系。方法:将大鼠随机分为正常对照组(A组), 糖尿病1周组(B组), 糖尿病1月组(C组)和糖尿病2月组(D组)。用免疫组化和Western印迹法检查PKCα, TGF-β₁和α-SMA在肾小球的表达情况。光镜观察肾组织的形态改变, 生化法测定大鼠血糖, 血脂, 血尿肌酐以及尿蛋白。结果:糖尿病各组肾小球PKCα和TGF-β₁的表达多于正常组(P<0.05), 糖尿病各组PKCα, TGF-β₁和α-SMA3者间呈正相关, 并且与肾脏病变程度呈正相关。结论:糖尿病早期肾组织PKCα表达持续增加, 可使肾小球滤过率和滤过膜通透性增加, 参与了肾病早期蛋白尿的发生机制, 使TGF-β₁增多并诱导α-SMA的表达, 标志着肾脏固有细胞激活及表型转变和肾脏组织学改变。     

RTN1A通过ERK信号诱导肾小管上皮细胞分泌VEGF和IL-8并促进糖尿病肾病肾纤维化

目的:探讨网状蛋白1A(RTN1A)对肾小管上皮细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素8(IL-8)及糖尿病肾病(DN)肾纤维化的影响及潜在机制。方法:构建DN小鼠模型,并检测其血糖、肾脏指数、尿微量白蛋白和肌酐清除率进行验证; Western blot检测RTN1A、p-ERK、ERK、细胞因子VEGF和IL-8以及肾脏纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN)的表达;高糖处理人肾小管上皮细胞株HK-2模拟体内DN细胞,Western blot和ELISA检测ERK信号蛋白、纤维化标志物及细胞因子分泌变化;高糖联合沉默RTN1A或ERK抑制剂PD98059处理24 h,检测细胞因子的分泌和纤维化蛋白的变化。结果:DN小鼠模型中血糖、肾脏指数、尿微量白蛋白和肌酐清除率均明显高于对照组,说明DN模型构建成功; DN模型小鼠中RTN1A及其下游蛋白p-ERK的水平显著增加,并且细胞因子VEGF和IL-8及纤维化标志物α-SMA和FN也显著增加;高糖处理HK-2细胞后,细胞中RTN1A及其下游蛋白p-ERK水平升高,细胞因子VEGF和IL-8及纤维化标志物α-SMA和FN也显著升高;而ERK抑制剂PD98059处理与沉默RTN1A结果一致,p-ERK、VEGF、IL-8、α-SMA和FN均明显降低。结论:RTN1A可能与DN发生发展有关。沉默RTN1A可能通过ERK信号抑制DN肾炎症反应及纤维化。RTN1A可能是一个有效的治疗靶点。     

环杷明对马兜铃酸诱导的肾上皮细胞表型转化及Hedgehog通路的影响

目的:探讨环杷明干预Hedgehog(HH)信号对马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞表型转化和基质累积的影响。方法:根据干预措施将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为溶剂对照组、AA损伤组(分别用终浓度为1、5和10 mg/L的AA处理细胞)和环杷明干预组(10 mg/L AA基础上加入1、5和10μmol/L环杷明)。细胞培养24 h后,用real-time PCR检测HH信号关键分子Ptch1和Smo、表型转化相关分子α-SMA和E-cadherin、ZO-1、BMP-7和基质成分I型和III型胶原mRNA的表达;ELISA法检测Shh和TGF-β1的含量;细胞免疫荧光染色检测Ptch1、Smo、E-cadherin、α-SMA和III型胶原蛋白表达。结果:AA不仅增加了TGF-β1、α-SMA和III型胶原的表达,降低了E-cadherin和ZO-1的表达,而且诱导了Shh和Smo mRNA表达的升高和Ptch1 mRNA表达的下降,提示AA促进小管上皮细胞表型转化和胶原累积,同时也激活了HH信号通路。环杷明干预AA作用后,Smo mRNA或蛋白表达下调,Ptch1 mRNA表达升高,这说明环杷明抑制了AA诱导的HH信号通路的活化。此外,环杷明也降低TGF-β1、α-SMA、I型和III型胶原的表达,提高BMP-7、ZO-1和E-cadherin的表达,这提示环杷明抑制了AA所致的上皮细胞的表型转化和基质累积。结论:环杷明可抑制AA所致的肾小管上皮细胞表型转化和基质累积,可能是通过靶向抑制HH信号的活化来实现的。     

马兜铃酸诱导大鼠肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积及垂盆草提取物的作用

 目的：研究垂盆草（SSB）提取物对马兜铃酸（AA）诱导的肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积的作用,并初步探讨可能的分子机制。方法：将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）分为：(1) 溶剂对照组：未加入SSB和AA;(2) AA损伤组：只加AA,浓度为1~100 mg/L;(3) SSB提取物干预组：在加入10 mg/L AA基础上,同时加入SSB提取物（10~2 000 mg/L）。细胞培养24 h后,酶联免疫吸附试验检测转化生长因子β1(TGF-β1)含量;细胞免疫荧光染色检测肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、上皮细胞标志物E-cadherin和基质成分III型胶原的表达;实时荧光定量PCR检测α-SMA、E-cadherin、骨形成蛋白7（BMP-7）和I型胶原mRNA的表达。结果：AA可诱导NRK-52E细胞呈现纤维化样改变;1 mg/L和10 mg/L AA不仅可增加基质成分I型和III型胶原的表达量,同时也可促进α-SMA表达,抑制E-cadherin的表达。用SSB提取物干预后,AA所致的纤维化改变明显减轻;SSB提取物下调了α-SMA、I型和III型胶原的表达,并且促进E-cadherin和BMP-7的表达。此外,SSB提取物也抑制TGF-β1的分泌,并呈浓度依赖性。结论：应用SSB提取物干预可明显降低AA所致的肾纤维化效应,可能的机制为SSB提取物降低TGF-β1的表达,抑制小管上皮细胞的表型转化,进而抑制胶原的累积。     

上调miR-181a抑制香烟提取物诱导的支气管上皮细胞致炎因子生成与collagen IV、fibronectin和α-SMA表达

目的:探讨微小RNA-181a(miR-181a)对香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells, HBECs)致炎因子生成与IV型胶原蛋白(collagen IV)、纤连蛋白(fibronectin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,并分析其可能的机制。方法:RT-qPCR检测CSE诱导下HBECs中miR-181a的表达情况。转染miR-181a mimic后经ELISA检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平;Western blot检测collagen IV、fibronectin和α-SMA的表达;并进一步评估NF-κB/TGF-β1/Smad3信号通路的活性。结果:CSE可显著增加HBECs中致炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β1的生成,显著上调collagen IV、fibronectin和α-SMA的表达,同时细胞内miR-181a的表达明显降低(P0.05);转染miR-181a mimic可显著抑制CSE诱导的HBECs致炎因子生成及collagen IV、fibronectin和α-SMA表达(P0.05)。此外,Western blot的结果显示转染miR-181a mimic可抑制CSE诱导的NF-κB/TGF-β1/Smad3信号活性(P0.05)。结论:上调miR-181a表达可部分逆转CSE诱导的HBECs致炎因子的释放及collagen IV、fibronectin和α-SMA表达,其作用机制可能与抑制NF-κB/TGF-β1/Smad3信号通路的活化有关。     

丹酚酸B对高糖诱导的肾小球系膜细胞表型转化及细胞外基质分泌的影响

目的:研究丹酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞表型转化及细胞外基质分泌的影响及其机制。方法:培养人肾小球系膜细胞(HGMCs),随机分为正常对照组、高糖组及高糖+丹酚酸B高、中、低剂量组,高糖组和丹酚酸B各组用含高浓度(33.3 mmol/L)葡萄糖的培养基培养72 h,丹酚酸B各组同时加人相应浓度丹酚酸B共同孵育。Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平,ELISA法检测细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、纤维连接蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)的分泌水平,Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及Smad2和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的磷酸化水平。结果:高糖孵育72 h后,肾小球系膜细胞α-SMA的蛋白表达水平明显升高,ColⅠ、ColⅢ、FN及LN蛋白的分泌水平显著增加(P 0.01),TGF-β1的表达及Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平也明显升高(P 0.01);与丹酚酸B共同孵育可明显降低α-SMA蛋白的表达水平,ColⅠ、ColⅢ、FN和LN的分泌明显减少,TGF-β1的表达及Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平显著下降(P 0.01或P 0.05)。结论:丹酚酸B可明显抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞表型转化,减少ColⅠ和ColⅢ等细胞外基质分泌,其机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路及p38 MAPK活化有关。