人端粒酶逆转录酶核心启动子调控的人TRAIL蛋白在人卵巢癌细胞中的表达

目的：构建人端粒酶逆转录酶基因核心启动子（hTERT）调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体真核表达载体，并检测TRAIL在转染的卵巢癌细胞SKOV3中的表达情况。方法：利用基因重组方法将TRAIL基因克隆人带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中。获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL。采用脂质体介导的方法将hTERT调控的TRAIL基因真核表达载体转染人卵巢癌SKOV3细胞，采用G418筛选获得阳性克隆；应用免疫细胞化学法、蛋白质印迹分析、流式细胞术（FCM）结合间接免疫荧光、RT—PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达。结果：经酶切鉴定及测序结果证实所构建载体正确。转染细胞中的TRAIL表达明显高于对照组细胞。结论：成功地构建了hTRET基因核心启动子调控的TRAIL基因真核表达载体，并在人卵巢癌细胞系SKOV3中得到稳定表达，为进一步研究其对卵巢癌细胞生物学行为的影响奠定了实验基础。     

非小细胞肺癌耐药相关蛋白与端粒酶逆转录酶、凋亡相关基因蛋白的关系

在前列腺癌、种经母细胞瘤及消化系统肿瘤中均已证实人端粒酶逆转录酶(hTERT)与化疗疗效有关,随着对细胞凋亡研究的深入,人们认识到细胞凋亡是肿瘤细胞在接受各种抗肿瘤药物后的死亡机制．它的抑制可能是带有更普遍性的耐药机制,本研究中我们探讨未治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)中端粒酶hTERT mRNA、细胞凋亡基因产物突变型p53、bcl-2蛋白的表达与多药耐药相关蛋白(MRP）、     

胶质瘤细胞ING1、人端粒酶逆转录酶及人端粒酶相关蛋白1基因表达的研究

目的 探讨胶质瘤细胞ING1、人端粒酶逆转录酶(hTERT)和人端粒酶相关蛋白1(hTP1)基因表达的意义。方法 用mRNA原位杂交及免疫组织化学染色方法观察了70例不同级别的人胶质瘤组织。结果 hTERT mRNA和蛋白的阳性表达率分别为88.6％和82.9％,hTP1 mRNA和蛋白的阳性表达率均为100％,这4种阳性肿瘤细胞的密度彼此间均呈正相关(r=0.758～0.882,P<0.0005),并均随肿瘤级别升高而相应增加(P<0.05～0.01)。ING1 mRNA和蛋白的阳性表达率分别为94.3％和88 6％,两种阳性肿瘤细胞密度间也呈正相关(r=0.831,P<0.0005),但两者均随肿瘤级别升高而相应减少(P<0.01),并均分别与hTERT mRNA和蛋白及hTP1 mRNA和蛋白的阳性肿瘤细胞密度呈负相关(r=-0.211～-0.384,P<0.05～0.001)。结论 胶质瘤细胞中hTERT和hTP1基因表达异常增加可能是抑制其ING1基因表达的重要因素,这3种基因的表达异常可能在胶质瘤发生及恶性进展过程中起重要作用。     

下调USP9X表达对胃癌AGS细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的:探讨下调X染色体连锁的泛素特异性肽酶9(USP9X)表达对胃癌细胞凋亡和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:将USP9X小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA转染胃癌AGS细胞,将细胞分为3组:未处理的AGS组、对照siRNA组和USP9X siRNA组。采用real-time PCR和Western blot检测不同处理组的胃癌AGS细胞中USP9X的mRNA和蛋白表达。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术和Boyden小室分别检测不同处理组胃癌AGS细胞的凋亡和侵袭能力;Western blot检测凋亡和侵袭相关蛋白的表达水平。结果:USP9X siRNA显著下调胃癌AGS细胞中USP9X的mRNA和蛋白表达水平。USP9X表达下调显著诱导胃癌细胞凋亡,并降低胃癌细胞的侵袭能力。USP9X表达下调显著降低Mcl-1和MMP-2的表达,但明显上调Bax蛋白的表达(P0.05)。结论:USP9X可能是胃癌细胞凋亡和侵袭的关键调控因子。     

Oct-4和人端粒酶逆转录酶在不同胎龄人胚原始生殖细胞的表达变化

目的 检测不同胎龄人胚原始生殖细胞中Oct-4、人端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达变化.方法 取人胚胎生殖嵴,通过RT-PCR检测5～13周龄人胚生殖嵴中Oct-4、hTERT的表达变化;同时,取人胚胎生殖嵴,经石蜡切片,HE染色、免疫组织化学染色等技术,观察不同胎龄人胚原始生殖细胞的形态,检测Oct-4、hTERT的表达情况.结果 胎龄6～7周时,生殖嵴中可见少量原始生殖细胞,且表达Oct-4及hTERT;胎龄8～12周时,生殖嵴中原始生殖细胞数量增多,Oct-4及hTERT表达增强(P<0.05);胎龄13周以后,生殖嵴中Oct-4阳性的原始生殖细胞数量逐渐减少,Oct-4表达减弱,但hTERT仍然高表达.结论 不同胎龄人胚原始生殖细胞中Oct-4的表达呈动态变化,胎龄8～12周时表达较强,但hTERT的表达量始终维持在较高水平,没有明显变化.     

人类端粒酶逆转录酶基因转染对足叶乙甙诱导Raji细胞凋亡的影响

探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因转入Raji细胞后足叶乙甙 (VP 16 )对细胞凋亡的影响。采用脂质体介导的转染方法将重组的hTERT基因转入Raji细胞 ,G4 18筛选 ;采用间接免疫荧光标记法及端粒酶聚合酶链反应 酶联免疫测定法检测hTERT蛋白表达水平和端粒酶活性的变化 ;姬姆萨染色及流式细胞仪观测细胞凋亡。结果发现 :转染hTERT入Raji细胞后 ,其表达hTERT的蛋白及端粒酶活性显著增加 (P <0.0 5 )。 10 μmol/LVP 16作用转染hTERT的Raji细胞 4 8h、72h对细胞生长抑制作用不如转染空载体组及未转染组明显 (P <0 .0 5 )。 10 μmol/LVP 16作用转染hTERT的Raji细胞 72h ,光镜下仅可见到很少量的细胞出现凋亡 ,流式细胞仪测定的细胞凋亡率 (4.34±1.0 3) %显著降低 ,分别与转染空载体组 (33.2 1± 3.12 ) %及未转染组 (31.6 3± 3.0 6 ) %比较 ,P <0.0 5。表明端粒酶活性过表达可使Raji细胞对VP 16产生抗凋亡作用     

靶向hTERT RNA干涉促进人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的：利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达，探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法：将成功构建的针对hTERT的siRNA(small interferencing RNA)表达载体转染HeLa细胞，通过透射电镜、免疫印迹和流式细胞术(FCM)等方法检测人宫颈癌HeLa细胞的凋亡情况。结果：构建的siRNA表达载体可以诱导HeLa细胞发生凋亡。结论：针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体稳定转染HeLa细胞，可诱导HeLa细胞发生凋亡。     

端粒酶抑制剂对葡萄膜黑色素瘤细胞生长的抑制作用

目的 研究两种端粒酶抑制剂干扰素α 2b(IFN-α 2b)和顺铂(CDDP)对人葡萄膜黑色素瘤细胞生长抑制作用,为临床化疗人葡萄膜黑色素瘤提供更多依据.方法 用不同浓度及不同作用时间的IFN-α2b和CDDP作用于体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞.倒置显微镜、电子显微镜观察其形态学变化,并用MTT法检测干扰剂对细胞生长的抑制作用.结果 随着IFN-α 2b和CDDP浓度的增加及作用时间的延长,细胞出现生长抑制的形态学变化,电子显微镜显示细胞出现凋亡;作用72 h,IFN-α 2b和CDDP浓度分别大于500IU/ml及1.00mg/L时细胞出现抑制状态,并在浓度分别达到5000IU/ml及10.00 mg/L时其细胞抑制率(66.1±4.7)%及(74.0±3.3)%开始与对照组出现差异有统计学意义(P<0.001);IFN-α 2b(5000 IU/ml)和CDDP(10.00 mg/L)浓度同定,作用时间达到48 h后细胞出现抑制状态,72 h后抑制率(67.9±8.1)%及(76.5±1.6)%开始与对照组出现差异有统计学意义(P<0.001);即随着两者浓度升高及作用时间增长,葡萄膜黑色素瘤细胞受到的抑制作用逐渐增强(P<0.01).结论 端粒酶抑制剂IFN-α2b和CDDP可有效抑制体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞的生长,且随着两者浓度升高及作用时间延长抑制作用加强,可造成细胞凋亡.     

端粒酶抑制剂对葡萄膜黑色素瘤细胞生长的抑制作用

Objective To study the restrain effects of two telomerase inhibitors included IFN-α2b (interferon-α2b)and CDDP(cisplatin;cis-dichlorodiamine platinum)to uveal melanoma cells of human eyes,and to provide theory bases for chemotherary of uveal melanoma.Methods Applied IFN-α2b and CDDP to the primary cultured uveal melanoma cells of human eyes individually with different concentration and duration,and compared with control group.Morphological changes were observed by inverted optical and electronic microscope,and the restrain effects were detected by MTT.Results More and more morphological changes of restraint and apoptosis of cells were observed with the increasing concentration and duration of IFN-α 2b and CDDP.When action durations were 72 h.the cells were inhibited with the concentration more than 500 IU/ml(IFN-α 2b)and 1.00 mg/L(CDDP)respectively.The cells restrain rates were(66.1±4.7)%and(74.0+3.3)%with the concentration more than 5000 IU/ml(IFN-α2b)and 10 mg/L (CDDP),and the rates were higher than before(P<0.001).When concentrations were 5000 IU/ml(IFN-α2b)and 10.00 mg/L(CDDP),cells were inhibited at 48 h and the restrain rates were(67.9±8.1)%and(76.5±1.61%at 72 h,respectively,(P相似文献   

端粒酶抑制剂对葡萄膜黑色素瘤细胞生长的抑制作用

Objective To study the restrain effects of two telomerase inhibitors included IFN-α2b (interferon-α2b)and CDDP(cisplatin;cis-dichlorodiamine platinum)to uveal melanoma cells of human eyes,and to provide theory bases for chemotherary of uveal melanoma.Methods Applied IFN-α2b and CDDP to the primary cultured uveal melanoma cells of human eyes individually with different concentration and duration,and compared with control group.Morphological changes were observed by inverted optical and electronic microscope,and the restrain effects were detected by MTT.Results More and more morphological changes of restraint and apoptosis of cells were observed with the increasing concentration and duration of IFN-α 2b and CDDP.When action durations were 72 h.the cells were inhibited with the concentration more than 500 IU/ml(IFN-α 2b)and 1.00 mg/L(CDDP)respectively.The cells restrain rates were(66.1±4.7)%and(74.0+3.3)%with the concentration more than 5000 IU/ml(IFN-α2b)and 10 mg/L (CDDP),and the rates were higher than before(P<0.001).When concentrations were 5000 IU/ml(IFN-α2b)and 10.00 mg/L(CDDP),cells were inhibited at 48 h and the restrain rates were(67.9±8.1)%and(76.5±1.61%at 72 h,respectively,(P相似文献   

ABCC4表达与胃癌细胞增殖的相关性研究

目的 观察ABCC4(ATP-binding cassette,sub-family C member4)基因对胃癌细胞系SGC-7901增殖及凋亡的作用.方法 在胃癌细胞系SGC-7901中导入携带ABCC4的RNAi慢病毒载体,应用CELLOMICS检测细胞生长及克隆形成情况,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 SGC-7901细胞经ABCC4基因RNAi有效靶点慢病毒(ABCC4 siRNA)感染后,SGC～7901细胞生长减慢,细胞周期发生改变,处于G1期的SGC7901细胞显著减少,(t=2.752,P＜0.05),处于G2/M期的SGC-7901细胞显著增加(t=2.973,P＜0.05),同时,细胞凋亡显著增加(t=3.068,P＜0.05),细胞克隆形成能力减弱(t=3.534,P＜0.05).结论 抑制ABCC4基因可以减缓SGC-7901细胞恶性增殖,促进凋亡.     

hTERT基因反义核酸对顺铂诱导Jurkat细胞凋亡的影响

目的:用人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的反义寡核苷酸(ASODN)抑制Jurkat细胞端粒酶活性后, 观察化疗药物(顺铂、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙)对Jurkat细胞凋亡的影响。方法:采用台盼蓝拒染法观察hTERT ASODN与化疗药物(顺铂、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙)联合作用对Jurkat细胞系生长的影响;姬姆萨染色法观察凋亡细胞的形态变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况;通过流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果: hTERT ASODN作用于Jurkat细胞24 h再加入柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙, 对细胞生长的抑制分别与单用柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙及hTERT正义寡核苷酸(sense oligodeoxynucleotide, SODN)联合柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙组相比, 无显著差异(P>0.05) 。hTERT ASODN作用于Jurkat细胞24 h再加入顺铂, 分别与SODN联合顺铂作用组、单用顺铂作用组相比, 对细胞抑制明显增强(P<0.05)。hTERT ASODN作用于Jurkat细胞24 h再加入顺铂作用48 h, 细胞出现典型的凋亡形态学改变, 经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带, 而SODN与顺铂联合作用组及单独应用顺铂均未见到DNA梯形条带。hTERT ASODN与2.5 μmol/L顺铂联合作用于Jurkat细胞48h的凋亡细胞百分率(25.18±3.63)%分别同SODN与顺铂联合作用组(10.07±2.12)%、单用顺铂作用组(9.73±2.43)%进行比较有显著差异(P<0.01)。 结论:hTERT基因反义寡核苷酸能促进顺铂诱导Jurkat细胞凋亡。     

miRNA-326调控胃癌细胞活力和凋亡的机制及其在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨微小RNA-326(miRNA-326)调控胃癌细胞活力和凋亡的机制及其在胃癌组织中的表达及临床意义。方法:采用RT-qPCR检测miRNA-326在55例胃癌组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。以胃癌细胞BGC-823为研究对象,RT-qPCR检测miRNA-326在细胞中的表达;将BGC-823细胞随机分为正常对照组(未转染)、mimic-NC组(转染mimic阴性对照)和miRNA-326 mimic组(转染miRNA-326 mimic),以脂质体转染法上调miRNA-326表达后,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、p21、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白水平,RT-qPCR检测cyclin D1的mRNA表达,双萤光素酶报告基因检测法验证CCND1 (cyclin D1的基因)是否是miRNA-326的靶基因。结果:miRNA-326在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P 0. 05),其表达与肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度及临床分期均有显著相关性(P 0. 05),而与患者的年龄和性别无关;此外,还与患者生存率密切相关(P 0. 05)。miRNA-326在BGC-823细胞中的表达明显低于正常胃黏膜GES-1细胞(P 0. 05)。与正常对照组相比,mimic-NC组细胞中miRNA-326的表达无明显变化,而miRNA-326 mimic组细胞中miRNA-326的表达明显升高(P 0. 05)。与正常对照组相比,miRNA-326 mimic组细胞活力明显减弱,而细胞凋亡增强(P 0. 05);此外,与正常对照组相比,miRNA-326 mimic组细胞中MMP-9、cyclin D1、Bcl-2蛋白及cyclin D1 mRNA表达下降,而p21和cleaved caspase-3的蛋白水平上升(P 0. 05)。然而,mimic-NC组与正常对照组相比,各检测指标的差异均无统计学显著性。与mimic-NC+miR-326 mimics组相比,转染pmiR-CCND1-WT质粒细胞的萤光素酶活性降低(P 0. 05),而转染pmiRCCND1-Mut质粒的萤光素酶活性无改变。结论:miRNA-326在胃癌组织中低表达,可能通过靶向调控CCND1表达而促进细胞活力并抑制细胞凋亡。     

蔓荆子黄素通过上调miR-1193表达调控胃癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨蔓荆子黄素对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及可能机制.方法:不同浓度的蔓荆子黄素作用于胃癌细胞AGS后,CCK-8实验和流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡,RT-qPCR检测miR-1193表达量,Western blot检测CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达.将miR-1193模拟物转染至AGS...     

亚硒酸钠抑制人胃癌SGC-7901细胞系增殖和hTERT的表达

目的 探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞系增殖和hTERT表达的作用及其机制.方法用含亚硒酸钠(0μmol/L、0.5μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、8μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24h、48h、72h、96h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测亚硒酸钠对SGC-7901的...     

胃腺癌IGFBP4的表达与患者预后的关系

目的探讨胃腺癌中胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)的表达情况及预后意义。方法免疫组织化学技术检测2000年1月至2006年12月间401例胃癌术后标本中IGFBP4的表达,并探讨IGFBP4表达与临床病理参数及预后相关性。结果结果显示401例患者中208例(51.9%)IGFBP4表达下调,且在低分化胃腺癌、T4a/b、及Ⅲ/Ⅳ期胃癌患者中表达下调明显。生存分析显示IGFBP4低表达与较差的预后相关(P<0.001)。多因素分析显示IGFBP4可作为一个独立预后风险因素(HR=2.175,P<0.001)。结论 IGFBP4在胃腺癌中表达下调,提示预后不良。     

Identification of discrepancy between CTLA4 expression and CTLA4 activation in gastric cancer

Objective: Recently, immune checkpoints blockers showed higher anti-tumor activity for advanced gastric cancer (GC). The purpose of the study is to find out predictive biomarkers related to anti-cytotoxic lymphocyte antigen 4 (CTLA4) therapy.

Materials and methods: Datasets of gene expression omnibus (GEO), the cancer genome atlas (TCGA), and gene set enrichment analysis (GESA) were extracted. Differential expression of CTLA4 between cancer tissues and normal mucosa, enrichment of WT (wild type) vs. CTLA4_KO (knockout) upregulated gene set and clinical significance were analyzed. The expression of CTLA4, CD3, and granzyme A (GZMA) were validated on 30 cases of Chinese GC. Microsatellite instability (MSI) marker MLH1 and Epstein-Barr virus (EBV) marker EBER were examined on 30 cases of Chinese GC by immunohistochemistry and in situ hybridization.

Results: CTLA4 was upregulated in GC tissue relative to normal mucosa in datasets of GSE27342 (fold change?=?1.586, p?<?.001) and GSE63089 (fold change?=?1.365, p?<?.001). Increased CTLA4 expression was positively related to CTLA4 activation. EBV-associated GC (EBVaGC) and microsatellite instability GC (MSIGC) disclosed higher CTLA4 levels than other GCs. Genomic stability GC (GSGC) also showed higher enrichment score of CTLA4 activation. CTLA4 activation resulted in shorter overall survival in GC. The expression level of CTLA4 was well correlated to expression levels of GZMA (R?=?0.701, p?<?.001) and CD3 (R?=?0.750, p?<?.001).

Conclusions: Based on bioinformatics analysis, GSGC should be worth noticed as a potential GC subtypes responsive to anti-CTLA4 treatment.