反向骨髓移植诱导异种造血嵌合体的研究

目的应用大鼠-小鼠骨髓移植模型,探讨反向骨髓移植诱导特异性免疫耐受的作用机制。方法首先诱导形成嵌合体S大鼠,再将此嵌合体大鼠的骨髓反向移植给Balb／c小鼠,监测存活率,GVHD发病率,做混合淋巴细胞培养,检测脾细胞增殖及TNF-α、INF-γ与IL-4产量,监测移植后小鼠嵌合率的变化。结果对照组小鼠观察期间出现严重GVHD表现,反向移植组小鼠仅出现轻度GVHD,生存期明显延长,TNF-α与INF-γ产量明显降低,而IL-4升高,移植后嵌合率较稳定,与对照组相比有显著性差异。结论有受者嵌合体的骨髓移植可以减轻急性GVHD,诱导出较长时间存在的异种造血嵌合体。     

IL-11在大鼠→小鼠异种骨髓移植中对急性GVHD的预防作用

接受致死剂量全身照射的BALB/c小鼠静脉注射SD大鼠骨髓细胞4×107和脾细胞4×107/只。处理组从移植前2d～后7d给予皮下注射重组人IL-11,监测存活率及GVHD的发病率,检测受鼠血清TNF-α、IFN-γ与IL-4水平,做混合淋巴细胞培养(MLC)检测脾细胞的增殖状况及TNF-α、IFN-γ与IL-4产量。结果发现与对照组相比,IL-11处理组GVHD发病高峰期后移,程度减轻,生存期明显延长。IL-11处理组的脾细胞增殖明显低于对照组,加入外源性IL-11可抑制淋巴细胞的增殖。处理组淋巴细胞的IL-4产量是对照组的3倍,而IFN-γ与TNF-α产量下降,血清浓度测定的结果与体外培养的结果相符。结果证实在大鼠→小鼠异种骨髓移植中短期给予IL-11能有效地减轻致死性GVHD。     

致敏血清干扰小鼠骨髓移植的作用研究

目的:研究致敏血清在小鼠骨髓移植中的作用,明确抗体介导的移植排斥作用.方法:在移植前1天将200μl致敏血清或非致敏血清注射到正常BALB/c小鼠中,移植受者经致死量照射后回输1×107 C57BL/6小鼠的骨髓细胞.应用补体依赖淋巴细胞毒性方法检测移植前受者的供者反应性抗体,并观察移植后受者的生存情况及植入分析.结果:致敏血清输注可促使供者反应性抗体存在于受者体内.骨髓移植后,接受致敏血清输注的受者80%于10天左右均死于骨髓衰竭,而接受非致敏血清输注的受者能长期存活.植入分析表明接受致敏血清输注的受者在移植后其血象及骨髓细胞随时间推移进行性下降,且供者细胞的嵌合百分比也进行性减少;与接受非致敏血清输注组相比,两组的差异有统计学意义(P＜0.05).结论:致敏血清能介导小鼠的骨髓移植排斥,其中供者反应性抗体介导的体液免疫发挥重要作用.     

混合骨髓移植后过继免疫治疗小鼠白血病

背景：急性白血病自体造血干细胞移植后复发率高,异基因造血干细胞移植后移植相关病死率高,混合造血干细胞移植及移植后过继免疫治疗有可能取长补短,提高疗效。 目的：观察自体骨髓混合H-2半相合异体骨髓移植后供体淋巴细胞输注+白细胞介素2治疗对小鼠白血病的疗效。 方法：将Balb/c小鼠经直线加速器照射3 Gy后分为白血病模型组、白血病模型照射组、混合移植组、自体骨髓移植组,均尾静脉注射5×10⁵ K562(GFP+/NeoR+)或K562(GFP-/NeoR-)细胞。7 d后6 Gy照射,自体骨髓移植组移植自体骨髓细胞或联合白细胞介素2治疗;混合移植组移植小鼠自体骨髓细胞混合1/10的H-2半相合异体骨髓细胞后应用白细胞介素2或联合供体淋巴细胞输注治疗。4周后行小鼠外周血及骨髓细胞形态检查,外周血细胞亚群、GFP及NeoR基因测定,肝、脾匀浆细胞GFP和NeoR基因测定。 结果与结论：白血病模型组小鼠因骨髓造血功能衰竭于20 d内全部死亡,白血病模型照射组小鼠因造血功能衰竭于14 d内全部死亡;自体骨髓移植组、混合移植组均有多少不等小鼠无白血病存活超过28 d,且混合骨髓移植后及自体骨髓移植后应用白细胞介素2治疗可提高白血病小鼠长期无病生存率,在此基础上联合供体淋巴细胞输注可更进一步提高白血病小鼠长期无病生存率。     

小鼠骨髓移植死亡率的影响因素分析

本实验探讨小鼠骨髓移植中影响死亡率的因素。将受鼠γ射线全身照射,分别经尾静脉输入同品系供鼠骨髓细胞或骨髓细胞和脾细胞的混合物。实验分4批进行,分别选用不同品系的小鼠,观察移植物抗宿主病(GVHD)表现,监测移植鼠35d生存率。结果显示第1批小鼠死亡率最低,第2批小鼠死亡率最高,且死前有明显的GVHD表现,第3批小鼠死亡率有所下降,与第2批小鼠死亡率相比,差异有统计学意义,第4批小鼠死亡率比第3批有所升高,但仍显著低于第2批小鼠,差异亦有统计学意义。由此推测小鼠基因的纯和度、脾细胞的输入、骨髓细胞和脾细胞的比例、周龄是影响小鼠骨髓移植死亡率的重要因素。     

MHC半相合骨髓移植后慢性GVHD小鼠模型的建立

目的建立MHC半相合异基因骨髓移植(allo-BMT)后慢性GVHD小鼠模型。方法以(Balb/c×C57BL/6)F1H-2d/b(CB6F1)雌性小鼠为受者,预处理条件为不同剂量的全身照射(TBI,60Co照射),输注MHC半相合Balb/cH-2d雄性小鼠骨髓细胞与不同数量脾细胞,观察移植后小鼠体质量变化,靶器官病理变化,血清抗ssDNA抗体、抗dsDNA抗体。结果在照射剂量为8Gy,输注骨髓细胞数量为8×106、脾细胞数量为4.5×107的小鼠至实验结束(移植后100d)全部存活,体质量减轻与对照组和其它实验组相比差异显著(P<0.05)。血清抗ssDNA抗体、抗dsDNA抗体较对照组和其它实验组显著升高(P<0.05)。该组皮肤、肝脏等病理改变明显。结论在照射剂量为8Gy,输注骨髓细胞数量为8×106、脾细胞数量为4.5×107的小鼠成功诱导出半相合allo-BMT慢性GVHD,为进一步研究慢性GVHD的发病机理、生物学特性、干预因素等打下了重要基础。     

异基因骨髓移植小鼠免疫功能缺损机制的探讨

异基因骨髓移植(Allogeneic Bone Marrow Transplantation,ABMT)后,受体的免疫功能长期缺损,是患者术后极易感染死亡的重要原因之一.本文对ABMT小鼠(C57BL/6→BALB/c)免疫功能缺损的机制进行了探讨,发现ABMT小鼠IL-2产生明显受损;其脾细胞与(C57BL/6小鼠脾细胞一起过继转移到致死量照射的BALB/C小鼠体内,能抑制移植物抗宿主病(GVHD)的发生.去除其脾T细胞后,这种抑制作用丧失,ABMT小鼠脾细胞上清中发现一种非特异的抑制因子,能抑制正常小鼠脾细胞产生混合淋巴细胞反应的能力;能抑制正常小鼠的脾细胞产生IL-2;抑制正常小鼠脾细胞毒T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性.用抗Thy-1.2单抗和补体去除ABMT小鼠脾T细胞后,其脾细胞培养上(?)的上述抑制活性丧失.这说明ABMT小鼠脾T(?)细胞活性增强是其免疫功能缺损的重要原因之一,它通过释放非特异的抑制因子执行其免疫抑制功能.     

同种异基因骨髓细胞移植诱导嵌合体小鼠生成

采用C57BL/J和BALB/c两种小鼠进行骨髓细胞移植。移植前受体小鼠经 6 0Gy6 0 Coγ射线照射。用细胞染色法和流式细胞术分析了射线对小鼠淋巴细胞的损伤强度和照射后移植了骨髓细胞的小鼠在不同时间内的淋巴细胞亚群变化。结果表明 ,(1 ) 6 0Gyγ射线照射受体鼠 ,能杀伤 95 5 %的外周淋巴细胞 ,但是不影响自身H 2Kb 分子在淋巴细胞表面表达的百分数。残留细胞中CD3+ T细胞、NK1 1 + 淋巴细胞、CD3+ /NK1 1 + 淋巴细胞的阳性率分别由照射前的 40 44%增加到45 30 %、 1 1 3 %增加到 37 41 %和 1 0 7%增加到 5 86 % (P≤ 0 0 1 ) ;(2 )小鼠的淋巴细胞数量从照射后 30d开始恢复 ,到1 90d达到正常值 ;(3 )照射后进行同种异基因骨髓细胞移植后的第 60天 ,受体淋巴细胞表面自身H 2Kb 抗原表达下降 ,CD3+ /NK1 1 + 淋巴细胞百分数增加。随H 2Kb 的抗原表达的恢复 ,CD3+ /NK1 1 + 淋巴细胞百分数下降 ;(4)在细胞移植的第 1 90天 ,受体小鼠 (黑色 )表型呈现出供体鼠 (白色 )颜色特征。在嵌合体小鼠外周淋巴细胞中 ,有 2 5 %为供体H 2Kd 阳性细胞 ,CD3+ /NK1 1 + 淋巴细胞百分数为 1 88% ,明显高于正常值 (P≤ 0 0 1 )。以上结果表明 ,6 0Gy6 0 Coγ射线照射能诱导免疫耐受 ,其耐受性的形成可能与最初保     

髓腔内骨髓移植诱导异基因小鼠皮肤移植耐受的研究

探讨髓腔内骨髓移植(IBM-BMT)对异基因小鼠皮肤移植耐受的诱导效果。受鼠为雌性C57BL/6(H-2b,B6)小鼠,于第0天接受60Coγ射线全身照射(TBI),4 h内输注雄性BALB/c(H-2d)小鼠来源的骨髓细胞(BMC),2 d后腹腔注射环磷酰胺(CTX)。通过皮肤移植、混合淋巴细胞反应(MLR)检测耐受状态,并通过骨髓染色体分析了解BMC的植入程度。结果显示,接受IBM-BMT的B6小鼠对BALB/c小鼠的皮肤移植物平均存活时间(MST)超过300 d,显著长于其余两组(P<0.001);MLR结果证明,实验组B6小鼠获得供体特异性耐受,在耐受小鼠骨髓中可检测到一定比例的Y染色体存在。以上表明髓腔内骨髓移植可以保证异基因骨髓细胞的植入并形成混合嵌合状态,从而有效地诱导免疫耐受。     

当归补血汤对骨髓移植小鼠免疫功能重建的影响

目的 研究当归补血汤(DBT)对骨髓移植小鼠免疫功能重建作用的影响.方法 BALB/c小鼠一次性接受全身137Csγ线致死量照射8.5Gy,照射后0-4h内经尾静脉输注同基因骨髓细胞107/只,同时给于不同剂量DBT,每日灌胃1次,连续15d.于骨髓移植后30、60d,检测以下指标:外周血红细胞(RBC)、白细胞(WBC)计数,骨髓有核细胞计数,胸腺、脾细胞总数和相应淋巴细胞亚类,以及反映免疫细胞功能的迟发型超敏反应(DTH)、空斑形成细胞数(PFC)等.结果 经一定剂量DBT治疗的骨髓移植小鼠,其外周血中RBC、WBC计数,骨髓有核细胞计数,脾细胞和胸腺细胞总数,胸腺内各类细胞[双阴性细胞(DN)、双阳性细胞(DP)、单阳性细胞(SP)]的百分比值,与单纯骨髓移植小鼠比较差异有统计学意义(P<0.05),并且淋巴细胞的功能也得到进一步增强.到移植后60d,其各项指标进一步恢复.结论 当归补血汤可以促进骨髓移植小鼠免疫功能的恢复.     

经肾动脉自体骨髓干细胞移植治疗急性肾小管坏死的实验研究

目的：采用经肾动脉灌注移植兔自体骨髓干细胞，观察自体骨髓干细胞移植对缺血再灌注（I/R）后急性肾小管坏死肾功能的作用及其机制。方法:28只日本大耳白兔采集骨髓，分离自体骨髓干细胞，5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)标记。全部实验兔建立肾脏I/R后随机分为移植组和对照组。移植组于肾血流恢复后经肾动脉灌注自体骨髓干细胞悬液，对照组同样方法注射等体积生理盐水。分别于I/R前和I/R后第1、3、5、7、14、21、28 d静脉采血，检测血清肌酐（SCr）和尿素氮（BUN），相同时点取肾组织行普通病理及BrdU免疫组化观察。结果:I/R后第1 d和第3 d 2组动物SCr、BUN均达到最高水平，以后逐渐下降；第7 d后移植组SCr及BUN水平逐渐低于对照组，到实验观察结束时的第28 d，对照组SCr和BUN分别为（135.6±32.5）μmol/L和（10.9±2.5）mmol/L，移植组SCr和BUN分别为（90.1±11.1）μmol/L和（8.0±1.5）mmol/L，2组间有显著差异（P<0.05）。普通病理观察，I/R后肾小管上皮细胞变性、坏死甚至脱落， BrdU免疫组化染色显示移植组于细胞移植后第5、7 d肾小管BrdU阳性染色并持续至实验结束，对照组阴性。结论:骨髓干细胞移植可以在一定程度上加速急性肾小管坏死后肾功能修复，自体骨髓干细胞移植是1种加速急性肾小管坏死后修复的安全而有效的方法。     

Separating antiviral and GVHD activities of donor T cells prior to bone marrow transplantation

Approaches to speed immune reconstitution following bone marrow transplantation (BMT) or peripheral-blood hematopoietic stem-cell transplantation (HSCT) could markedly reduce morbidity and mortality, particularly following partially major histocompatibility complex (MHC)-matched related donor (PMRD) transplants. However, it is critical to simultaneously eliminate the subpopulation of donor T cells that are alloreactive with the recipient and may produce graft-vs-host disease (GVHD). In this article, we discuss a number of promising cellular engineering approaches that could be applied to this problem, including the use of veto cells, regulatory T-cell subsets, and psoralen-treated donor lymphocytes. Emphasis is placed on whether these approaches can simultaneously transfer broad-spectrum immunity to the recipient without producing GVHD.     

骨髓移植治疗Duchenne型肌营养不良模型鼠的实验研究

目的：观察骨髓移植治疗Duchenne型肌营养不良（DMD）模型鼠（mdx鼠）后,骨骼肌中抗肌萎缩蛋白的表达，以及病理、生理和运动功能的变化情况，从而正确评价骨髓移植治疗DMD的疗效。 方法： 以正常C57鼠作为供者，以致死剂量放疗后的mdx鼠作为受者进行骨髓移植，在移植后4个月和6个月分别用荧光免疫组化法观察抗肌萎缩蛋白表达情况，用HE染色观察并计算骨骼肌细胞核中心移位纤维比例（CNF），同时进行mdx鼠腓肠肌电生理检查和运动功能检测。 结果： 骨髓移植后的mdx鼠骨骼肌细胞膜上有部分抗肌萎缩蛋白表达，CNF比例和肌肉湿重下降，mdx鼠的被动运动功能增强。 结论： 骨髓移植后，骨髓干细胞在mdx鼠体内的骨骼肌和骨髓中定居，并分化成可以表达抗肌萎缩蛋白的骨骼肌细胞，使mdx鼠病理、生理得到部分改善，最终导致了肌肉的运动功能的增强。说明骨髓移植治疗DMD是有一定价值的，为临床应用提供实验基础。     

NKT cells,Treg, and their interactions in bone marrow transplantation

Bone marrow transplantation (BMT) is a potentially curative treatment for patients with leukemia and lymphoma. Tumor eradication is promoted by the anti‐tumor activity of donor T cells contained in the transplant; however, donor T cells also mediate the serious side effect of graft‐versus‐host disease (GVHD). Separation of GVHD from graft anti‐tumor activity is an important goal of research in improving transplant outcome. One approach is to take advantage of the immunomodulatory activity of regulatory NKT cells and CD4⁺CD25⁺ Treg of host and/or donor origin. Both host and donor NKT cells and donor Treg are able to prevent GVHD in murine models. In this review, we summarize the mechanisms of NKT cell‐ and Treg‐mediated protection against GVHD in mice while maintaining graft anti‐tumor activity. In addition, we also examine the interactions between NKT cells and Treg in the context of BMT, and integrate the data from murine experimental models with the observations made in humans.     

放射损伤对于移植的骨髓间充质干细胞在受体大鼠不同器官中植入的影响

目的： 探讨放射损伤对于骨髓间充质干细胞（MSCs）移植后在受体大鼠不同器官中植入的影响以及可能的机制。方法：采用DNA缺口末端标记法(TUNEL)检测正常对照组和单纯放射组大鼠心脏、肾脏、肝脏、肺脏的细胞凋亡率。应用密度梯度离心法结合贴壁法提取雄性大鼠骨髓MSCs，培养后把MSCs移植到［60COγ］照射和未经照射的雌性大鼠体内，通过PCR和Y染色体荧光原位杂交（Y- FISH）示踪雄性大鼠MSCs在雌性大鼠体内的分布情况。结果：照射后大鼠心脏、肾脏、肝脏、肺脏细胞凋亡率显著高于对照组。PCR结果显示照射后移植MSCs的大鼠心脏、肾脏、肝脏、肺脏和外周血中可以扩增出Sry基因的DNA序列，而且Y- FISH显示照射后移植MSCs的大鼠在心脏、肾脏、肝脏、肺脏中可发现Y染色体阳性的细胞。但是未经照射行MSCs移植的大鼠在上述器官中未发现Y染色体阳性的细胞。结论：全身放射促进组织细胞的凋亡，并导致移植的MSCs在受体大鼠心脏、肾脏、肝脏和肺脏的植入。     

FVB小鼠骨髓源树突状细胞的培养

目的 建立FVB小鼠骨髓源树突状细胞体外培养和扩增方法,观察其形态和特征.方法 在无菌条件下提取FVB鼠骨髓细胞,分离单个核细胞,用IL-4和GM-CSF联合协同诱导下培养,加用磷酸脂多糖刺激.应用光镜下观察树突状细胞的形态,流色细胞仪检测鉴定其生物学特征.结果 联合培养小鼠骨髓细胞3d后,可见细胞形态发生改变,细胞形...     

NK细胞在小鼠异基因骨髓移植中的作用

目的:研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法:以近交系小鼠C57/6j(H-2^b)为供鼠、BALB/c(H-2^d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,用流式细胞仪检测受鼠的CD₃₄^＋细胞计数和H-2K^b＋细胞表达水平,血细胞自动分析仪检测外周血白细胞计数,并结合临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率、GVHD、植入水平及造血重建等。结果:增加NK细胞组的小鼠存活率显著大于不增加NK细胞组,小鼠出现GVHD的数量少、程度轻,外周血白细胞及骨髓CD₃₄^＋细胞恢复快、H-2K^b＋细胞表达水平高。结论:NK细胞抑制小鼠异基因骨髓移植中的GVHD和移植排斥,促进骨髓植入及造血重建。     

大鼠成体骨髓干细胞在肾小管上皮细胞再生中的作用

目的：观察肾小管上皮细胞的更新、再生有无来源于骨髓干细胞。方法:建立性别不匹配大鼠间的骨髓移植和肾脏移植模型，通过激光切割技术，将肾小管上皮细胞切割下来，提取其基因组DNA，用针对大鼠Y染色体上性别决定基因（Sry基因）的引物进行PCR反应，以观察提取的DNA中有无Sry基因。结果:据PCR反应结果，在2种模型所取标本的肾小管上皮细胞中，大部分可见Sry基因的存在。结论:骨髓干细胞可能是肾小管上皮细胞再生的一个来源。     

Antibody response to pneumococcal vaccine in children receiving bone marrow transplantation

Fifty-three pediatric patients given an allogeneic or an autologous bone marrow transplantation (BMT) were immunized with a polyvalent pneumococcal capsular polysaccharide vaccine (Pneumovax II). Vaccine was administered six months or more after BMT and the pneumococcal IgM, total IgG, and IgG subclasses levels were evaluated before and three weeks after immunization. Immunization promoted a significant rise in antibody serum levels (P<0.000001), and all children vaccinated more than two years after transplantation responded to pneumococcal polysaccharides, whereas only 20–30% and 50% of patients given BMT between six months and one year and one and two years, respectively, mounted an eifective antibody production (P<0.0001). In univariate analysis, lapse of time from BMT to vaccination, chronic graft-versus-host disease occurrence, and female sex influenced the response rate. However, in multivariate analysis, only time between marrow transplant and immunization was a powerful predictor of response. Interestingly, four of 11 patients with IgG2 deficiency before immunization normalized serum levels of this IgG subclass after the pneumococcal antigenic challenge. Our study suggests that time after transplant is the major factor influencing the recovery of immune reactivity to polysaccharide antigens. This seems to confirm the hypothesis that ontogeny of the B-cell repertoire follows a predetermined sequential program in which polysaccharide antigens are some of the last to evoke an antibody response.