EGFP示踪NSCs海马移植对APP/PS1转基因鼠认知功能及基底前脑胆碱能神经元的影响

目的观察神经干细胞(NSCs)移植对APP/PS1双转基因小鼠认知功能及基底前脑胆碱能神经元的影响,并探讨其可能机制。方法体外分离培养EGFP转基因小鼠胎脑来源NSCs,24只12月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分入实验组(Tg-NSCs组)和AD对照组(Tg-AD组),每组12只,12只同月龄雄性野生型小鼠作为正常对照组(WT组),Tg-NSCs组进行EGFP示踪NSCs移植,其余两组进行等量磷酸盐缓冲液注射,移植部位为双侧海马区。移植4周后采用Morris水迷宫检测三组小鼠学习记忆功能,免疫荧光组化法和Western blot检测基底前脑胆碱能神经元的变化情况;Q-PCR检测海马神经营养因子NGF、BDNF、NT3的mRNA水平的变化。结果①体外悬浮培养的神经球表达EGFP阳性,免疫荧光检测显示神经干细胞特异性标志物Nestin阳性。移植4周后,可见EGFP阳性NSCs在海马注射移植部位存活并向胼胝体,海马深部和齿状回迁移,基底前脑未见EGFP阳性细胞。②与Tg-AD组相比,Tg-NSCs组基底前脑ChAT神经元及蛋白水平均增加(P<0.05),但ChAT蛋白表达低于WT组水平(P<0.05)。③Tg-NSCs组海马区神经营养因子NGF、BDNF、NT3的mRNA表达增加,高于Tg-AD组(P<0.05),且与WT组相比差异无统计学意义(P>0.05)。④水迷宫结果显示Tg-NSCs组学习记忆功能改善优于Tg-AD组(P<0.05),但仍低于WT组水平(P<0.05)。结论 NSCs海马移植并不能对该转基因鼠基底前脑胆碱能神经元丢失产生直接的替代与补充,可能通过分泌神经营养因子对基底前脑胆碱能神经元起到保护作用,从而促进其认知功能的恢复。     

激活APP/PS1小鼠β_2-AR增强海马神经元再生并改善记忆缺失

目的:研究β_2-肾上腺素受体(β_2-AR)对阿尔茨海默病(AD)APP/PS1转基因小鼠海马神经元再生和学习记忆的作用。方法:12只AD小鼠随机分为APP/PS1组和APP/PS1+Clen组,另选6只野生型小鼠作为对照组(WT)。APP/PS1+Clen组于第8月龄起行腹腔注射β_2-AR激动剂Clenbuterol(Clen)2 mg/kg/d,持续2个月。APP/PS1组和WT组均接受等量的0.9%生理盐水稀释的DMSO。给药后对小鼠进行Morris水迷宫试验检测小鼠的学习记忆能力,后取脑切片进行PSA-NCAM免疫组织化学染色。结果:与APP/PS1组相比,APP/PS1+Clen组逃避潜伏期明显缩短,而目标象限停留时间及经过平台次数明显增加(P0.05)。免疫组织化学法显示APP/PS1+Clen组小鼠海马区PSA-NCAM表达增强。结论:通过Clenbuterol激活APP/PS1小鼠β_2-AR可增强海马神经元再生并改善记忆缺失。     

β淀粉样蛋白及代谢酶类在阿尔茨海默病和糖尿病模型小鼠脑内的表达

目的观察阿尔茨海默病(AD)和糖尿病模型小鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)及代谢相关酶类的表达情况,以便从分子水平找到糖尿病并发AD的实验室依据。方法 5月龄双转基因痴呆症模型小鼠(APP/PS1双转基因小鼠)、ob/ob T2DM肥胖模型小鼠和野生型C57BL/6J小鼠为对照,分别用免疫组化染色、ELISA和Western blot检测脑内老年斑(SP)、Aβ含量及Aβ代谢酶类的表达情况。结果 APP/PS1小鼠大脑皮质及海马均可见一定数量的SP;ob/ob小鼠大脑皮质内偶可见SP,而对照组未见SP。与对照小鼠相比,APP/PS1与ob/ob小鼠脑内Aβ40、Aβ42的含量明显升高(P0.05);但APP/PS1小鼠脑内Aβ水平显著高于ob/ob小鼠(P0.05)。APP在APP/PS1小鼠脑内的表达显著高于其他两组小鼠;在ob/ob小鼠脑内的表达要强于对照小鼠(P0.05)。Aβ生成的关键酶BACE1在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著高于对照小鼠(P0.05),但其在APP/PS1小鼠脑内的表达要强于ob/ob小鼠(P0.05)。Aβ降解的关键酶IDE在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著低于对照小鼠(P0.05),且在ob/ob小鼠脑内表达最低。结论 Aβ生成与降解的异常以及其异常聚集沉积不仅发生在早期AD脑内,同时也发生在T2DM脑内,提示Aβ过表达可能是促进2型糖尿病并发AD的重要原因之一。     

法舒地尔通过促进APP/PS1双转基因小鼠神经再生改善认知功能

目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)在治疗阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型——淀粉样前体蛋白/早老素1双转基因(amyloid precursor protein/presenilin 1 double transgenic,APP/PS1 Tg)小鼠中促进神经再生并改善认知功能的作用。方法:将8月龄雄性APP/PS1 Tg小鼠作为AD模型,随机分为fasudil组(腹腔注射fasudil 25 mg·kg~(-1)·d~(-1))和生理盐水(normal saline,NS)组(腹腔注射等体积生理盐水),取同月龄同性别野生型(wild type,WT)小鼠为WT组,连续治疗2个月;应用Morris水迷宫(Morris water maze,MWM)实验和SMART 3.0行为学记录系统检测、记录并分析各组小鼠空间认知功能;免疫荧光组织化学染色法检测小鼠脑内海马齿状回和CA3区及大脑皮层p-Tau、ChA T、BrdU和nestin的蛋白表达水平和分布;Western blot法检测小鼠脑组织p-APP(Thr668)和p-Tau的蛋白水平。结果:在MWM实验中,与WT组小鼠相比,NS组10月龄APP/PS1 Tg小鼠从入水点到达平台的时间增加,在平台所在象限活动时间占总活动时间的比例及在平台所在象限游泳距离占总路径的比例减少;而fasudil治疗明显拮抗上述行为学指标,改善APP/PS1 Tg小鼠认知功能。此外,与NS组小鼠相比,fasudil明显减少小鼠p-Tau蛋白水平,增加p-APP蛋白水平,使海马区胆碱能神经元数量增多,促进神经元的轴突再生,动员脑内海马齿状回颗粒下区和脑室下区的内源性神经干细胞增殖。结论:Fasudil通过促进APP/PS1 Tg小鼠中枢神经系统p-Tau蛋白水平下调,增加可溶性APP水平,促进胆碱能神经元再生,动员内源性神经干细胞增殖,从而改善APP/PS1双转基因小鼠空间认知功能。     

骨髓基质细胞移植改善APP/PS1转基因小鼠的认知功能

目的探究骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)移植治疗对APP/PS转基因的阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠认知功能障碍的改善作用。方法分离培养C57BL/6小鼠的BMSCs,诱导其分化为神经细胞,通过相差显微镜技术和免疫细胞化学荧光染色技术鉴定其表型与分化。通过显微注射技术,将绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,eGFP)转基因小鼠(生后3个月)来源的BMSCs注入APP/PS转基因小鼠(生后12个月)侧脑室内后,以荧光显微镜技术检测移植细胞的存活和整合情况,HE染色检测AD模型小鼠海马区萎缩的恢复程度并以Morris水迷宫试验与旷场试验检测移植治疗后小鼠认知功能障碍的改善情况。结果分离自C57BL/6小鼠的BMSCs在增殖培养基中贴壁生长,形态呈纺锤形,免疫表型CD271+/CD45-++,经神经分化诱导培养可形成β-tubulin-III神经元和GFAP星形胶质细胞。GFP转基因小鼠来源的BMSCs移植入APP/PS1转基因小鼠脑内可存活并与宿主海马区神经组织有效整合。移植治疗3周后宿主小鼠海马区面积显著增加(<0.001),水迷宫实验逃生潜伏期明显缩短(<0.01),旷场试验评分显著提高(<0.05)。结论骨髓基质细胞移植治疗可有效改善APP/PS1转基因的AD模型小鼠的认知功能障碍。     

游泳运动对早期阿尔茨海默模型小鼠认知功能及海马突触可塑性的影响

目的评估游泳运动对早期阿尔茨海默模型小鼠认知功能及海马突触可塑性的影响。方法选取4～5月龄C57BL/6雄性小鼠和3xTg(APP/Tau/PS1三转基因)雄性小鼠各20只,分为4组(n=10),野生对照组(WT+C),野生游泳组(WT+S),3xTg对照组(Tg+C),3xTg游泳组(Tg+S)。对照组常规饲养,游泳组每日训练2次,每次10min,训练周期30日。利用经典Morris水迷宫实验(MWM)和旷场实验评估小鼠行为学差异,利用长时程增强(LTP)评估海马突触可塑性。结果 Tg+S组小鼠逃避潜伏期显著低于Tg+C组,在平台所在象限停留时间和移动距离显著高于Tg+C组;Tg+S组在高频刺激后30min内fEPSP的斜率显著高于Tg+C组。WT+C组和WT+S组在高频刺激后30min内fEPSP的斜率无显著差异(P0.05)。结论游泳运动改善早期阿尔茨海默模型小鼠的学习记忆能力和探索能力,与提高海马突触可塑性相关。     

APP/PS1双转基因AD小鼠早期内质网应激诱导的凋亡

目的观察APP/PS1双转基因AD小鼠神经细胞凋亡,及内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白（GRP78）和内质网促凋亡因子半胱氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）表达的改变,探讨APP/PS1双转基因AD小鼠早期内质网应激诱导的凋亡。方法选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和同月龄同背景的野生型小鼠（WT）,分为5月龄WT组、5月龄APP/PS1组、7月龄WT组和7月龄APP/PS1组,每组6只,应用原位细胞凋亡检测法（TUNEL）检测凋亡细胞,免疫组织化学方法检测其脑内GRP78和Caspase-12的表达水平。结果 TUNEL检测凋亡率分别为7月龄APP/PS1鼠（35.0±6.31）%、5月龄APP/PS1鼠（9.0±2.78）%、7月龄WT鼠（4.0±1.89）%、5月龄WT鼠（4.0±1.83）%,其中7月龄APP/PS1鼠凋亡率显著升高（P〈0.05）;免疫组织化学检测GRP78阳性率分别为7月龄APP/PS1鼠（30.0±5.43）%、5月龄APP/PS1鼠（10.0±2.12）%、7月龄WT鼠（2.0±1.71）%、5月龄WT鼠（3.0±1.41）%,7月龄APP/PS1鼠GRP78表达明显升高（P〈0.05）;免疫组织化学检测Caspase-12阳性率分别为7月龄APP/PS1鼠（33.0±5.98）%、5月龄APP/PS1鼠（12.0±2.60）%、7月龄WT鼠（4.0±2.56）%、5月龄WT鼠（2.0±1.79）%,7月龄APP/PS1鼠Caspase-12表达明显升高（P〈0.05）。结论 7月龄的APP/PS1双转基因小鼠出现了内质网应激诱导的凋亡。本实验结果为临床AD早期预防和治疗提供了重要依据。     

持续高盐饮食通过调节转录因子C/EBPβ促进阿尔兹海默病小鼠认知障碍

目的:探讨转录因子C/EBPβ参与高盐饮食加重阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆损伤的机制。方法:实验小鼠分为APP/PS1-ND组、APP/PS1-HSD组、APP/PS1/C/EBPβ+/--ND组、APP/PS1/C/EBPβ+/--HSD组、APP/PS1/C/EBPβ-HDO-ND组、APP/PS1/C/EBPβ-HDO-HSD组,每组各15只,分别给予正常饮食或高盐饮食,通过新物体识别实验(NOR)、关联条件恐惧、暗示条件恐惧实验检测其学习记忆水平。荧光定量PCR检测海马脑区C/EBPβ mRNA水平,特定酶活试剂盒检测C/EBPβ活性。结果:APP/PS1-HSD组小鼠在NOR的T2实验中的区分指数与APP/PS1-ND组小鼠差异无统计学意义(P>0.05),APP/PS1-HSD组小鼠在NOR的T3实验中的区分指数、关联条件恐惧实验的僵直时间百分比以及暗示条件恐惧实验的僵直时间百分比均明显低于APP/PS1-ND组(P均<0.01)。APP/PS1/C/EBPβ+/--ND组与APP/PS1/C/EBPβ+/--HSD组小鼠在NOR的T2和T3实验中的区分...     

高压氧通过激活CREB/BDNF信号通路减轻阿尔茨海默病小鼠海马神经元突触损伤

目的:探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)对阿尔茨海默病APP/PS1转基因(trangenic,TG)小鼠海马神经元突触损伤的影响及其作用机制。方法:将6月龄雄性APP/PS1 TG小鼠随机分为TG组、HBO组及环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)抑制剂H89组,每组10只;另取10只同龄雄性野生型(wild-type,WT)C57BL/6小鼠作为阴性对照组(WT组)。HBO和H89组小鼠进行高压氧治疗6个疗程;WT组及TG组小鼠不给予治疗。Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力;筑巢实验检测小鼠智力改变;尼氏染色检测各组小鼠海马神经元中尼氏体表达;real-time PCR检测小鼠海马区CREB及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA的表达;Western blot检测小鼠海马区突触素(synapsin,SYN)、突触后致密区蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD95)、生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP43)、CREB、磷酸化CREB(p-CREB)及BDNF的蛋白水平。结果:与WT组相比,TG组小鼠学习记忆能力降低,筑巢分数显著降低,海马区尼氏体数量显著减少,CREB及BDNF mRNA相对表达显著减少,SYN、PSD95、GAP43、p-CREB及BDNF蛋白水平显著降低(P0. 05)。与TG组相比,HBO组小鼠学习与记忆能力改善,小鼠筑巢分数显著增加,海马区神经元排列整齐且尼氏体数量增加,CREB及BDNF mRNA相对表达显著增加,SYN、PSD95、GAP43、p-CREB及BDNF蛋白水平显著升高(P0. 05)。与HBO组相比,H89组小鼠学习记忆能力及筑巢分数显著降低,海马区尼氏体数量减少,CREB及BDNF mRNA相对表达显著减少(P0. 05),SYN、PSD95、GAP43、p-CREB及BDNF蛋白水平显著降低(P0. 05)。结论:HBO能改善APP/PS1 TG小鼠的学习记忆能力,其机制可能与激活CREB/BDNF信号通路,减轻小鼠海马神经元突触损伤有关。     

APP/PS1转基因小鼠海马内少突胶质细胞变化的体视学研究

目的:定量研究APP/PS1转基因小鼠海马内少突胶质细胞(OLG)的改变,探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)对OLG的影响。方法:随机选取10月龄雄性APP/PS1转基因小鼠(AD组)和10月龄同窝生雄性野生型小鼠(WT组)各13只,运用Morris水迷宫检测各组小鼠的空间学习和记忆能力;运用体视学方法计数各组小鼠海马CA1、CA2-3和齿状回(DG)内Olig2+细胞和2',3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶(CNPase)阳性细胞总数;体外培养小鼠少突胶质前体细胞(MOPC),给予Aβ1-42,运用real time RT-PCR和Western Blot检测OLG相关蛋白的表达水平和含量。结果:AD小鼠逃避潜伏期显著性长于WT小鼠(P<0.05),穿台次数显著性少于WT小鼠(P<0.05);AD小鼠海马各区Olig2+细胞总数均较WT小鼠显著性增加(P<0.05),且与逃避潜伏期呈正相关,与穿台次数呈负相关,而各区CNPase+细胞总数均较WT小鼠显著性减少(P<0.05),且与逃避潜伏期呈负相关;Aβ1-42干预后MOPC的NG2及CNPase的mRNA水平显著性降低(P<0.05),Olig2含量也显著性降低(P<0.05)。结论:APP/PS1转基因小鼠海马内存在成熟OLG丢失、少突胶质细胞系异常增殖;Aβ可能引起OLG损伤和发育异常;保护海马成熟OLG以及调控OLG发育可能是防治AD的有效策略。     

病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB的表达

目的:初步探讨基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65在柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的小鼠病毒性心肌炎心肌中的表达。方法:6周龄近交系雄性BALB/c小鼠随机分为对照组和病毒性心肌炎组,分别给予0.1 m L PBS和10-5.69TCID50/m L CVB3注射,第4天和第10天各随机取8只小鼠处死并取血和心脏标本。Reed-Muench法测定接种病毒滴度;苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色后光镜观察心肌组织病理学改变;应用免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测MMP-2和NF-κB p65在心肌组织表达的分布和含量;用Western blot法检测MMP-2、NF-κB p65和IκBα在心肌组织的表达,用ELISA检测血清TNF-α含量的变化。结果:与对照组相比,免疫组化和Western blot实验结果提示病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB p65的表达显著升高(P0.05);感染组IκBα的表达呈下降趋势(P0.05);ELISA结果提示血清TNF-α含量在感染组显著升高,差异有统计学显著性(P0.05)。结论:病毒性心肌炎小鼠心肌组织中TNF-α、NF-κB p65和MMP-2表达显著上调,可能通过相关机制参与疾病的发生。     

Aspirin Inhibits LPS-Induced Expression of PI3K/Akt,ERK, NF-κB,CX3CL1, and MMPs in Human Bronchial Epithelial Cells

This study focused on the effects of aspirin on lipopolysaccharide (LPS)-induced expression of phosphoinositide 3 kinase (PI3K)/protein kinase B (Akt), extracellular signal-regulated protein kinase (ERK), nuclear factor-κB (NF-κB), CX3CL1, and MMPs in human bronchial epithelial cells. Human bronchial epithelial cells were seeded in six-well plates. After 24 h, the cells were classified into six groups: control blank (CK) group; LPS group; PD98059 (ERK inhibitor) (PD) group, treated with LPS + ERK inhibitor; LY294002(PI3K/Akt inhibitor) (LY) group, treated with LPS + PI3K/Akt inhibitor; Aspirin (Asp) group, treated with LPS + aspirin; and Pyrrolidinedithiocarbamic acid (PDTC) group, treated with LPS + NF-κB inhibitor. After 4-h treatment, the cells were harvested. Western blot analysis was performed to detect the expression of PI3K/Akt, ERK, NF-κB, and CX3CL1. Real-time quantitative PCR (RT-qPCR) was used to determine the gene expression of MMP-7, MMP-9, and MMP-12. Compared to the CK group, expression of PI3K/Akt, ERK, NF-κB, and CX3CL1 was significantly increased in the LPS group (P?<?0.05). When compared to the LPS group, expression of PI3K/Akt, ERK, NF-κB, and CX3CL1 was significantly decreased in the PD group, PDTC group, and Asp group (P?<?0.05). In addition, expression of NF-κB in the LY group was significantly reduced by comparison with the LPS group (P?<?0.05). RT-qPCR: When compared to the LPS group, expression of MMP-7 and MMP-12 was significantly decreased in Asp group (P?<?0.05). Expression of MMP-12 was significantly reduced in LY group (P?<?0.05). LPS-ERK, NF-κB-PI3K/Akt, and CX3CL1 signal pathways exist in human bronchial epithelial cells. The PI3K/Akt inhibitor repressed expression of MMP-12. Aspirin inhibited LPS-induced expression of PI3K, Akt, ERK, NF-κB, CX3CL1, MMP-7, and MMP-12 in human bronchial epithelial cells.     

肿瘤坏死因子α刺激骨髓间充质干细胞表达及分泌肝细胞生长因子

背景：有研究表明,肿瘤坏死因子α可以刺激骨髓间充质干细胞发挥免疫抑制功能,并促进骨髓间充质干细胞表达肝细胞生长因子。 目的：观察肿瘤坏死因子α刺激大鼠骨髓间充质干细胞是否可以促进肝细胞生长因子的表达及分泌。 方法：全骨髓贴壁法分离、纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞,传代至第三四代使用。以100 µg/L肿瘤坏死因子α预刺激骨髓间充质干细胞 5 h后弃去培养基,换上新鲜培养基作为实验组,以正常培养的骨髓间充质干细胞为空白组。采用倒置相差显微镜观察细胞形态;流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞表面标记物CD29、CD34、CD44、CD45的表达;RT-PCR 、Western blot检测细胞肝细胞生长因子mRNA及蛋白表达;ELISA测定细胞上清液中肝细胞生长因子水平。 结果与结论：获得的骨髓间充质干细胞形态均一,呈典型的旋涡样生长。骨髓间充质干细胞表达CD29⁺99.45%,CD34^-97.91%、CD44⁺99.52%、CD45^-98.42%;骨髓间充质干细胞中肝细胞生长因子 mRNA及蛋白与上清液中肝细胞生长因子表达量呈时间依赖性增加,实验组肝细胞生长因子 mRNA及蛋白与上清液中肝细胞生长因子的表达量明显高于空白组(P < 0.01)。说明肿瘤坏死因子α刺激骨髓间充质干细胞可以有效促进肝细胞生长因子的表达及分泌。     

白藜芦醇对TNF-α诱导的离体大鼠肺动脉内皮细胞损伤及MCP-1表达的影响

目的:探讨中药单体白藜芦醇(resveratrol,Res)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的离体大鼠肺动脉内皮细胞(rat pulmonary artery endothelial cells,RPAECs)中单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的作用。方法:采用组织贴块法培养RPAECs,随机分为空白对照组(control组)、溶剂对照组(solvent组)、TNF-α(10μmol/L)组和Res(50μmol/L)+TNF-α组(Res组),每组又分成1、4和8 h三个时点(n=6),在8 h增加TNF-α+C1142(MCP-1特异性中和抗体)组(C1142组)。采用Western blot方法检测RPAECs中MCP-1蛋白表达,real-time PCR方法检测MCP-1 mRNA表达。结果:C1142可显著减少TNF-α诱导的RPAECs凋亡(P0.05)。相同时点solvent组的MCP-1蛋白和control组比较差异无统计学显著性;TNF-α组的MCP-1蛋白及mRNA较control组增高(P0.05);Res组的MCP-1蛋白及mRNA表达较TNF-α组降低(P0.05)。结论:MCP-1参与TNF-α诱导的RPAECs损伤;Res可降低TNF-α诱导的RPAECs中MCP-1表达,从而减少内皮细胞损伤。     

基质细胞衍生因子-1_α/CXCR4/CXCR7轴对骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)受体CXCR4、CXCR7在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中蛋白和mRNA的表达;及SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴对BMSCs迁移作用的可能机制。方法体外培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD44和CD34。应用CXCR4特异性拮抗剂AMD3100及CXCR7中和抗体分别阻断CXCR4及CXCR7,通过Western blotting和RT-PCR分别检测BMSCs蛋白和mRNA的表达变化;Transwell法检测细胞迁移能力。本次实验分为单纯BMSCs组(A)、AMD3100预处理BMSCs组(B)、CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(C)及AMD3100+CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(D)。结果经鉴定第3代大鼠BMSCs中CD29和CD44均呈阳性表达,而CD34表达阴性。BMSCs中CXCR4、CXCR7蛋白和mRNA均有表达。与A组相比,B组及D组CXCR4及CXCR7蛋白表达明显受到抑制(P0.05),C组只有CXCR7蛋白表达降低(P0.05);各组CXCR4 mRNA和CXCR7 mRNA的表达差异均无显著性。SDF-1α可以诱导BMSCs迁移,与0μg/L组相比,10μg/L组和100μg/L组穿膜细胞数均显著增多(P0.01),与10μg/L组相比,100μg/L组穿膜细胞数亦明显增多(P0.01);AMD3100和CXCR7中和抗体均能抑制BMSCs的迁移作用(P0.05),当两者同时作用时,抑制效应更为显著(P0.05)。结论 BMSCs共表达CXCR4、CXCR7蛋白及mRNA;BMSCs的迁移具有SDF-1α浓度依赖性;SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴介导BMSCs的迁移作用,CXCR4受体和CXCR7受体对BMSCs的迁移可能具有协同促进作用。     

GLP-1受体激动剂对肥胖小鼠脂肪组织的脂解作用及机制探讨

目的:探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂艾塞那肽(exendin-4)对肥胖小鼠脂肪组织的作用及机制。方法:8周龄C57BL/6J小鼠高脂喂养12周后随机分为艾塞那肽组和生理盐水对照组,另设正常饮食组。取附睾旁脂肪检测sirtuin 1(SIRT1)、脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及脂联素mRNA的表达。Exendin-4或联合SIRT1激动剂/抑制剂处理3T3-L1脂肪细胞24 h;小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)诱导成脂肪细胞后exendin-4干预24 h;检测SIRT1、ATGL和激素敏感性脂酶(HSL)的蛋白表达水平。结果:与生理盐水对照组相比,艾塞那肽组小鼠附睾旁脂肪量、空腹血糖及血甘油三酯水平降低(均P0.05),体重减轻,血TNF-α水平降低。艾塞那肽干预后,肥胖小鼠脂肪组织SIRT1、ATGL和脂联素mRNA表达明显上调,TNF-αmRNA表达明显下调(P0.05)。Exendin-4剂量依赖性促进3T3-L1脂肪细胞SIRT1、ATGL和HSL脂解相关蛋白的表达。联合SIRT1激动剂后,脂滴数量减少,上述脂解相关蛋白的表达上调。联合SIRT1抑制剂后上述作用减弱。敲除SIRT1后MEF脂肪细胞内脂滴增大,数量增多,exendin-4促进脂解的作用消失。结论:艾塞那肽通过激活SIRT1促进肥胖小鼠脂肪组织脂解作用。     

奥氮平对骨髓间充质干细胞成脂分化的作用及机制

目的探讨第2代抗精神病药物(SGA)奥氮平(olanzapine)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外脂肪分化的影响及其作用机制。方法培养小鼠BMSCs,MTT法检测不同浓度奥氮平对BMSCs增殖的影响;通过油红O染色观察细胞形态,Western blotting检测脂肪分化标志基因蛋白αP2和C/EBPβ的表达,Real-time PCR检测成脂相关基因Leptin、C/EBPα和TNF-α的mRNA表达情况;同时Western blotting检测Akt信号通路上下游相关分子的表达水平及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt特异性阻断剂对小鼠BMSCs脂肪分化的影响。结果 MTT法结果显示,20μmol/L奥氮平对BMSCs的毒性最小;油红O染色可见加入奥氮平的细胞内脂肪滴明显多于对照组;Western blotting结果显示,αP2和C/EBPβ的表达水平较对照组上升了36%(P0.01)和25%(P0.05);Realtime PCR结果显示,Leptin、C/EBPα和TNF-α的表达水平较对照组分别上升68%(P0.001)、79%(P0.01)和60%(P0.01),均具有统计学意义;Western blotting检测结果显示,p-Akt的含量明显高于对照组,磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-3β)的表达随着p-Akt表达的增加逐渐减少;加入PI3K/Akt特异性阻断剂(LY294002)后αP2和C/EBPβ的表达受到抑制,细胞中的脂肪滴也明显减少。结论奥氮平可能通过促使PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化水平升高来促进小鼠BMSCs的脂肪分化。     

NF-κB通路对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中CX3CL1表达的影响

目的观察NF-κB通路对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)中CX3CL1表达的影响。方法用100μM NF-κB拮抗剂(PDTC)刺激体外培养的RA-FLS,用RT-PCR检测刺激不同时间后RA-FLS中CX3CL1 mRNA表达。结果 RA-FLS中表达CX3CL1;PDTC作用18h后,RA-FLS自身CX3CL1 mRNA表达量下降(P0.001)。结论 CX3CL1 mRNA的表达可能受到NF-κB通路的调节。     

造影剂肾病发病机制中炎症反应的探讨*

  目的：通过观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）与核因子κB（NF-κB）在造影剂肾病(CIN)模型大鼠肾组织中的表达,初步探讨CIN发病中是否存在炎症反应机制。方法：将96只雄性SD大鼠随机分成2组：模型组（n=48）和对照组（n=48）,分别从尾静脉注射碘造影剂和生理盐水10 mL/kg。在注射后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、10 d和15 d各处死6只大鼠,留取血液和肾组织,采用HE染色法观察肾脏病理变化,免疫组化和RT-PCR法分别检测肾损伤分子1（KIM-1）、NF-κB、TNF-α蛋白和mRNA表达情况,并进行相关性分析。结果：（1）对照组血清肌酐（SCr）和血尿素氮（BUN）各时点变化不大（P＞0.05）,模型组各时点（除15 d外）SCr和BUN水平明显高于对照组（P＜0.05）;（2）对照组各时点肾小管无明显损伤,病理评分无显著差异（P＞0.05）。模型组的肾小管损伤评分显著高于同一时点的对照组（P＜0.05）;（3）各因子在造膜后6 h后开始大量表达,KIM-1蛋白及mRNA在24 h达高峰,NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA在48 h达高峰,且与对照组对应时点（除15 d外）比较均有显著差异（P＜0.05）;（4）模型组肾小管损伤评分与NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达呈正相关（r=0.843、0.758、0.743和0.707,P＜0.05）;模型组肾组织的NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达与KIM-1蛋白及mRNA表达呈正相关（r=0.863、0.807、0.839和0.855,均P＜0.05）。结论：NF-κB和TNF-α在CIN大鼠肾脏中的表达上调,其表达水平与肾小管损伤程度相关。CIN的发生发展中存在炎症反应机制。     

CX3CR1通过调节Ca2+内流介导神经元凋亡影响缺血性卒中小鼠预后

目的观察脑缺血后趋化因子受体1(CX3CR1)在神经元上的表达变化,并探讨其作用及机制。方法将野生型C57/BL6小鼠和CX3CR1基因敲除小鼠,分别设置对照组(假手术组)和小鼠中动脉永久闭塞(pMCAO)模型,用磁共振成像(MRI)检测30 min后脑缺血范围和24 h后梗死面积;免疫荧光三重染色法检测凋亡;Western blot检测CX3CR1蛋白的表达。在体外,培养原代神经元,建立氧糖剥离(OGD)细胞缺血模型;用MTT法检测细胞存活率;免疫荧光检测神经元CX3CR1的表达;激光共聚焦显微镜观察神经元内Ca^2+浓度变化。结果在野生型小鼠中,与对照组和健侧相比,pMACO后,患侧CX3CR1表达显著升高(P<0.05),且CX3CR1与凋亡蛋白caspase-3在神经元上共表达;与野生型小鼠相比,CX3CR1基因敲除小鼠pMACO 30 min后缺血损伤面积相似,但24 h后CX3CR1基因敲除小鼠梗死面积小于对照组(P<0.05);在体外,原代神经元OGD后CX3CR1表达显著升高(P<0.05),敲除神经元上CX3CR1,可减轻谷氨酸介导的兴奋性损伤,细胞存活率显著上升,同时观察到,敲除CX3CR1可降低谷氨酸介导的Ca^2+内流到神经元的速度和总量。结论缺血可诱导神经元CX3CR1的表达,且神经元CX3CR1可以通过调节Ca^2+内流来介导神经元的凋亡。