间隙连接Cx32mRNA,Cx43mRNA及其蛋白产物在肝细？…

探讨间隙连接基因Ｃｘ３２ｍＲＮＡ、Ｃｘ４３ｍＲＮＡ及其蛋白产物在肝细胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｏｎｍａ，ＨＣＣ）发生的重要意义，方法应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学法，原位杂交和流式细胞仪分析技术，研究６１例ＨＣＣ、１４例正常肝组织以及肝癌细胞系ＨＨＣＣ、ＳＭＭＣ－７７２１、正常肝细胞系ＱＺＧ中，Ｃｘ３２ｍＲＮＡ，Ｃｘ４３ｍＲＮＡ及其蛋白产物的表达规律。结果：Ｃｘ３２蛋白在ＨＣＣⅠ、Ⅱ、Ⅲ     

Cx43基因对近端流出道隔心肌化过程的调控机制

目的:探讨connexin43（Cx43）基因在小鼠近端流出道隔心肌化的作用及其机制。 方法:选用胚胎（ED）11.5 d至出生后1 d的Cx43基因剔除（KO）纯合型（Cx43-/-）、杂合型（Cx43+/-）及野生型（Cx43+/+）C57/BL6小鼠作为研究对象；采用PCR方法鉴定基因型；HE染色观察心脏结构，免疫组化法测定横纹肌肌动蛋白α-SCA、凋亡相关分子active caspase-3及神经嵴细胞的标志物AP-2的表达。 结果:①Cx43-/-小鼠大多出生后24 h内即死亡。大体解剖见明显的右室流出道圆锥部异常膨隆，右心房扩张；组织切片HE染色示右室流出道壁大量异常小梁状组织增生突起，形成多个囊状结构，右室流出道腔明显狭窄，右室腔扩张。Cx43+/-和Cx43+/+心脏无明显异常。②Cx43-/-小鼠近端流出道隔中央区域α-SCA的表达明显滞后。③Active caspase-3组化显示Cx43+/+凋亡细胞主要出现在近端流出道隔，ED12.5至ED15.5均可见到；Cx43+/-凋亡减少，Cx43-/-则仅见很少凋亡细胞。④Cx43-/-流出道AP-2的表达增多，且表达位置异常。 结论:Cx43 KO小鼠以右室流出道异常增生引起的梗阻性畸形为主要特征，该病变过程可能与胚胎期近端流出道隔心肌化迟滞有关，其近端流出道隔细胞凋亡减少和神经嵴细胞表达异常很可能参与了流出道心肌化异常的形成，表明Cx43在近端流出道隔心肌化过程中具有重要作用。     

造血基质细胞在造血重建中的作用

基质(Stroma)一词源于希腊语，意为“床”或“床垫”。造血微环境的基质和造血主质细胞的关系被形象地喻为“土壤和种子”的关系。自70年代初Tentin提出造血诱导微环境(Hematopoietic inductive microenvironment, HIE)的概念[1]和1977年Dexter等成功地首创骨髓细胞体外长期培养体系(Long-term bone marrow cultures, LTBMC)[2]以来，对构成HIE中重要的细胞成分──基质细胞(Stromal cell)一直是国内外学者进行造血调控研究的热点。这方面的工作虽然取得了大量的有价值的研究成果，但有些问题仍需要进一步研究。1 基质细胞的分类、特…     

外源基因在人造血干祖细胞中的转移和表达

应用逆转录病毒载体介导基因转移法将ｎｅｏ~ｒ基因导入人造血干祖细胞，并经体外液体长期培养。结果表明，产重祖病毒细胞ＰＡ３１７／Ｎ２的病毒滴度最高达６．５×１０~５ＣＦＵ／ｍｌ，用ＰＣＲ法从体外培养２、４、６ｗ及加入ｒＩＬ－１、ｒＩＬ－６的悬浮和贴壁的转染细胞中均可扩增出ｎｅｏ~ｒ基因ｃＤ－ＮＡ片段，非同位素化学发光法标记ｎｅｏ~ｒ探针与之杂交显示阳性结果。表明逆转录病毒介导目的基因已有效地转入体外培养的人造血干祖细胞中，并进行表达。     

造血干/祖细胞在基因治疗中的应用

基因治疗进入临床试验后,为了使带有目的基因的细胞在病人体内长期或永久地表达,必须选一种能在体内自我更新和自我维持的永不消亡的细胞,作为目的基因的宿主细胞。本文综述了造血干/祖细胞的特性、体外扩增、定向分化、诱导和造血细胞作为基因导入靶细胞的基因治疗及其临床应用,以及存在的问题、改进措施和应用前景。     

大鼠心脏缺血对间隙连接蛋白Cx43分布的影响

目的：探讨大鼠心脏缺血区心肌间隙连接蛋白43（Connexin 43．Cx43）的分布特征。方法：结扎大鼠冠状动脉前降支造成心肌缺血模型。用免疫组织化学法显示心肌缺血区、边缘带及非缺血区Cx43的分布。结果：缺血中心区和边缘区Cx43表达明显紊乱。缺血中心区心肌细胞端-端相接处的Cx43严重消失．重接排列到细胞侧-侧相接处。边缘区Cx43阳性颗粒开始从细胞端-端处向四周扩散,非缺血区Cx43的表达与止常心肌相同。结论：急性短时间心肌缺血时Cx43已开始大量扩散和重新分布,可能是导致心功能异常的结构基础。     

造血干／祖细胞在基因治疗中的应用

基因治疗进入临床试验后，为了使带有目的基因的细胞在病人体内长期或永久地表达，必须选一种能在体内自我更新和自我维持的永不消亡的细胞，作为目的基因的宿主细胞。本文综述了造血干／祖细胞的特性、体外扩增、定向分化、诱导和造血细胞作为基因导入靶细胞的基因治疗及其临床应用，以及存在的问题、改进措施和应用前景。     

造血干/祖细胞体外扩增的最新研究进展

造血干/祖细胞体外扩增方法的快速发展为造血干/祖细胞广泛应用于临床开辟了广阔的前景,就造血干/祖细胞体外扩增的方法和培养系统的最新进展做一综述。     

SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞移植研究中的应用

严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠是研究人造血干细胞增殖分化的一个理想的体内试验模型 ,近年来脐血造血干 /祖细胞体外扩增的研究成为干细胞移植领域备受关注的课题 ,通过采用有效的体内试验模型来进一步深入了解扩增后脐血造血细胞的移植潜能和造血活性。本文就SCID小鼠在脐血造血干 /祖细胞体外扩增和移植中应用作一综述     

014 SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞移植研究中的应用

严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠是研究人造血干细胞增殖分化的一个理想的体内试验模型,近年来脐血造血干/祖细胞体外扩增的研究成为干细胞移植领域备受关注的课题,通过采用有效的体内试验模型来进一步深入了解扩增后脐血造血细胞的移植潜能和造血活性.本文就SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞体外扩增和移植中应用作一综述.     

TLRs control hematopoiesis during infection

Recent research has shown that (i) Toll‐like receptor (TLR) agonists drive hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) to proliferate and differentiate along the myeloid lineage in vitro, and (ii) direct TLR‐mediated stimulation of HSPCs also promotes macrophage differentiation in vivo following infection. These new insights demonstrate that TLR signaling in HSPCs, in addition to other TLR‐dependent mechanisms, can contribute to HSPC expansion and myeloid differentiation after infection. Evidence is, therefore, mounting that direct TLR‐induced programming of hematopoiesis plays a key role in host defense by rapidly replenishing the innate immune system with the cells needed to deal with pathogens.     

同种异体骨髓间充质干细胞移植上调急性心肌梗死大鼠Cx43的表达

目的研究同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植心肌梗死(MI)大鼠后缝隙连接蛋白43(Cx43)在不同时期的动态变化。方法建立大鼠MI模型。将同种异体MSCs用5-氮胞苷诱导成心肌样细胞并行荧光标记,经二次开胸注射入MI大鼠梗死区和梗死边缘区。各亚组分别于移植后4、8和12周在荧光显微镜下跟踪MSCs移植情况。同时用免疫组化分析Cx43表达与缝隙连接(GJ)分布。结果MSCs体外诱导可分化为自发搏动的心肌样细胞,表达心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)和形成肌丝结构。MSCs移植后可长期存活并在4、8和12周,并有效上调缺血区Cx43的表达,改善GJ分布紊乱状态。在梗死区Cx43无特殊改变。结论MSCs具有分化为心肌样细胞的可塑性,移植后上调MI后缺血区Cx43表达,改善GJ分布紊乱。     

抑制小鼠HL-1心肌细胞桥粒斑蛋白基因表达对缝隙连接蛋白43结构和功能的影响

 目的：采用基因沉默技术抑制小鼠HL-1心肌细胞桥粒斑蛋白（DSP）基因表达以明确DSP与缝隙连接蛋白43(Cx43)的结构和功能关系。方法：用基因沉默技术抑制DSP基因的表达,Western blotting和流式细胞术检测HL-1细胞DSP和Cx43蛋白的表达,用双免疫荧光方法检测DSP与Cx43蛋白的表达与定位情况,并用划痕标记染料示踪技术检测细胞缝隙连接通讯状况。结果：与空白组和对照组相比,siRNA-DSP组的DSP和Cx43蛋白表达量降低（P＜0.05）。免疫荧光检测发现空白组和对照组DSP与Cx43蛋白存在共定位情况,而siRNA-DSP组DSP和Cx43蛋白共定位遭到破坏,Cx43蛋白出现再分布,在细胞内检测到Cx43蛋白,并且划痕标记染料示踪技术检测发现siRNA-DSP组Lucifer yellow通过HL-1细胞缝隙连接的传输功能降低。结论：DSP表达抑制不仅使Cx43出现再分布,而且影响缝隙连接传导功能。     

Altered expression of connexin43 and phosphorylation connexin43 in glioma tumors

In this study, we aim to evaluate the connexin (Cx43) and phosphorylation Cx43 (p-Cx43) expression of human glioma tumors and correlate their expression with degrees of malignancy and proliferation, apoptosis, and migration activity of tumors. Cx43 and p-Cx43 expression were examined by Western blot analysis and immunohistochemical staining. The U251 cell viability was measured by MTT analysis. The apoptosis and migration were also evaluated by flow cytometric analysis and fluoroblok transwell chambers, respectively. We found that the Cx43 expression were significantly downregulated in in malignant glioma (WHO grade III and IV), compared to the malignant glioma (WHO grade I and II) and the p-Cx43 expression levels of malignant glioma (WHO grade III and IV) were significantly increased (P<0.05), compared to the malignant glioma (WHO grade I and II) at immunohistochemical analysis. After treatment of cells with a specific inhibitor of PKC, MAPK, and PTK inhibitors, the cell viability and migration were significantly decreased, while the apoptosis was slightly induced. In conclusion, the Cx43 expression level is inversely correlated with the tumor grade and proliferation and migration activity of tumor. Higher p-Cx43 expression level in high tumor grade suggests that a complex mechanism is involved in the suppression of tumor growth by connexins.     

实验性病毒性心肌炎组织中连接蛋白43和结蛋白的表达

目的 了解病毒性心肌炎时心肌细胞连接蛋白４３和结蛋白表达情况,以探讨病毒性心肌炎时心律失常的机制。方法 应用免疫组织化学ＳＡＢＣ法,对实验性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞连接蛋白４３和结蛋白的表达进行了观察。结果 连接蛋白４３和结蛋白在正常小鼠心肌闰盘中定位分布,均匀存在,后者还在肌节横纹中显示阳性;病毒性心肌炎时两者的表达明显减弱甚至阴性。结论 病毒性心肌炎时受累的心肌细胞连接蛋白４３和结蛋白的表达受     

成血管血液干细胞特化形成相关基因的研究进展

在鼠和人的胚胎发生过程中,血细胞紧邻内皮细胞发育.在卵黄囊血岛、胚内腹侧中胚层-副主动脉层/主动脉性腺-中肾(para aortic splanchnopleura/aorta gonad mesonephros,PAS/AGM)     

连接蛋白43在培养心肌肥大时的表达及其意义

目的研究培养心肌连接蛋白４３（Ｃｘ４３）的表达及与心肌肥大的关系。方法分离培养大鼠心肌细胞,用去甲肾上腺素（ＮＥ）或苯肾上腺素（ＰＥ）诱导心肌肥大,用免疫组化方法观察心肌细胞Ｃｘ４３、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）及ｃｄｃ２表达,以图像分析系统检测Ｃｘ４３表达量的变化。结果在培养中加ＮＥ或ＰＥ的心肌细胞,Ｃｘ４３表达明显低于对照组,而其ＰＣＮＡ的阳性率明显高于对照组。ｃｄｃ２阳性率不变。结论在ＮＥ或ＰＥ作用下,培养大鼠心肌细胞中Ｃｘ４３表达下降,与细胞进入Ｓ期有关,这可能是两者促进心肌肥大的机制     

缝隙连接蛋白43和黄体生成素受体在小鼠卵巢中的表达

目的 观察小鼠卵泡发育过程中缝隙连接蛋白43（Cx43）和黄体生成素受体（LHR）在小鼠卵巢中的表达以及黄体生成素(LH)对卵巢Cx43表达的影响,为这两种分子与卵泡发育的关系提供实验依据。 方法 选择出生后1d、4d、7d、2周、3周、4周、6周、8周龄雌性C57小鼠共8组,每组10只,取卵巢。HE染色观察卵巢形态、卵泡发育并测量颗粒细胞体积分数。免疫组织化学和Western blotting观察卵巢组织中Cx43及LHR的表达,Western blotting检测不同浓度黄体生成素（LH）孵育后对卵巢Cx43表达的影响。 结果 HE染色显示,出生1d小鼠卵巢中见原始卵泡,出生7d卵巢内出现初级卵泡,2周时出现窦前卵泡和少量窦卵泡,3周、4周时,出现较多大的窦卵泡,6～8周时出现黄体。卵泡颗粒细胞体积分数在2周后的卵巢中明显增加。Cx43表达在各阶段卵泡的颗粒细胞胞膜上,LHR表达在卵泡膜细胞、颗粒细胞及卵母细胞胞质中。Cx43和LHR出生后2周卵巢中的表达开始明显增加,并随卵泡发育表达逐渐增强,在3周、4周、6周和8周维持相对较高水平。LH体外干预可增加卵巢组织Cx43的表达。 结论 Cx43和LHR在卵泡发育中发挥重要作用,LH可能通过LHR促进卵巢卵泡颗粒细胞Cx43的表达。     

Digesting the role of bone marrow macrophages on hematopoiesis

Tissue resident macrophages are found in various tissues like Langerhans cells in the skin or alveolar macrophages in the lung, and their main function is to regulate organ homeostasis. They have also been observed in the bone marrow and these cells in particular have been gaining importance in recent years as they are key players in hematopoiesis. However, as the characterization and classification of these putatively different bone marrow resident macrophages is far from established there is a need to generate an overview of tissue resident macrophages of the bone marrow. Here, we will review the current knowledge of bone marrow resident macrophages both in mouse and human. We will discuss the state of the art on the origin of bone marrow macrophages, specialized microenvironments where they reside and their unique characteristics. We will emphasize the two best studied examples of macrophage homeostatic function in the bone marrow, specifically within erythroblastic islands and the hematopoietic stem cell niche. Although increasing evidence shows that bone marrow resident macrophages are indispensable for hematopoietic stem cell function and bone marrow erythroid output, the field of bone marrow macrophages is in its infancy. This field is in dire need for a unified nomenclature to support functional experiments, model systems, and the identification of niches.