丙泊酚对肝缺血再灌注大鼠肺损伤及PI3K/Akt通路的影响

 目的：通过研究丙泊酚对全肝缺血再灌注大鼠肺组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路活化的影响,探讨丙泊酚在全肝缺血再灌注肺损伤中的作用机制。方法：SD 大鼠66只,随机分成4组,假手术组(S组,n=6)、肝缺血再灌注组 (IR 组,n=24)、丙泊酚预处理组 (P 组,n=24)和丙泊酚预处理+PI3K阻断剂 wortmannin 组 (P+W组,n=12),IR 组和 P 组按再灌注 1 h、3 h、6 h和12 h 分为 4 个亚组,P+W 组按再灌注 3 h和6 h分为 2 个亚组。S 组仅解剖肝门,不结扎;IR 组采用结扎肝蒂全肝缺血 30 min、再灌注的方法建立大鼠肝缺血再灌注模型;P 组缺血前 10 min 经尾静脉缓慢注射负荷剂量的丙泊酚 20 mg·kg-1,再以 20 mg·kg-1·h-1的速度尾静脉持续泵注直至处死,余同IR 组;P+W组缺血前经尾静脉注射 PI3K 阻断剂 wortmannin 15 μg·kg-1,余同 P 组。各组于再灌注 1 h、3 h、6 h和12 h时处死大鼠取肺组织。采用 Western  blotting 检测大鼠肺组织中总 Akt（t-Akt）、磷酸化 Akt（p-Akt)及 Bcl-2 蛋白表达水平;用 Annexin V-FITC/PI 法检测肺细胞凋亡率。结果：与 S 组比较,IR 组、P 组和 P+W 组肺组织中 p-Akt和 Bcl-2蛋白表达水平和肺细胞凋亡率升高（P<0.05）;与 IR 组比较,P 组 p-Akt 和 Bcl-2 蛋白表达水平升高,肺细胞凋亡率降低（P<0.05）,P+W 组上述指标表达差异无统计学意义（P>0.05）;与 P 组比较,P+W 组 p-Akt 和 Bcl-2蛋白表达水平下降,肺细胞凋亡率升高（P<0.05）;各组中 t-Akt 蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：丙泊酚可以减轻大鼠肝缺血再灌注诱发的肺损伤,其机制可能与 PI3K/Akt 信号通路的激活进而减轻肺细胞凋亡有关。     

PI3K/Akt通路介导TRPV1抑制离体小鼠心脏缺血再灌注后的细胞凋亡

目的研究瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对离体小鼠心脏缺血/再灌注(I/R)后心肌细胞凋亡的影响及与PI3K/Akt通路的关系。方法 TRPV1基因敲除(TRPV1~(-/-))和野生型(WT)小鼠各54只,均各随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)和LY294002处理组(LY)。建立Langendorff离体心脏灌注模型,检测心功能;灌注结束后,TTC染色法检测心肌梗死面积;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、Akt和p-Akt的蛋白表达水平。结果 I/R后,TRPV1~(-/-)小鼠较WT小鼠的LVDP明显降低(P0.001),LVEDP明显升高(P0.001),同时心肌梗死面积和心肌凋亡细胞明显增加(P0.01),Bcl-2/Bax和p-Akt表达水平下降(P0.001)。LY294002阻断PI3K后,与相应的I/R组相比,WT小鼠心肌梗死面积明显扩大(P0.001),心肌凋亡细胞明显增加(P0.01),Bcl-2/Bax和p-Akt蛋白表达水平降低(P0.001)。结论 TRPV1可能通过PI3K/Akt通路抑制离体小鼠心脏缺血/再灌注所致的心肌细胞凋亡。     

重组人生长停滞特异性蛋白6预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注PI3K/AKT的影响

目的研究生长停滞特异性蛋白6(Gas 6)对Wistar大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响,探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,将大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、Gas6预处理组(Gas6组)、Gas6预处理联合PI3K抑制剂Wortmannin组(Gas6+W组)。按Zea-Longa 5分制法测定各组神经功能评分,干湿重法测定脑组织含水量、TTC染色测定脑梗死面积、Western-blot法检测脑组织p-Akt的蛋白表达。结果 I/R组较Sham组神经功能缺损、脑含水量和梗死区均增加,p-Akt表达上调;Gas6组较I/R组,神经功能缺血损伤、脑含水量和梗死面积显著减少,p-Akt表达进一步上调;而给与PI3K抑制剂后,Gas6+W组与Gas6组比较,神经功能缺损、脑含水量和梗死面积显著增加,p-Akt的表达显著下调。结论 Gas6对于大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与激活PI3K/Akt信号通路相关。     

乙肝病毒X蛋白通过激活JAK2/STAT3信号通路调节肾小管上皮细胞凋亡

 目的：观察乙肝病毒X蛋白(HBx)对肾小管上皮细胞凋亡的作用,并探讨其在乙型病毒肝炎相关性肾炎(HBVGN)发病中的分子机制。方法：将构建好的HBx真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx转染至体外培养的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)中。Western blotting法检测转染后目的蛋白的表达及JAK2/STAT3信号通路的活化。细胞免疫荧光检测STAT3及p-STAT3表达水平。CCK-8法检测细胞增殖活性。Hoechst 33342染色观察细胞的形态学改变。透射电镜观察细胞的超微结构及凋亡。Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：转染目的基因HBx后,p-JAK2及p-STAT3表达水平均显著增加;同时,细胞增殖明显受抑。透射电镜、Hoechst 33342染色及Annexin V/PI双染流式细胞术检测发现HBx促进HK-2细胞凋亡。AG490（JAK2/STAT3信号通路阻断剂）孵育后能够部分阻断JAK2/STAT3信号通路,减少HBx所致细胞凋亡。结论：HBx通过激活JAK2/STAT3信号通路导致肾小管上皮细胞凋亡,可能参与了HBV直接损伤肾组织的致病机制。     

腺苷A2b受体激活减轻小鼠肾缺血再灌注致肺损伤

目的研究腺苷A2b受体激活对肾缺血再灌注(RIR)致肺损伤的保护作用及其机制。方法雄性C57BL/6J小鼠随机分为:对照组(C组),缺血再灌注组(I/R组),缺血再灌注+A2bR激动剂Bay606583组(I/R+Bay组,1 mg/kg Bay术前15 min腹腔注射),缺血再灌注+A2bR激动剂Bay606583+Akt抑制剂LY294002组(I/R+Bay+LY组,1 mg/kg Bay+7.5 mg/kg LY术前15 min腹腔注射)及缺血再灌注+A2bR抑制剂MRS1754组(I/R+MRS组,1 mg/kg MRS术前15 min腹腔注射)。分别取血检测肾功能(血肌酐、血尿素氮);检测肺组织A2bR mRNA表达; Western blot检测肺组织p-Akt和A2bR的蛋白表达;检测各组小鼠肺组织湿重/干重比值(W/D)以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白、TNF-α和IL-6的浓度;观察肺组织病理变化;采取动脉血进行动脉血气分析。结果肾缺血再灌注后血肌酐、血尿素氮升高,A2bR mRNA的表达随时间降低(P0.05),且p-Akt和A2bR的蛋白表达水平显著降低(P0.05)。另外,与对照组相比,再灌注后小鼠肺组织湿重/干重比值(W/D)、肺泡灌洗液蛋白、TNF-α和IL-6浓度明显增加(P0.05),肺病理损伤评分和氧合水平明显变差(P0.05),1 mg/kg Bay606583明显减轻上述损伤并增加p-Akt的表达,然而这一作用在应用Akt抑制剂LY294002后消失。结论腺苷A2b受体激活可能通过PI3K/Akt通路减轻肾缺血再灌注后肺组织损伤并改善氧合状态。     

威灵仙总皂苷抑制佐剂性关节炎大鼠JAK2/STAT3信号通路

目的研究威灵仙总皂苷(TSC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的JAK2/STAT3信号通路的作用机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分为6组,每组10只。除正常组外,采用Freund完全佐剂诱导AA大鼠模型。造模第12天,灌胃给予相应药物,1次/d,连续16 d,观察药物对AA大鼠体质量及足肿胀度的影响;取固定部位踝关节组织,HE染色观察病理学改变;实时荧光定量PCR法测定滑膜细胞中Janus激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)mRNA表达;Western blot法检测磷酸化JAK2及非磷酸化JAK2(p-JAK2、JAK2)、磷酸化STAT3及非磷酸化STAT3(p-STAT3、STAT3)的蛋白表达。结果 TSC可有效缓解AA大鼠体质量减轻及明显抑制AA大鼠足肿胀,明显改变炎细胞浸润,减少血管翳生成,减轻组织增生,有效抑制JAK2、STAT3 mRNA表达及降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的相对表达。结论 TSC降低AA大鼠JAK2、STAT3 mRNA表达并抑制p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3相对表达,抑制JAK2/STAT3信号通路。     

DFG-STYK1/NOK对小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3增殖以及细胞周期G1/S的影响

目的研究新型受体酪氨酸激酶STYK1/NOK加入DFG基序后对小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3增殖和细胞周期G_1/S的影响。方法 SWISS MODEL同源比对STYK1/NOK的二级结构确定DFG加入的位置;用CCK8和MTT法检测瞬时转染pcDNA3.0或pcDNA3.0-DFG-NOK的NIH3T3细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞周期;Western blot检测细胞增殖信号通路蛋白Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、STAT、p-STAT、JAK3、p-JAK3和周期蛋白cyclin D1的表达。结果与瞬时转染pcDNA3.0相比,1)瞬时转染pcDNA3.0-DFG-NOK可抑制NIH3T3细胞增殖;2)DFG-NOK阻碍细胞周期由G_1期进入S期;3)DFG-NOK抑制Erk、STAT1、STAT3和JAK3的磷酸化和周期蛋白cyclin D1表达。结论 DFG-NOK抑制NIH3T3细胞增殖和细胞周期G_1期进入S期。     

黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:采用线栓法构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型,取30只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和黄角颗粒组,并按分组给予相应处理。采用Zea Longa评分法对各组大鼠进行神经功能评分,TTC染色检测各组大鼠脑梗死体积百分比,HE染色观察各组大鼠脑组织病理形态,TUNEL染色法检测各组大鼠脑细胞凋亡率,Western blot检测各组大鼠脑组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠的神经功能缺损程度和神经细胞损伤程度明显加重(P0.05);脑梗死体积百分比和脑细胞凋亡率显著上升(P0.05);脑组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平显著上调(P0.05)。与模型组相比,黄角颗粒组大鼠的神经功能缺损程度和神经细胞损伤程度明显减轻(P0.05);脑梗死体积百分比和脑细胞凋亡率显著下降(P0.05);脑组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平显著下调(P0.05)。结论:黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活相关。     

右美托咪定激活PI3K/Akt信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨右美托咪定在大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及可能机制。方法 采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,随机将大鼠分为假手术组（Sham组）、模型组（MCAO/R组）和右美托咪定处理组（Dex组）;于术后24h对各组大鼠进行神经功能评分和组织病理学的检测;采用TUNEL染色法检测脑细胞的凋亡;采用ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10的水平;Western blot方法检测PI3K和p-Akt的表达。结果 与MCAO/R组相比,DEX能够显著提高脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分,改善组织病理学损伤,显著降低脑细胞的凋亡,显著抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平,促进IL-10的释放,显著上调脑缺血再灌注大鼠脑组织PI3K和p-Akt等蛋白的表达（P<0.05）。结论 右美托咪定改善脑缺血再灌注损伤与激活PI3K/Akt信号通路相关。     

小檗碱减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨小檗碱(BBR)减轻大鼠心肌缺血再灌注(MI/R)损伤的作用及其与JAK2/STAT3信号通路的关系。方法雄性SD大鼠(250只)随机分为7组(n=36):假手术组(sham)、sham+BBR组、sham+AG490(AG,JAK2/STAT3通路抑制剂)组、MI/R+溶剂组(MI/R+V)、MI/R+BBR组、MI/R+BBR+AG组、MI/R+AG组。常规结扎大鼠冠状动脉左前降支行心肌缺血再灌注手术,缺血30 min后再灌注4 h,用Western blot法检测心肌JAK2、STAT3磷酸化水平及心肌凋亡相关蛋白表达,再灌注6 h后检测心肌细胞凋亡率、梗死面积及氧化应激相关指标,再灌注72 h后检测心功能。结果 BBR可显著改善心肌缺血再灌注术后心功能并减轻心肌凋亡及梗死,这种保护作用可被AG阻断(均P0.05)。BBR治疗还可显著提高心肌JAK2及STAT3磷酸化水平,抑制凋亡相关信号分子表达,这种作用也被AG阻断(P0.05)。结论 BBR可显著减轻大鼠MI/R损伤后心肌梗死及凋亡水平,改善心功能,JAK2/STAT3可能介导此作用。     

PI3K/Akt信号通路上调急性肺损伤大鼠肺泡上皮钠通道表达

目的 探讨PI3K/Akt信号通路对急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡上皮钠通道(ENaC)α、β和γ亚基表达的影响.方法 成年SD大鼠随机分为对照组、ALI组(脂多糖)、胰岛素组及渥曼青霉素组,每组5只.观察肺组织病理改变,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测量总肺水含量,RT-PCR和Western blot测定ENaC mRNA和蛋白、p-Akt表达.结果 胰岛素组BALF蛋白含量、髓过氧化物酶(MPO)活性、总肺水含量较ALI组显著减少(P＜0.05),渥曼青霉素组BALF蛋白含量、MPO活性及总肺水含量较胰岛素组显著增加(P＜0.05).ALI组α-、β-和γ-ENaC蛋白表达显著低于对照组(0.33 ±0.06 vs 1.27 ±0.07,0.18±0.04 vs 0.72±0.04,0.37±0.04 vs0.69±0.05)(P＜0.05).胰岛素组蛋白表达α-ENaC(2.19 ±0.04)、β-ENaC(1.18 ±0.07)和γ-ENaC(1.18 ±0.08)显著高于ALI组(P＜0.05).渥曼青霉素组蛋白表达α-ENaC(0.86 ±0.09)、β-ENaC (0.58±0.05)和γ-ENaC (0.59±0.02)显著低于胰岛素组(P＜ 0.05).胰岛素组ENaC mRNA和p-Akt较ALI组显著升高(P＜0.05).渥曼青霉素组ENaC mRNA和p-Akt较胰岛素组显著降低(P＜0.05).结论 激活H3K/Akt通路上调3种ENaC亚基表达,从而清除肺水肿液.     

Propofol pretreatment attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats by activating the phosphoinositide-3-kinase/Akt pathway

The aim of this study was to investigate the effect of propofol pretreatment on lipopolysaccharide (LPS)-induced acute lung injury (ALI) and the role of the phosphoinositide-3-kinase/protein kinase B (PI3K/Akt) pathway in this procedure. Survival was determined 48 h after LPS injection. At 1 h after LPS challenge, the lung wet- to dry-weight ratio was examined, and concentrations of protein, tumor necrosis factor-α (TNF-α), and interleukin-6 (IL-6) in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were determined using the bicinchoninic acid method or ELISA. Lung injury was assayed via lung histological examination. PI3K and p-Akt expression levels in the lung tissue were determined by Western blotting. Propofol pretreatment prolonged survival, decreased the concentrations of protein, TNF-α, and IL-6 in BALF, attenuated ALI, and increased PI3K and p-Akt expression in the lung tissue of LPS-challenged rats, whereas treatment with wortmannin, a PI3K/Akt pathway specific inhibitor, blunted this effect. Our study indicates that propofol pretreatment attenuated LPS-induced ALI, partly by activation of the PI3K/Akt pathway.     

异丙酚通过抑制JAK/STAT通路减轻肝冷缺血再灌注大鼠肾损伤

目的:探讨JAK/STAT信号通路在异丙酚减轻大鼠肝冷缺血再灌注后肾损伤中的作用。方法:SD大鼠随机分为4组(n=8):假手术组(sham组);肝冷缺血再灌注模型组(I/R组);异丙酚组(Pro组),于再灌注前5 min经右侧股静脉给予异丙酚20 mg·kg~(-1)·h~(-1)持续泵注30 min;JAK2抑制剂AG490组(AG490组),于建立模型前30 min腹腔注射AG490 10 mg/kg。再灌注6 h后处死大鼠,采集血样和肾组织标本,检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;观察肾组织的病理学改变,并进行肾小管损伤评分;检测肾组织细胞凋亡并计算凋亡指数(AI);检测p-JAK2、p-STAT_1和p-STAT_3的蛋白水平。结果:与sham组比较,I/R组血清的Cr和BUN浓度、肾组织的MDA含量、肾小管损伤评分及AI均明显升高,SOD活性降低,p-JAK2、p-STAT_1和p-STAT_3的蛋白水平显著上调(P0.05)。与I/R组相比,Pro组和AG490组的血清BUN和Cr浓度、肾组织的MDA含量、AI和肾小管损伤评分降低,SOD活性升高,p-JAK2、p-STAT_1和p-STAT_3蛋白水平显著下调(P0.05)。结论:异丙酚可减轻肝冷缺血再灌注后肾损伤,其机制可能与抑制JAK/STAT信号通路激活有关。     

HIPK2基因对缺氧复氧诱导的NRK-52E肾小管上皮细胞活力和凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)对缺氧复氧(H/R)诱导的NRK-52E肾小管上皮细胞活力和凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:通过Lipofectamine~(TM)2000将靶向HIPK2基因的小干扰RNA(siRNA)转染NRK-52E细胞,并设置正常对照组(control组)和阴性对照组(HIPK2-NC组),Western blot法检测转染48 h的效率;细胞经H/R处理后,通过CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和Ca~(2+)荧光强度;Western blot法检测Ki67、cleaved caspase-3、caspase-12、Bcl-2、Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平。结果:靶向HIPK2的siRNA转染NRK-52E细胞后,HIPK2的蛋白表达显著低于control组(P0.05)。与control组比较,H/R组的细胞活力及Ki67和Bcl-2的蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率、Ca~(2+)荧光强度值及cleaved caspase-3、caspase-12、Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平均显著升高(P0.05);与H/R组比较,HIPK2-siRNA+H/R组的细胞活力及Ki67和Bcl-2的蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率、Ca~(2+)荧光强度值及cleaved caspase-3、caspase-12、Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平均显著降低(P0.05)。结论:抑制HIPK2基因表达可促进H/R诱导的NRK-52E肾小管上皮细胞生长,降低凋亡率,其机制可能与下调JAK2/STAT3信号通路相关蛋白水平有关。     

胰岛素样生长因子2通过磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路调控人卵巢颗粒细胞增殖的机制

目的 检测胰岛素样生长因子2（IGF2）对人卵巢颗粒细胞（KGN细胞）增殖的调控作用及作用机制。 方法 将体外培养的KGN细胞,分不同浓度IGF2处理组（对照组和25 μg/L、50 μg/L、100 μg/L IGF2组)和磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路干预组（以LY294002干预处理将细胞分对照组、100μg/L IGF2组、LY294002组和IGF2+LY294002组）。采用MTS和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测IGF2对KGN细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞培养液上清中雌激素、孕激素的含量,Western blotting法检测各组胰岛素样生长因子受体1（IGF1R）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化的蛋白激酶B（p-Akt）及CYP19A1蛋白表达。 结果 随着IGF2的浓度梯度增高,KGN细胞的增殖率及雌激素、孕激素的分泌量逐渐升高,以 100 μg/L IGF2处理组的细胞增殖率和激素水平最高 (P<0.01),而抑制PI3K/Akt信号通路,细胞增殖率和激素的分泌量均明显降低(P<0.01);Western blotting结果显示,IGF1R、p-Akt及CYP19A1 蛋白表达水平随着IGF2的浓度梯度逐渐升高(P<0.05),而干预PI3K/Akt信号通路可影响上述蛋白的表达,与对照组相比,IGF2组和IGF2+ LY294002组IGF1R及p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,CYP19A1在IGF2组明显升高（P<0.01）,LY294002组p-Akt及 CYP19A1蛋白明显降低（P<0.05）,IGF1R的表达差异无统计学意义。与IGF2组相比,IGF2+LY294002组p-Akt及CYP19A1蛋白表达降低（P<0.01）,IGF1R的表达差异无统计学意义,LY294002组p-Akt 及CYP19A1蛋白表达量均显著降低（P<0.01）。 结论 IGF2 可能由IGF1R介导通过PI3K/Akt 信号通路促进人卵巢颗粒细胞的增殖及分泌功能。     

PI3K/Akt信号通路在脓毒症肾脏损伤诱导的自噬中的调节作用*

 目的：研究脓毒症造成肾脏损伤时的自噬情况以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调节作用。方法：对大鼠盲肠进行结扎与穿刺（CLP）,对肾脏组织切片进行HE染色,并测定血清尿素氮和肌酐。通过Western blotting定量分析CLP大鼠肾脏损伤发生后不同时点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3（LC3）Ⅰ/Ⅱ、beclin-1和Akt蛋白磷酸化的表达情况;体外用LPS诱导人近端肾小管上皮细胞株HK-2发生自噬,检测不同浓度LPS和不同刺激时间自噬相关分子LC3Ⅰ/Ⅱ和Akt蛋白磷酸化的表达情况;进一步使用PI3K抑制剂、Akt抑制剂和LPS刺激HK-2细胞观察自噬相关蛋白的表达情况及细胞的凋亡水平。结果：同对照组相比,CLP大鼠显微镜下可见肾损伤的典型病理改变,血清尿素氮和肌酐均有上升。CLP肾脏损伤发生后,自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ、beclin-1含量及Akt磷酸化水平均有上升。LPS刺激HK-2细胞后,随着刺激浓度的增加,p-Akt(308)表达量逐渐提高,而LC3Ⅰ/Ⅱ及p-Akt(472)的表达量在10 mg/L LPS刺激组最高。随着刺激时间的延长,p-Akt(308)表达量逐渐提高;LC3Ⅰ/Ⅱ表达量同p-Akt(472)在刺激8 h时最高;使用PI3K抑制剂及Akt抑制剂后,LPS诱导的LC3表达显著下调,HK-2细胞凋亡明显增加。结论：CLP肾脏损伤发生时可以诱导自噬发生, PI3K／Akt信号通路在其中发挥重要调节作用。     

ROCK通过抑制PI3K/Akt通路促进高糖诱导的心肌细胞凋亡

目的:探讨Rho相关卷曲螺旋激酶(ROCK)是否通过调控PI3K/Akt信号通路参与高糖诱导的原代心肌细胞凋亡。方法:培养原代Wistar乳鼠心肌细胞,用α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)免疫组化法进行鉴定;建立心肌细胞高糖模型,采用5.5、33和40 mmol/L葡萄糖作用于细胞48 h。采用MTT法检测细胞活力;RT-qPCR检测各组心肌细胞中ROCK1和ROCK2的表达水平;流式细胞术检测各组心肌细胞的凋亡水平;Western blot检测ROCK1、ROCK2、cleaved caspase-3、Bcl-2、PI3K、Akt和p-Akt的蛋白水平;为了证实ROCKs对PI3K/Akt信号通路的调控作用,将细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖处理细胞)和高糖加Y27632(ROCK抑制剂)组,Western blot检测ROCK1、ROCK2、PI3K、Akt和p-Akt的蛋白水平。结果:高糖培养48 h后,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞相对活力分别为(79.71±2.43)%和(68.41±7.49)%,与对照组相比显著降低(P<0.05)。各组细胞培养48 h后,33和40 mmol/L葡萄糖组ROCK1和ROCK2的mRNA相对表达量较对照组显著增加(P<0.05)。与对照组相比,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率均显著增加(P<0.05)。与对照组相比,33和40 mmol/L葡萄糖组的ROCK1和ROCK2蛋白表达增高(P<0.05),caspase-3活化片段的蛋白水平增加(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达降低(P<0.05)。3组间心肌细胞PI3K与Akt蛋白水平的差异无统计学显著性,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞p-Akt蛋白的水平较对照组降低(P<0.05)。与高糖组相比,高糖加Y27632组的ROCK1和ROCK2表达被抑制;3组间心肌细胞PI3K和Akt的蛋白水平差异无统计学显著性;与对照组相比,高糖组的p-Akt蛋白水平降低(P<0.05),高糖加Y27632组的p-Akt蛋白水平显著增加(P<0.05)。结论:高糖环境下,ROCK可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,降低了p-Akt水平,从而促使心肌细胞凋亡的发生。     

Akt/GSK-3β/Snail通路在TGF-β_1诱导A549/DDP细胞上皮间质转化中的作用

目的:通过观察转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导前后Akt/GSK-3β/Snail信号通路相关分子的表达情况,探讨A549/DDP细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的分子机制。方法:TGF-β_1(5μg/L)作用48 h,观察A549/DDP细胞的形态变化,并测定EMT标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达情况,评估TGF-β_1是否成功诱导A549/DDP细胞发生EMT。进一步将A549/DDP细胞分为TGF-β_1(+)组、TGF-β_1(-)组和LY294002组,应用Western blot法检测各组Akt/GSK-3β/Snail通路相关分子Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平。结果:形态学观察可见TGF-β_1(+)组的细胞变得更加狭长,呈纺锤形,细胞间较为疏散,形态与间充质细胞相似。与TGF-β_1(-)组比较,TGF-β_1(+)组E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin蛋白表达上调(P0.05);各组间Akt和GSK-3β的蛋白表达水平并无明显差别,TGF-β_1(+)组的p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail蛋白水平较TGF-β_1(-)组明显增强(P0.05);PI3K抑制剂LY294002与TGF-β_1同时刺激细胞后,p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平较TGF-β_1(+)组下调(P0.05)。结论:TGF-β_1干预Akt/GSK-3β/Snail信号通路,促进Akt和GSK-3β的磷酸化,提高Snail的表达水平,诱导A549/DDP细胞发生EMT。