c-Myc 调控PIK3R3 抑制黑色素瘤B16-F10 细胞的迁移和侵袭

目的:探讨c-Myc 调控PIK3R3 对黑色素瘤B16-10 细胞的迁移和侵袭的影响。方法:运用免疫组化检测PIK3R3 在正常皮肤组织和黑色素瘤组织的表达;检测慢病毒(LV3-c-Myc 和LV3-PIK3R3)对c-Myc 和PIK3R3 基因的沉默效率;使用EdU 增殖实验检测沉默c-Myc 和PIK3R3 后黑色素瘤细胞株B16-F10 的增殖情况;Transwell 侵袭实验检测c-Myc 和PIK3R3 的表达对黑色素瘤细胞B16-F10 的侵袭能力的影响;划痕实验检测c鄄Myc 和PIK3R3 的表达对黑色素瘤细胞B16-F10迁移能力的影响;qPCR 检测沉默c-Myc 和PIK3R3 后miR-199a 的表达;qPCR 检测转染miR-199a mimics 和miR-199a inhibitor后c-Myc 和PIK3R3 的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-199a 对c-Myc 和PIK3R3 转录活性的影响。结果:和正常皮肤组织比较,PIK3R3 在黑色素瘤组织中表达明显增加;沉默c-Myc 和PIK3R3 基因后,黑色素瘤细胞株B16-F10 的增殖、侵袭和转移能力明显降低;沉默c-Myc 和PIK3R3 基因后,miR-199a 表达上调;转染miR-199a mimics 后,c-Myc 和PIK3R3 表达降低;转染miR-199a inhibitor 后,c-Myc 和PIK3R3 表达上调;双荧光素酶报告基因系统检测结果示,miR-199a 可以直接调控c-Myc和PIK3R3 的转录活性。结论:c-Myc 可以通过miR-199a 调控PIK3R3 的表达,从而促进黑色素瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

HOTAIR-siRNA通过miR-21对肝癌侵袭、转移的影响

目的探讨长链非编码HOTAIR靶控miR-21对肝癌细胞侵袭的影响及相关机制。方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测30例肝癌组织中miR-21的表达,及其与临床病理特征的相关性;HOTAIR的siRNA转染人肝癌HepG2细胞,采用Transwell小室法检测HepG2细胞的侵袭活性;应用qRT-PCR法检测HepG2细胞中miR-21的表达;采用Western blot法检测MMP-2蛋白的表达,并分析其与miR-21的相关性。结果 qRT-PCR检测发现miR-21在肝癌组织中的表达水平均明显高于癌旁组织(P0.05);miR-21表达与肿瘤恶性程度、分化程度及侵袭转移均呈正相关;与患者AFP、肿瘤大小及肿瘤数目无关。沉默HOTAIR基因后,HepG2细胞侵袭能力下降,miR-21基因和MMP-2蛋白的表达均下调且两者呈正相关。结论 miR-21在肝癌组织中呈高表达,并与肝癌恶性程度、肿瘤分化、门静脉癌栓及侵袭转移有关;HOTAIR可能通过靶控miR-21的表达抑制肝癌细胞的侵袭与转移。     

曲古霉素A抑制肝癌细胞的糖酵解

目的研究表观遗传药物组蛋白去乙酰化抑制剂曲古霉素A(TSA)对miR-34家族(miR-34a/b/c)在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞糖酵解的分子机制。方法在肝癌细胞系中分别转染miR-34模拟物或相应阴性对照,用real-time PCR法检测miR-34a/b/c的表达以及糖酵解途径关键酶的表达;在肝癌细胞中分别转染miR-34b模拟物、相应阴性对照,或用TSA、DMSO处理肝癌细胞,用乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒分析miR-34b及TSA对肝癌细胞Hep G2、PLC/PRF/5糖酵解途径的影响;设计拯救实验在Hep G2细胞中研究TSA、miR-34b与肝癌细胞糖酵解调控的关系。结果 TSA可以诱导Hep G2、PLC/PRF/5肝癌细胞内源性miR-34b的表达上调(P0.01);过表达miR-34b可以抑制糖酵解关键酶LDH-A的表达(P0.05);miR-34 b可以抑制含有LDH-A 3'非翻译区的报告基因活性;敲低miR-34 b的表达可以降低TSA对肝癌细胞Hep G2糖酵解途径的抑制作用。结论 TSA通过诱导miR-34 b表达上调发挥抑制肝癌细胞的代谢转换。     

miR-100靶基因BAZ2A在肝癌迁移侵袭中的机制研究

目的:探讨miR-100和BAZ2A基因在肝癌细胞中的表达及对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。方法:以qRT-PCR检测和Western blot分析miR-100与BAZ2A在肝癌细胞中的表达情况;以miR-100 mimics转染肝癌细胞SMMC-7721,检测miR-100对BAZ2A表达的影响,细胞划痕实验和Transwell小室实验验证miR-100对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果:miR-100在肝癌细胞中呈低表达,BAZ2A表达与其呈负相关,上调miR-100可以降低BAZ2A的表达,抑制肝癌细胞的迁移侵袭能力。结论:miR-100可以通过抑制BAZ2A的表达来降低肝癌细胞的迁移侵袭能力,达到抗肿瘤的效果。     

水通道蛋白9表达水平影响HepG2肝癌细胞的生物学行为及对As_2O_3的敏感性

目的研究水通道蛋白9(AQP9)表达水平对三氧化二砷(As2O3)诱导Hep G2肝癌细胞凋亡及对其生物学行为的影响。方法采用MTT法筛选As2O3对肝癌细胞Hep G2增殖抑制作用;将重组质粒p EGFP-N1-AQP9和pshRNA-AQP9转染肝癌细胞,反转录PCR检测AQP9 mRNA的表达,Western blot法检测AQP9蛋白表达;将As2O3加入转染后及未处理的Hep G2细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术分析周期和凋亡情况;TranswellTM实验验证迁移侵袭能力的改变;酶标仪检测caspase-3活性。结果重组质粒对AQP9有明显的过表达及抑制表达作用,转染p EGFP-N1-AQP9组肝癌细胞的增殖抑制作用明显大于单纯As2O3处理组,侵袭及迁移能力显著减弱,细胞周期停滞在G0/G1期,凋亡明显多于单纯As2O3处理组,活化的caspase-3活性最高。转染pshRNA-AQP9组细胞的增殖抑制作用及caspase-3活性小于单纯As2O3处理组,侵袭迁移能力强于单纯As2O3处理组,细胞周期停滞在G0/G1期的数量及凋亡率较少。结论调节AQP9的表达影响Hep G2肝癌细胞的生物学行为并影响As2O3对Hep G2肝癌细胞的敏感性。     

Uba-2在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭转移能力的影响

目的探讨Uba-2在肝癌组织中的差异表达以及过表达和低表达时其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法 qRTPCR法检测肝癌组织中Uba-2 mRNA的表达;将Uba-2的过表达载体和siRNA表达载体转染至肝癌细胞Hep G2后,MTS实验检测Uba-2对肝癌细胞增殖能力的影响;细胞迁移/侵袭实验检测其对肝癌细胞侵袭转移能力的影响;Western blot法检测肝癌细胞Hep G2中TGF-β1~3及VEGF、Snail蛋白的表达。结果 Uba-2在肝癌组织中呈高表达,与癌旁肝组织中的表达差异有显著性(P0.01),qRT-PCR法检测Uba-2在Hep G2细胞中过表达或低表达;细胞增殖实验数据显示Uba-2表达水平与肝癌细胞Hep G2的增殖能力相关,siRNA干扰沉默Hep G2细胞中Uba-2的表达会抑制其增殖生长,细胞迁移/侵袭实验数据显示Uba-2过表达能促进肝癌细胞Hep G2的侵袭、转移能力,且与阴性对照组细胞相比差异有统计学意义;Western blot结果显示Uba-2的异常表达影响TGF-β2及VEGF、Snail蛋白表达水平。结论 Uba-2基因在肝癌组织中的高表达可能具有促进肝癌细胞增殖及侵袭转移的作用。     

miR-483-5p通过上调IGF2基因转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭

目的:探讨miR-483-5p对人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因P3启动子驱动的m RNA(P3 m RNA)表达的影响及其在肝细胞癌发生发展中的作用。方法:(1)采用real-time PCR检测人肝癌细胞株Huh7、Hep3B、Bel-7402、Hep G2和SMMC-7721,人正常肝细胞株HL-7702,83例人肝细胞癌组织和配对的癌旁组织,22例正常肝组织中miR-483-5p和P3 m RNA的表达水平,并应用Pearson相关分析评估P3 m RNA与miR-483-5p表达水平之间的关系。(2)将IGF2基因P3 m RNA的5’端非翻译区(5’UTR)克隆入p GL3启动子载体,构建P3 m RNA 5’UTR野生型(p GL3-P3-5’UTR-WT)及P3 m RNA 5’UTR突变型(p GL3-P3-5’UTR-MUT)重组萤光素酶报告质粒,将其分别与miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control共转染He La、293T及Huh7细胞,采用双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性。(3)分别将miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control转染Huh7及Hep3B肝癌细胞,应用real-time PCR检测这2种肝癌细胞P3 m RNA表达水平的变化。(4)应用real-time PCR检测肝癌细胞Huh7及Hep3B的细胞核和细胞质中miR-483-5p的表达水平;应用核连缀实验(nuclear run-on assay)分析miR-483-5p对P3 m RNA转录的影响;应用RNA稳定性实验分析miR-483-5p对P3 m RNA稳定性影响。(5)应用体外细胞功能实验研究miR-483-5p对Huh7肝癌细胞生长、凋亡、迁移与侵袭能力的影响。结果:(1)5种肝癌细胞株miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于正常肝细胞株HL-7702(P0.01),肝细胞癌组织中miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于配对的癌旁组织及正常肝组织(P0.01);线性相关分析显示,在5种肝癌细胞株及肝细胞癌组织中,P3 m RNA表达水平均与miR-483-5p水平呈正相关。(2)萤光素酶实验显示,miR-483-5p与P3m RNA 5’UTR的同源位点互补结合可促进P3 m RNA的表达。(3)瞬时转染实验显示,过表达miR-483-5p呈剂量依赖性促进Hep3B和Huh7肝癌细胞P3 m RNA表达水平的增高。(4)miR-483-5p表达实验显示,成熟miR-483-5p存在于肝癌细胞Hep3B和Huh7的细胞质和细胞核中;核连缀实验显示,miR-483-5p诱导Huh7肝癌细胞核中新生P3 m RNA转录;RNA稳定性实验表明,miR-483-5p不改变Huh7肝癌细胞P3 m RNA稳定性。(5)体外细胞功能实验显示,miR-483-5p促进Huh7肝癌细胞增殖,抑制其凋亡,并增强迁移与侵袭能力。结论:miR-483-5p高表达可部分通过上调IGF2基因P3 m RNA转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭,进而参与肝细胞癌发生。     

miR-509靶向Rac1调节人肝癌LM3细胞侵袭和迁移及裸鼠模型的存活

目的:探究微小RNA-509(miR-509)对人肝癌细胞生长、侵袭、迁移及荷瘤裸鼠存活的作用及其作用机制。方法:将miR-509模拟物(miR-509 mimic)和pcDNA Ras相关的C3肉毒毒素底物1(pcDNA Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, pcRac1)转染人肝癌LM3细胞,Western blot检测Rac1的表达;萤光素酶报告基因实验证明miR-509和Rac1的靶向关系;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;采用皮下注射LM3细胞的方法建立肝癌裸鼠移植瘤模型,检测裸鼠存活率,Western blot检测肿瘤组织Rac1的表达。结果:miR-509 mimic能明显抑制LM3细胞Rac1的表达(P0.05),pcRac1能明显减弱miR-509 mimic对Rac1表达的抑制作用(P0.05);miR-509 mimic还能显著减弱Rac1野生质粒的萤光素酶活性(P0.05);同时,miR-509 mimic可减少侵袭细胞数,抑制肝癌细胞迁移(P0.05)。此外,miR-509过表达还能升高肝癌移植瘤模型小鼠存活率(P0.05),降低肿瘤组织Rac1的蛋白表达水平(P0.01)。结论:miR-509能通过靶向抑制Rac1的表达而抑制肝癌细胞侵袭和迁移,并促进肝癌模型小鼠存活。     

miR-485-5p靶向作用于SOX5抑制肝癌细胞Hep3B的活力及侵袭和迁移能力

目的:研究微小RNA-485-5p(miR-485-5p)对肝癌细胞的活力及迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法:以正常肝细胞THLE-3为对照,采用RT-qPCR检测肝癌细胞中性别决定区Y框蛋白5(SOX5)mRNA和miR-485-5p的表达,Western blot检测SOX5、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达水平,MTT法检测Hep3B细胞的活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,双萤光素酶报告基因系统验证细胞中miR-485-5p与SOX5的调控关系。结果:与对照组相比,在肝癌细胞Hep3B、Huh7和HCCLM3中miR-485-5p的表达水平显著降低(P<0.05),SOX5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);过表达miR-485-5p可抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力(P<0.05);miR-485-5p靶向调控SOX5的表达,敲减SOX5的表达也可抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力;过表达SOX5可部分逆转过表达miR-485-5p对Hep3B细胞活力及迁移和侵袭能力的抑制作用(P<0.05)。结论:miR-485-5p通过靶向调控SOX5基因抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力,有望成为肝癌诊断和治疗的潜在分子靶点。     

miR-133a-3p 通过抑制氧化还原因子1 抑制肝癌细胞恶性生物学行为

目的:通过多种实验途径探讨miR-133a-3p通过调节氧化还原因子1(Ref-1)对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:收集2017年2月～2018年12月来本院就诊的肝癌手术患者的癌组织和癌旁相邻正常组织标本,用qRT-PCR检测miR-133a-3p在癌组织和癌旁相邻正常组织中以及在肝癌细胞系HepG2、Huh-7、SK-Hep1、SMMC-7721和肝正常细胞Hep-3B中的表达;构建miR-133a-3p-mimics(miR-mimics组、miR-NC转染质粒组和正常对照组(Control),qRT-PCR检测转染前后miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验检测HepG2细胞转染前后增殖能力变化;细胞划痕和Transwell实验分别检测转染前后HepG2细胞的迁移和侵袭能力变化;RNA转录组测序检测HepG2细胞转染前后转录组RNA表达差异并作通路富集分析;qRT-PCR检测筛选RNA-seq中RNA表达差异较大的基因;qRT-PCR和Western blot检测Ref-1在HepG2细胞转染前后中的表达。免疫组化和qRT-PCR分别检测Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中表达;最后HepG2细胞同时转染了miR-mimics和Ref-1 miR-inhibitors,进行联合干预,随后CCK-8、细胞划痕和Transwell分别检测了联合干预后细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。结果:miR-133a-3p在肝癌患者癌组织中的表达显著低于癌旁组织,同时其在肝癌细胞HepG2中的表达最低;qRT-PCR结果表明miR-mimics可有效促进miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示miR-133a-3p过表达后可以显著抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为;RNA-seq结果显示HepG2转染前后Ref-1的表达差异最大;qRT-PCR和Western blot结果显示HepG2转染成功后,Ref-1表达随miR-133a-3p的过表达而降低。免疫组化和qRT-PCR结果显示Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达均显著高于阴性对照组;联合干预后HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学抑制作用更加强烈。结论:miR-133a-3p可能通过抑制Ref-1表达从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。     

miR-188-3p靶向YAP1抑制肝细胞癌的侵袭和迁移

目的 探究miR-188-3p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其抑制HCC细胞侵袭和迁移的分子机制.方法 利用RT-qPCR检测miR-188-3p在人HCC组织和细胞系中的表达情况,进一步分析miR-188-3p表达在HCC中的临床价值;利用Western印迹检测转染m...     

长链非编码MALAT-1 调控miR-205 的表达影响非小细胞肺癌细胞的生长和迁移

目的:探讨在非小细胞肺癌中,LncRNA MALAT-1 与miR-205 的相互关系,以及影响肺癌细胞生物学行为的机制。方法:qPCR 检测不同非小细胞肺癌中LncRNA MALAT-1 的表达情况;双荧光素酶报告基因检测MALAT-1 与miR-205的相互作用;Transwell 侵袭实验和划痕实验检测抑制MALAT-1 后肺癌细胞侵袭能力的变化,以及抑制miR-205 的表达后肺癌细胞迁移和侵袭能力的恢复情况;裸鼠皮下成瘤检测抑制LncRNA MALAT-1 后肺癌细胞体外成瘤体积和质量变化。结果:与其他肺癌细胞株相比,A549 细胞中MALAT-1 表达最高,miR-205 的表达水平最低;双荧光素酶实验证实MALAT-1 能与miR-205 的3忆UTR 特异性结合,可以调控miR-205 的表达与活性;抑制MALAT-1 的表达后可以降低肺癌细胞的迁移和侵袭能力;抑制miR-205 的表达水平过后,肺癌细胞的迁移和侵袭能力相对增强;抑制MALAT-1 的表达后,荷瘤小鼠的肿瘤体积和重量都明显减小。结论:MALAT-1 可以调控miR-205 的表达影响肺癌细胞A549 的侵袭和迁移能力。     

长链非编码RNA PVT1调控miR-551通过Wnt信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA PVT1在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及机制。方法:q PCR检测卵巢癌和正常卵巢组织及不同卵巢癌细胞中PVT1的表达情况;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的变化;双萤光素酶报告基因检测PVT1与微小RNA(miR)-551的相互作用;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后miR-551-inhibitor对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测沉默PVT1后Wnt信号通路相关蛋白的表达情况。裸鼠皮下成瘤实验检测沉默PVT1对卵巢癌成瘤重量及体积的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢瘤组织中PVT1表达明显增高(P0.05);卵巢癌细胞株ES-2中PVT1表达水平最高(P0.05);沉默PVT1可以抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;PVT1能与miR-551的位点特异性结合;沉默PVT1后,miR-551-inhibitor可以促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;沉默PVT1后Wnt信号通路蛋白的表达相应下调;与阴性对照组相比,PVT1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小(P0.05)。结论:PVT1在卵巢癌发生发展过程中起重要作用,它可以靶向调节miR-551,通过Wnt信号通路调控卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-153靶向PRDM2基因并通过JAK/STAT信号通路影响膀胱癌的侵袭和迁移

目的:研究微小RNA(miR)-153是否靶向正性调控域锌指蛋白2(PRDM2)基因并通过调控JAK/STAT信号通路影响膀胱癌细胞的侵袭和迁移。方法:运用q PCR检测miR-153在膀胱癌组织中的表达;运用免疫组化检测PRDM2在正常组织和膀胱癌组织中的表达;Western blot检测不同膀胱癌细胞株中PRDM2的表达情况;双萤光素酶报告基因系统检测miR-153对PRDM2转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4迁移能力的影响;Western blot实验检测过表达miR-153后JAK/STAT信号通路蛋白的水平。结果:和正常组织比较,PRDM2蛋白在膀胱癌中表达较高(P0.05);miR-153的表达水平在膀胱癌组织中较低(P0.05);双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-153可以调控PRDM2的表达水平;过表达miR-153后,膀胱癌细胞株RT4的侵袭和迁移能力明显降低,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平下调。结论:miR-153靶向PRDM2,并通过JAK/STAT信号通路调控膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-210 调控Mex3B 蛋白对肺癌细胞侵袭和增殖的影响

目的:探讨miR-210 和Mex3B 蛋白对肺癌细胞侵袭和增殖能力的影响。方法:运用qPCR 检测miR-210 在正常肺组织和癌旁组织中的表达情况;运用qPCR 检测Mex3B 在肺癌组织、癌旁组织中的表达;qPCR 检测miR-210 在不同肺癌细胞株中(A549、H1299、H1650 和H358)的表达水平;双荧光素酶报告基因系统检测miR-210 对Mex3B 转录的影响;细胞活性实验检测miR-210 的表达对肺癌细胞活性的影响;平板克隆实验检测miR-210 的表达对肺癌细胞A549 的增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-210 的表达对肺癌细胞株A549 的侵袭能力的影响。结果:和癌旁组织比较,miR-210 在肺癌组织中表达明显增高,和癌旁组织比较,Mex3B 在肺癌中表达较低,双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-210 可以直接调控Mex3B 的转录活性,抑制miR-210 的表达活性后,A549 肺癌细胞的细胞活性受到一定的抑制;抑制miR-210 后,肺癌细胞株A549 的侵袭和增殖能力明显降低。结论:miR-210 可以靶向调控肺癌细胞的侵袭和增殖能力。     

MicroRNA-155 通过调节CXCR4 / PI3K / AKT 途径影响滋养细胞的侵袭与迁移

目的:以人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3 细胞为研究对象,结合该细胞侵袭和迁移能力的变化情况,研究转染miR-155 mimics 和miR-155 inhibitor 之后CXCR4 的表达变化及其对下游PI3K/ AKT 信号通路的影响作用,从而探讨miR-155参与子痫前期发生发展的分子机制。方法:设计miR-155mimics 和miR-155 inhibitor,对JEG-3 进行转染,通过Transwell 侵袭实验、划痕实验,观察转染后细胞的侵袭和迁移能力的变化;利用Real-time PCR 检测CXCR4 mRNA 的表达;利用Western blot检测CXCR4 及下游p鄄AKT 蛋白的表达水平。结果:Real-time PCR 结果显示,miR-155 mimics 转染组CXCR4 mRNA 相对表达量(0.589依0.096)明显低于空白对照组(1.503依0.090)和阴性对照组(1.146依0.153),差异有统计学意义(P<0.05);miR-155 inhibitor 转染组CXCR4 mRNA 相对表达量(1.739依0.083)与两组对照组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。Western blot 结果显示miR-155 mimics 转染组CXCR4 蛋白和下游p-AKT 蛋白表达水平均明显降低,而miR-155 inhibitor 转染组CXCR4 和p-AKT 蛋白水平则升高,与空白对照组和阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell 侵袭实验结果显示,与空白对照组(63郾46依2郾37)和阴性对照组(49.29依5.81)侵袭细胞数相比,miR-155 mimics 转染组侵袭细胞数(22.89依9.42)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);同时,miR-155 inhibitor 转染组侵袭细胞数(81.50依11.25)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,转染miR-155 mimics 后,JEG-3 细胞相对迁移距离(0.159依0.058)低于空白对照组(1.080依0.045)和阴性对照组(0.823依0.201),差异有统计学意义(P<0.05);而miR-155 inhibitor 转染组,JEG-3 细胞相对迁移距离(1.640依0.078)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-155 可能通过抑制CXCR4 的表达进而抑制其下游PI3K/AKT 信号通路的活化,从而影响滋养细胞的侵袭及迁移能力,最终导致子痫前期的发生发展。     

miR-34c-3p inhibits cell proliferation,migration and invasion of hepatocellular carcinoma by targeting MARCKS

Recent studies have shown that microRNA-34c-3p (miR-34c-3p) is down-regulated in various types of cancers and involved in tumor growth, invasion and metastasis. However, the roles of miR-34c-3p in hepatocellular carcinoma (HCC) are poorly understood. In this study, the expression profile of miR-34c-3pin HCC tissues and cell lines were examined by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). The correlations of miR-34c-3p expression and clinicopathological characteristics were analyzed. The biological role of MiR-34c-3pin cell proliferation, migration and invasion was examined. In addition, the targets of miR-34c-3p were identified. The results showed that miR-34c-3p expression was significantly down-regulated in HCC tissues and cell lines; low expression level of miR-34c-3p was correlated with vascular invasion and advanced TNM stage. In vitro functional assays showed that overexpression of miR-34c-3pin HepG2 and Huh7 cells significantly reduced cell proliferation, migration and invasion. Furthermore, target analysis and luciferase assay identified myristoylated alanine-rich protein kinase c substrate (MARCKS) as a specific target of miR-34c-3p. Knockdown of MARCKS in HepG2 cells reduced cell migration and invasion, but not cell proliferation. Taken together, our findings implicate the potential application of miR-34c-3p as a tumor suppressor in cancer therapy.     

mTOR负调控miR-27a并通过靶向降低GP73抑制人肝癌细胞侵袭

目的探索m TOR促进肝癌细胞侵袭能力机理。方法使用q-PCR方法检测miR-27a和GP73表达;将miR-27a的mimic转染GP73高表达的M97H细胞中,并将miR-27a inhibitor转入GP73低表达Hep G2细胞中,q-PCR和Western blot观察GP73的表达;使用荧光素酶报告基因系统验证miR-27a在GP73的3UTR区的结合位点;将miR-27a mimic转染GP73高表达的M97H细胞和GP73低表达的Hep G2细胞,Transwell实验观察细胞的侵袭。结果m TOR下调miR-27a,并上调GP73的表达;miR-27a下调GP73的表达,抑制miR-27a则上调GP73;GP73是miR-27a的靶基因;miR-27a显著抑制M97H细胞的侵袭,但对Hep G2细胞无抑制效果。结论 m TOR负调控的miR-27a靶向GP73抑制肝癌细胞的侵袭。