1,25-二羟维生素D3抑制被动致敏人气道平滑肌细胞的增殖

目的: 检测1,25-二羟维生素D₃ 对被动致敏的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖的调节作用,探讨其对哮喘气道重塑的可能作用。方法: 离体培养HASMCs,并将细胞分为对照组、哮喘组及1,25-(OH)₂D₃组。MTT法检测细胞增殖活力并确定1,25-(OH)₂D₃最佳作用浓度;用最佳作用浓度刺激HASMCs 48 h后以流式细胞术测定细胞周期,免疫细胞化学染色(SABC法)检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果: 1,25-(OH)₂D₃在10^-9-10^-7 mol/L范围内能显著抑制哮喘血清被动致敏的HASMCs增殖(P<0.05),且10^-7 mol/L时抑制作用最强;流式细胞术检测显示这一最佳作用浓度的1,25-(OH)₂D₃能显著抑制被动致敏HASMCs由G₀/G₁期向S期的转化;此外,1,25-(OH)₂D₃能显著抑制被动致敏HASMCs中PCNA的表达。结论: 1,25-(OH)₂D₃能抑制哮喘血清被动致敏的HASMCs增殖,有助于哮喘气道重塑的防治。     

1,25-二羟维生素D3的免疫学作用及其临床应用

维生素D的主要生理学功能是调节机体的钙磷平衡,近年来随着认识的深入,发现其调节免疫功能方面新的重要功能。如对细胞免疫具有重要的调节作用,对单核/巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞,以及胸腺细胞增殖分化产生影响。这些新的内容对于我们重新认识其在体内重要生物学调节作用,拓展其临床应用有极为重要的意义。作为一种新发现的免疫调节剂,1,25(OH)2D3及其类似物,既能达到预防和治疗自身免疫性疾病的目的,又不产生全身性的免疫抑制作用,在临床上具有广阔的应用前景。本文就有关维生素D与自身免疫性疾病关系的研究进展进行综述。     

1,25-二羟维生素D_3对胰岛β细胞免疫保护作用

目的研究1,25-二羟维生素D3对胰岛β细胞的免疫保护作用,为胰岛β细胞的免疫保护治疗提供实验依据。方法培养胰岛β细胞株NIT细胞及正常对照外周血单个核细胞,分别与以下4组作用：①（IL-1β＋IFN-γ）组,②（IL-1β＋IFN-γ＋D3）组,③D3组,④对照组（DMEM）。采用酶联免疫吸附分析（ELISA）检测培养上清液中IL-4、IFN-γ水平,用硝酸还原酶法检测上清液NO水平,用化学发光法检测上清液胰岛素水平。结果①IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌IL-4水平增高（P〈0.01）、IFN-γ减少（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ增高（P〈0.01）;②IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌NO水平减少（P〈0.01）;③IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,胰岛素分泌增加（P〈0.05）。结论 1,25-二羟维生素D3可减轻IL-1β＋IFN-γ对NIT细胞的损伤作用,保护NIT细胞的胰岛素分泌功能。     

1,25-二羟维生素D3对哮喘小鼠气道重塑的干预作用

 目的 探讨1,25-二羟维生素D3(1,25-(OH)2D3,VD)对哮喘小鼠气道重塑及其肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的干预作用及其机制。方法 卵蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型,BALB / c 小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松(DEX）组及VD组。HE 染色观察各组气道结构改变情况;采用计算机图像分析系统评价各组气道重塑情况;采用明胶酶谱法及RT-PCR法检测各组的MMP-9的活性及其mRNA表达水平。结果 ①HE 染色提示哮喘组与对照组相比出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落及平滑肌细胞层增厚等气道重塑改变,而DEX组及VD组均可部分逆转上述病理改变;②DEX组及VD组的支气管内壁厚度、平滑肌层厚度和平滑肌细胞核数显著低于哮喘组,但仍高于对照组( P < 0.05);③DEX组及VD组肺组织MMP-9的活性及其mRNA表达水平均明显低于哮喘组,但仍高于对照组 ( P < 0.05) 。结论 VD可显著减轻哮喘气道重塑的病理改变;并可通过部分抑制肺内 MMP-9的表达来延缓气道重塑进程。     

1,25-二羟维生素D3的免疫调节作用新进展

维生素D3(VitD3)不是内分泌细胞合成的激素,但在体内经修饰活化后可成为一种重要的激素-1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3],它与靶细胞内的核受体结合后,能够影响基因转录,发挥多种生物学效应.1,25(OH)2D3以及维生素D受体在淋巴细胞的分化发育、细胞周期的进程以及细胞因子的产生方面存在广泛的影响.本文综述了1,25(OH)2D3的主要作用机制,以及在自身免疫性疾病中的潜在作用.     

头颈部鳞癌患者1,25-二羟维生素D3水平及其与细胞免疫状态和预后的相关性

目的 探讨1,25-二羟维生素D3水平对头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)患者肿瘤细胞免疫状态及预后的影响.方法 纳入2014年3月至2017年4月我院收治的头颈部鳞癌患者200例,设为HNSCC组,另选取同期在我院健康体检者100例设为对照组;检...     

1,25-二羟维生素D_3减轻哮喘小鼠的气道重塑

目的探讨1,25-二羟维生素D3(1,25(OH)2D3,VD)对哮喘小鼠气道重塑及其肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的干预作用及其机制。方法建立慢性哮喘小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松(DEX)组及VD组。HE染色观察各组气道结构;用计算机图像分析系统评价各组气道重塑;用明胶酶谱法及RT-PCR法检测各组的MMP-9的活性及其mRNA表达。结果 (1)哮喘组出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落及平滑肌细胞层增厚等气道重塑改变,而DEX组及VD组均可部分逆转上述病理改变;(2)DEX组及VD组的支气管内壁厚度、平滑肌层厚度和平滑肌细胞核数显著低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05);(3)DEX组及VD组肺组织MMP-9的活性分别为对照组的(2.24±0.16)倍及(3.46±0.09)倍,而哮喘组是对照组的(7.87±0.09)倍(P<0.05);(4)各组MMP-9mRNA相对定量分别为对照组(0.57±0.08)、哮喘组(5.74±0.13)、DEX组(2.63±0.11)及VD组(3.16±0.09),且两两比较均P<0.05。结论 1,25(OH)2D3可显著减轻哮喘气道...     

1α, 25-二羟维生素D3对早期角膜移植小鼠Th17细胞的免疫调控作用

 目的:观察在同种异体角膜移植的小鼠模型中,1α, 25-二羟维生素D3对Th17细胞及其相关细胞因子的影响。方法: C57BL/6 小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体,建立小鼠穿透性角膜移植术模型。术后隔日对角膜移植小鼠腹腔注射1.0 μg 1α,25二羟维生素D3（维生素D3干预组）,模型组和正常对照组腹腔注射等量大豆油。在裂隙灯活组织镜下观察角膜移植物的透明情况,评估排斥反应的发生情况,并取角膜移植物做病理学检测。采用实时荧光定量PCR检测脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平,Western blotting分析外周血中RORγt及IL-17的蛋白含量,流式细胞术检测外周血IL-17和IFN-γ细胞因子的表达情况。结果: 1α, 25-二羟维生素D3显著地抑制了同种异体角膜移植排斥反应,同时减少了角膜移植物的炎性渗出。应用1α, 25-二羟维生素D3治疗后,小鼠脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平降低;外周血中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平被下调。结论: 1α, 25-二羟维生素D3抑制小鼠同种异体角膜排斥反应的作用与IL-17及相关细胞因子RORγt细胞调节密切相关。     

1,25-二羟维生素D3对哮喘小鼠气道重塑及基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察1,25-二羟维生素D3(VD)对哮喘小鼠气道重塑及其肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨VD在哮喘治疗中的作用.方法:BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及VD组.卵蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型;HE染色观察各组气道结构改变情况;采用计算机图像分析系统评价各组气道重塑情况;采用RT-PCR法检测各组的MMP-9mRNA表达水平.结果:①HE染色提示哮喘组与对照组相比出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落及平滑肌细胞层增厚等气道重塑改变,而VD组可部分逆转上述病理改变;②VD组的支气管内壁厚度、平滑肌层厚度和平滑肌细胞核数显著低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05);③VD组肺组织MMP-9mRNA表达水平均明显低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05).结论:VD干预可明显减轻慢性哮喘气道重塑的病理改变;并可通过部分抑制肺内MMP-9的表达来延缓气道重塑进程.     

原发ITP患者外周血维生素D3水平与维生素D受体表达的相关性研究

目的 研究成人原发免疫性血小板减少症(ITP)患者血清中25-羟维生素D3[25-(OH)-D3]、维生素D活性指标与维生素D受体表达的相关性.方法 选择开滦总医院2017年1月至2019年12月收治的30例ITP患者作为研究对象,设为ITP组;选择同期来院体检的30例健康体检者作为对照组,抽取外周血,检测血清中25-...     

核因子κB在蛋白激酶C诱导哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的： 探讨核因子κB（NF-κB）在蛋白激酶C（PKC）致哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖中的作用。方法： 16只Wistar大鼠随机分为哮喘组（8只）和对照组（8只）。应用PKC激动剂PMA和NF-κB抑制剂PDTC干预哮喘组和对照组大鼠ASMCs。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫荧光技术等方法检测ASMCs增殖；免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-κB活性。 结果： PMA干预哮喘组ASMCs 后S期细胞比例、A值、PCNA表达率、NF-κBp65阳性率及结合带的灰度值均显著高于未干预的哮喘组ASMCs (均P<0.05)，PDTC预处理后再给予PMA上述指标均低于仅用PMA干预及未干预者(均P<0.05)。仅用PDTC处理的哮喘组ASMCs上述指标均低于未干预的ASMCs (均P<0.05)。结论： NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖，在其增殖中存在着PKC－NF-κB信号途径。     

核因子-κB对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响

目的: 探讨核因子-κB(NF-κB)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖、凋亡和转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达的影响。方法: 体外培养ASMCs，以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,将ASMCs分为对照组、TNF-α组和TNF-α+PDTC组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β₁ mRNA表达，Western blotting检测NF-κB、TGF-β₁的表达，免疫细胞化学染色法检测PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位，四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMCs增殖，Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡。结果: （1）TNF-α组ASMCs的NF-κB活性显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组NF-κB活性显著低于TNF-α组 (P<0.01)。（2）TNF-α组ASMCs增殖显著高于对照组(P<0.01),TNF-α＋PDTC组的增殖反应显著低于TNF-α组(P<0.01)；TNF-α+PDTC组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01)。（3）TNF-α组ASMCs的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01)，TNF-α+PDTC组的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著低于TNF-α组(P<0.01)。（4）TNF-α组ASMCs的TGF-β₁的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α＋PDTC组（P<0.01）。结论: NF-κB活化可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β₁的表达和分泌。     

核因子κB在蛋白激酶C诱导哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在蛋白激酶C(PKC)致哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用。方法:16只Wistar大鼠随机分为哮喘组(8只)和对照组(8只)。应用PKC激动剂PMA和NF-κB抑制剂PDTC干预哮喘组和对照组大鼠ASMCs。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光技术等方法检测ASMCs增殖;免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-κB活性。结果:PMA干预哮喘组ASMCs后S期细胞比例、A值、PCNA表达率、NF-κBp65阳性率及结合带的灰度值均显著高于未干预的哮喘组ASMCs(均P<0.05),PDTC预处理后再给予PMA上述指标均低于仅用PMA干预及未干预者(均P<0.05)。仅用PDTC处理的哮喘组ASMCs上述指标均低于未干预的ASMCs(均P<0.05)。结论:NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖,在其增殖中存在着PKC-NF-κB信号途径。     

周期蛋白D1在蛋白激酶C调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：观察蛋白激酶C(PKC)激活后哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)周期蛋白D1(cyclin D1)的表达变化及两者表达相关性，探讨cyclin D1在PKC调控哮喘大鼠ASMCs增殖中所起的作用。方法:卵清蛋白（OVA）吸入制备SD大鼠2周哮喘模型，原代培养ASMCs。采用正常大鼠（N组）和模型大鼠（A组）第3-6代细胞，分别应用PKC特异性激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯（PMA）及抑制剂Ro-31-8220干预ASMCs, 根据不同处理分为4组：（1）空白组；（2）10 nmol/L PMA组；(3)10 nmol/L PMA+5 μmol/L Ro-31-8220组； (4)5 μmol/L Ro-31-8220组。采用流式细胞术，四甲基偶氮唑盐（MTT）法，增殖细胞核抗原（PCNA）染色等方法观察药物对ASMCs增殖的影响。RT-PCR方法检测PKC-α和cyclin D1 mRNA表达水平，Western blotting方法检测PKC-α和cyclin D1蛋白表达水平。线性相关分析评价PKC-α和cyclin D1表达水平的关系。结果:（1）在哮喘组，与空白对照比较，PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率，差异显著（P<0.01）。在正常组，与空白对照相比，PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率差异均显著（P<0.01）。（2）哮喘组内PMA组、Ro-31-8220组PKC-α以及cyclin D1 mRNA 和蛋白表达水平与空白对照比较，差异显著（P<0.01）。正常组和哮喘组变化趋势一致。(3)在mRNA水平，大鼠ASMCs PKC-α和cyclin D1的表达呈明显正相关(r=0.476，P<0.05)，在蛋白水平两者的表达亦呈明显正相关(r=0.899, P<0.01)。结论:PKC-α能促进正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs增殖，其在基因和蛋白的表达水平与cyclin D1的表达呈正相关，提示PKC-α可能通过调节cyclin D1而影响ASMCs的增殖。     

血管内皮生长因子及其受体2与被动致敏的人气道平滑肌细胞增殖相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体2（KDR）在被动致敏的人气道平滑肌细胞（ASNC）中表达变化及其对ASMC增殖的影响。方法培养人ASMC，用支气管哮喘病人血清被动致敏ASMC。用免疫组织化学技术检测ASMC增殖细胞核抗原（POJA）的表达，MTT法检测细胞代谢活性及流式细胞仪分析细胞周期；用RT-PCR及Western blot方法分别检测VEGF和KDR mRNA及蛋白质在不同组人ASMC的表达程度。结果（1）被动致敏组ASMC较对照组和干预组增殖显著增加（P〈0．05）。（2）被动致敏组ASMC的VEGF121、VEGF165和VEGF189的mRNA表达分别较对照组和干预组显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。（3）被动致敏组ASMCVEGF及KDR蛋白质的表达较对照组和干预组显著增加（P〈0．05）。直线相关性分析显示，ASMC中PCNA表达与ASMC中VEGF121、165、189及KDRmRNA表达水平呈正相关（r分别为0．73、0．82、0．77、0．70，P〈0．05）；ASMC中PCNA表达与ASMC中VEGF及KDR蛋白质表达水平也呈正相关（r分别为0．69、0．67,P〈0．05）。结论被动致敏的ASMC中VEGF及其受体KDR表达上调。并与ASMC增殖密切相关。该结果提示VEGF及其受体2可能参与了哮喘气道重建中ASMC增殖的过程。     

Kv在正常与被动致敏人气道平滑肌张力调控中的作用

目的：探讨电压依赖性延迟整流钾通道（Kv）对正常与体外致敏人气道平滑肌（HASM）的张力调控作用及其机制。 方法： 采用肌张力试验、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学等技术，观察钾通道阻断剂对正常与哮喘患者血清致敏HASM张力、细胞Kv的mRNA和蛋白质表达。 结果： Kv 阻断剂4-氨基吡啶（4-AP）可引起正常HASM肌环产生浓度依赖性收缩反应，达到最大效应一半所需浓度的负对数值（pD2）为2.09±0.09，人哮喘血清致敏组为2.44±0.16，差异显著（P＜0.01）；但最大反应强度（Emax）分别为正常组（24.0±6.4）g/g，人哮喘血清致敏组（31.8±7.3）g/g，差异无显著（P＞0.05）。在培养的HASM细胞上，Kv1.2、Kv1.3和 Kv1.5基因mRNA均有表达；人哮喘血清致敏的HASM细胞Kv1.5基因mRNA（P＜0.01）和蛋白质（P＜0.01）的表达均下降。 结论： 体外被动致敏HASM细胞Kv功能较正常下调，致平滑肌兴奋性增高，该变化可能主要与Kv1.5基因相关。     

香烟提取物对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的： 探讨香烟提取物（CSE）对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖作用及可能机制。方法: 16只SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,各8只。原代培养大鼠ASMCs,取第3-6代细胞,分为对照组、对照+CSE组、哮喘组、哮喘+CSE组、哮喘+CSE+嘧啶基-苯磺酰胺（GW8510,细胞周期蛋白依赖激酶-4抑制剂）组、哮喘+GW8510组。用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐（MTT）法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫细胞化学技术检测ASMCs增殖;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹（Western blotting）检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达。结果: （1）哮喘组ASMCs与对照组ASMCs相比,在S+G2/M期比例、吸光度（A）值和PCNA表达率上明显增高,差异显著（P＜0.01）。（2）哮喘组ASMCs S+G2/M期比例、吸光度（A）值和PCNA表达率分别为(18.30±1.12)%、0.512±0.110、(55.1±3.7)%;哮喘+CSE组分别为（32.12±1.17）%、0.801±0.210、（90.2±7.3）%;哮喘+CSE+GW8510组分别为(17.21±0.95)%、0.508±0.009、(54.3±4.8)%;哮喘+GW8510组分别为(11.16±1.48)%、0.345±0.078、(40.6±5.4)%。除哮喘组、哮喘+CSE+GW8510组两组比较差异无显著外,其余两两比较差异均显著（P＜0.01）。（3）哮喘组、哮喘+CSE组、哮喘+CSE+GW8510组、哮喘+GW8510组ASMCs cyclin D1 mRNA A值比值和蛋白表达A值比值分别为0.236±0.045、0.271±0.002;0.369±0.124、0.379±0.002;0.231±0.075、0.261±0.002;0.165±0.064、0.193±0.002。除哮喘组、哮喘+CSE+GW8510组两组比较差异无显著外,其余两两比较差异均显著（P＜0.01）。结论: 正常与哮喘大鼠ASMCs在CSE干预后增殖明显加快,cyclin D1表达明显增加。CSE可能是通过cyclin D1参与调控哮喘大鼠ASMCs的增殖。     

1,25-dihydroxyvitamin D(3) promotes IL-10 production in human B cells

1,25-dihydroxyvitamin D(3) (calcitriol) regulates immune responses, e.g., inhibits expression of IgE by B cells and enhances expression of IL-10 by dendritic cells and T cells. We report here that activation of human B cells by B cell receptor, CD40 and IL-4 signals induces expression of the gene for 25-hydroxyvitamin-D3-1alpha-hydroxylase (CYP1alpha). Accordingly, these B cells generate and secrete significant amounts of calcitriol. In activated B cells calcitriol induces expression of the genes Cyp24, encoding a vitamin D hydroxylase, and Trpv6, encoding a calcium selective channel protein. Calcitriol enhances IL-10 expression of activated B cells more than threefold, both by recruiting the vitamin D receptor to the promoter of Il-10, and to lesser extent by modulation of calcium-dependent signaling. The molecular link in activated B cells between vitamin D signaling, expression of IgE and IL-10, and their ability to produce calcitriol from its precursor, suggest that pro-vitamin D (25-hydroxyvitamin D(3)) can be used as a modulator of allergic immune responses.