IL-18对肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的：研究IL-18对体外培养肾小管上皮细胞表型转化的影响，以明确IL-18在慢性肾脏疾病中的可能作用机制。方法：应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞侏（HK-2）。应用RT-PCR技术检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA水平，用免疫细胞化学方法（ICC）及Western blot技术分别检测IL-18对HK-2细胞表达仪-SMA蛋白的影响。结果：（1）IL-18可促进HK-2细胞表达α-SMA、TGF-β1 mRNA，且两者之间呈正相关（P〈0．05）。（2）IL-18增加α-SMA阳性HK-2细胞百分数（P〈0．05）。（3）IL-18使HK-2细胞α-SMA蛋白表达水平增加。结论：IL-18可剂量和时间依赖性地促进肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞，促进肾间质纤维化。     

沙利度胺减轻肾病综合征小鼠肾脏纤维化

目的探讨沙利度胺对肾病综合征小鼠表皮生长因子受体(EGFR)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路及肾脏纤维化的影响。方法将小鼠随机分为对照组、模型组(制备膜性肾病模型)、沙利度胺组(灌胃给予沙利度胺溶液100 mg/kg)、来氟米特组(灌胃给予来氟米特溶液5 mg/kg),每组15只。1天1次,连续给药4周。分别在造模前、造模后、治疗4周后检测小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-Upro);治疗4周后,全自动生化分析仪检测小鼠生化指标;酶联免疫吸附(ELISA)检测血清中炎性因子白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达;苏木精-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色、高碘酸-无色品红(PAS)染色观察肾组织病理变化;RT-qPCR和Western blot检测肾脏组织中EGFR、ERK mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,模型组小鼠肾小球体积增大,肾小管中有空泡性病变,肾小管上皮细胞有嗜复红蛋白沉积,小鼠24 h-Upro、血清中TC、TG、BUN、Scr含量、血清中炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α含量、肾脏组织中EGFR、ERK mRNA水平及p-EGFR/EGFR、p-ERK/ERK蛋白表达显著升高(P0.05);与模型组相比,来氟米特组、沙利度胺组小鼠上述病理症状明显减轻,小鼠24 h-Upro、血清中TC、TG、BUN和Scr含量、血清中炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α表达、肾脏组织中EGFR、ERK mRNA水平及p-EGFR/EGFR、p-ERK/ERK蛋白表达显著回降(P0.05)。结论沙利度胺可能通过抑制EGFR/ERK信号通路减轻肾脏损伤,抑制肾脏纤维化。     

转录因子Sp1促进肾小管上皮间质转化的体外实验研究

目的:研究转录因子Sp1促进肾小管上皮间质转化(EMT)以及肾脏纤维化的作用和机制.方法:用30 mL/L浓度的低氧培养肾小管上皮细胞HK-2,采用Real-time PCR及Western blot法分别检测细胞中转录因子Spl,E-cadherin和α-SMA的mRNA和蛋白表达水平.构建SP1基因的小干扰RNA载体,并将其转染低氧处理的HK-2肾小管上皮细胞.Real time PCR及Western blot法检测转录因子SP1对HK-2细胞EMT标志物的影响.结果:低氧处理后的HK-2细胞上皮标志物E-cadherin表达显著下降,而间皮标志物α-SMA的表达显著增加,提示HK-2细胞发生EMT.同时发现低氧处理后HK-2中转录因子Sp1的mRNA水平和蛋白水平表达逐渐增加.将Sp1的小干扰RNA载体转染HK-2细胞,得到下调Sp1表达的肾小管上皮细胞系.结果显示,与对照组相比,敲减Sp1的低氧处理的HK-2细胞中上皮细胞标志物E-cadherin 表达未见显著下降,而间质细胞标志物α-SMA的表达未见显著增加,提示此时的HK-2细胞未发生EMT.结论:转录因子Sp1可促进HK-2肾小管上皮细胞的EMT.     

THEM4/Akt在糖尿病小鼠肾脏细胞外基质沉积中的作用

目的探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)/Akt在糖尿病小鼠肾脏中的表达以及与细胞外基质沉积的关系。方法采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射复制糖尿病小鼠模型,饲养8周后处死小鼠,应用Western blot、免疫组化及RT-PCR技术检测糖尿病小鼠肾脏中THEM4/Akt、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ、FN蛋白及THEM4 mRNA的表达。结果与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠肾脏中THEM4蛋白低表达,相对于对照组下降了37.7%;同时伴随phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ及FN蛋白表达升高,较对照组分别上调了3.66、1.29、2.33、1.99及2.82倍;糖尿病小鼠肾小管间质可见细胞外基质沉积。结论糖尿病小鼠肾小管间质细胞外基质沉积可能是由于THEM4的低表达进而激活Akt,上调TGF-β1和α-SMA蛋白的表达而实现的。     

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1表达的影响

目的:通过观察甲状旁腺素(PIH)对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,以探讨PTH在肾间质纤维化发病机制中的作用.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分别用不同浓度的PTH(10-12、10-11、10-10、10-9、10-8 mol/L)作用于HK-2细胞48 h,以及10-8 mol /L作用于HK-2细胞不同时间(12、24、48、72 h).应用RT-PCR法检测HK-2细胞内α-SMA、TGF-β1 mRNA表达水平,免疫细胞化学法检测HK-2细胞表达α-SMA阳性细胞百分数,Western blot法检测细胞内α-SMA的蛋白表达水平.结果:(1)RT-PCR结果表明,PTH呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞α-SMA、TGF-β1 mRNA的表达(P＜0.01),且两者之间呈正相关(P＜0.05).(2)免疫细胞化学结果表明,PTH可增加表达α-SMA阳性的HK-2细胞百分数,且呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).(3)Western blot结果表明,PTH 可增加HK-2细胞α-SMA的蛋白表达量,也呈剂量和时间依赖性(P＜0.01).结论:PTH可通过促进肾小管上皮细胞转分化以及TGF-β1的表达促进肾小管间质纤维化.     

NF-κB反义寡核苷酸对高糖诱导的HK-2细胞外基质表达的影响

目的观察NF-κBp65反义寡核苷酸(AS-ODN)对高糖诱导体外培养HK-2细胞外基质表达的影响,探讨NF-κB在糖尿病肾病(DN)肾小管间质纤维化中的作用。方法体外培养HK-2,予以正常糖(NG组)、高糖(HG组)培养液培养。在高糖培养后应用梭华-SofastTM转染NF-κB p65AS-ODN(ODNL、ODNH组)。免疫细胞化学检测细胞NF-κBp65蛋白的表达;ELISA检测细胞培养上清液Fn、ColⅢ浓度。结果 NG组HK-2细胞呈基础量地表达NF-κBp65蛋白;与NG组比较,HG组细胞NF-κBp65蛋白的表达显著增加,细胞上清液FN、ColⅢ蛋白浓度亦显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与HG组比较,ODNL及ODNH组细胞NF-κBp65蛋白的表达显著减弱,培养上清液FN、ColⅢ蛋白水平也显著降低,两者差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 NF-κB反义寡核苷酸可抑制高糖诱导的HK-2细胞NF-κBp65、FN、ColⅢ的表达;通过抑制NF-κB的活化可能有助于DN肾脏纤维化的防治。     

单核巨噬细胞对肾小管上皮细胞的活化作用及其机制初探

目的:观察外周血单核巨噬细胞(MO/MAC)条件培养基(M-CM)对肾小管上皮细胞(RTEC)直接作用的生物学效应并探讨可能的作用机制。方法:应用正常人外周血M-CM刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2),以[³H]-TdR掺入法检测HK-2细胞DNA合成、Westernblot法检测骨桥蛋白(OPN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达、间接抑制ELISA法检测纤连蛋白(FN)分泌。进一步采用白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β₁(TGF-β₁)中和抗体进行拮抗。结果:①M-CM可促进HK-2细胞DNA合成、α-SMA表达及FN分泌。②TGF-β₁中和抗体(5mg/L)与M-CM同时作用于HK-2细胞,其α-SMA表达和FN分泌均明显低于M-CM单独作用组。③IL-10(20μg/L)与M-CM同时作用组的HK-2细胞,α-SMA表达和FN分泌亦明显低于M-CM组;IL-10预孵育MO/MAC组,HK-2细胞α-SMA表达也明显低于M-CM组。结论:单核巨噬细胞可直接诱导肾小管上皮细胞增殖、表型转化以及分泌细胞外基质增加;其分泌的TGF-β₁及炎性细胞因子可能参与介导上述效应。     

Snaill在糖尿病大鼠肾组织中表达增加

目的 观察Snaill在糖尿病大鼠肾组织中的表达.并初步探讨其在糖尿病肾病(DN)发生、发展中的作用.方法 大鼠随机分为对照组(C)、糖尿病组(DM)、胰岛素治疗组(A).检测Snaill、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素及纤连蛋白(FN)的蛋白和(或)mRNA表达.结果 Snaill阳性染色见于各组DM大鼠肾小管.从16周开始在DM大鼠肾小管上皮细胞可见α-SMA蛋白阳性表达.肾皮质Snaill与FN蛋白和mRNA的表达水平均显著增加(P＜0.05),而治疗组上述指标显著降低(P＜0.05).E-cadherin蛋白及mRNA表达与Snaill呈负相关.结论 Snaill基因和蛋白在DM大鼠肾小管高表达,并可能通过介导FN生成和抑制E-cadherin转录触发肾小管上皮细胞EMT参与了DN的发生和发展.     

人参皂苷降低β淀粉样蛋白诱导THP-1单核细胞ERK的磷酸化和细胞因子含量

目的观察人参皂苷对β-淀粉样蛋白(-βamyloid,Aβ)1-40诱导的THP-1单核细胞系表达细胞因子和磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)的影响。方法用Western blotting方法测定磷酸化ERK的表达,放射免疫法测定细胞培养上清液中的细胞因子IL-1β、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度。结果Aβ刺激组磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达明显高于对照组。人参皂苷(50、100和150 mg/L可减少Aβ诱导THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达。与模型组比较,人参皂苷治疗组Aβ1-40诱导的THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子(IL-1β、IL-8和TNF-α)的表达明显降低。结论人参皂苷可抑制Aβ诱导的ERK磷酸化,进一步减少细胞因子的产生。     

三七皂苷R1 抑制TGF-β1 / Smad3 信号传导对糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化和炎症细胞因子的调节作用研究

目的:探讨三七皂苷R1(NGR1)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏纤维化和炎症细胞因子的调节作用及其机制。方法:采用高脂饲喂联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立DN大鼠模型。将大鼠随机分为6组:对照组、模型组、NGR1低中高剂量组(5、10、20 mg/kg)和阳性对照组(二甲双胍,Metformin,MET,500 mg/kg)。检测大鼠肾脏功能;HE染色检测大鼠肾脏组织病理学改变;ELISA检测炎症细胞因子血清含量;Western blot和免疫组织化学检测肾脏纤维化相关蛋白表达水平;RT-PCR和Western blot检测大鼠TGF-β1/Smad3信号通路表达情况。结果:与模型组相比,NGR1中高剂量组肾脏肥大指数、尿蛋白、血清肌酸酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平具有统计学意义(P0.05或P0.01);肾脏病理学改变也有明显改善;TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ的血清含量也明显下调(P0.05或P0.01);肾脏Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)、纤联蛋白(FN)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达水平降低,而基质金属蛋白酶9(MMP-9)增加(P0.05或P0.01),α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)肾脏表达水平也明显降低;最后,肾脏TGF-β1/Smad3信号通路表达水平也降低(P0.05或P0.01)。结论:NGR1可能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路来调节糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化和炎症细胞因子表达水平。     

保护素D1 通过抑制肾脏炎症及足突细胞上皮-间充质转化而抑制早期 糖尿病肾病小鼠肾纤维化

 目的：保护素D1 (PD1) 是一个潜在的抗炎症脂蛋白分子,本实验探讨其治疗早期糖尿病肾病（DN）肾纤维化的作用及机制。方法：用链脲佐菌素125 mg/kg 2次腹腔注射C57BL/6J雌性小鼠,建立早期DN小鼠模型。糖尿病模型成功后,用PD1（0.08 mg·kg-1·d-1）腹腔注射治疗,设正常鼠及DN鼠为对照。治疗8周后检测各组小鼠24 h尿蛋白及尿白蛋白定量、体重、肾重、肾重/体重比、血清及尿肌酐和肌酐清除率;用PAS染色法检测肾小球系膜区基质/肾小球面积比,用免疫荧光染色法检测肾皮质中巨噬细胞的数量,用Western blotting检测肾小球纤连蛋白（FN）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,以及肾小球足突细胞特异性上皮标志蛋白zonula occludens-1(ZO-1)和P-cadherin的表达;同时,体外用高糖刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7,检测PD1对其分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的抑制作用。体外用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激小鼠足突细胞株,用Western blotting检测PD1对其诱导足突细胞上皮-间充质转化(EMT)中上皮细胞标志蛋白P-cadherin 和ZO-1减少的恢复作用,及间充质细胞标志蛋白成纤维细胞特异性蛋白1（FSP1） 和α-SMA过表达的抑制作用。结果：PD1能减少DN小鼠肾小球系膜基质的积聚、24 h尿蛋白及尿白蛋白定量、体重、肾重和肾重/体重比,抑制异常增高的肌酐清除率。PD1能减少DN小鼠肾皮质中巨噬细胞的数量,抑制DN小鼠肾小球FN和α-SMA的表达,恢复足突细胞特异性上皮标志蛋白ZO-1和P-cadherin的表达。PD1能抑制高糖诱导RAW264.7分泌TNF-α和IL-1β,能抑制TGF-β1诱导足突细胞FSP1和α-SMA表达的增加以及ZO-1和P-cadherin表达的减少。结论：PD1能减轻早期DN小鼠肾纤维化,其部分机制可能通过抑制肾脏的炎症及足突细胞EMT。     

胰岛素控制血糖对糖尿病大鼠肾组织Smad7表达及纤维化病变的影响

 目的：观察胰岛素控制糖尿病大鼠血糖后是否能上调肾组织Smad7的表达,减轻或延缓糖尿病肾病(DN)肾纤维化病变的发生发展。方法：链脲菌素复制大鼠糖尿病模型,随机分为糖尿病组(DM组) 和胰岛素治疗组(INS组) (n=8);INS组于成模13周起用胰岛素将血糖控制在4~7 mmol/L;同时设正常对照组(NC组)(n=8)。17周处死大鼠,检测相应生化指标,观察胰腺和肾组织病理学改变,免疫组化和Western blotting检测各组大鼠肾组织组织转化生长因子β1 (transforming growth factor β1, TGF-β1)、Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitin regulatory factor 2, Smurf2)、Smad7、 E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、层连蛋白(fibronectin, FN)和胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)的蛋白表达。结果：与NC组比较,DM组大鼠体重显著减轻,24 h尿蛋白、血糖和甘油三酯显著升高(P<0.05),病理检查显示胰岛被破坏,肾组织TGF-β1、Smurf2、α-SMA、FN和collagenⅠ蛋白的表达均显著增加(P<0.05),并伴有肾小管Smad7和E-cadherin的表达减少(P<0.05);而经胰岛素控制血糖后,INS组大鼠较DM组体重逐渐增加,24 h尿蛋白和血糖均显著降低 (P<0.05),肾纤维化病变明显改善,TGF-β1、Smurf2、α-SMA、FN和collagenⅠ蛋白的表达均显著减少(P< 0.05),Smad7和E-cadherin的表达显著上调(P<0.05)。结论：控制血糖能恢复糖尿病大鼠肾组织Smad7蛋白表达水平,减少细胞外基质的沉积,延缓DN的纤维化进展,其机制可能与肾组织中TGF-β1和Smurf2表达降低、Smad7蛋白的泛素化降解减少有关。     

黄芪多糖对糖尿病肾病肾小管上皮细胞凋亡、转分化及ROS 含量的影响研究

目的:探讨黄芪多糖对糖尿病肾病肾小管上皮细胞凋亡、转分化及ROS 含量的影响。方法:HK-2 细胞分为低糖组、高糖组和黄芪多糖+高糖组,处理细胞48 h 后,CCK-8 实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS 含量;Western blot 检测E-cadherin、α-SMA、STAT1、STAT3、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表达。结果:高糖组细胞存活率显著低于低糖组(P<0.01),细胞凋亡率、ROS 含量及E-cadherin、α-SMA、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表达均显著高于低糖组(P<0.01),高糖+黄芪多糖组细胞存活率显著高于高糖组,细胞凋亡率、ROS 含量及E-cadherin、α-SMA、p-STAT1、p-STAT3 蛋白表达均显著低于高糖组(P<0.01)。结论:黄芪多糖可促进高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖,抑制细胞凋亡及转分化,其机制与下调JAK/ STAT 信号通路有关。     

阻断核心岩藻糖基化修饰抑制肾小管上皮细胞的间充质转化

目的: 探讨阻抑核心岩藻糖基化修饰对肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)过程的影响。方法: 利用转化生长因子β₁(TGF-β₁)建立肾小管上皮HK-2细胞EMT的模型,应用RNAi技术沉默HK-2细胞的α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因表达,光镜下观察FUT8 基因沉默后细胞形态变化,免疫印迹及免疫细胞化学方法测定细胞表型标记物蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)的表达变化,流式细胞仪测定细胞凋亡。 结果: TGF-β₁孵育48 h后,HK-2细胞失去原有的上皮细胞形态,呈现纤维细胞形态,纤维细胞表型标记蛋白α-SMA、FSP-1及N-cadherin表达明显升高,而上皮细胞表型标记蛋白E-cadherin表达明显下降,同时伴有 FUT8 基因表达上调,细胞凋亡增加,而提前转染FUT8 siRNA能明显减弱上述这些反应。结论: FUT8催化的核心岩藻糖基化修饰参与HK-2细胞的EMT过程;阻断核心岩藻糖基化修饰,能有效阻断肾小管上皮细胞的EMT过程。     

糖尿病大鼠肾小球蛋白激酶Cα表达与肾病发病关系的研究

目的:观察四氧嘧啶诱发的糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶Cα(PKCα)、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的动态变化, 探讨3者之间相互关系以及与肾损害之间的关系。方法:将大鼠随机分为正常对照组(A组), 糖尿病1周组(B组), 糖尿病1月组(C组)和糖尿病2月组(D组)。用免疫组化和Western印迹法检查PKCα, TGF-β₁和α-SMA在肾小球的表达情况。光镜观察肾组织的形态改变, 生化法测定大鼠血糖, 血脂, 血尿肌酐以及尿蛋白。结果:糖尿病各组肾小球PKCα和TGF-β₁的表达多于正常组(P<0.05), 糖尿病各组PKCα, TGF-β₁和α-SMA3者间呈正相关, 并且与肾脏病变程度呈正相关。结论:糖尿病早期肾组织PKCα表达持续增加, 可使肾小球滤过率和滤过膜通透性增加, 参与了肾病早期蛋白尿的发生机制, 使TGF-β₁增多并诱导α-SMA的表达, 标志着肾脏固有细胞激活及表型转变和肾脏组织学改变。     

黏着斑激酶在2型糖尿病大鼠肾组织中的表达变化及意义

 目的：观察黏着斑激酶（FAK）在2型糖尿病（T2DM）大鼠肾组织中的动态变化,探讨其在糖尿病肾病（DN）发病机制中的作用。方法：复制T2DM模型,随机分为糖尿病8、12和16周(DM8、DM12和DM16)组,另设正常对照(NC)组和高脂高糖对照(HC)组。免疫组织化学检测肾组织中FAK、转化生长因子β1(TGF-β1)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2和纤维连接蛋白(FN)的表达;Western blotting检测FAK和p-FAK(Tyr397)蛋白水平;RT-PCR法检测肾皮质FAK mRNA的水平。结果：DM各组TGF-β1、p-ERK1/2和FN蛋白表达显著高于NC组及HC组(P<0.05);DM12和DM16组肾皮质FAK和p-FAK (Tyr397)表达均较NC组、HC组及DM8组显著增多(P< 0.05),且p-FAK(Tyr397)与总FAK蛋白表达趋势一致;FAK与TGF-β1、p-ERK1/2、FN呈显著正相关（P<0.01）。DM12和DM16组FAK mRNA比NC组、HC组及DM8周组表达明显增加(P< 0.05)。结论: 在2型糖尿病中,FAK可能作为TGF-β1的下游分子被活化,并通过活化ERK1/2使FN表达增多,从而参与了糖尿病肾病的发生发展。     

miR-219与TGFBR2的调控关系在肾脏纤维化中的作用

目的:研究微小RNA-219(miR-219)通过靶向调控转化生长因子βⅡ型受体(TGFBR2)在肾脏纤维化中发挥的作用。方法:收集2017年9月～2018年3月于我院就诊的70例肾脏纤维化患者,选取同期来本院体检的20例健康人设为对照组,RT-qPCR检测肾脏纤维化患者及对照组血清中miR-219的表达水平,并检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠肾成纤维细胞NRK49F后miR-219的表达水平。Western blot检测转染miR-219模拟物(miR-219 mimics)的NRK49F细胞在AngⅡ刺激后α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达情况。筛选出miR-219的潜在靶基因TGFBR2,并通过萤光素酶报告基因法进行验证。RT-qPCR和Western blot检测miR-219 mimics对TGFBR2的mRNA及蛋白表达的影响。RT-qPCR检测miR-219 mimics对α-SMA、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和COL3A1的mRNA表达水平的影响。构建单侧输尿管闭塞(UUO)小鼠模型并检测其肾脏组织中miR-219的表达水平,对UUO小鼠注射miR-219后观察肾脏纤维化的变化情况,并检测COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平。结果:肾脏纤维化患者血清中miR-219的表达水平明显低于对照组,UUO小鼠肾脏组织中miR-219的表达显著下降(P0.01);AngⅡ刺激NRK49F细胞后miR-219的表达水平明显降低,且miR-219 mimics可抑制α-SMA蛋白的表达(P0.01);miR-219 mimics对TGFBR2具有靶向调控作用,可抑制TGFBR2的mRNA及蛋白表达;miR-219 mimics可抑制α-SMA、CTGF、COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平;miR-219可下调UUO小鼠中COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平并抑制其肾脏纤维化进程。结论:miR-219可通过抑制TGFBR2的表达从而抑制肾脏纤维化的发展,可能成为肾脏纤维化诊断及治疗的新靶点。     

葛根素注射液对糖尿病KKAy小鼠肾小管上皮细胞的影响

 目的：观察葛根素治疗糖尿病小鼠肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis,RIF）过程中肾小管上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白表达的变化,为临床药物治疗糖尿病RIF提供实验依据。方法：将16只2型糖尿病模型KKAy小鼠随机分为模型组（n=8）和葛根素注射液治疗组（n=8）。8只C57BL/6J小鼠作为正常组。用药组小鼠14周龄开始以腹腔注射的方式给药,观测小鼠日常状态及血糖变化,于24周龄处死小鼠,取肾脏分别观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin, α-SMA)、转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）和转化生长因子β I型受体（TGF-β-RI）蛋白的表达。结果：形态学观察可见模型组发生明显的纤维化改变,而经葛根素注射液治疗后,小鼠肾间质基质轻度增多,病变较轻微。治疗组KKAy小鼠肾组织中较模型组小鼠肾组织中α-SMA、TGF-β1和TGF-β-RI蛋白的表达减少。结论：葛根素注射液可在一定程度上减少α-SMA的表达,抑制KKAy小鼠肾脏组织中TGF-β1和TGF-β-RI蛋白表达,阻断并逆转EMT的过程,延缓肾间质纤维化的发生和发展。     

真武汤对链脲佐菌素所致大鼠糖尿病肾病的保护作用

 目的：探讨真武汤对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法：腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病大鼠模型,将成模大鼠随机分为糖尿病肾病(DN)模型组和真武汤治疗组（真武组）,另设正常组。采用生化、HE染色观察真武汤对糖尿病肾病大鼠肾功能、肾组织形态学变化及脂质过氧化相关参数的作用;采用蛋白免疫印迹方法探讨真武汤对肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和NF-κB表达的影响。结果：模型组大鼠肾系数、24 h尿蛋白定量、血尿素氮、肌酐、血糖和丙二醛(MDA)均显著升高(P<0.05),体重、超氧化物歧化酶(SOD)及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）显著降低(P<0.05);真武组大鼠的肾系数、24 h尿蛋白、尿素氮、肌酐、血糖和MDA明显低于模型组(P<0.05),iNOS显著高于模型组（P<0.05）;模型组大鼠肾小球肥大、毛细血管基底膜增厚,系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡样变,可见蛋白管型;真武组病变轻于模型组。模型大鼠肾组织α-SMA及NF-κB蛋白的水平明显高于正常组（P<0.05）,真武组大鼠肾组织α-SMA及NF-κB蛋白水平明显低于模型组（P<0.05）。结论：真武汤能减轻糖尿病肾病肾脏局部氧化应激反应,改善糖尿病肾病大鼠肾功能,减轻病理损伤,其发挥肾脏保护作用可能与抑制α-SMA及NF-κB蛋白的表达有关。