赫赛汀诱导乳腺癌细胞凋亡及对其细胞周期的影响

目的研究免疫靶向治疗药物赫赛汀(Herceptin)对HER-2过表达的乳腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。方法Herceptin处理体外培养的乳腺癌SKBR3细胞系,经MTT试验筛选最佳药物处理浓度和时间的组合,应用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、扫描电镜、透射电镜及流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡的特征、凋亡细胞百分率及细胞周期的变化。结果在Herceptin作用下,荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、扫描电镜、透射电镜观察SKBR3细胞均出现凋亡特征。Annexin/PI染色流式仪测定,药物处理组早期凋亡百分率较对照组显著增加(P<0.01)。流式仪细胞周期分析显示,S期细胞含量下降,而G2期细胞含量上升。结论免疫靶向治疗药物Herceptin可特异性地诱导HER-2过表达的乳腺癌细胞发生凋亡,并可使其生长受阻于G2期。诱导凋亡可能是Herceptin抗肿瘤作用的重要机制之一。     

光动力疗法对子宫内膜癌Ishikawa细胞系细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨光动力疗法(PDT)对子宫内膜癌Ishikawa细胞系细胞周期及凋亡的影响.方法 以四甲基吡啶卟啉(TMPyP)为光敏剂的PDT处理Ishikawa细胞,显微镜观察细胞形态;细胞计数试剂盒CCK-8检测细胞的存活率;流式细胞术检测细胞周期;使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞术检测细胞的凋亡;蛋白免疫印迹法检测Bcl-2、NF-κB P65及磷酸化NF-κB P65的表达.结果 PDT可以改变Ishikawa细胞的形态,降低细胞存活率(P＜0.05),并与光敏剂TMPyP的浓度和激光能量密度有关;PDT引起细胞S期阻滞(P＜0.05),诱导Ishikawa细胞发生凋亡(P＜0.05),降低Bcl-2蛋白的表达和NF-κB P65的磷酸化水平(P＜0.05).结论 PDT可能通过下调Bcl-2、NF-κB的活性引起Ishikawa细胞S期阻滞和细胞凋亡.     

丹参酮ⅡA增强顺铂抗子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用

目的 探讨丹参酮ⅡA增强顺铂抗子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用及其分子机制.方法 体外培养并取对数生长期子宫内膜癌Ishikawa细胞,设空白对照组、丹参酮ⅡA组(10 μg/ml)组、顺铂(10 μg/ml)组和联合干预组[丹参酮ⅡA(10 μg/ml)+顺铂(10 μg/ml)].采用CCK-8法检测各组细胞的增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力,Western blotting实验检测各组细胞的Caspase-3蛋白表达情况.结果 空白对照组、丹参酮ⅡA组、顺铂组、联合干预组细胞增殖活性分别为2.46±0.06、1.92±0.04、1.61±0.06、0.38±0.03,联合干预组细胞增殖活性低于顺铂组,差异有统计学意义(P＜0.05);而4组细胞在48h时的划痕愈合率分别为(0.93±0.01)％、(0.26±0.07)％、(0.43±0.06)％、(-0.01±0.00)％,与其他各组比较,联合干预组细胞的愈合率最低,差异有统计学意义(P＜0.05);联合干预组Cleaved-Caspase-3蛋白表达量高于顺铂组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA具有增强子宫内膜癌Ishikawa细胞顺铂化疗效果的潜在作用,其机制可能与抑制细胞迁移及调节Caspase-3凋亡相关蛋白表达有关.     

白术多糖通过调控线粒体凋亡途径诱导人子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡

目的：探讨白术多糖（PAM）对人子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：预实验选取梯度浓度（0、7.5、15、30、60、120、240 mg/ml）的PAM作用于RL95-2细胞，MTT比色法检测细胞增殖活性，Bliss法计算24 h、48 h和72 h的半数抑制浓度（IC50）。正式实验中将RL95-2细胞分为空白对照组和不同浓度（15、30、60 mg/ml）PAM处理组。共培养48 h后，Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡；JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化；Western blot检测细胞线粒体和细胞质中细胞色素C(Cyt C)蛋白水平差异；分光光度法检测细胞中半胱天冬酶9(Caspase9)活性；Western blot检测线粒体凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax和cleaved-Caspase3）表达水平。结果：PAM可降低RL95-2细胞的增殖率，与药物浓度和作用时间有关。与空白对照组相比，PAM处理组细胞凋亡率显著增加（均P<0.01）；线粒体膜电位及Cyt C蛋白表达显著降低（均P<0.05），但细胞质中Cyt C蛋白...     

DUSP6沉默对人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡和迁移的影响及机制研究

目的:探讨双特异性磷酸酶6(DUSP6)沉默对人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡和迁移的影响及机制.方法:Ishikawa细胞随机分为空白对照组(转染脂质体试剂)、过表达组(转染DUSP6)、过表达NC组(转染DUSP6-NC)、沉默组(转染siDUSP6)、沉默NC组(转染siDUSP6-NC).RT-qPCR检测...     

肉桂醛对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的 探讨肉桂醛对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制.方法 将培养的Ishikawa细胞分为空白对照组与肉桂醛组(3.75、7.50、15.00μg/ml).不同浓度肉桂醛干预24h后,MTT实验检测Ishikawa细胞增殖能力变化;平板克隆实验检测细胞克隆形成率;流式细胞术分析Ishika...     

雷帕霉素增强子宫内膜癌细胞对阿霉素的敏感性

目的: 探讨mTOR抑制剂雷帕霉素联合阿霉素对子宫内膜癌细胞株的影响及其机制。方法: 选用2株不同 PTEN 状态的子宫内膜癌细胞株:HEC-1A( PTEN 野生型)和Ishikawa( PTEN 突变型),分别给予低浓度雷帕霉素预处理24 h,再使用阿霉素,MTT法检测联合用药前后阿霉素24 h IC₅₀及细胞生存率的变化,计算两药的联合指数;流式细胞术检测细胞凋亡率, Western blotting观察PI3K/Akt通路的蛋白磷酸化和凋亡蛋白caspase-3的变化。结果: (1)雷帕霉素或阿霉素单药使用时均明显抑制2株子宫内膜癌细胞的生长。抑制率与时间、剂量呈正相关。使用10 nmol/L雷帕霉素预处理24 h后,阿霉素作用Ishikawa细胞的IC₅₀由(21.3±3.8)μmol/L降到(11.9±1.2) μmol/L(P<0.05);而HEC-1A细胞的IC₅₀由(14.3±2.8)μmol/L降到(8.2±0.9)μmol/L(P<0.05);2株细胞中阿霉素与雷帕霉素的联合指数均大于1.15,提示在2种细胞株中两药均有协同作用;(2)联合用药后,凋亡率较单药使用组明显升高(P<0.05);同时,p-Akt蛋白表达下降,而活化的caspase-3表达上调。结论: 雷帕霉素能增加子宫内膜癌细胞对阿霉素的敏感性,从而降低肿瘤细胞对药物的耐药性,具有良好的抗肿瘤前景。     

赫赛汀对吉非替尼诱导肺癌A549细胞凋亡的影响

目的： 研究吉非替尼与赫赛汀联合应用对人肺腺癌A549 细胞凋亡的影响。方法: 应用MTT法,流式细胞仪Annexin V－PI 双标法、DAPI荧光染色等多项方法,体外研究吉非替尼与赫赛汀联合对A549 细胞的促凋亡作用。结果: 吉非替尼与赫赛汀单独应用及联合应用均可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长，促进细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性,2者联合作用人肺腺癌A549 细胞24 h、48 h、72 h 的凋亡率显著高于单用吉非替尼或赫赛汀组(P<0.05),2者呈现出相加的抗瘤效果。结论: 吉非替尼与赫赛汀联合应用在体外对人肺腺癌A549 细胞有明显的促凋亡作用。     

子宫内膜癌中的神经内分泌细胞

一、材料与方法收集本教研室 1 983～ 1 992年外检资料齐全的 93例子宫内膜癌手术切除的标本。标本经 4%甲醛固定 ,石蜡包埋 ,4μｍ连续切片 ,ＨＥ染色 ,用免疫组织化学Ｓ Ｐ法检测神经元特异性烯醇化酶 (ＮＳＥ) ;嗜铬粒素Ａ(ＣｇＡ)和突触素 (Ｓｙｎ)的表达。试剂均购自福州迈新公司 ,用已知胰岛细胞瘤的阳性病例对照 ,ＴＢＳ代替“一抗”作阴性对照。阳性细胞为胞质呈现棕黄色颗粒。统计学方法用卡方检验。二、结果1 大体观察 :子宫内膜癌根据生长方式和范围分为 2型 :(1 )局限型 (2 9例 ) :癌组织局限性增厚或隆起 ,范围不超过 2ｃｍ者…     

紫草素对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响及可能机制

目的 探讨紫草素对子宫内膜癌lshikawa细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制.方法 将培养的Ishikawa细胞分为空白对照组与紫草素组(10、20、40pmol/L).不同浓度紫草素干预48h后,MTT实验检测Ishikawa细胞增殖能力变化;流式细胞术分析Ishikawa细胞的凋亡变化.40μmol/L紫草素处...     

调控FOXM1基因对乳腺癌BT474细胞赫赛汀药物敏感性的影响

目的探究调控叉头框转录因子M1(FOXM1)基因对乳腺癌BT474细胞赫赛汀药物敏感性的影响。方法将FOXM1过表达及特异性靶向FOXM1基因的小干扰RNA(FOXM1-siRNA)转染至乳腺癌BT474细胞,将细胞分为上调FOXM1基因组、下调FOXM1基因组和对照组。Western blot检测FOXM1蛋白以及PI3K/AKT信号通路蛋白的表达。MTT法检测不同浓度赫赛汀药物对BT474细胞增殖能力的影响。Transwell实验检测不同浓度赫赛汀药物对BT474细胞迁移、侵袭能力的影响。结果下调FOXM1基因后,FOXM1蛋白的相对表达量明显减少(P<0.05)。上调FOXM1基因组BT474细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著高于对照组,且随着赫赛汀浓度的增加其增殖率、迁移数量、侵袭数量逐渐增加,上调FOXM1基因可增强BT474细胞对赫赛汀的耐药性,促进增殖、迁移及侵袭。下调FOXM1基因组BT474细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著低于对照组,低浓度的赫赛汀对BT474细胞的增殖、迁移及侵袭能力的抑制程度较弱,高浓度的赫赛汀对BT474细胞的增殖、迁移及侵袭能力的抑制过度,而中浓度的赫赛汀抑制能力介于低、高浓度之间,能够有效抑制BT474细胞增殖、迁移及侵袭,但无抑制过度的表现。不同赫赛汀浓度下下调FOXM1基因组细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著低于上调FOXM1基因组。下调FOXM1基因组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白相对表达量均低于对照组和上调FOXM1基因组(P<0.05)。结论上调FOXM1基因可增强乳腺癌BT474细胞对赫赛汀的耐药性,下调FOXM1基因在中浓度赫赛汀的干预下,可通过作用于PI3K/AKT信号通路,抑制乳腺癌BT474细胞的增殖、迁移及侵袭,从而抑制乳腺癌的发展。     

CMIP promotes Herceptin resistance of HER2 positive gastric cancer cells

Gastric cancer remains one of the most malignant human cancers with poor prognosis. Herceptin is a well-received antibody drug for HER2 positive gastric cancer. Primary Herceptin resistance and acquired Herceptin resistance retarded the use of Herceptin for gastric cancer. We herein reported CMIP (C-Maf-inducing protein) was overexpressed in Herceptin-resistant gastric cancer cells MKN45-HR and NCI-N87-HR; CMIP promoted Herceptin resistance of HER2 positive gastric cancer cells. SOX2 was examined to be positively regulated by CMIP and also promoted Herceptin resistance of HER2 positive gastric cancer cells. SOX2 might mediate the Herceptin resistance promoting role of CMIP in gastric cancer cells. Elevated expression of CMIP was associated with poor clinicopathological features including tumor size, lymph node metastasis and clinical stage in HER2 positive gastric cancer patients. Inhibitors of CMIP could be used as potential adjuvant therapeutic drugs for HER2 positive gastric cancer.     

靶向药物赫赛汀治疗转移性乳腺癌的研究

乳腺癌为女性常见恶性肿瘤之一,为女性常见癌症第2大死因。乳腺虽不属于人体不可或缺的器官,且原位癌也不致命,随着病情进展速度逐渐加快,癌细胞后期发展至脱落会转移,侵犯至患者心、脑等重要脏器器官,危害患者生命健康。现阶段对乳腺癌相关治疗措施包括手术、放疗、化疗及内分泌治疗等。赫赛汀以癌细胞作为靶点,能进一步抑制转移性乳腺癌发展,本文就近年来所报道的文献结合我院实际开展情况进行以下总结,为后续临床工作者提供理论参考。     

Variations in the number of regulatory T cells (CD4+CD25+) in patients with breast cancer during Herceptin therapy

We studied the effect of Herceptin therapy on the population composition of lymphocytes and percentage of CD4⁺CD25⁺ cells (regulatory T cells) in breast cancer patients. Herceptin treatment decreased the number of “professional” T suppressors (CD4⁺CD25⁺ cells and regulatory T cells) in the peripheral blood. __________ Translated from Byulleten’ Eksperimental’noi Biologii i Meditsiny, Vol. 141, No. 3, pp. 338–340, March, 2006     

Notch1对神经胶质瘤U251细胞干性及化疗药物敏感性的调节

目的:探讨Notch1对人胶质瘤U251细胞干性和药物敏感性的影响。方法:用高表达Notch1胞内段(Notch1 intracellular domain,NICD1)和Notch1-shRNA慢病毒表达载体感染体外培养的人胶质瘤U251细胞,Western blot和免疫荧光染色法鉴定高表达NICD和Notch1沉默细胞。通过流式细胞术检测分析CD133+细胞的比例、免疫荧光染色法检测nestin和GFAP的表达情况、检测肿瘤细胞球的形成率和SCID小鼠体内种植致瘤情况,分析Notch1对细胞干性的调节。并采用MTT法检测各组细胞对化疗药物替尼泊苷(VM-26)和卡莫司汀(BCNU)的敏感性。结果:NICD表达增加的瘤细胞干性表型增强,如CD133+细胞的比例增加、nestin表达增强而GFAP表达减弱、肿瘤细胞球的形成率和SCID小鼠种植致瘤率增加,并伴有对VM-26和BCNU的敏感性降低。而Notch1基因表达下调的瘤细胞干性表型受到明显抑制,而对VM-26和BCNU的敏感性增高。结论:Notch1高表达可增加人胶质瘤U251细胞的干性,减弱U251细胞对化疗药物的敏感性。     

Raloxifene,a selective estrogen receptor modulator,induces mitochondria-mediated apoptosis in human endometrial carcinoma cells

Raloxifene is a nonsteroidal benzothiophene that has also been classified as a selective estrogen receptor modulator (SERM) on the basis of studies in which it produced both estrogen-agonistic effects on bone and lipid metabolism and estrogen-antagonistic effects on uterine endometrium and breast tissue. We investigated apoptotic cell death and the apoptotic pathway in human endometrial carcinoma cells (Ishikawa cells) expressing estrogen receptor treated with raloxifene. Cell viability was significantly decreased in Ishikawa cells treated with raloxifene at 20 microM and higher levels. Raloxifene at 20 microM induced 54% inhibition of cell viability after 48 h treatment. Apoptotic parameters were analyzed for determination of apoptotic pathway in Ishikawa cells treated with 20 microM or 40 microM raloxifene for 48 h. The numbers of apoptotic cells were significantly increased in cells treated with raloxifene as compared with control cells. Activities of caspase-3,-8, and-9 were significantly elevated in Ishikawa cells treated with raloxifene. A significant decrease in mitochondrial membrane potential was observed in this treatment. In addition, the levels of cytosolic cytochrome c were significantly elevated in raloxifene-treated cells. Expression of Bid was detected in both control and raloxifene-treated cells, but Bid cleavage was not observed. In caspase inhibitor experiments, cell viability was significantly increased by the caspase-9 inhibitor z-LEHD-fmk and by the caspase-3 inhibitor z-DEVD-fmk. However, cell viability was unaffected by addition of the caspase-8 inhibitor z-IETD-fmk. Thus, raloxifene induced mitochondria-mediated apoptosis in endometrial cancer cells but not via the Bid-mitochondria pathway. It is possibly that raloxifene may be useful as an adjuvant to current chemotherapies for endometrial cancer and possibly is useful as a chemopreventive agent.     

小檗碱增强阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡

 目的:研究小檗碱对阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡的影响及机制。方法:将膀胱癌T24细胞分为对照组、阿霉素组、阿霉素+小檗碱组和小檗碱组。采用CCK-8试剂盒测定膀胱癌T24细胞的增殖抑制率。采用Hoechst 33258染色剂检测细胞凋亡,同时测定caspase-3和caspase-9活性以及Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:小檗碱呈剂量和时间依赖性地促进阿霉素诱导的T24细胞凋亡。与阿霉素组比较,小檗碱+阿霉素组caspase-3、caspase-9活性和Bax蛋白的表达水平明显增加,而Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:小檗碱可进一步增强阿霉素对T24细胞增殖的抑制作用,其机制与小檗碱增强阿霉素诱导的T24细胞凋亡有关。     

青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及联合化疗药物的抗肝癌效应

目的: 研究青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的作用,并检测其是否影响HepG2细胞对化疗药物的敏感性。方法: 采用CCK-8法观察不同浓度青蒿琥酯对HepG2细胞生长增殖的影响;克隆形成实验检测青蒿琥酯对HepG2细胞克隆形成的影响;Hoechst 33258染色观察青蒿琥酯作用HepG2细胞后细胞形态的变化;PI单染流式细胞术检测青蒿琥酯对HepG2细胞周期以及亚二倍体率的影响;Annexin V-PI双染测定青蒿琥酯对HepG2细胞凋亡的影响;CCK-8法检测青蒿琥酯对HepG2细胞化疗药物敏感性的影响。结果: (1)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,能有效抑制其增殖,随着浓度的升高,增殖抑制率越高,IC₅₀值为19.2 μmol/L。(2)青蒿琥酯作用HepG2细胞7 d后,能有效抑制HepG2细胞形成的克隆数。(3)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,Hoechst 33258染色可见实验组细胞胞核固缩、边聚和裂解、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。(4)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,PI单染流式细胞术检测细胞周期发现实验组细胞明显阻滞于G₂期。(5)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,PI单染实验检测实验组出现明显的亚二倍体凋亡峰;Annexin V-PI 双染实验检测实验组细胞出现明显的早期凋亡细胞群。(6)青蒿琥酯分别联合化疗药物5-氟尿嘧啶、卡铂和表柔比星作用于HepG2细胞48 h后,能明显增强化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用,增敏倍数分别为3.33、2.02和1.71。结论: (1)青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡。(2)青蒿琥酯能提高人肝癌HepG2细胞对5-氟尿嘧啶、卡铂和表柔比星的敏感性。     

Knockdown of PINCH-1 protein sensitizes the estrogen positive breast cancer cells to chemotherapy induced apoptosis

Introduction

PINCH-1 is a ubiquitously expressed protein belonging to the focal adhesion protein group which has a role in cell survival, spreading, adhesion and migration. It has been implicated in pathogenesis of several cancers. In the present study we aimed to investigate the role of this protein in estrogen positive and negative breast cancer subtypes.