草苁蓉提取物抑制HSC-T6细胞体外增殖及胶原合成

肝纤维化是各种致病因子引起慢性肝病进而发展成肝硬化的病理学基础与必经之路.肝星状细胞( Hepatic stellite cell,HSC)是一种具有多潜能的幼稚间质细胞,经过激活刺激后其表型转换形成成纤维细胞并分泌大量细胞外基质,是肝纤维化发生的细胞学基础.近年来文献报道,草苁蓉( boschniakia rossica,BR)具有抗自由基、抗脂质过氧化、抗癌、抗炎等作用,且对肝脏急慢性损伤具有保护功能[1].本实验探讨了草苁蓉乙醇提取物对培养的大鼠HSC增殖及胶原合成的抑制作用.     

Th2细胞和IgE合成

ＩｇＥ是介导速发型过敏反应的抗体，过敏原特异的Ｔｈ２细胞通过其表面分子与Ｂ细胞表面分子相互作用，并分泌细胞因子作用于Ｂ细胞，使Ｂ细胞分泌ＩｇＥ抗体。同时Ｔｈ２细胞的分化受到体内细胞因子、激素、个体ＭＨＣ基因型等的影响。本文就Ｔｈ２细胞对Ｂ细胞分泌ＩｇＥ的作用以及Ｔｈ２细胞本身产生的机制作一综述。     

FRNK质粒转染抑制肝星状细胞胶原合成

目的：探讨黏着斑激酶相关非激酶（FRNK）对纤维连接蛋白（FN）刺激的肝星状细胞（HSCs）胶原合成的影响。方法:应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染;采用Western blotting方法测定FRNK蛋白在HSCs的表达,鉴定转染效果;［3H］-Pro掺入法检测HSCs总胶原和Ⅰ型胶原的合成能力。结果:FRNK质粒成功转染HSCs,于转染48 h时FRNK蛋白表达最强（P<0.05）;在FRNK转染HSCs 48 h后总胶原合成能力（498.17±73.20）较空质粒组（748.33±61.30）显著下降（P<0.01）;在FRNK转染HSCs 48 h后 Ⅰ型 胶原合成能力（163.17±23.80）较空质粒组（371.58±15.44）亦显著下降（P<0.01）。结论:FRNK可以使HSCs总胶原和Ⅰ型胶原合成能力降低,提示其对肝星状细胞胶原合成功能具有负调控作用。     

细胞生长因子和维拉帕米在肝细胞胶原合成和前胶原基因表达中的作用

目的：探索肝细胞在肝纤维化形成中的可能作用。方法：用核酸原位分子杂交方法和＾３Ｈ－脯氨酸掺入法,观察原代培养大鼠肝细胞在血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）刺激前后胶原合成和Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的及钙拮抗剂维拉帕米对此作用的影响。结果：肝细胞培养一定一能够合成胶原,能够表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因。ＰＤＧＦ能促进肝细胞的胶原合成和前胶原基因表达。但此刺激作用为维拉帕米所抑制。结论：这些研究为肝细胞参与肝纤维     

食欲素A对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响及机制

目的研究食欲素A(orexin A)对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响,及其可能作用机制。方法以不同浓度的orexin A干预Hep G2细胞24h,MTT法检测细胞的增殖能力,筛选最适的orexin A作用浓度。使用食欲素受体1选择性拮抗剂SB408124(10μM)预处理细胞1 h,然后用最适浓度的orexin A干预细胞24h,实验设置为:正常对照组、溶剂对照组、orexin A组、SB408124+orexin A组。MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechst染色观察细胞的形态变化,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cytochrome c和Cleaved-caspase-3蛋白的表达。结果 Orexin A以剂量依赖性方式明显抑制Hep G2细胞的生长,最适宜浓度为0.5μM,细胞G0/G1期百分比(72.50%±1.32%)明显高于S期(19.6%9±1.15%)。Orexin A促进Hep G2细胞凋亡,细胞凋亡率显著升高(0.01)。Orexin A显著上调Bax和Cleaved-caspase-3表达水平,下调Bcl-2和线粒体Cytochrome c表达水平。SB408124的干预能够减小orexin A对Hep G2细胞的影响。结论 Orexin A通过食欲素受体1抑制Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡。     

索拉非尼抑制人肝星状细胞胶原合成

目的: 研究索拉非尼(sorafenib)对人肝星状细胞胶原合成的影响。方法: 应用人肝星状细胞株LX-2进行体外研究,采用 -脯氨酸掺入法测定胶原的合成,采用免疫细胞化学法检测I型胶原蛋白表达,采用real-time PCR法测定I型胶原α1 mRNA表达。结果: 免疫细胞化学研究显示血小板源性生长因子(PDGF)刺激可引起LX-2细胞胶原合成增加,10.0 μmol·L^-1索拉非尼作用于LX-2细胞 24 h能明显抑制I型胶原蛋白的合成。无论有无PDGF的刺激,索拉非尼均呈剂量与时间依赖性地抑制LX-2细胞胶原合成(P<0.01);在10.0 μmol·L^-1浓度下,索拉非尼作用于LX-2细胞 12 h、24 h和48 h对胶原合成的抑制率为22.69%、37.52%和71.74%。索拉非尼剂量依赖性地抑制PDGF诱导的I型胶原α1 mRNA表达上调;在2.5 μmol·L^-1、5.0 μmol·L^-1和10.0 μmol·L^-1 索拉非尼作用下,I型胶原α1 mRNA表达较PDGF刺激组分别下调58.66%、 67.06%和81.64%。结论: 索拉非尼在体外能抑制人肝星状细胞胶原的合成,抑制I型胶原的表达,有可能成为一种新型的治疗肝纤维化药物。     

G蛋白介导促胰液素对大鼠胃平滑肌细胞的舒张作用

本研究应用人鼠游离胃平滑肌细胞和采用[35S]GTPγS结合法测定肌细胞的G蛋白,观察促胰液素舒张胃个沿肌细胞中的G蛋白的变化及其信号转导通路。结果显示：（1）促膝液素对胃体、胃窦平滑肌细胞均有舒张作用,促膝液素抗血清可阻断促腔激素对胃窦平滑肌细胞的舒张反应,Forskolin与cAMP抑制剂分别加强和抑制促胰液素的这一作用。（2）Gαs抗体可抑制促胰液素的舒张作用,促胰液素明显引起Gαs抗体与[35S]GTPγS结合的增加,表明胃平滑肌细胞中促胰液素受体与Gs蛋白相偶联,激活cAMP系统介导促胰液素舒张胃平滑肌细胞。     

中介素抑制高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织胶原生成

 目的:研究中介素（IMD）对高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织胶原生成和沉积的调节作用及其机制。方法: 健康雄性SD大鼠20只,随机分为对照组（n=7）、分流组（n=7）和分流+IMD组（n=6）。对后2组大鼠行腹主动脉-下腔静脉分流术。8周后,对分流+IMD组大鼠,皮下埋微量渗透泵持续给予IMD 1.5 μg·kg-1·h-1。继续饲养2周后,比较各组大鼠肺动脉平均压（mPAP）、肺中、小动脉相对中膜厚度（RMT）,肺组织羟脯氨酸、Ⅰ和Ⅲ 型胶原、骨形成蛋白-2（BMP-2）含量和I、III型前胶原mRNA表达水平。结果: 与对照组相比,分流组大鼠mPAP明显上升,肺中、小动脉RMT明显增加,肺组织羟脯氨酸和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显增多,Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达上调,BMP-2含量明显增多。IMD则使分流大鼠肺动脉压力明显回降,肺血管结构改变缓解,胶原沉积减少,BMP-2含量降低,Ⅰ、Ⅲ 型前胶原mRNA表达下调。结论: IMD可通过抑制高肺血流大鼠肺组织胶原生成和沉积,缓解高肺血流性肺动脉高压和肺血管结构重构形成,该作用可能与BMP-2途径有关。     

利用II型胶原变构肽抑制类风湿关节炎患者T细胞活化的研究

为了研究II型胶原(CII)变构肽对类风湿性关节炎(RA)患者外周血T细胞激活的抑制作用,以固相法合成CII263-272原型肽及3条变构肽,计算机模拟分析变构肽与HLA-DR4分子的结合能力3。H掺入法检测61例RA患者外周血单个核细胞对CII263-272原型肽及变构肽的T细胞增殖反应。ELISA法检测CII263-272原型肽及变构肽刺激下外周血T细胞IL-2及IFN-γ的分泌。竞争抑制试验观察CII变构肽对原型肽介导T细胞激活的抑制作用。计算机模拟结果发现,CII263-272原型肽可与HLA-DR4分子结合,在此基础上替换TCR结合位点267位谷氨酰胺、270位赖氨酸和271或265位甘氨酸为丙氨酸,不影响该多肽与HLA-DR4分子的结合能力。CII变构肽在RA患者外周血T细胞具增殖中有明显低反应性,下调IL-2和IFN-γ的产生,并且可特异性抑制CII原型肽诱导的T细胞活化(P<0.05或P<0.01)。以上结果提示,替换CII263-272多肽中与T细胞受体结合的氨基酸形成的CII变构肽可抑制RA患者外周血T细胞活化,可能在本病的免疫治疗中有重要意义。     

前列腺素E2抑制T细胞活化的机制

机体在严重烧伤、创伤、败血症等情况下,T细胞免疫功能受到抑制.前列腺素E2是抑制T细胞免疫活化的重要炎性介质之一,它通过对T细胞活化途径中的信号转导分子的抑制作用,使T细胞处于免疫失活或无能状态,这种免疫调节作用,在机体处于应急状态下,发挥免疫保护作用.     

青藤碱抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭

目的:观察青藤碱对人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:分别采用不同浓度的青藤碱处理SKOV3细胞12、24和48 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Transwell实验检测细胞迁移率和侵袭率,同时采用Western blot法检测细胞周期素(cyclin)A、cyclin D1、E-cadherin和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平。结果 :随着青藤碱作用浓度和作用时间的增加,SKOV3和IOSE80细胞活力逐渐降低,青藤碱作用SKOV3和IOSE80细胞48 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为2.12 mmol/L和17.35 mmol/L;青藤碱可呈剂量依赖性地诱导SKOV3细胞发生G_0/G_1期和S期阻滞(P0.05),抑制SKOV3细胞迁移和侵袭(P0.05),下调cyclin A、cyclin D1和MMP-9蛋白水平(P0.05),并上调E-cadherin蛋白水平(P0.05)。结论 :青藤碱可在体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭,这可能与其下调cyclin D1、cyclin A和MMP-9蛋白水平,以及上调E-cadherin蛋白水平有关。     

M1型巨噬细胞源外泌体增强卵泡膜细胞的活力

目的:探讨M1型巨噬细胞源外泌体对卵泡膜细胞活力的影响及其作用机制。方法:采用脂多糖(LPS)处理Raw264.7小鼠巨噬细胞,构建M1型巨噬细胞模型及巨噬细胞-卵泡膜细胞共培养体系。超速离心法分离巨噬细胞分泌的外泌体;通过电镜、Western blot和纳米流式检测仪鉴定外泌体。体外分离培养小鼠卵泡膜细胞,与PKH67荧光标记的外泌体共孵育,观察卵泡膜细胞摄取外泌体的情况。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术分析细胞周期分布,q PCR及Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1B(CDKN1B)的表达。结果:在巨噬细胞-卵泡膜细胞共培养体系中,LPS诱导的M1型巨噬细胞通过外泌体增强卵泡膜细胞活力。电镜、Western blot及纳米流式检测结果显示,巨噬细胞源外泌体被成功分离。PKH67标记的外泌体与卵泡膜细胞共孵育实验证实卵泡膜细胞能摄取大量巨噬细胞源外泌体。这些外泌体可增强卵泡膜细胞的活力,使卵泡膜细胞G₀/G₁期比例下降,S期比例升高,且卵泡膜细胞CDKN1B的m RNA及蛋白相对表达量均明显低于对照组。结论:卵...     

miR-130a对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-130a对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs)生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:采用real-time PCR法检测大鼠BASMCs在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下miR-130a的表达水平。转染miR-130a inhibitor下调BASMCs中miR-130a的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测BASMCs活力、细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞周期及凋亡相关调控因子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、p21、p-Rb、Bcl-2和cleaved caspase-3/caspase-3的蛋白水平。Real-time PCR及Western blot检测检测生长阻滞特异性同源盒蛋白(Gax)的表达情况。结果:AngⅡ可促进BASMCs中miR-130a的表达,而抑制Gax的表达。miR-130a inhibitor可部分抑制AngⅡ增加BASMCs细胞活力的效应,并上调Gax的表达。此外,下调miR-130a后细胞早期凋亡率显著增加(P0.05);同时细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2和p-Rb的蛋白水平均显著降低,p21及cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P0.05)。结论:沉默miR-130a可上调BASMCs中Gax的表达,进而影响细胞周期及凋亡相关因子的表达,从而抑制细胞活力,并促进其凋亡,提示miR-130a可作为高血压脑血管重构的一个潜在诊疗靶点。     

格列本脲对胶质母细胞瘤活性及细胞内酸碱平衡的影响

目的:探讨格列本脲对胶质母细胞瘤活性及细胞内酸碱变化的影响。方法:使用不同浓度的格列本脲(Glib)处理人胶质瘤细胞株U251和U87,通过CCK-8法筛选有效剂量;随后将实验分成对照组和药物处理组,划痕实验检测细胞迁移情况,细胞p H指示荧光探针检测细胞内p H变化,Western blot测定内向整流钾离子通道4.1(Kir4.1)和单羧酸转运蛋白1(MCT1)的表达情况。结果:CCK-8法检测结果显示,Glib作用于U251细胞和U87细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为400.20μmol/L和553.70μmol/L,且在100~1 600μmol/L的浓度区间范围内,Glib抑制U251细胞活力,在50~1 600μmol/L的浓度区间范围内,Glib抑制U87细胞活力,两者均呈浓度依赖性(P0.05);与对照组相比较,Glib不仅能够抑制细胞迁移(P0.05),抑制作用与药物浓度呈正相关(P0.05),而且使实验组细胞内荧光强度减弱(P0.05),提示随着药物浓度的增高,细胞内p H值逐渐下降(P0.05);实验组细胞的Kir4.1和MCT1蛋白含量明显降低,均有浓度依赖性(P0.05)。结论:Glib在一定剂量范围内通过下调Kir4.1和MCT1表达诱导细胞内环境酸化,抑制胶质瘤细胞生长。     

GDC-0032抑制U251胶质瘤细胞活力并诱导DNA损伤

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂GDC-0032对人胶质瘤U251细胞活力、细胞周期和DNA损伤的影响。方法:GDC-0032处理U251细胞,MTT实验检测细胞活力;流式细胞术分析GDC-0032对细胞周期的影响;Western blot检测细胞内蛋白表达的变化;免疫荧光检测组蛋白γ-H2AX在细胞内的表达与分布。结果:GDC-0032剂量依赖性地抑制U251细胞活力;U251细胞经GDC-0032作用后,处于G1期的细胞数量明显增多,同时p27的表达水平增加,而细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)的表达则受到抑制;在GDC-0032作用的细胞中,γ-H2AX焦点的生成和表达水平明显升高;另外,GDC-0032上调胶质瘤细胞中丝裂原活化蛋白激酶家族成员细胞外信号调节激酶(ERK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平,而survivin的表达则受到抑制。结论:GDC-0032能够通过抑制细胞活力和阻滞细胞于G1期而抑制U251细胞的增殖,并且诱导胶质瘤细胞发生DNA损伤;GDC-0032的抑癌活性与其调控ERK和JNK的活性及下调survivin的表达相关。     

CDA-2诱导胶质瘤细胞SWO-38分化并抑制其增殖的作用机制

目的： 诱导分化是肿瘤治疗的新策略，CDA-2是1种高效低毒的新型细胞分化剂，本实验研究CDA-2对人脑胶质瘤细胞SWO-38诱导分化作用并探讨CDA-2诱导分化的机制。方法: 应用MTT法检测CDA-2对SWO-38细胞活性的抑制作用、平板集落形成实验检测CDA-2对SWO-38细胞的增殖抑制作用、免疫组化检测SWO-38细胞GFAP的表达、Western blotting检测SWO-38细胞PPARγ、COX-2及GFAP蛋白的表达。结果: CDA-2能明显抑制人脑胶质瘤细胞SWO-38活性及增殖，其IC₅₀值分别为(2.33±0.37) g·L^-1 及(0.51±0.01) g·L^-1；3 g·L^-1 CDA-2处理SWO-38细胞72 h即表现为细胞突起增多变长，细胞高表达GFAP蛋白；同时CDA-2可诱导SWO-38细胞PPARγ表达上调和COX-2 表达下调。结论: CDA-2对胶质瘤SWO-38细胞具有增殖抑制及诱导分化作用，其作用机制可能与GFAP、PPARγ和COX-2信号转导通路有关。     

淫羊藿苷对前列腺癌细胞株活力、迁移与侵袭的作用

目的:探讨淫羊藿苷对前列腺癌细胞株Du145与PC3的存活、迁移与侵袭能力的影响,并初步研究其机制。方法:CCK-8法检测不同浓度淫羊藿苷(0、5、10、20、40和80μmol/L)对Du145细胞与PC3细胞活力的影响;Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白水平。结果:MTT法检测结果显示淫羊藿苷呈浓度依赖性抑制Du145与PC3细胞的活力,当浓度到达40μmol/L时,抑制作用达到最大;经淫羊藿苷干预后,Du145和PC3细胞迁移和侵袭能力显著下降,Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白表达水平显著下降。结论:淫羊藿苷具有抑制前列腺癌细胞株Du145与PC3生长、迁移和侵袭的作用,其作用机制可能与淫羊藿苷抑制Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白的表达有关。     

miR-485-5p靶向作用于SOX5抑制肝癌细胞Hep3B的活力及侵袭和迁移能力

目的:研究微小RNA-485-5p(miR-485-5p)对肝癌细胞的活力及迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法:以正常肝细胞THLE-3为对照,采用RT-qPCR检测肝癌细胞中性别决定区Y框蛋白5(SOX5)mRNA和miR-485-5p的表达,Western blot检测SOX5、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达水平,MTT法检测Hep3B细胞的活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,双萤光素酶报告基因系统验证细胞中miR-485-5p与SOX5的调控关系。结果:与对照组相比,在肝癌细胞Hep3B、Huh7和HCCLM3中miR-485-5p的表达水平显著降低(P<0.05),SOX5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);过表达miR-485-5p可抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力(P<0.05);miR-485-5p靶向调控SOX5的表达,敲减SOX5的表达也可抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力;过表达SOX5可部分逆转过表达miR-48...     

PRRX2通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞活力和迁移

目的:研究配对相关同源框2(paired-related homeobox 2,PRRX2)基因对胃癌细胞活力和迁移能力的影响,并分析其调控Wnt/β-catenin信号通路的机制。方法:通过生物信息学分析在线数据库中胃癌和正常胃组织的PRRX2表达水平及PRRX2在胃癌组织中的表达与胃癌患者总生存率的相关性;将PRRX2小干扰RNA(si RNA)和过表达质粒分别转染到胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中,敲低和过表达PRRX2基因;MTT法和Transwell实验检测胃癌细胞的活力和迁移能力;Western blot和TOPflash/FOPflash双萤光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin信号通路的活化情况;免疫共沉淀实验检测PRRX2与β-catenin蛋白的相互作用。结果:敲低PRRX2能够减弱胃癌细胞MGC-803的活力和迁移能力(P0.05)。过表达PRRX2能够增强胃癌细胞SGC-7901的活力和迁移能力(P0.05),增加β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白的表达水平(P0.05),增强TOPflash/FOPflash双萤光素酶报告基因活性(P0.05)。PRRX2与β-catenin蛋白存在相互作用。结论:PRRX2可促进胃癌细胞的活力和迁移,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。