奥沙利铂对结肠癌SW480细胞迁移侵袭及细胞凋亡的影响

目的探讨奥沙利铂对结肠癌细胞SW480细胞的增殖、凋亡及迁移作用的影响。。方法体外培养结肠癌SW480细胞,加入不同浓度的奥沙利铂(5, 10, 20, 40μg/mL),分别培养0,24,48,72h后,平板克隆形成实验检测奥沙利铂对结肠癌SW480细胞生长能力的影响;细胞划痕实验观察实验处理前后SW480细胞的迁移能力的变化;Matrigel细胞侵袭实验检测奥沙利铂对恶性肿瘤细胞侵袭和转移的影响;Real-time PCR和Western blot验证Bcl2、Bax、Bcl-Xl、E-Cadherin等基因的表达水平。结果奥沙利铂降低结肠癌SW480细胞的克隆形成率,显著抑制细胞的迁移能力,但奥沙利铂对结肠癌SW480细胞的侵袭能力无抑制作用;下调原癌基因Bcl2和Bcl-Xl的表达水平、上调抑癌基因Bax的表达水平。结论奥沙利铂抑制SW480细胞增殖、促进凋亡与下调Bcl2/Bax比值相关。     

Wip1基因沉默对结肠癌细胞化疗敏感性的影响

目的:观察靶向Wip1基因的特异性siRNA序列对结肠癌细胞Wip1基因的抑制效应,探讨Wip1基因沉默对结肠癌细胞化疗敏感性的影响。方法:将Wip1-811 siRNA转染入Wip1高表达的RKO结肠癌细胞株,采用real-time PCR法检测Wip1 mRNA的表达,采用Western blotting方法检测Wip1蛋白表达,采用MTS方法检测结肠癌细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果:Wip1-811 siRNA明显抑制Wip1的表达。抑制Wip1基因表达后,转染组RKO结肠癌细胞对抗肿瘤药物的敏感性增加,5-氟尿嘧啶处理组RKO结肠癌细胞活力由(89.4±6.6)%降至(74.7±3.9)%(P0.05),奥沙利铂处理组细胞活力由(77.9±2.4)%降至(66.7±2.9)%(P0.05)。转染Wip1-811 siRNA后,5-氟尿嘧啶处理组细胞凋亡比例由(7.7±0.5)%升至(12.3±3.2)%(P0.05);奥沙利铂处理组细胞凋亡比例由(14.7±2.1)%升至(34.0±2.1)%(P0.05)。结论:沉默Wip1基因表达能增强结肠癌细胞的化疗敏感性。     

VEGF-DsiRNA干扰对人结肠癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的利用人血管内皮生长因子-D(vascular endothelial growth factor-D,VEGF-D)小RNA干扰(siRNA),研究VEGF-D表达下调对人结肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法设立3个细胞组:未处理的人结肠癌SW480细胞作为空白对照组,转染阴性对照siRNA的SW480细胞作为阴性对照组,转染VEGF-D siRNA的SW480细胞作为实验组。RT-PCR和Western-blot检测转染后SW480细胞VEGF-D基因和蛋白的表达,MTT法检测VEGF-D RNA干扰对结肠癌细胞增殖的影响,Transwell小室实验检测VEGF-D RNA干扰对结肠癌细胞侵袭的影响。结果 VEGF-D siRNA转染人结肠癌细胞SW480,VEGF-D基因和蛋白水平表达量明显低于对照组,MTT实验显示体外细胞存活率下降,Transwell小室中穿膜细胞数减少。结论 VEGF-D siRNA显著抑制结肠癌细胞SW480中VEGFD的基因和蛋白表达,明显抑制SW480细胞的体外增殖和侵袭能力。     

miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及可能机制

目的 探讨miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测人结肠癌细胞株SW480与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中miR-27a的表达水平。体外培养SW480细胞,将SW480细胞随机分为空白对照组(不进行任何处理)、miR-27a抑制剂组（转染miR-27a inhibitor）与阴性对照组（转染miR-27a inhibitor NC）,采用脂质体法进行转染,实时荧光定量PCR方法验证转染效率。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测SW480细胞增殖;Transwell实验检测SW480细胞侵袭与迁移;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot法检测转染后叉头框蛋白O1(FOXO1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、泛素连接酶FBW7的表达。结果 miR-27a在SW480细胞中的表达水平显著高于NCM460细胞（P<0.01）。转染miR-27a抑制剂后,SW480细胞中miR-27a的表达水平明显降低,转染成功。抑制miR-27a表达后,SW480细胞的增殖、迁移与侵袭能力显著降低,凋亡率显...     

敲低丝酶抑制蛋白E2(serpin E2)抑制SW480结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的探讨丝酶抑制蛋白E2(serpin E2)对结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法免疫组织化学染色对30名结肠癌患者癌组织和癌旁组织中serpin E2的表达量进行差异性检测,通过转染serpin小干扰RNA(si-serpin)至SW480细胞中,实时定量PCR检测SW480细胞中serpin E2 mRNA水平,Western blot法检测serpin E2蛋白水平,CCK-8法和平板克隆形成实验检测SW480细胞的增殖,TranswellTM实验分别检测SW480细胞的侵袭与迁移能力。结果结肠癌组织中serpin E2表达明显增加,敲低SW480细胞serpin E2水平后,SW480细胞的增殖、侵袭、迁移能力均显著降低。结论下调SW480细胞中serpin E2水平抑制SW480细胞的增殖、侵袭和迁移。     

USP22 siRNA通过TIMP-2抑制人结肠癌细胞系SW480侵袭

目的探讨泛素特异性蛋白酶22(USP22)调控基质金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)对人结肠癌细胞侵袭的影响。方法 Western blot检测USP22在不同结肠癌细胞系的表达,选定高表达USP22的SW480细胞用于后续实验;将SW480细胞分为对照组(NC siRNA)和转染组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测对照组及转染组Hif-1α、Hif-1β、cdc42、RhoA、Smad7、TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达;RT-qPCR和Western blot检测对照组及2种转染组中USP22及TIMP-2蛋白的表达;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力。结果 USP22在SW480细胞中表达量较高(P0.05);与对照组相比敲低USP22基因后,TIMP-2表达及SW480细胞侵袭能力均下降(P0.05);敲低TIMP-2基因后,USP22表达无明显变化,SW480细胞侵袭能力下降(P0.05)。结论 USP22可能通过调控TIMP-2的表达抑制人结肠癌细胞的侵袭与转移。     

小分子干扰RNA 沉默RhoGDI2 基因表达对结肠癌细胞增殖侵袭的影响及其机制

目的:应用小分子干扰RNA(siRNA)沉默RhoGDI2 基因的表达,初步探讨其对结肠癌细胞增殖、迁移能力的影响及可能的机制。方法:分别运用Western blot 和RT-qPCR 检测结肠癌细胞株RKO、HT29、SW620、SW480、HCT116 基因RhoGDI2 的表达情况。设计并合成RhoGDI2 siRNA 干扰序列,按照LipofectamineTM2000 转染方法将siRNA 干扰序列转染到目的细胞,设置实验干扰组、空白对照和阴性对照组;CCK-8 实验检测细胞增殖能力,细胞划痕试验和Transwell 实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果:人结肠癌细胞株RhoGDI2 表达量由高到低依次是RKO、HT29、SW620、SW480、HCT116;RKO 细胞siRNA干扰后RhoGDI2 表达抑制率大于70%:实验干扰组、阴性对照组、空白对照组细胞增殖率分别是(0.683±0.013)、(0.866±0.088)、(0.905±0.008),P<0.05;实验干扰组细胞迁移、侵袭速率较对照组均减慢。沉默RhoGDI2 基因的表达,实验组细胞E-Cadherin 较对照组表达量高,Vimentin 蛋白表达下降。结论:结肠癌RhoGDI2 基因沉默可能通过抑制EMT 进程阻止肿瘤恶性生物学行为。     

lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的探讨lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中lncRNA RAB11B-AS1的表达水平。构建稳定过表达RAB11B-AS1的SW480细胞系,MTT方法检测SW480细胞的增殖能力变化;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭能力变化,划痕实验检测SW480细胞迁移能力变化;Western blot检测SW480细胞中细胞周期蛋白1(cyclin D1)和CDK6的表达水平。结果 RAB11B-AS1在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P0.01);在SW480中的表达显著低于NCM460细胞(P0.01)。RAB11B-AS1过表达后,SW480细胞的增殖、侵袭与迁移能力显著降低,凋亡率显著升高,cyclin D1与CDK6的蛋白表达降低(P0.01)。结论 lncRNA RAB11B-AS1在结直肠癌组织中表达降低,过表达RAB11B-AS1能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

Gli2基因沉默对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)基因对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法构建靶向Gli2基因的shRNA慢病毒载体,转染到SW480细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;实验设干扰组、阴性对照组和空白组。用MTT法、倍增时间与集落形成实验检测细胞的增殖能力;用Transwell小室法检测细胞的迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blot法检测细胞间Gli2、cyclin D和MMP-2基因和蛋白的表达。结果SW480细胞转染慢病毒72 h后可见明显的绿色荧光蛋白表达,干扰组较阴性对照组与空白组Gli2表达降低,细胞增殖减慢,集落形成能力减弱,倍增时间延长,迁移、侵袭能力减弱,cyclin D1和MMP-2表达下降(P0.05)。结论沉默Gli2的表达能够抑制SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力,机制可能与cyclin D1和MMP-2的下调有关。     

miRNA-224-3p对人结肠癌细胞株SW480的增殖及侵袭的作用

目的探讨低表达miRNA-224-3p对结肠癌细胞株SW480增殖及侵袭的作用机制。方法采用siRNA技术沉默miRNA-224-3p在结肠癌细胞株SW480中的表达,实验分为si RNA组和NC组;采用CCK8法检测细胞增殖率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用Western blot检测细胞中miRNA-224-3p、Cyclin D1以及CDK4蛋白的表达;采用Transwell小室检测细胞侵袭力。结果转染si RNA后,siRNA组中miRNA-224-3p蛋白表达明显低于NC组(P0.05);CCK8结果表明在结肠癌细胞株在转染24 h、48 h和72 h时的细胞增殖率分别明显低于NC组(P0.05);流式检测结果表明在siRNA组中,处于G0～G1期的SW480的细胞数量显著高于NC组(P0.05),处于S期的SW480细胞数量显著低于NC组(P0.05);Western blot结果表明siRNA组中的Cyclin D1和CDK4蛋白表达明显高于NC组(均P0.05);Transwell小室检测表明siRNA组细胞的侵袭力明显低于NC组(P0.05)。结论低表达miRNA-224-3p可显著抑制结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭,其机制可能与阻滞细胞周期进程有关。     

PRL-3基因对结直肠癌细胞形态及粘附、运动能力的影响

目的探讨PRL-3的过表达或敲低对结直肠癌细胞相应的生物学特性的影响。方法常规进行细胞培养,应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞结构;应用运动小室实验检测PRL-3对结直肠癌迁移能力的影响;应用细胞粘附实验测定细胞在I型胶原上的粘附性。结果粘附实验结果表明,与SW480/EGFP/mock和SW480/EGFP细胞相比,SW480-EGFP-PRL-3细胞的粘附能力增强,而SW480-PRL-3-KD1细胞的粘附能力减弱,差异有统计学意义（F=22.013,P〈0.01）。运动小室实验证明,SW480/EGFP、SW480-EGFP-PRL-3、SW480/EGFP/mock及SW480-PRL-3-KD1细胞的运动能力差异有统计学意义（F=21.368,P〈0.01）,说明PRL-3与结直肠癌细胞的运动迁移能力有关。结论 PRL-3基因是结直肠癌细胞粘附、迁移的促进基因。     

ST6Gal I 基因特异性siRNA对SW480细胞黏附和侵袭力的影响

目的:探讨人α-2,6-唾液酸转移酶(ST6GalI)小分子干扰RNA(siRNA)对ST6GalI高表达的结肠癌SW480细胞株的黏附和侵袭力的影响。方法:设计并合成ST6GalI靶向的siRNA,用脂质体Lipofectamine2000包裹后转染SW480细胞。实验设空白对照组、脂质体对照组、非特异性siRNA组和ST6GalIsiRNA组,采用RT-PCR测定细胞中ST6GalImRNA表达水平,流式细胞术检测细胞表面α-2,6-唾液酸含量,并分别用CytoMatrixTM细胞黏附试剂盒及细胞侵袭分析试剂盒,检测细胞对细胞外基质(ECM)黏附与侵袭力。结果:与空白对照组、脂质体对照组、非特异性siRNA组相比,转染48h后,ST6GalIsiRNA组细胞中ST6GalImRNA表达明显下调;转染72h后,ST6GalIsiRNA组细胞表面α-2,6-唾液酸的含量及细胞对ECM的黏附和侵袭力均明显低于其他3个对照组(P<0.05)。结论:化学合成的靶向ST6GalI的siRNA能够下调SW480细胞中ST6GalI基因的表达,降低细胞对ECM的黏附和侵袭力。本实验为进一步研究应用RNA干扰技术抗肿瘤治疗奠定基础。     

RNA干扰沉默增殖诱导配体基因对结肠癌细胞周期的影响

目的 探讨沉默增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因对人结肠癌SW480细胞增殖及细胞周期的影响.方法 将APRIL基因的小干扰RNA质粒载体(siRNA-APRIL)转染结肠癌SW480细胞株,以非特异性序列载体转染组(nontargeting control)及未转染组(nontransfected control)作为对照.Real-time PCR和Western blot评价APRIL沉默效率;CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR检测细胞周期调控基因p21及p27的表达.结果 与非特异性序列载体转染组及未转染组相比,siRNA-APRIL显著抑制APRIL mRNA及蛋白的表达(P＜0.05);siRNA-APRIL转染SW480细胞48 h、72 h和96 h后细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);转染48 h,siRNA-APRIL组G0/G1期细胞比例增高,S期及G2/M期细胞比例减少,细胞凋亡的数量增加,同时p21及p27 mRNA的表达上调(P＜0.05);而上述指标两对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 siRNA-APRIL能特异性抑制结肠癌SW480细胞APRIL的表达,并抑制细胞增殖,使细胞周期出现G0/G1期阻滞,其机制可能与上调p21和p27的表达有关.     

lncRNA MALAT1靶向调控miR-146b-5p影响膀胱癌细胞侵袭和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)靶向微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)影响膀胱癌细胞侵袭和迁移的机制。方法:在膀胱癌BIU-87细胞中转染MALAT1 siRNA,以real-time PCR方法测定转染效果,Transwell法测定侵袭及迁移能力,Western blot法检测细胞中上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(vimentin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的变化。生物信息学软件预测MALAT1与miR-146b-5p有靶向互补位点,利用双萤光素酶报告系统鉴定靶向关系。用real-time PCR方法检测下调MALAT1后BIU-87细胞中miR-146b-5p表达的变化。将MALAT1 siRNA和miR-146b-5p inhibitor共转染至BIU-87细胞中,用上述方法分析细胞侵袭、迁移及vimentin、E-cadherin和MMP-2蛋白表达的变化。结果:转染MALAT1 siRNA可明显下调BIU-87细胞中MALAT...     

低氧对结肠癌SW480细胞生存的影响及与细胞自噬的关系

 摘要：目的 观察低氧微环境对结肠癌细胞增殖、侵袭及自噬的影响,探讨低氧对结肠癌细胞生存及与自噬的关系。方法 免疫磁珠分选CD133+ 细胞;Boyden小室实验研究结肠癌细胞的侵袭;透射电子显微镜（TEM）观察细胞的超微结构;MDC荧光检测自噬囊泡;联合运用流式细胞仪和台盼蓝染色研究自噬与细胞增殖的关系。结果 Boyden小室实验中低氧微环境增加结肠癌细胞SW480进入下室的细胞数量;在实验组低氧的微环境中SW480细胞的MDC荧光强度由20.53±0.64降低至17.00±0.20,而CD133+ 细胞的MDC荧光强度由19.89±0.58增加至33.13±1.95（P<0.05）。台盼蓝染色实验显示,与对照组相比,低氧微环境中SW480活细胞率随着时间的延长而降低（P<0.05）;但CD133+ 活细胞率无显著改变。结论：低氧可增加SW480细胞的侵袭性,细胞自噬水平下降,活细胞率降低;CD133+细胞在低氧的微环境中自噬的发生增加,活细胞率基本不变。     

多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的:观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制探讨。方法:用不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理人结肠癌SW480细胞后,采用MTT法观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响,并使用流式细胞术及Hoechst33258染色检测多烯紫杉醇对SW480细胞的凋亡影响,采用RT-PCR检测SW480细胞Bcl-2mRNA表达。结果:经不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理后,MTT结果显示SW480细胞生长抑制率显著上升,流式细胞术检测显示SW480细胞凋亡发生显著升高,并且Hoechst33258染色检测SW480细胞呈凋亡状态。此外,RT-PCR检测T-24细胞Bcl-2mRNA表达水平降低。结论:多烯紫杉醇通过诱导凋亡能抑制人结肠癌SW480细胞的生长,这可能与其下调Bcl-2mRNA表达有关。     

敲减FGFR1基因表达对婴幼儿血管瘤内皮细胞生物学特性的影响

目的:研究敲减成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因的表达对婴幼儿血管瘤内皮细胞(HemECs)活力、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:经转染FGFR1小干扰RNA(si-FGFR1)下调FGFR1表达,研究FGFR1对HemECs生物学特性的影响,以CCK-8法检测细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡水平, Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的改变;Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白水平。结果:转染si-FGFR1进入HemECs能够显著抑制细胞的活力(P0.05),促进其凋亡(P0.05),降低细胞的侵袭和迁移能力(P0.05);Western blot结果显示,下调细胞中FGFR1基因的表达可降低PI3K和p-AKT的蛋白水平(P0.05),但对AKT蛋白水平无显著影响。结论:敲减HemECs细胞内FGFR1的表达可通过影响PI3K/AKT信号通路调节婴幼儿血管瘤内皮细胞的生物学特性。     

MicroRNA-98通过下调EZH2表达抑制结直肠癌细胞的活力与侵袭能力

目的:探讨微小RNA-98(mi R-98)与Zeste基因增强子同源物2(EZH2)之间的靶向关系,及其对结直肠癌细胞活力和侵袭能力的影响。方法:Target Scan软件预测EZH2和mi R-98之间的靶向结合,双萤光素酶报告基因实验验证mi R-98与EZH2之间的靶向关系。用mi R-98 mimic和mi R-98 inhibitor分别转染人结直肠癌SW480细胞和SW620细胞,Western blot检测EZH2的蛋白表达; MMT法检测细胞活力; Transwell法检测细胞的侵袭能力。转染EZH2过表达质粒检测其对细胞活力和侵袭的影响。结果:mi R-98能够靶向调节EZH2并负向调节SW480细胞和SW620细胞中EZH2的蛋白表达。在SW480细胞和SW620细胞中,过表达mi R-98显著下调细胞活力和侵袭能力,而抑制mi R-98表达显著促进细胞生长和侵袭。过表达EZH2也可促进SW480细胞和SW620细胞的生长和侵袭。结论:mi R-98通过下调EZH2表达抑制SW480细胞和SW620细胞的活力和侵袭。本研究为结直肠癌的治疗提供了新的靶点和方向。