硫化氢通过调控瘦素保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤

目的探讨瘦素(leptin)在高糖损伤心肌细胞中的作用及硫化氢(H2S)是否通过调控瘦素保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤。方法应用细胞计数盒(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色检测凋亡细胞形态及数量的改变,双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相测定胞内活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色及荧光显微镜照相测定线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测瘦素蛋白的表达。结果 35 mmol/L葡萄糖(高糖)作用H9c2心肌细胞9h可明显地促进瘦素表达,并引起心肌细胞损伤,表现为细胞存活率降低、凋亡细胞数量和ROS生成增多及线粒体膜电位(MMP)丢失。硫化氢钠(NaHS,为H2S的供体)预处理能抑制高糖对心肌细胞瘦素表达的上调作用。NaHS预处理或瘦素拮抗剂均能保护H9c2心肌细胞对抗高糖引起的上述损伤。结论瘦素参与高糖引起的心肌细胞损伤。外源性H2S可通过抑制瘦素表达保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤。     

Wnt/β-catenin信号在高糖诱导H9c2心肌细胞损伤与凋亡中的作用

目的：探讨Wnt/β-catenin信号通路是否参与体外培养条件下高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤凋亡,及其与细胞自噬的关系。方法：构建高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡细胞模型,CCK-8法和流式细胞仪检测细胞存活率和凋亡率,Western blot检测H9c2心肌细胞caspase-3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Axin-1和β-catenin的表达。结果：与对照组相比,50 mmol/L高糖处理H9c2心肌细胞48 h后,细胞存活率急速下降,caspase-3表达增强;其次,Western blot实验结果显示高糖促进wnt/β-catenin的激活,表现为Axin-1表达抑制,β-catenin表达显著升高,并伴随细胞内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低;DKK预处理能削弱高糖引起的H9c2心肌细胞凋亡,下调Axin-1活性,增强β-catenin表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结论：Wnt/β-catenin通路在高糖致H9c2心肌细胞损伤与凋亡过程中被激活,且其的激活抑制了自噬通路的活化。而当添加D-葡萄糖(Dickkopf-1,DKK-1)抑制Wnt/β-catenin后,自噬作用增强,高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡率明显下降。     

肌肽对高糖诱导的大鼠H9C2心肌细胞损伤的保护作用及其机制

目的 研究肌肽对高糖诱导受损的大鼠心肌细胞（H9C2）的保护作用及其机制。 方法 用含50 mmol/L葡萄糖的高糖培养液建立高糖损伤模型,实验观察组给予5、15 mmol/L肌肽进行保护。MTT检测各组H9C2心肌细胞活力;ELISA测定培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子浓度含量;试剂盒检测细胞中SOD、MDA、AST和LDH活性;二氢乙锭测定细胞中活性氧含量;免疫印迹测定细胞中bax、bcl-2、p65和IκB-α的蛋白表达。 结果 肌肽预处理组细胞内活性氧含量下降,SOD活性升高,AST和LDH活性减弱,MDA含量降低;其培养液中炎症因子含量明显降低,细胞核中p65蛋白水平降低,胞浆中IκB-α蛋白水平升高,bax和bax/bcl-2比值降低。 结论 肌肽能够减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤,降低细胞炎症反应,其机制可能与ROS/NF-κB信号通路有关。     

MCU在高糖诱导心肌H9c2细胞凋亡中的作用机制

目的:探讨线粒体钙离子单向转运体(mitochondrial calcium uniporter,MCU)在高糖(high glucose,HG)诱导心肌H9c2细胞凋亡中的作用机制。方法:将心肌H9c2细胞随机分为3组:对照(control)组,5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞;HG组,25 mmol/L葡萄糖处理细胞;精胺(spermine,Sp)干预(HG+Sp)组,25 mmol/L葡萄糖和5μmol/L Sp共同处理细胞。Western blot检测H9c2细胞MCU、caspase-9和caspase-3蛋白的表达;RT-qPCR检测H9c2细胞MCU的mRNA水平;Rhod-2 AM探针检测线粒体内Ca2+的荧光强度;吸光度法检测丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase,PDH)的活性;萤火虫萤光素酶检测细胞裂解液ATP的浓度;JC-1染色法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,Δψm);MitoSOXTM染色法检测线粒体活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平。结果:与control组相比,HG组MCU mRNA和蛋白水平、线粒体内Ca2+浓度、PDH活性、细胞ATP浓度及Δψm降低(P<0.05),而ROS水平及caspase-9和caspase-3凋亡蛋白表达增加(P<0.05);与HG组相比,HG+Sp组线粒体内Ca2+浓度、PDH活性、细胞ATP浓度和Δψm增加(P<0.05),而ROS水平及caspase-9和caspase-3凋亡蛋白表达降低(P<0.05)。结论:高糖通过降低MCU表达导致其活性下降,从而促进心肌H9c2细胞凋亡,其机制可能与线粒体的钙离子稳态失衡、三羧酸循环障碍和线粒体功能损伤有关。     

柚皮苷通过抑制瘦素通路对抗高糖引起的心肌细胞损伤*

 目的：探讨柚皮苷能否通过抑制瘦素通路保护H9c2心肌细胞,对抗高糖HG引起的损伤。方法：应用Western blotting法检测瘦素及瘦素受体（LEPR）的表达水平;细胞计数盒（CCK-8）测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞的形态及数量的变化;双氯荧光素（DCFH-DA）染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123染色法测定线粒体膜电位（MMP）。结果：应用35 mmol/L 葡萄糖（HG）处理H9c2心肌细胞6~24 h能上调瘦素表达,其中9 h时表达最多;HG处理心肌细胞1~24 h也能促进LEPR表达,其中12 h时表达最多;在HG处理心肌细胞前,80 μmol/L柚皮苷预处理2 h能明显抑制HG对瘦素及LEPR表达的上调作用;柚皮苷预处理2 h、瘦素拮抗剂预处理24 h或瘦素受体拮抗剂预处理2 h均能抑制HG引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率增多,凋亡细胞数量和胞内ROS生成减少,MMP回升。结论:柚皮苷可通过抑制瘦素通路保护H9c2心肌细胞,对抗HG引起的损伤。     

活性氧与丝裂原激活蛋白激酶通路的相互作用介导高糖引起的心肌细胞损伤

目的探讨活性氧(ROS)与丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路的相互作用在高糖损伤H9c2心肌细胞中的作用。方法应用细胞计数盒(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色检测凋亡细胞形态及数量的改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内ROS水平;Western blot测定蛋白质表达水平。结果高糖(35 mmol/L葡萄糖)处理H9c2心肌细胞24 h可引起明显的损伤,表现为细胞存活率下降,凋亡细胞数量及ROS水平明显升高。另方面,高糖可明显地上调磷酸化(p)p38MAPK、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)及c-Jun N端激酶(JNK)(为MAPK家族的3个成员)的表达水平。N-乙酰半胱氨酸(NAC,为ROS清除剂)能抑制高糖引起的心肌细胞毒性和细胞凋亡,也能阻断高糖对p-p38MAPK、p-ERK1/2及p-JNK表达的上调作用。此外,p38MAPK、ERK1/2和JNK的选择性抑制剂均能抑制高糖引起的心肌损伤,并能抑制ROS生成增多。结论在高糖损伤H9c2心肌细胞中,存在ROS与MAPK通路的正相互作用,这种相互作用可能在高糖引起的心肌细胞损伤中起着重要的作用。     

PKCε信号通路介导槲皮素拮抗心肌细胞缺氧/复氧损伤

 目的：探讨槲皮素拮抗心肌细胞缺氧/复氧（A/R）损伤与蛋白激酶Cε(PKCε)之间的关系。方法：培养新生大鼠原代心肌细胞,构建A/R模型,Western　blotting检测槲皮素对PKCε表达水平的调节。检测A/R损伤后各组细胞乳酸脱氢酶活性、肌酸激酶活性、细胞存活率、活性氧（ROS）含量、线粒体膜电位、线粒体通透性转换孔（mPTP）的开放和细胞凋亡。结果：A/R前72 h加入40 μmol/L槲皮素可明显上调心肌细胞PKCε蛋白表达水平,并显著提高细胞存活率,减少ROS产生,维持线粒体膜电位,抑制mPTP开放,减少细胞凋亡（P<0.01）。同时经槲皮素和PKCε抑制剂εV1-2预处理后,则槲皮素的上述保护作用均明显减弱或消失（P<0.01）。结论：槲皮素可以上调心肌细胞PKCε蛋白表达水平,其抗心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制可能依赖于PKCε途径。     

京尼平抑制高糖诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化应激及凋亡损伤

目的:探讨京尼平(genipin,GEN)对高糖损伤的大鼠心肌H9c2细胞的抗氧化作用和抑制细胞凋亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,高浓度(50 mmol/L)葡萄糖处理H9c2细胞建立细胞损伤模型,分为正常糖对照组(NC组,葡萄糖浓度为5.6 mmol/L)、高糖损伤组(HG组,葡萄糖浓度为50 mmol/L)、正常糖+京尼平组(NC+GEN组)和高糖+京尼平组(HG+GEN组,京尼平浓度为10μmol/L)。CCK-8法检测细胞活力;酶标法和WST-1法分别测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;微板法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;荧光探针DCF检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;ELISA法检测核小体片段的聚集值;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞内线粒体膜电位变化;利用Western blot法检测线粒体内抗氧化酶锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD),以及早期凋亡蛋白细胞色素C(Cyt C)、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与HG组比较,HG+GEN组细胞活力显著升高(P 0.05),细胞内MDA的含量及细胞上清液中LDH的活性明显降低(P 0.05),细胞内SOD活性升高(P 0.05),细胞内线粒体膜电位明显升高(P 0.05),ROS水平降低(P 0.05),核小体片段聚集程度显著降低(P 0.05)。HG组线粒体内抗氧化酶Mn-SOD比NC组降低(P 0.05),但线粒体内凋亡蛋白Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平比NC组显著升高(P 0.05),而HG+GEN组与HG组相比,Mn-SOD升高(P 0.05),Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著降低(P 0.05)。结论:京尼平对高糖损伤的心肌H9c2细胞具有抗氧化保护作用和抑制细胞凋亡的作用。     

硫化氢通过抑制坏死性凋亡对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤

 目的: 探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H₂S)能否通过调控坏死性凋亡(necroptosis)对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤。方法: 应用Western blot法检测心肌细胞内能反映坏死性凋亡的RIP3蛋白和cleaved caspase-3蛋白的水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞的数量。结果: 应用HG(35 mmol/L葡萄糖)处理H9c2心肌细胞3 h、6 h、9 h、12 h和24 h均能明显地上调RIP3蛋白的表达水平,其中24 h时RIP3蛋白水平增加最明显。400μmol/L硫氢化钠(NaHS;为H₂S的供体)预处理或坏死性凋亡的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1;100μmol/L)共处理心肌细胞均能明显地抑制HG对RIP3蛋白表达的上调作用。此外,NaHS预处理或Nec-1共处理心肌细胞均显著地抑制HG引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高,ROS生成及MMP丢失减少。另一方面,400μmol/L NaHS预处理心肌细胞能使凋亡细胞数量及cleaved caspase-3表达明显减少。结论: H₂S可通过抑制坏死性凋亡保护心肌细胞,对抗高糖引起的损伤。     

MafK通过p65乙酰化对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的 探究MafK对大鼠心肌细胞（H9c2）缺氧/复氧（H/R）损伤的保护作用及相关机制。方法 将H9c2细胞随机分为对照组、H/R组、抑制对照组和MafK抑制组。对照组（按H9c2细胞的正常培养方式进行处理）、H/R组（H9c2细胞进行缺氧4 h/复氧12 h的处理）、抑制对照组（H9c2细胞转染空白对照siRNA-NC 48 h后进行H/R处理）和MafK抑制组（H9c2细胞转染siRNA-MafK 48 h后进行H/R处理）。CCK-8法检测各组细胞的活性;ELISA法检测各组TNF-α和IL-6的表达水平;Caspase-3活性检测试剂盒检测各组细胞的Caspase-3活性;Western blot检测各组细胞的MafK蛋白、凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3）和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达水平。结果与对照组相比,MafK在H/R组中的表达水平显著升高（P<0.01）。与抑制对照组相比,敲低MafK可以显著降低MafK在H/R处理下的H9c2细胞中的表达水平（P<0.05）。与对照组相比,H/R组H9c2细胞活性降至（47.0...     

XBP1 / CHOP / Puma 信号转导通路对高糖心肌细胞凋亡的作用研究

目的:探讨X 盒结合蛋白1(XBP1)通过调控XBP1/ CHOP/ Puma 信号转导通路对高糖诱导的H9C2 心肌细胞凋亡的影响。方法:实验分为4 组:低糖组(LG 组)、高糖刺激组(HG 组)、高糖+siRNA-NC 组(HG+NC 组)、高糖+siRNA-XBP1组(HG+siRNA 组);蛋白质免疫印迹(Western blot) 检测细胞转染后各组细胞中XBP1 蛋白、C/ EBP 同源蛋白(C/ EBP homologous protein,CHOP)、p53 上调凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,Puma)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),CCK-8 法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:siRNA-XBP1 可使心肌细胞XBP1 表达量降低(P<0.05)。与LG 组相比,HG 组、HG+NC 组、HG+siRNA 组细胞存活率均显著降低(P<0.05),凋亡率显著增高(P<0.05);与HG 组相比,HG+siRNA 组细胞存活率明显升高(P<0.05),凋亡率明显降低(P<0.05)。与LG 组相比,HG 组、HG+NC 组、HG+siRNA 组细胞中XBP1、CHOP、Puma、Caspase-3 的表达量均显著增加(均P<0.05);与HG 组相比,HG+siRNA 组细胞中XBP1、CHOP、Puma、Caspase-3 的表达量显著降低(P<0.05)。结论:XBP1 通过调节XBP1/ CHOP/ Puma 信号通路抑制高糖环境下心肌细胞凋亡、促进其增殖。     

PHB 对高糖环境下的心肌细胞中活性氧及细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨抗增殖蛋白(PHB)对高糖诱导的H9C2 心肌细胞凋亡的影响以及机制研究。方法:选取pCDNA3-PHB、pCDNA3-NC 重组质粒转染和高糖干预心肌细胞,实验分为4 组:正常对照组(Control 组)、高糖刺激组(HG 组)、高糖+空载体组(HG+pCDNA3-NC 组)、高糖加pCDNA3-PHB 重组质粒组(HG+pCDNA3-PHB);Western blot 检测细胞转染后各组细胞中PHB 蛋白、B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2 相关X 蛋白(Bax) / B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bcl-2)、剪切的半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(c-caspase3)、蛋白激酶B(AKt)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKt)蛋白的表达量,二氢乙啶(DHE)染色法检测高糖环境下心肌细胞内的活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中TNF-αmRNA 和IL-6 mRNA 含量的测定,流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:pCDNA3-PHB 重组质粒可使PHB 表达量增加;与Control 组相比,HG 组、HG+pCDNA3-NC 组、HG+pCDNA3-PHB 组细胞凋亡率显著增高(P<0.05);与HG 组相比,HG+pCDNA3-NC 组细胞凋亡率变化不显著(P>0.05); HG+pCDNA3-PHB 组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与Control 组相比,HG 组HG+pCDNA3-NC 组、HG+pCDNA3-PHB 组细胞内ROS 的水平、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、Bax/ Bcl-2 的相对表达量、c-caspase3(P<0.05)蛋白相对表达量显著增高;与HG组相比,HG+pCDNA3-NC 组细胞内ROS 的水平( P>0.05)、TNF-αmRNA(P<0.05)、IL-6 mRNA(P<0.05)、Bax/ Bcl-2 的相对表达量(P>0.05)、c-caspase3 蛋白相对表达量(P>0.05)无明显差异;但pCDNA3-PHB 组细胞中ROS 的水平(P<0.05)、TNF-琢mRNA(P<0.05)、IL-6 mRNA(P<0.05)、Bax/ Bcl-2 的相对表达量(P<0.05)、c-caspase3(P<0.05)蛋白相对表达量明显降低。经统计分析显示,各组细胞中AKt 蛋白的相对表达量无显著差异(P>0.05)。经比较后,HG 组、HG+pCDNA3-NC 组、HG+pCDNA3-PHB 组心肌细胞中p-AKt 蛋白的相对表达量显著低于Control 组(P<0.05);HG+pCDNA3-NC 组心肌细胞中p-AKt 蛋白的相对表达量与HG 组间无显著差异(P>0.05);但HG+pCDNA3-PHB 组心肌细胞中p-AKt 蛋白的相对表达量明显高于HG组(P<0.05)。结论:PHB 过表达可抑制高糖环境下H9C2 心肌细胞的凋亡和炎症反应,主要是通过调控PI3K/ Akt 信号通路、ROS、Bax/ Bcl-2、c-caspase3 蛋白的水平,为糖尿病心肌病的治疗提供新的思路与方法。     

敲低Txnip抑制高糖诱导的人肾小管细胞系凋亡

目的观察敲低Txnip对高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法将体外培养人肾小管上皮细胞分为正常糖组、高糖组、高糖+质粒载体对照组及高糖+shRNA组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞ROS水平;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、BAX、BCL-2、P38 MAPK、P-P38 MAPK及细胞色素c的表达。结果与正常糖组相比,高糖组肾小管上皮细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加(P0.01),cleaved caspase-3和P-P38 MAPK表达增高,BAX/BCL-2比率明显升高以及细胞色素c易位(P0.05)。敲低Txnip能够显著抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3、和P-P38MAPK的表达,减少BAX/BCL-2比率和细胞色素c易位(P0.05)。结论敲低Txnip能够抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡可能是通过减少ROS产生,保护线粒体功能,抑制P38MAPK信号通路激活而实现的。     

成纤维细胞生长因子19改善缺氧/复氧心肌细胞H9c2损伤

目的:研究成纤维细胞生长因子19(FGF19)对缺氧/复氧心肌细胞H9c2损伤的改善作用。方法:将心肌细胞H9c2分为Control组(常规方法培养)、H/R组(细胞经缺氧/复氧处理)、NC+H/R组(细胞转染pcDNA 3.1后再经缺氧/复氧处理)和FGF19+H/R组(细胞转染pcDNA 3.1-FGF19后再经缺氧/复氧处理)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹(Western blot)检测各组FGF19 mRNA和蛋白表达水平,ELISA检测各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、LDH、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Western blot检测各组细胞中活化的半胱天冬酶-3(C-Caspase-3)、活化的半胱天冬酶-9(C-Caspase-9)蛋白表达和胞浆中细胞色素C(Cyt C)蛋白水平,JC-1法检测各组细胞线粒体膜电位变化。结果:与H/R组和NC+H/R组比较,FGF19+H/R组心肌细胞中FGF19 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P均<0.01)。H/R组与NC+H/R组心肌细胞中FGF19 mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Control组比较,H/R组细胞培养液中LDH水平升高(P<0.01),细胞中MDA和ROS水平升高(P<0.01),SOD、CAT和GSH-Px活力降低(P<0.01),细胞凋亡率、C-Caspase-3、C-Caspase-9和Cyt C蛋白水平升高(P<0.01),线粒体膜电位降低(P<0.01)。与NC+H/R组比较,FGF19+H/R组细胞培养液中LDH水平降低(P<0.01),细胞中MDA和ROS水平降低(P<0.01),SOD、CAT和GSH-Px活力升高(P<0.01),细胞凋亡率、C-Caspase-3、C-Caspase-9和Cyt C蛋白水平降低(P<0.01),线粒体膜电位升高(P<0.01)。结论:FGF19可能通过减少细胞凋亡和氧化损伤改善缺氧/复氧心肌细胞H9c2损伤。     

自噬在高糖高脂引起心肌细胞系H9C2凋亡中的影响

目的探究自噬在高糖高脂(HGHL)引起的心肌细胞系H9C2凋亡中的影响。方法不同浓度高糖高脂处理H9C2心肌细胞不同时间,HE染色并测量心肌细胞表面积;流式细胞计量术检测细胞活性和凋亡率,确定心肌细胞肥大及凋亡的最适浓度和时间;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬指标LC3Ⅱ、自噬信号通路p62/SQSTM1(p62)、Beclin-1、LAMP2蛋白表达以及自噬抑制剂氯喹预处理后cleaved caspase-3蛋白表达。结果HGHL处理后H9C2心肌细胞肥大呈浓度和时间依赖性,36 h最显著(P0.001);细胞凋亡呈浓度和时间依赖性增高,36 h凋亡率约50%(P0.001);与对照组相比,HGHL诱导24 h时LC3Ⅱ蛋白水平显著增加(P0.01),Beclin-1、LAMP2蛋白水平显著下降(P0.05),而p62蛋白水平显著升高(P0.01);与对照组以及干预组相比,氯喹预处理1 h后cleaved caspase-3蛋白表达显著增加(P0.01)。结论 HGHL诱导H9C2心肌细胞肥大并促进其凋亡。HGHL通过同时抑制自噬形成和降解,使自噬体异常堆积,导致细胞凋亡。这表明抑制自噬可能是促进细胞凋亡的重要原因。     

白藜芦醇抑制高糖诱导的H9C2心肌细胞系肥大

目的观察白藜芦醇对高糖诱导H9C2心肌细胞系氧化应激和肥大的作用及其可能机制。方法将H9C2心肌细胞分为正常糖浓度组(NG组)、高糖组(HG组)、白芦藜醇组(Res组)和白藜芦醇+DAPT组(Res+DAPT组)。用鬼笔环肽检测细胞表面积;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS);比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量PCR及Western blot检测Notch1、Hes1、ANP、BNP mRNA和蛋白表达。结果与NG组相比,高糖可诱导心肌细胞肥大(P0.01),ROS和MDA含量增加(P0.01),SOD活性下降(P0.01),伴随ANP和BNP基因及蛋白表达增加(P0.05),Notch1和Hes1表达下降(P0.05),白藜芦醇处理后可逆转心肌细胞肥大(P0.01),减轻ROS和MDA氧化损伤(P0.01),增加SOD活性(P0.01),抑制ANP和BNP表达(P0.05),增加Notch1及Hes1表达(P0.05)。结论白藜芦醇可能通过改善氧化应激,活化Notch1/Hes1信号通路抑制高糖引起的H9C2心肌细胞肥大。     

上调GDF-15 表达对H2O2 诱导的H9C2 心肌细胞生物学特性及PI3K/ AKT 信号通路的影响

目的：探讨上调生长分化因子-15（GDF-15）的表达对H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法：CCK8法检测不同浓度的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后的细胞增殖情况;H9C2心肌细胞分为Control组、NC组、H₂O₂组、GDF-15+H₂O₂组,各组细胞处理24 h后收集细胞,RT-PCR及Western blot分别检测各组细胞中GDF-15的mRNA及蛋白表达;CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况;2′,7′-二氯二氢荧光素黄二乙酸酯（DCFH-DA）探针检测细胞活性氧簇（ROS）水平;Western blot检测Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PI3K、p-AKT蛋白表达。10 μmol/L的PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理H9C2心肌细胞,通过CCK8法及流式细胞术分别检测GDF-15+H₂O₂组及PI3K/AKT信号通路抑制剂组细胞活力及凋亡率,Western blot检测Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果：不同浓度H₂O₂处理H9C2心肌细胞后,细胞活力均受到抑制,且有浓度依赖性（P<0.05）,由于200 μmol/L的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后可抑制将近一半的细胞增殖,选择200 μmol/L的H₂O2作为研究对象;与Control组比较,H2O2组GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著降低,凋亡率增加,ROS水平升高,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GDF-15+H₂O₂组细胞GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著增加,凋亡率降低,ROS水平降低,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低（P<0.05）。PI3K/AKT信号抑制剂组细胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于GDF-15+H₂O₂组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于GDF-15+H₂O₂组（P<0.05）。结论：上调GDF-15表达可促进H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖,降低细胞凋亡,其机制可能与调节细胞中ROS水平,Ki67、Bcl-2、Bax表达及PI3K/AKT信号通路有关。