LC-MS/MS检测血清万古霉素浓度方法的建立及评价

目的建立检测人血清中万古霉素浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法,并与化学发光微粒子免疫法(CMIA)比较方法学性能。方法血清样品经过甲醇沉淀蛋白质,采用安捷伦Poroshell 120EC C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.7μm)梯度洗脱分离,流动相为甲醇(0.1%甲酸)-水(0.1%甲酸),流速为0.5 m L/min,内标采用去甲万古霉素,质谱采用ESI正离子多反应监测扫描模式。用该方法定量检测112例临床服用万古霉素患者血清万古霉素含量,并与临床常用的CMIA所得结果进行比较。结果万古霉素在1~100μg/m L内线性关系良好(r2=0.996 4);方法日内日间精密度、准确度均满足药物定量检测要求,且无基质效应和残留效应。Wilcoxon符号秩和检验结果显示,LC-MS/MS测定结果与CMIA结果比较,差异有统计学意义(P0.05);相关性检验结果显示,两者线性相关性良好,Y=1.06X-0.37(r=0.986)。结论 LC-MS/MS法性能较好,价格优廉,与CMIA法有较好的相关性,且检测在准确度、精密度上优势明显,可用于临床检测万古霉素的血清药物浓度。     

HPLC-MS/MS法在骨髓移植患者他克莫司血药浓度测定中的应用

目的建立测定骨髓移植患者全血他克莫司(FK506)血药浓度的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法,探索HPLC-MS/MS法与羧基金属免疫分析(CMIA)法和化学发光微粒免疫(Elecsys)法在FK506血药浓度检测中的关系,为临床合理选用FK506血药浓度监测方法提供可靠依据。方法采用子囊霉素作内标,全血样品经合内标甲醇沉淀蛋白处理。色谱柱为Ultimate XB-C_(18),柱温65℃,流动相为含0.1 g/dl甲酸和2 mmol/IL乙酸铵的水和含0.1ml/dl甲酸的甲醇,梯度洗脱。质谱检测方式为电喷雾离子阱正离子模式,MRM扫描,监测FK506 m/z 821.5~768.5,子囊霉素m/z809.4~756.4。选取部分骨髓移植患者全血FK506样本,分别用HPLC-MS/MS法,CMIA法和Elecsys法进行检测,对各种检测方法所检测的FK506浓度值进行比较。结果建立的HPLC-MS/MS法检测FK506血药浓度在0.5~50 ng/ml范围内线性关系良好,Y=0.228X-0.003 08(r=0.999 0)。HPLC-MS/MS法与CMIA法和Elecsys法检测FK506血药浓度结果相关性较好,差异无统计学意义。结论建立了检测FK506血药浓度的HPLC-MS/MS法,该法可用于临床骨髓移植患者全血FK506浓度的监测。     

环孢素A血药浓度检测方法比较分析

目的比较电化学发光法(Elecsys)、化学发光微粒子免疫法(CMIA)及液质联用(HPLC-MS/MS)法监测环孢素A(CSA)血药浓度的相关性。方法收集101例服用环孢素A达稳态的骨髓移植患者全血样本,分别用3种方法进行测定并进行评价。结果 3种测定方法的相关性良好,Elecsys法与HPLC-MS/MS的检测结果相关系数r为0.99,CMIA法与HPLC-MS/MS的检测结果相关系数r为0.92,Elecsys法与CMIA法的检测结果相关系数r为0.91,但CMIA检测结果明显高于Elecsys和HPLC-MS/MS,t值分别为1.97×10-4和7.49×10-6,差异有统计学意义;而Elecsys和HPLC-MS/MS检测结果比较差异无统计学意义(t=0.39,P>0.05)。结论三种方法的检测结果相关性好。HPLC-MS/MS与Elecsys法检测结果可以根据相应的回归方程互算,而HPLC-MS/MS与CMIA法检测结果不可直接进行换算。     

液相色谱串联质谱检测血清万古霉素方法的建立及临床验证

目的建立一种基于同位素内标法定量的血清万古霉素液相色谱串联质谱检测方法(LC-MS/MS), 并进行临床应用评估。方法方法学评价类研究。收集2021年3月至2022年6月就诊于浙江大学医学院附属邵逸夫医院且接受万古霉素静脉给药治疗的221例患者的临床血清样本, 其中男142例, 女79例, 年龄(59.31±15.32)岁, 检测其谷浓度。收集体检中心30名体检结果均正常的表观健康人剩余血清样本作为空白基质用于方法学评价, 其中男 15 名, 女 15 名, 年龄(35.65±9.86)岁。使用AB Sciex Triple Quad 4500 MD 液相色谱串联质谱系统, 采用Phenyl-Hexyl色谱柱进行分离, 柱温40 ℃, 以含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液梯度洗脱, 以万古霉素-[d12]三氟乙酸盐作为内标(IS), 建立定量方法, 并对方法的敏感度、特异度、线性、回收率、精密度、基质效应、残留进行性能验证。结果万古霉素的检出限是0.2 mg/L, 最低定量限是0.5 mg/L, 在浓度1～50 mg/L范围内线性关系良好(R2=0.998 4), 准确度...     

HPLC法测定血清甲氨蝶呤浓度的方法建立及其与荧光偏振法的比较

目的建立测定血清甲氨蝶呤（MTX）浓度的高效液相色谱（HPLC）法,并与荧光偏振法（FPIA）作比较,评价其临床实用性。方法血清样本经20%高氯酸沉淀蛋白质,吸取上清液进行HPLC分析。以MTX标准品外标法建立标准曲线,检测62例用药后患者血清MTX浓度,同时以FPIA测定。结果 HPLC法在0.049~25 ng/L内线性关系良好,日内及日间相对标准偏差（RSD）均〈6%,最低检测浓度为0.025 ng/L。HPLC法和FPIA具有良好的相关性（r=0.973,P〈0.01）,2种方法测定值的差异无统计学意义（P=0.705）。结论 HPLC法具有便捷、准确、成本低等特点,与FPIA相关性良好,适用于临床MTX的血药浓度监测。     

液相色谱串联质谱法检测人血清雌酮、雌二醇

目的建立同时测定人血清中雌酮(E1)及雌二醇(E2)水平的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并初步应用于临床血清样品的雌激素检测。方法血清样品经乙酸乙酯提取,丹磺酰氯衍生化后进行LC-MS/MS分析。用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱进行线性梯度洗脱,流动相为乙腈(0.05%甲酸)-水(0.05%甲酸),流速为0.3 m L/min。用多重反应离子监测(MRM)正离子模式对血清中的E1、E2进行质谱检测,并根据"生物样品定量分析方法验证指导原则(中国药典,2015)"对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、精密度、提取回收率和稳定性等进行评价。用本法对172例健康成年女性血清标本进行E1、E2检测,用百分位数法计算不同月经周期E1、E2的浓度区间。结果 LC-MS/MS法可同时检测人血清中E1、E2的含量,在0.05~10 nmol/L范围内线性关系良好。该法的定量限为0.05 nmol/L,日内与日间不精密度均小于15%,稳定性良好。初步临床应用显示,用LC-MS/MS法计算所得的E1、E2浓度区间符合女性月经周期生理性变化规律。结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中E1、E2的浓度水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清雌激素检测的参考方法。     

HPLC-MS/MS法检测血浆伏立康唑、泊沙康唑和伊曲康唑浓度的方法建立及在白血病患者用药监测中的应用

目的建立同时测定白血病患者血浆伏立康唑、泊沙康唑和伊曲康唑浓度的高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS),并应用于此三种药物的常规治疗药物监测,为其在临床合理使用提供血药浓度依据。方法色谱柱为Ultimate XB-C18,柱温60℃,流动相:甲醇(0.1 ml/dl甲酸)和水(0.1 ml/dl甲酸和2 mmol/L乙酸铵),流速:0.8 ml/min,梯度洗脱。质谱检测方式为电喷雾离子阱正离子模式,MRM扫描,监测伏立康唑m/z 350.1281.2和伏立康唑-d3 m/z 353.1284.2;泊沙康唑m/z 701.4683.4和泊沙康唑-d4 m/z 705.4687.4;伊曲康唑m/z 705.3392.2和伊曲康唑-d9 m/z 714.5401.4。用含伏立康唑、泊沙康唑与伊曲康唑相应同位素内标甲醇液对白血病患者血浆样本进行蛋白沉淀处理,进行质谱检测,内标法定量,对各自检测结果作四分位分析。结果在0.1～10.0μg/ml范围内,伏立康唑峰面积/伏立康唑-d3峰面积与伏立康唑浓度线性关系良好,Y=1.58X+0.011 6(R=0.998 7);泊沙康唑峰面积/泊沙康唑-d4峰面积与泊沙康唑浓度线性关系良好,Y=1.38X+0.021 7(r=0.998 2);伊曲康唑峰面积/伊曲康唑-d9峰面积与伊曲康唑浓度线性关系良好,Y=1.42X+0.032 5(r=0.999 1)。此三种药物日内及日间相对标准偏差(RSD)均小于5%,平均回收率为95%～105%。1 000份白血病患者伏立康唑浓度四分位结果为Q1～Q3:0.3～1.7μg/ml;1 000份白血病患者泊沙康唑浓度四分位结果为Q1～Q3:0.4～1.4μg/ml。结论建立了同时测定白血病患者伏立康唑、泊沙康唑和伊曲康唑浓度的HPLC-MS/MS法,该方法前处理简单,检测耗时短,检测结果准确度和稳定性好,可适用于临床检测。     

EMIT法和HPLC法监测苯妥英和苯巴比妥血药浓度比较研究

目的比较酶增强免疫法（EMIT）和高效液相色谱法（HPLC）监测苯妥英（PHT）和苯巴比妥（PB）血浆药物浓度的相关性。方法收集癫痫患者服药后的稳态谷浓度血样,分别用EMIT法和HPLC法进行测定,考察2种测定方法的相关程度。结果以HPLC法测定结果（X）与EMIT法测定结果（Y）所作线性回归方程如下：YPHT=0.505＋1.200X（r=0.991）;YPB=0.103＋1.115X（r=0.970）;EMIT法测定血浆中PHT浓度较HPLC法高3.0μg/mL,EMIT法测定血浆中PB浓度较HPLC法高1.7μg/mL,2种方法测定PHT和PB血浆药物浓度结果差异有统计学意义（P〈0.05）。结论EMIT法和HPLC法测定2种抗癫痫药血浆浓度结果差异具有统计学意义,在PHT和PB治疗药物监测中应予以关注并作相应调整。     

HPLC-MS/MS 法在检测慢性粒细胞白血病患者帕纳替尼血药浓度中的应用

目的　建立测定慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia, CML) 患者血浆帕纳替尼浓度的高效液相色谱- 串联质谱法（HPLC-MS/MS）,并应用于帕纳替尼血药浓度日常监测,为帕纳替尼合理使用提供实验室依据。方法　采用含内标（帕纳替尼-d8）的甲醇对患者血浆进行沉淀蛋白处理。色谱柱为Ultimate XB-C18,柱温60℃,流动相为甲醇相（0.1% 甲酸）和水相（0.1% 甲酸和2 mmol/L 乙酸铵）,梯度洗脱。质谱检测方式为电喷雾离子阱正离子模式,MRM 扫描,同时监测帕纳替尼m/z 533.1>260.1 和帕纳替尼-d8 m/z 541.2>260.1。采用内标法定量,以帕纳替尼和帕纳替尼-d8 峰面积比为定量依据,计算血浆帕纳替尼浓度,并分别对其线性、专属性、精密度、准确度及稳定性进行考察。结果　帕纳替尼浓度在（1 ～ 250） ng/ml 范围内与峰面积线性关系良好,Y = 0.019 3X + 0.028 4 （r= 0.999 1）。专属性较好,血浆中的内源性物质不干扰帕纳替尼及其内标的测定;日内及日间RSD 均小于5%;相对回收率为100.91%~105.18%;室温放置稳定性及冻融稳定性RSD 均小于5%。结论　该文建立的HPLC-MS/MS 法,前处理简单,特异度及灵敏度高,能准确、快速地检测血浆帕纳替尼浓度,适合慢性粒细胞白血病患者帕纳替尼血药浓度的日常监测。     

高效液相色谱-串联质谱法测定移植患者血浆泊沙康唑水平

目的建立测定血浆泊沙康唑水平的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法,并应用于临床治疗药物监测。方法 HPLC色谱柱为Ultimate XB-C18。柱温50℃,流速0.8mL/min,流动相为含0.1%甲酸,以及2mmol/L乙酸铵的水溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液,梯度洗脱。质谱检测方式为ESI正离子模式,MRM扫描,监测泊沙康唑m/z 701.5~683.4作为定量离子,内标泊沙康唑-d4m/z 705.4~687.5作为定量离子。结果泊沙康唑水平在0.1~10.0μg/L范围内与峰面积线性关系良好(r=0.993 0),日内及日间精密度5%,平均回收率为90%~103%。结论该方法简便、准确、快速,适用于泊沙康唑的血药浓度测定。     

The Hereditary Syndrome of Thrombocytopathia, Bleeding Tendency, Extreme Miosis, Muscular Fatigue, Asplenia, Headache, etc

SYNOPSIS
A new, autosomal dominantly inherited syndrome with a bleeding disorder was described in 1985 by Stormorken and his co-workers.1,2 In this multifaceted syndrome, there were the following integral components: thrombocytopathia, extreme miosis with Argyll Robertson-like traits, muscular fatigue, a tendency to spasms, asplenia, ichthyosis, dyslexia, etc.
Headache with migraine traits was also present in the family in all 4 generations in which this syndrome had been observed. Nasal and conjunctival bleeding were part of the headache picture in some of the individuals exhibiting the hemorrhagic syndrome. While the attack-related bleeding disturbances only involved family members who also suffered from the hemorrhagic syndrome, the headache per se may seem to behave differently: The affected son's headache seems to have developed into a headache with tension headache traits, whereas the other, unaffected, son's headache has common migraine traits. The familial headache which in earlier generations clearly had migraine traits, therefore, may be inherited independently from the hemorrhagic disorder. In other words, a migraine or migraine-like headache is most probably not an obligatory integral part of this syndrome. The thrombocytopathia in this disorder comprises abnormal serotonin storage, uptake, and release (Stormorken and co-workers, to be published).
The admittedly somewhat farfetched possibility also exists that the headache, although being similar to migraine, differs essentially from it and may be an expression of the serotonin aberration.     

大麻素受体在成年大鼠脑组织中的分布特点

目的：研究大麻素CB1、CB2受体在成年大鼠脑组织的分布特点和规律,为进一步研究其功能打下基础。方法：用兔抗鼠CB1、CB2受体特异性抗体免疫组化染色,检测大鼠脑组织主要部位两种受体的表达分布情况。结果：CB1受体阳性细胞在脑组织有广泛大量的分布,大脑皮质、胼胝体、海马、基底核区及小脑浦肯野细胞层、脑桥等区域均有较明显表达。CB2受体阳性细胞的数量及分布部位与CB1受体表达基本一致,少数区域如胼胝体、小脑白质阳性细胞数相差较大,CB2受体明显多于CB1受体的表达。结论：大麻素CB1、CB2受体在成年大鼠脑组织均广泛分布,并在多数部位表达情况一致,少数部位存在表达程度差异,提示其在神经系统中参与了某些生理及病理作用。 关键词 CB1受体;CB2受体;大麻素;脑组织;大鼠     

Effect of 5-fluorouracil, mitoxantrone, methotrexate, and vincristine on the antibacterial activity of ceftriaxone, ceftazidime, cefotiam, piperacillin, and netilmicin

Using the checkerboard agar dilution technique, antibacterial activity and in vitro interactions of 4 antineoplastic agents and 5 antimicrobial drugs were examined against 56 strains of 7 bacterial species. 5-fluorouracil was found to inhibit all strains of Staphylococcus aureus and of Staphylococcus epidermidis at a concentration of 0.8 micrograms/ml or less. 84% of all gram-negative strains were inhibited synergistically when 5-fluorouracil was combined with beta-lactam antibiotics. Methotrexate and cefotiam were antagonistic in 42% of all combinations, especially when tested against Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae.     

Susceptibilities of non-Pseudomonas aeruginosa gram-negative nonfermentative rods to ciprofloxacin, ofloxacin, levofloxacin, D-ofloxacin, sparfloxacin, ceftazidime, piperacillin, piperacillin-tazobactam, trimethoprim-sulfamethoxazole, and imipenem.

Agar dilution MICs of 10 agents against 410 non-Pseudomonas aeruginosa gram-negative nonfermentative rods were determined. MICs at which 50 and 90% of the isolates were inhibited, respectively, were as follows (in micrograms per milliliter): sparfloxacin, 0.5 and 8.0; levofloxacin, 1.0 and 8.0; ciprofloxacin, 2.0 and 32.0; ofloxacin, 2.0 and 32.0; D-ofloxacin, 32.0 and > 64.0; ceftazidime, 8.0 and 64.0; piperacillin with or without tazobactam, 16.0 and > 64.0; trimethoprim-sulfamethoxazole, 0.5 and > 64.0; imipenem, 2.0 and > 64.0. With the exception of those for Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia, and Alcaligenes faecalis-A. odorans, agar dilution MICs for all strains tested were within 1 dilution of inhibitory (bacteriostatic) levels as determined by time-kill methodology.     

4种免疫法促甲状腺素检测系统结果的一致性评价王丹晨,禹松林,尹逸丛,国秀芝,程歆琦 ,邱玲,马超超,张瑞丽,刘茜,刘荔,高学慧,张葵 (中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院检验科,北京100730)

目的 比较4种免疫法促甲状腺素(TSH)检测系统结果的一致性。方法 性能验证。收集2018年3至4月北京协和医院临床检测剩余新鲜血清标本共102份,用于方法学比对。参考CLSI EP15-A2 及EP9-A2方案进行精密度评价及方法学比对。分别采用雅培 i2000、贝克曼 DXI 800、西门子 ADVIA Centaur XP及罗氏 e601(标为A~D)全自动化学发光免疫分析仪及其配套试剂检测102份血清的TSH水平,应用Passing Babloke及Bland Altman进行比对分析。以0.27、5.33mU/L为医学决定水平,比较各检测系统的预期偏倚。 结果 A~D四种检测系统的精密度分别为1.7~3.3%、1.8~3.9%、0.7~2.3%、0.6~1.5%,中位数(P25 ~P75 )分别为1.898(0.518~4.809)mU/L、2.819(0.719~7.020)mU/L、2.502(0.692~6.888)mU/L、3.105(0.886~7.905)mU/L。4种检测系统回归方程的决定系数R2均>0.975,相关系数(r)在0.9935~0.9971之间,截距和斜率分别为0~0.06、0.59~1.15,其中B与C两个检测系统直线回归图斜率为1.02,截距为0,相关性最好；偏差图显示不同检测系统的百分偏倚在-48.1~17.3%,A与D检测系统偏倚最大为-48.1%,B与C检测系统偏倚最小为0.3%。4种检测系统在医学决定水平处的预期偏倚为-40.7~37.2%。结论 贝克曼与西门子TSH检测试剂一致性较好,罗氏、雅培TSH检测试剂与另外两家一致性存在差异。