叔丁基对苯二酚激活蛋白酶体活性促进成年小鼠神经干细胞增殖与分化

目的:探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)对成年小鼠神经干细胞(aNSCs)增殖分化能力的影响,寻找维持aNSCs活力的有效手段。方法:成年BALB/c小鼠腹腔注射tBHQ(每日16.7 mg/kg)7 d,收集室管膜下区(SVZ)的脑组织,应用荧光酶标仪定量检测其蛋白酶体的活性;同时小鼠腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),Brd U免疫荧光染色检测SVZ内a NSCs的增殖能力。分离培养SVZ aNSCs,tBHQ(20μmol/L)作用7 d,分析比较tBHQ组与DMSO组a NSCs的蛋白酶体活性、BrdU阳性率以及形成神经球的数量和直径。应用1%的胎牛血清诱导a NSCs分化,早期神经元标记物β-Ⅲ微管蛋白(Tuj1)免疫荧光染色并比较tBHQ组与DMSO组a NSCs向神经元分化的能力。结果:小鼠腹腔注射tBHQ,其SVZ蛋白酶体活性较DMSO对照组上调12.9%±4.6%(P0.05),并且BrdU标记实验显示tBHQ组阳性细胞数为31.3±6.3,与DMSO对照组(15.4±1.3)比较,aNSCs增殖能力显著提高(P0.05)。体外实验结果也显示tBHQ组aNSCs蛋白酶体活性较DMSO对照组上升10.1%±0.8%(P0.01)。tBHQ组Brd U阳性率(31.3%±3.2%)是DMSO对照组(20%±1.5%)的1.6倍(P0.05)。tBHQ组神经球的数量和直径分别是DMSO对照组的1.7倍(P0.05)和1.4倍(P0.05),提示tBHQ促进aNSCs的自我更新。此外,tBHQ组Tuj1阳性率为26.5%±1.6%,较DMSO对照组18.6%±2.1%显著提高(P0.05),提示tBHQ能够促进a NSCs向神经元方向分化。结论:tBHQ能够上调蛋白酶体活性,促进aNSCs的增殖与分化。     

蛋白酶体活性对小鼠神经干细胞活性氧水平的影响

目的:探讨蛋白酶体活性对小鼠神经干细胞(NSCs)活性氧(ROS)水平和增殖能力的影响,寻求维持NSCs活力的有效方法。方法:分离培养新生(P0)和成年(P90)小鼠室管膜下区(SVZ)神经干细胞。比较P0和P90 NSCs成球数量和增殖能力,荧光酶标仪检测蛋白酶体活性,DCFH-DA法测定ROS水平。应用蛋白酶体抑制剂MG132和激活剂18α-GA分别作用于P0和P90 NSCs,CCK-8法、DCFH-DA法和JC-1染色检测蛋白酶体活性改变对NSCs增殖能力、ROS水平和线粒体膜电位的影响。结果:P90 NSCs神经球直径和数量较P0明显减少,增殖活性较P0 NSCs明显下降(P0.001)。此外,P90 NSCs蛋白酶体活性较P0 NSCs降低0.55±0.03(P0.05),但ROS水平却较P0 NSCs升高13.25±0.12倍(P0.001)。MG132作用后P0 NSCs ROS水平呈浓度依赖性升高,其中10μmol/L组较对照组显著升高131%±8.4%(P0.001),增殖活性却降低54.4%±7.8%(P0.001);MG132组NSCs线粒体膜电位较对照组下降。相反,18α-GA作用后P90 NSCs ROS水平呈浓度依赖性降低,其中6和8μg/ml组分别下降2.77±0.20和2.78±0.32(P0.01),增殖活性却是对照组的3.76和5倍(P0.001);18α-GA组NSCs线粒体膜电位较对照组升高。结论:蛋白酶体活性与NSCs ROS水平密切相关,激活蛋白酶体活性可减少ROS对成年NSCs线粒体功能的影响,提高NSCs增殖活力。     

Nrf2靶向siRNA对小鼠神经干细胞增殖和分化能力的影响

目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:分离新生小鼠海马组织，培养NSCs,采用电穿孔法将Nrf2 siRNA序列转染至NSCs,分别用real time RT-PCR和Western Blot检测敲减效率；运用BrdU掺入实验、Tuj1免疫荧光染色和CCK-8法检测Nrf2靶向siRNA对NSCs的增殖、分化能力和细胞活力的影响。通过脑立体定位技术，在成年小鼠海马部位注射Nrf2抑制剂Brusatol,应用Western Blot检测Nrf2的蛋白表达水平；通过Ki67、DCX免疫荧光染色检测下调Nrf2对海马神经发生的影响。利用活性氧簇(ROS)水平测定法和real time RT-PCR分别检测活性氧水平和氧化应激相关通路超氧化物歧化酶(SOD1和SOD2)的表达。结果:Nrf2的siRNA序列转染至NSCs, real time RT-PCR结果显示siRNA的敲减效率为(54.56±7.05)%(P<0.01),Western Blot结果显示siRNA的敲减效率为(39.50±7.90)%(P<0.01)...     

p53对体外神经干细胞增殖能力的影响

目的:探讨p53对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖能力的影响,寻求维持NSCs活力的有效途径。方法:分离出生后0 d(postnatal day 0,P0)和生后90 d(postnatal day 90,P90)小鼠前脑室管膜下区(subventricular zone,SVZ)组织,培养NSCs。比较P0和P90 NSCs增殖能力并通过q PCR和Western Blot检测衰老相关分子p53和p21在新生和成年NSCs的表达变化。应用p53抑制剂PFT-α(20μmol/L)连续作用于P90 NSCs 72 h,通过Brd U掺入实验和CCK-8实验,分析抑制p53对NSCs增殖能力的影响。结果:随年龄增加,NSCs的增殖能力降低,P90组神经球的数量和直径分别是P0组的22.9%±1.2%(P0.01)和63.5%±3.7%(P0.05)。P90NSCs p53和p21 mRNA表达水平分别较P0 NSCs显著增高了1.4±0.05和1.2±0.04(P0.01)。Western Blot结果证明P90 NSCs p53蛋白的表达水平比P0 NSCs增加了1.2±0.01倍(P0.05)。经p53抑制剂PFT-α连续处理P90 NSCs 72 h后,CCK-8结果显示PFT-α组吸光度值1.1±0.02高于DMSO组0.8±0.03(P0.05),Brd U掺入实验也显示PFT-α组Brd U阳性细胞率为43.3%±4.0%显著高于DMSO组24.8%±3.1%(P0.05)。结论:p53信号通路激活可能是导致成年小鼠NSCs增殖能力下降的重要因素,应用p53抑制剂PFT-α能够增加成年NSCs的增殖能力。     

18α-甘草次酸通过抗氧化作用促进成年小鼠室管膜下区神经干细胞增殖

目的 探讨18 α-甘草次酸(18α-GA)对成年小鼠室管膜下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖的影响及其机制.方法 100只6月龄BALB/c小鼠随机平均分为18α-GA组(腹腔注射18α-GA 40 mg/kg两个月,以DMSO为溶解介质)和DMSO对照组(腹腔注射含等体积DMSO溶解介质的PBS溶液),每组5...     

靶向PSMB5基因的shRNA慢病毒载体对神经干细胞增殖和分化潜能的影响

目的:优化20S蛋白酶体β5亚单位(proteasome subunit beta type-5,PSMB5)-shRNA慢病毒感染神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方案,观察PSMB5表达下调对NSCs增殖和分化能力的影响,探讨调控NSCs潜能的分子机制。方法:构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的PSMB5-shRNA慢病毒载体,并设错义序列对照,感染新生小鼠(postnatal day 0,P0)NSCs。倒置荧光显微镜观察GFP阳性率,计算感染率,RT-PCR、免疫印迹和荧光分光光度法检测PSMB5沉默效率和蛋白酶体活性。比较对照组和shRNA组神经球的数量和直径,利用CCK-8实验观察PSMB5基因沉默对NSCs增殖潜能的影响。Tuj1染色观察PSMB5基因沉默对NSCs分化能力的影响。结果:PSMB5-shRNA慢病毒感染NSCs 24 h后可见GFP荧光表达,48 h达峰值,传代后可见GFP稳定表达。其感染复数MOI为40,polybrene 3μg/ml时,感染48 h GFP阳性率可达92.5%±2.3%;PSMB5-shRNA组PSMB5 mRNA和蛋白表达水平分别较对照组降低66.49%±4.81%(P0.001)和33.1%±2.54%(P0.001)。PSMB5-shRNA组蛋白酶体活性较对照组下降43.4%±1.48%(P0.01)。shRNA组NSCs的增殖能力降低,神经球数量为126.5±8.4显著低于对照组163.5±9.5(P0.01),神经球的平均直径为29.9μm±2.6μm显著低于对照组42.9μm±2.3μm(P0.01)。CCK-8结果表明PSMB5-shRNA组细胞吸光度值0.36±0.04,显著低于对照组0.59±0.03(P0.001),PSMB5-shRNA组Tuj1+阳性率为39.13%±8.14%,较对照组显著降低(P0.01)。结论:PSMB5基因沉默可降低NSCs蛋白酶体活性抑制P0期小鼠NSCs增殖分化能力。     

Wnt3a减轻黑素细胞iMC65氧化应激损伤

目的探讨Wnt3a对氧化应激损伤的i MC65黑素细胞的保护作用及机制。方法将黑素细胞分成对照组,Wnt3a组,H2O2处理组,Wnt3a干预组,750μmol/L的H2O2作用模拟黑素细胞的氧化应激损伤。MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞产生活性氧(ROS),荧光素酶报告基因检测Nrf2/ARE通路的激活,Western blot检测Nrf2/ARE通路的相关蛋白表达。结果与对照组相比,H2O2处理组的细胞活性明显下降(P0.01),凋亡比率明显上升(P0.01),ROS的产生明显增加(P0.01)。而Wnt3a干预组能显著缓解H2O2处理组细胞活性的降低(P0.05)、降低凋亡比率(P0.05),减少ROS的产生(P0.05)。Wnt3a也能上调Nrf2和HO-1蛋白水平的表达。结论 Wnt3a可以保护氧化应激状态下的黑素细胞,其机制可能与激活Nrf2/ARE有关。     

18α-GA通过上调蛋白酶体活性促进晚期骨髓间充质干细胞增殖

 目的: 明确18α-甘草次酸(18α-glycyrrhetinic acid,18α-GA)对晚期骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)衰老标志物和增殖能力的影响。方法: 晚期BMSCs(≥14代)应用2.0 mg/L的18α-GA持续作用30 d,比较18α-GA组与DMSO组蛋白酶体活性;衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-Gal)染色和Western blot检测衰老相关蛋白p53、p21和p16的表达变化;CCK-8、BrdU掺入试验、流式细胞术和Western blot分别检测细胞增殖能力、细胞周期分布及细胞周期相关分子表达变化。结果: 应用18α-GA 后BMSCs蛋白酶体活性较DMSO组增高约0.2倍(P<0.01)。18α-GA组SA-β-Gal阳性衰老细胞较DMSO组减少,且细胞着色浅淡;衰老相关蛋白p53和p21表达水平分别较对照组降低(P<0.05)。CCK-8实验及流式细胞术结果显示18α-GA组细胞增殖能力较DMSO组增高,S期细胞显著增多(P<0.05),18α-GA组BrdU染色阳性细胞率较DMSO对照组增高(P<0.05)。18α-GA组细胞周期相关蛋白cyclin D1及CDK4表达水平分别较DMSO组增高(P<0.05)。结论: 18α-GA可激活晚期BMSCs蛋白酶体活性延缓细胞衰老,并且可能通过上调细胞周期相关蛋白表达水平促进晚期BMSCs增殖。     

叶黄素对乳腺癌细胞活力的影响

目的:探究叶黄素对人乳腺癌T47D细胞活力的影响及其可能的作用机制。方法:将人乳腺癌T47D细胞随机分为对照组和叶黄素(浓度分别为6.25、12.5、25和50 mg/L)干预组,采用MTT法检测叶黄素对T47D细胞活力的影响;RT-qPCR检测核因子E2相关因子2(Nrf2),谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)及超氧化物歧化酶2(SOD2)的mRNA水平;荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测Nrf2和p65的蛋白表达。结果:MTT结果显示叶黄素抑制人乳腺癌T47D细胞的活力,且呈时间和剂量依赖关系。RT-q PCR结果显示各浓度叶黄素干预组细胞中Nrf2,GPx1及SOD2的mRNA水平均较对照组升高(P0.05);且叶黄素干预组细胞内ROS水平显著下降(P0.01)。Western blot结果显示,叶黄素干预48 h后,Nrf2蛋白表达增加(P0.05),p65蛋白表达降低(P0.05),呈剂量依赖关系。结论 :叶黄素对乳腺癌细胞活力的抑制作用可能与上调Nrf2的表达、诱导抗氧化酶GPx1及SOD2 mRNA表达和降低氧化应激水平,进而阻断NF-κB信号通路有关。     

支气管哮喘豚鼠BALF炎症细胞中PPARγ、Nrf2和γ-GCS-h表达的变化

目的:研究支气管哮喘急性发作豚鼠肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞中PPARγ、Nrf2和γ-GCS-h表达变化并探索PPARγ对Nrf2/γ-GCS-h作用。方法:40只健康雄性豚鼠随机化原则分成对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松组(C组)和罗格列酮组(D组),每组10只豚鼠,卵蛋白致敏法复制哮喘模型。收集BALF,行细胞计数和分类,离心,上清液行活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)浓度测定,细胞涂片原位杂交检测PPARγ、Nrf2和γ-GCS-hmRNA表达,细胞涂片免疫细胞化学检测PPARγ、Nrf2和γ-GCS-h蛋白表达。结果:B组嗜酸性粒细胞数(EOS)比例高于A组、C组和D组,差异显著(P0.01),BALF中ROS和MDA浓度在B组中最高,4组间差异显著(均P0.05);PPARγ、Nrf2和γ-GCS-hmRNA和蛋白在B组表达最低,4组表达差异显著(均P0.01)。PPARγ与Nrf2/γ-GCS-h表达均呈正相关(均P0.05);γ-GCS-h与Nrf2表达呈正相关(r=0.954,P0.05);哮喘组PPARγ、γ-GCS-h和Nrf2表达均与浸润的嗜酸性粒细胞数呈负相关(均P0.05)。结论:PPARγ和Nrf2/γ-GCS-h在卵蛋白致敏急性支气管哮喘模型BALF炎症细胞中表达均下降;PPARγ可上调Nrf2/γ-GCS-h表达,在抑制炎症反应和氧化应激中发挥重要作用,这可能为支气管哮喘防治开辟新途径。     

甲状腺激素诱导的神经干细胞移植对慢性实验性变态反应性脑脊髓炎的神经保护作用

目的探讨甲状腺激素诱导的神经干细胞(NSCs)是否比单纯NSCs移植对慢性实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)有更好的神经保护作用。方法体外培养新生大鼠NSCs和三碘甲腺原氨酸(T3)诱导的NSCs(T3/NSCs),诱导其分化7d后,免疫细胞化学或免疫荧光染色分别检测半乳糖脑苷脂阳性(Gal C+)和GFAP阳性(GFAP+)细胞。用豚鼠脊髓匀浆诱导慢性EAE大鼠模型。在免疫后10d,脑立体定位仪分别移植T3/NSCs、NSCs和生理盐水入EAE大鼠侧脑室,T3/NSCs和NSCs移植前用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)标记。实验分为T3/NSCs组、NSCs组和对照组,每组10只。每天对大鼠临床症状评分评估神经功能。大鼠免疫60d后处死,HE和LFB染色分别观察脑的炎症侵润和脱髓鞘;免疫荧光双标染色检测脑的Gal C+/Brd U+和GFAP+/Brd U+比例;RT-PCR法检测脑组织血小板源性生长因子α受体(PDGFαR)、Gal C和髓鞘碱性蛋白(MBP)mRNA的表达。结果 T3/NSCs体外分化为Gal C+和GFAP+细胞的比例分别高于和低于NSCs的分化。T3/NSCs组和NSCs组神经功能恢复较对照组好。T3/NSCs组较NSCs组更明显改善脑的炎症侵润和脱髓鞘,其脑内Gal C+/Brd U+及GFAP+/Brd U+的比例分别高于和低于NSCs组,脑组织的PDGFαR、Gal C和MBP mRNA的表达也较NSCs组高。结论 T3/NSCs比NSCs对EAE有更好的神经保护作用。     

花姜酮通过抑制氧化应激减轻MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的:探讨花姜酮(zerumbone,ZER)对1-甲基-4-苯基-吡啶鎓离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP~+)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的作用及其可能的分子机制。方法:采用CCK-8法检测MPP~+对SH-SY5Y细胞的毒性作用以及ZER的保护作用,采用流式细胞术检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况,采用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术抑制人帕金森病蛋白7(Parkinson disease protein 7,PARK7)基因的表达,采用Western blot法检测PARK7、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)和血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的蛋白表达水平。结果:MPP~+可显著抑制SH-SY5Y细胞活力(P0.05),并呈剂量和时间依赖性;ZER可使经600μmol/L MPP~+处理24 h的SH-SY5Y细胞活力升高,PARK7和Nrf2蛋白表达水平显著升高(P0.05),ROS含量和细胞凋亡明显减少(P0.05),抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)具有相似的作用;沉默PARK7基因后,Nrf2和HO-1蛋白的表达水平明显下降(P0.05),ROS含量和细胞凋亡显著增加(P0.05)。结论:ZER可在体外剂量依赖性地减轻MPP~+对SH-SY5Y细胞的毒性作用,这可能与ZER激活PARK7/Nrf2/HO-1通路,继而抑制MPP~+诱导的ROS生成和细胞凋亡有关。     

PI3K/Nrf2通路在内毒素休克兔肾损伤中的作用

 目的: 探讨磷脂酰肌醇3-激酶/核因子E2相关因子2(PI3K/Nrf2)信号通路在内毒素休克兔急性肾损伤中的作用。方法: 健康清洁级雄性新西兰大白兔50只,随机分为5组(每组10只):对照组(C组)、内毒素休克模型组(L组)、渥曼青霉素+内毒素休克组(WL组)、渥曼青霉素组(W组)和二甲基亚砜组(D组)。W组、WL组经耳缘静脉注射渥曼青霉素0.6 mg/kg,D组注射二甲基亚砜0.08 mL/kg,C组和L组注射等容量生理盐水。30 min后,L组和WL组静脉注射脂多糖5 mg/kg(溶于2 mL生理盐水),C组、W组和D组注射等容量生理盐水。注射脂多糖或生理盐水后6 h处死兔,取肾组织进行肾损伤评分(HSK),测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿α1-微球蛋白(α1-MG)浓度,检测肾组织MDA含量及SOD活性,检测肾组织Nrf2和HO-1的mRNA总Akt蛋白、p-Akt蛋白、总Nrf2蛋白、p-Nrf2蛋白、核Nrf2蛋白和HO-1蛋白水平。结果: 与C组、W组及D组比较,L组和WL组HSK、BUN、Cr、α1-MG及MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织Nrf2和HO-1的mRNA、p-Akt蛋白、Nrf2总蛋白、p-Nrf2蛋白、Nrf2核蛋白及HO-1蛋白的水平上调(P<0.05)。C组、W组和D组之间上述指标差异无统计学显著性。与L组比较,WL组HSK、BUN、Cr、α1-MG及MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织Nrf2和HO-1的mRNA、p-Akt蛋白、Nrf2总蛋白、p-Nrf2蛋白、Nrf2核蛋白及HO-1蛋白的水平降低(P<0.05)。结论: PI3K/Nrf2通路激活是内毒素休克诱发兔急性肾损伤时机体的适应性调节反应机制之一。     

Nrf2过表达对乙醇刺激下肝星状细胞激活与增殖及合成I型胶原的影响

 目的：探讨核因子E2相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法：采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空载质粒瞬时转染,将细胞分为正常对照组、乙醇刺激组、乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组和乙醇刺激+ pEGFP-N1空载质粒组。采用RT-PCR及Western blotting方法对HSC-T6中Nrf2、I型胶原及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA及蛋白表达水平进行检测,采用MTT法对HSC-T6细胞增殖水平进行检测,采用流式细胞术对HSC-T6细胞周期分布进行检测。结果：(1) 荧光显微镜下观察显示pEGFP-Nrf2质粒成功转染HSC-T6,转染后48h Nrf2 mRNA及蛋白表达水平较其余组显著升高（P＜0.05）。(2) 乙醇刺激组与乙醇刺激+ pEGFP-N1空载质粒组之间细胞增殖水平、I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,均明显高于正常对照组（P＜0.05）,细胞周期分布G1期比例下降,S期比例升高（P＜0.05）,而乙醇刺激+ pEGFP-Nrf2质粒组细胞增殖水平及I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平与乙醇刺激组及乙醇刺激+ pEGFP-N1空载质粒组相比均显著下降（P＜0.05）,细胞周期分布G1期比例显著上升,S期比例显著下降（P＜0.05）,呈G1/S期阻滞。结论：Nrf2过表达可显著抑制乙醇对HSC-T6 I型胶原及α-SMA mRNA及蛋白表达的促进作用,使HSC-T6细胞周期发生G1/S期阻滞,抑制乙醇诱导的HSC-T6增殖水平的升高,提示其对乙醇诱导的HSC-T6细胞活化具有负性调控作用。     

大叶茜草素抑制大鼠CFSC-2G细胞活化和胶原合成

目的:观察大叶茜草素(mollugin)对大鼠肝星状细胞系CFSC-2G活化和胶原合成的影响并探讨其分子机制。方法:小剂量(10μmol/L)过氧化氢(H_2O_2)诱导CFSC-2G细胞30 min后,再加入不同浓度(0、20、40、60和120μmol/L)的mollugin处理。MTT法检测细胞活力,real-time PCR和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、核因子κB(NF-κB)p65、Bcl-2、Bcl-x L、Bax以及肝星状细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白表达,并用Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的磷酸化水平。结果:低剂量H_2O_2可以诱导CFSC-2G细胞活化,mollugin明显促进p38 MAPK磷酸化,上调Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达,下调NF-κB p65、Bcl-2和Bcl-x L的mRNA和蛋白表达,抑制H_2O_2诱导活化的CFSC-2G细胞活力和胶原合成(P0.05)。结论:Mollugin可能通过上调Nrf2和HO-1并下调NF-κB p65和Bcl-2表达,抑制CFSC-2G细胞活化和胶原合成。     

EP_2A体外可促进人CD34~+细胞归巢而不能促进其增殖

目的:探讨前列腺素E_2受体2激动剂(EP_2A)在体外对人CD34~+细胞的归巢与增殖作用。方法:收集健康供者经粒细胞集落刺激因子动员后的外周血,免疫磁珠法分选出人CD34~+细胞;同时收集健康供者动员前骨髓液,分离单个核细胞,并行骨髓间充质干细胞(BMMSC)培养。人CD34~+细胞和BMMSC经前列腺素E_2(阳性对照)、DMSO(阴性对照)、EP_2A和EP_2A+前列腺素E_2受体2拮抗剂(EP_2AA)处理后,对人CD34~+细胞用CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测集落形成数目,流式细胞术检测G_2/M期细胞比例,Western blot检测细胞中survivin、β-catenin及CXC趋化因子受体4(CXCR4)的蛋白表达;ELISA法检测BMMSC中基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的含量。结果:EP_2A组与阴性对照组相比,人CD34~+细胞在细胞活力、集落形成数目、G_2/M期比例及survivin和β-catenin蛋白表达方面均无明显差别。但EP_2A组人CD34~+细胞CXCR4及BMMSC SDF-1α的表达均明显高于阴性对照组。结论:EP_2A体外可促进人CD34~+细胞归巢但不能促进其增殖。