MAPK通路抑制剂对三七皂苷单体R1减轻大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩的影响

 目的：探讨三七皂苷单体R1对低氧高二氧化碳性肺血管收缩(HHPV)的影响及其与MAPK信号通路的关系。方法：采用大鼠离体肺动脉环灌流模型,随机将其分为：常氧组（N组）;低氧高二氧化碳组（H组）;低氧高二氧化碳+DMSO组（HD组）;低氧高二氧化碳+R1组,又分为低浓度组（RL组）、中浓度组（RM组）和高浓度组（RH组）;低氧高二氧化碳+SB203580组（S组）;低氧高二氧化碳+U0126组（U组）;低氧高二氧化碳+R1+SB203580组（RS组）;低氧高二氧化碳+R1+U0126组（RU组）。观察二级肺动脉环在常氧及急性低氧高二氧化碳条件下的张力变化。在急性低氧高二氧化碳条件下,观察不同浓度R1孵育及最佳浓度R1分别与SB203580、U0126联合孵育对HHPV三期变化的影响,按照低氧高二氧化碳反应性测定方法测定血管张力变化值。结果：在急性低氧高二氧化碳条件下：（1）二级肺动脉呈现双相性收缩变化,与N组相比显著差异（P＜005或P＜001）;(2)HD组和RL组能明显缓解HHPV的I期快速收缩,逆转II期持续收缩,RM组作用不明显,RH组增强HHPV的I期快速收缩和II期持续收缩。与HD组比较,RL和RH组有显著差异（P＜005或P＜001）;(3)RS组和RU组收缩峰值较HD组均明显下降,II期持续收缩逆转为舒张状态。与RL组相比,RS组和RU组HHPV显著缓解(P＜005或P＜001)。与S组和U组相比,RS组和RU组HHPV显著缓解(P＜005或P＜001)。结论：低浓度（8 mg/L）三七皂苷单体R1可减轻大鼠急性HHPV,其机制可能与MAPK（p38 MAPK和ERK1/2）信号通路的参与有关。     

MAPK 通路抑制剂对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的影响

目的： 观察肺主动脉环、二级肺动脉环在急性低氧高二氧化碳介质中张力的变化；探讨 MAPK 信号通路抑制剂 U0126、SB203580 对低氧高二氧化碳性肺血管收缩的影响。方法: 制备离体 SD 大鼠肺主动脉环、二级肺动脉环。分别观察肺主动脉环、二级肺动脉环在常氧及急性低氧高二氧化碳介质中的张力变化；在急性低氧高二氧化碳条件下分别用 U0126、SB203580 孵育二级肺动脉，观察各自对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的影响。结果: 在常氧条件下,肺主动脉、二级肺动脉张力均无明显变化。急性低氧高二氧化碳条件下二级肺动脉发生双向性收缩反应，肺主动脉只在低氧高二氧化碳早期出现较明显的收缩峰，后期则变化不明显。二级肺动脉分别经ERK1/2上游激酶抑制剂 U0126、p38 MAPK 通路抑制剂 SB203580 孵育后，Ⅱ期持续收缩幅度明显下降（P<0.05)，Ⅰ期快速收缩峰、Ⅰ期舒张均没有明显变化。结论: 在离体条件下，急性低氧高二氧化碳（PO₂ = 30-35 mmHg，PCO₂=55-60 mmHg)可使肺主动脉出现早期快速收缩，并可使二级肺动脉环发生双向性收缩反应；急性低氧高二氧化碳条件下，U0126、SB203580 均能减弱二级肺动脉环的Ⅱ期持续收缩反应。这为临床治疗缺氧和高碳酸血症引起的肺血管收缩及肺动脉高压提供了理论依据。     

辛伐他汀通过抑制p38 MAPK活化降低肝硬化门静脉高压大鼠门静脉压力

 目的:探讨p38 MAPK信号通路在辛伐他汀降低肝硬化门静脉高压症大鼠门静脉压力（PP）中的作用。方法:采用四氯化碳复合因素法构建大鼠肝硬化门静脉高压症模型,成模后将存活大鼠随机分为模型组（n=10）、辛伐他汀治疗组（n=11）和p38 MAPK信号通路抑制剂SB203580处理组（n=10）,后2组分别给予辛伐他汀及SB203580干预处理;另设正常对照组（n=8）。处理结束后检测大鼠PP、肝脏总p38 MAPK蛋白、磷酸化p38 MAPK蛋白、总eNOS蛋白、磷酸化eNOS蛋白表达水平以及肝脏一氧化氮（NO）含量的变化。结果:（1）模型组大鼠PP明显高于正常对照组;辛伐他汀治疗组及SB203580处理组PP均明显低于模型组（P＜0.01）,辛伐他汀治疗组PP明显低于SB203580处理组（P＜0.01）。（2）与正常大鼠相比,模型组大鼠肝脏总p38 MAPK蛋白及总eNOS蛋白表达水平无明显变化（P＞0.05）,而磷酸化p38 MAPK蛋白及磷酸化eNOS蛋白表达水平分别增高与降低（P＜0.01）;辛伐他汀治疗组大鼠肝脏磷酸化p38 MAPK蛋白及磷酸化eNOS蛋白表达水平分别降低与增高（P＜0.01）;SB203580处理组大鼠肝脏磷酸化p38 MAPK蛋白及磷酸化eNOS蛋白表达水平分别降低与增高（P＜0.01）,但磷酸化eNOS蛋白表达水平增高的程度低于辛伐他汀治疗组（P＜0.01）。(3)辛伐他汀治疗组肝脏NO含量［（15.73±1.59） μmol/(g protein)］及SB203580处理组肝脏NO含量［（13.98±1.27) μmol/(g protein)］明显高于模型组［（9.81±1.12） μmol/（g protein）］（P＜0.01）,辛伐他汀治疗组NO含量明显高于SB203580处理组（P＜0.01）。结论: 辛伐他汀降低肝硬化门静脉高压症大鼠门静脉压力可能与其抑制p38 MAPK信号通路的活化有关。     

容量激活性氯离子通道在低氧高二氧化碳处理的大鼠PASMCs的表达及其与MAPK通路的关系

 目的：探讨容量激活性氯离子通道（CLC3）在低氧高二氧化碳处理的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中的表达变化及其与MAPK信号通路的关系。方法：酶消化法取雄性SD大鼠PASMCs进行原代培养,采用小鼠抗大鼠α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定;复制低氧高二氧化碳模型,采用免疫印迹法检测CLC3蛋白的表达;采用RT-PCR技术测定CLC3 mRNA水平的表达。结果：(1)与对照组比较,低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均显著上调(均P＜001);(2)与低氧高二氧化碳组比较,ERK抑制剂U0126+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均显著下调(均P＜001);p38抑制剂SB203580+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均明显上调(均P＜001);p38激活剂茴香霉素+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P＜005和P＜001)。结论：低氧高二氧化碳可上调大鼠PASMCs CLC3 mRNA和蛋白的表达;ERK1/2通路介导了低氧高二氧化碳诱导的大鼠PASMCs CLC3表达, 而p38 MAPK通路活化则下调低氧高二氧化碳诱导的CLC3 mRNA和蛋白表达。     

Kv1.5对大鼠低氧高二氧化碳性PASMCs增殖、凋亡的影响及与MAPK通路的关系

 目的：探讨电压依赖性钾离子通道Kv1.5对大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖、凋亡的影响及其与丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号通路的关系。方法：体外培养大鼠PASMCs,复制低氧高二氧化碳模型,随机分组如下：常氧组（N组）;低氧高二氧化碳组（HH组）;低氧高二氧化碳+溶剂DMSO对照组（HD组）;低氧高二氧化碳+ERK1/2通路抑制剂U0126组（HU组）;低氧高二氧化碳+p38 MAPK通路抑制剂SB203580组（HS组）;低氧高二氧化碳+MAPK通路激动剂茴香霉素（anisomycin）组（HA组）。采用CCK-8法检测细胞活性,蛋白免疫印迹法检测Kv1.5、增殖细胞核抗原（PCNA）及Bax蛋白的表达水平。结果：与N组相比,HH组和HD组细胞活性增加（P<0.01）,PCNA蛋白表达上调,Kv1.5及Bax蛋白表达均明显降低（P<0.01）,HH组和HD组间各指标变化均无显著差异（均P>0.05）;较之HD组,HU组、HS组及HA组细胞活性降低（P<0.05或P<0.01）,PCNA蛋白表达下调,Kv1.5及Bax蛋白表达均明显增加,差异均显著（P<0.01）,其中以HA组各指标变化最明显。结论：钾离子通道Kv1.5对低氧高二氧化碳性大鼠PASMCs增殖、凋亡的调节可能与MAPK通路的激活有关。     

p38MAPK参与高糖刺激大鼠肾小管上皮细胞产生细胞外基质胶原Ⅲ

目的：探讨p38MAPK信号通路在高糖刺激大鼠肾小管上皮细胞产生细胞外基质胶原Ⅲ中的作用。 方法： 采用体外培养和Western blotting等方法，以不同浓度D-葡萄糖、p38MAPK信号通路特异性阻断剂SB203580以及用不同时间刺激正常大鼠肾小管上皮细胞NRK52E，分别检NRK52E细胞p38MAPK磷酸化水平和细胞外基质胶原Ⅲ的表达。 结果： 随D-葡萄糖浓度增加，p38MAPK磷酸化水平、胶原Ⅲ的产生也增加，SB203580可有效阻断高糖引起p38MAPK磷酸化水平的升高和细胞外基质胶原Ⅲ的表达的增高。 结论： 高糖引起p38MAPK磷酸化水平的升高可能在糖尿病肾病的肾间质纤维化中发挥重要作用。SB203580有潜在的糖尿病肾病防治的临床应用价值。     

p38 MAPK信号途径参与大鼠系膜细胞MMP2表达

目的探讨系膜细胞中调节MMP2表达的信号通路。方法鼠系膜细胞培养,分别加入酪氨酸激酶抑制剂（Herbimycin A）,p38MAPK抑制剂（SB203580）,MEK抑制剂（U0126）,ERK抑制剂（PD098059）,P13K抑制剂（Y294002）,用酶谱法分析MMP2酶活性、用RT-PCR及Westem方法从基因及蛋白水平,观察阻断剂对MMP2表达的影响。结果酪氨酸激酶抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂及P13K抑制剂对MMP2酶活性、mRNA及蛋白水平无影响,在72hp38MAPK抑制剂SB203580抑制MMP2活性25％。在48h当SB203580浓度分别为10、20、30及40μmol／L时,系膜细胞中MMP2的抑制率分别为7．2％、13．5％、21．3％及28％。结论大鼠系膜细胞中p38MAPK信号传导途径参与了MMP2的表达,并且p38MAPK抑制剂SB203580对MMP2的抑制有剂量依赖性。     

SB203580对急性肺栓塞后肺动脉高压及MCP-1表达的影响

 目的：观察单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)与急性肺栓塞（pulmonary thromboembolism, PTE）后肺动脉高压形成的关系;探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）特异性抑制剂SB203580对急性PTE后肺动脉高压及MCP-1表达的影响。方法：采用自体血栓回输法复制Sprague-Dawley大鼠急性PTE模型;将大鼠随机分成5组,每组观察1 h、4 h和8 h 3个时点;急性PTE模型复制前1 h,分别对MCP-1中和抗体C1142组及SB203580组进行药物预处理;在1 h、4 h和8 h检测各组肺动脉平均压力（mean pulmonary artery pressure, MPAP）和MCP-1 mRNA及蛋白表达。结果：（1）在相同时点,急性PTE组MPAP和MCP-1 mRNA及蛋白表达均较溶剂对照组显著升高（P<005）;（2）在相同时点,C1142组及SB203580组MPAP和MCP-1 mRNA及蛋白表达均较急性PTE组显著降低（P<005）。结论：（1）急性PTE后MCP-1的大量表达参与急性PTE性肺动脉高压的形成;（2）SB203580可能通过p38 MAPK信号转导通路,下调MCP-1表达,降低急性PTE肺动脉压力。     

p38MAPK信号传导通路在人绒毛滋养层细胞EMMPRIN表达和体外侵袭中的作用

目的 研究人绒毛滋养层细胞中调节细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）表达的信号通路及p38MAPK信号通路在滋养细胞体外侵袭中的作用.方法 体外无血清培养人绒毛滋养细胞,分别加入p38MAPK抑制剂（SB203580）,JNK抑制剂（SP600125）,ERK抑制剂（PD098059）,用RT-PCR及Western blot方法观察阻断剂对EMMPRIN表达的影响.用不同浓度的佛波酯（PMA）作用于滋养细胞,ELISA方法检测滋养细胞中p38MAPK的活性变化,用transwell细胞侵入系统检测滋养细胞的侵袭作用;加入不同浓度的SB203580,观察阻断剂对滋养细胞侵袭性的影响.结果 JNK抑制剂、ERK抑制剂对滋养细胞分泌EMMPRIN无影响,p38MAPK抑制剂以时间剂量依赖的方式抑制滋养细胞表达EMMPRIN,SB203580浓度为5、10、15及20μmol/L作用24h后,EMMPIRN的抑制率分别为7.3%、24.6%、31.8%及39%;加入10μmol/L的SB203580培养24h后即可抑制EMMPRIN基因和蛋白的表达,抑制率为22%,培养48h和72h抑制率分别为45%和76%.向培养的细胞中加入浓度为0.1、1、10mmol/L的PMA作用30min,PMA以时间剂量依赖的方式激活p38MAPK,而SB203580以时间剂量依赖的方式抑制PMA对p38MAPK的激活.PMA可以促进滋养细胞体外侵袭作用,5mmol/L的SB203580能明显的抑制滋养细胞的体外侵袭能力,也能抑制PMA对滋养细胞侵袭活性的激活.结论 p38MAPK信号传导途径参与了人绒毛滋养细胞中EMMPRIN的表达.p38MAPK通路在人滋养细胞的侵袭行为中有重要的作用,p38MAPK激动剂可能会为子痫前期-子痫的防治提供新的途径.     

三七皂苷单体R1 抑制低氧高二氧化碳诱导的肺动脉平滑肌细胞p38 MAPK信号通路的活化

目的: 探讨三七皂苷单体R₁(R₁)减轻低氧高二氧化碳(CO₂)性肺动脉收缩的作用及其与p38 MAPK信号通路的关系。方法: 原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),取第2至5代对数生长期细胞至低氧高CO₂(1% O₂, 6% CO₂)条件下继续培养,并分别用8、40、100 mg/L R₁ 孵育24 h后收集细胞,采用免疫印迹法测定p38 MAPK磷酸化蛋白表达,半定量RT-PCR检测p38 MAPK mRNA的表达。结果: Western blotting和RT-PCR结果显示,低氧高CO₂组p-p38 MAPK蛋白和p38 MAPK mRNA表达明显高于对照组(N)组(P<0.01)。与低氧高CO₂组相比,R₁(8、40、100 mg/L)不同程度抑制了p-p38 MAPK蛋白和p38 MAPK mRNA的表达(P<0.01),并呈剂量依赖关系。结论: 低氧高CO₂诱导PASMCs p38 MAPK活化,三七皂苷单体R₁可能通过抑制p38 MAPK通路减轻低氧高CO₂性肺动脉收缩。     

三七总皂苷对低氧大鼠肺动脉压和肺组织p38 MAPK表达的影响

目的:探讨三七总皂苷(PNS)对低氧大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)表达的影响,及预防低氧性肺动脉高压(HPH)的作用和机制。方法:将30只SD大鼠随机分为3组:正常对照组、低氧组和低氧+PNS组。观察各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、平均颈动脉压(mCAP)和右心室/(左心室+室间隔重量)比[RV/(LV+S)],免疫组化法和RT-PCR法分别检测肺小血管壁磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白和肺组织中mRNA的含量。结果:与对照组相比,低氧组大鼠mPAP、RV/(LV+S)明显升高,肺小动脉p-p38 MAPK及肺组织p38 MAPK mRNA含量显著升高(P0.05)。低氧+PNS组mPAP、RV/(LV+S)、肺小动脉p-p38 MAPK及肺组织p38 MAPK mRNA含量明显低于低氧组(P0.05)。结论:PNS具有显著预防HPH的作用,其机制可能与其降低p38 MAPK mRNA的表达有关。     

高碳酸血症通过赖氨酰氧化酶依赖的胶原蛋白交联影响大鼠缺氧性肺动脉高压

目的:通过研究缺氧和/或高碳酸血症时赖氨酰氧化酶(LOX)以及细胞外基质胶原蛋白的交联变化,探讨高碳酸血症对缺氧性肺动脉高压的影响机制。方法:SD大鼠随机均分为4组,分别为常氧对照组、缺氧组、高碳酸血症组以及缺氧+高碳酸血症组。比色法测定胶原蛋白含量,荧光光谱法分析LOX酶活性,免疫组织化学和Western blot法检测肺动脉LOX蛋白含量,实时荧光定量PCR检测肺动脉LOX的mRNA水平。结果:缺氧组大鼠平均肺动脉压(m PAP)、右心室/(左心室+室间隔)重量比值[RV/(LV+S)]及血管壁面积(WA)/血管总面积(TA)均明显高于常氧对照组;高碳酸血症组与常氧对照组的m PAP、RV/(LV+S)差异无统计学显著性;缺氧+高碳酸血症组大鼠的m PAP及RV/(LV+S)显著低于单纯缺氧组。缺氧组大鼠肺组织的胶原交联程度则明显高于常氧组及高碳酸血症组;高碳酸血症组大鼠肺组织的胶原交联程度与常氧组比较无显著差异;缺氧+高碳酸血症组大鼠肺组织的胶原交联程度显著低于缺氧组。缺氧组大鼠肺动脉LOX的mRNA、蛋白表达量及其酶活性均高于常氧组(P0.01);缺氧+高碳酸血症组大鼠肺动脉LOX mRNA、蛋白表达以及酶活性均明显低于缺氧组(P0.01)。结论:缺氧能诱导肺动脉LOX高表达,通过促进胶原合成及交联,参与肺动脉高压的形成。高碳酸血症通过抑制缺氧诱导的LOX表达和胶原交联,延缓缺氧性肺动脉高压的进展。     

mmLDL通过p38 MAPK通路上调小鼠肠系膜动脉ET受体

目的:探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(mm LDL)是否通过激活p38 MAPK炎症通路上调小鼠肠系膜动脉内皮素(ET)A型(ETA)和B型(ETB)受体。方法:将昆明小鼠分为正常对照组(尾静脉注射生理盐水)、mm LDL组(尾静脉注射mm LDL)、LDL组(尾静脉注射LDL)、mm LDL+SB 203580组(尾静脉注射mm LDL及腹腔注射p38 MAPK抑制剂SB 203580)和mm LDL+DMSO组(尾静脉注射mm LDL及腹腔注射DMSO)。微血管张力描记仪记录ETB受体激动剂角蝰毒素6c和ET-1引起肠系膜动脉收缩的量效曲线;RT-q PCR检测ETB受体、ETA受体和白细胞介素(IL-6)的m RNA表达;ELISA检测血清IL-6的水平;Western blot检测ETB受体、ETA受体、IL-6、p38 MAPK、p-p38MAPK、NF-κB和p-NF-κB的蛋白水平。结果:mm LDL引起ETB受体和ETA受体介导的血管收缩反应显著增强(P<0.01),ETB受体、ETA受体和IL-6的m RNA和蛋白表达显著增加(P<0.01),p-p38 MAPK和p-NF-κB蛋白水平显著升高(P<0.01),血清中IL-6水平显著升高(P<0.01);腹腔注射SB 203580抑制了mm LDL的作用。mm LDL引起的IL-6血清浓度升高分别与ETB受体和ETA受体介导的最大收缩率呈正相关。结论:mm LDL通过激活p38 MAPK通路及下游NF-κB转录因子,提高炎症因子IL-6血清水平,增加小鼠肠系膜动脉IL-6、ETA受体和ETB受体表达,增强ETA受体和ETB受体介导的血管收缩功能。     

核因子-κB抑制剂在蛋白激酶C对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉环反应性影响中的作用

目的:探讨核因子-κB抑制剂在蛋白激酶C对低氧性肺动脉高压大鼠离体肺动脉环反应性影响中的作用。方法:复制低氧性肺动脉高压大鼠模型,测定肺动脉平均压(mPAP)、右心室重/(左心室+室间隔)重。取低氧模型组和常氧组大鼠的去内皮肺动脉环,观察PKC激活剂PMA0.5μmol/L对肺动脉环的时间-效应曲线以及NF-κB抑制剂PDTC0-1000μmol/L时对PMA诱导肺动脉环反应性改变的浓度-效应曲线。以血管环对10μmol/L盐酸苯肾上腺素的最大反应值为P₀,对PMA和PDTC的反应值以占P₀的百分值表示(%P₀),记录达最大反应值一半时对应的时间t_1/2(min)、峰值持续时间T(min)。结果:低氧组的mPAP及RV/(LV+S)均高于常氧组(P<0.05)。PMA0.5μmol/L作用于血管环:低氧组各时点的张力%P₀均高于常氧组(P<0.05);低氧组t_1/2小于常氧组(P<0.05);低氧组T大于常氧组(P<0.05)。PDTC0-100μmol/L血管环相对张力低氧组均高于常氧组(P<0.05);大于500μmol/L两组血管张力均下降(P<0.05)。结论:低氧可导致去内皮肺动脉环对PMA的反应性增强;PDTC呈剂量依赖性地降低去内皮肺动脉环对PMA的反应性。提示肺动脉平滑肌细胞内PKC－NF-κB生物信号转导途径的变化可能参与低氧性肺动脉高压肺血管反应性异常升高的过程。