蒙药材蓝盆花指纹图谱及一测多评含量测定方法研究

目的： 建立蒙药材蓝盆花的HPLC指纹图谱及一测多评法同时测定绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A及异绿原酸C 4个成分的含量,评价药材质量。方法： 采用Kromasil 100-5-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长分别为326 nm（含量测定）和350 nm（指纹图谱）,柱温30℃。以17批样品建立指纹图谱共有模式。以异绿原酸A为内参物,建立绿原酸、木犀草苷、异绿原酸C与内参物的相对校正因子,计算含量,并与外标法计算结果进行比较。结果： 建立了蓝盆花药材的HPLC指纹图谱,标示了10个共有峰,并指认其中的7个色谱峰,分别为绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A、大波斯菊苷、异绿原酸C、木犀草素、芹菜素。相对校正因子重现性良好,以异绿原酸A为内参物采用校正因子计算的含量值与实测值之间无显著差异。结论： 采用指纹图谱与多指标检测模式可为评价蒙药材蓝盆花的质量提供有效方法。     

毛连菜不同生长部位的活性成分含量比较

目的 考察毛连菜不同生长部位主要活动成分的分布情况，为毛连菜的后续研究提供参考。方法 采用高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱-多波长切换法，以乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱，流速为0.8 mL·min^-1;同时测定毛连菜中绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C和木犀草苷等5种活性成分的含量，比较各成分在不同部位分布情况。结果 5种活性成分在不同生长部位含量有明显差异，花序中含量最高，叶中含量其次，根、茎中含量相对较低。不同批次毛连菜活性成分在不同部位变化趋势有一定差异，但整体变化趋势基本一致。结论 毛连菜不同生长部位有效成分含量存在明显差异。     

一测多评法测定藏茴香中异绿原酸A、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C

目的 建立一测多评法（QAMS）测定藏茴香中6种咖啡酰奎宁酸类成分含量,并验证该方法在藏茴香质量评价中应用的可行性与适用性。方法 取藏茴香粉末（过三号筛）0.5 g,精密加入70%甲醇 20 mL ,超声处理（250 W、频率 53 kHz）30 min,制备供试品溶液;采用Phenomenex GeminiR C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为 330 nm,体积流量 1.0 mL·min^-1,柱温 30 ℃,进行专属性、供试品提取条件、检测波长选择、色谱条件、线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率方法学考察,建立异绿原酸A、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸 B、异绿原酸 C成分含量检测的 HPLC法;以异绿原酸 A为内参成分,分别计算新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C 5种成分的相对校正因子,分别采用3种不同色谱仪和3种色谱柱进行相对校正因子、相对保留时间耐用性考察,对藏茴香样品同时采用外标法与 QAMS 测定 6 种成分的质量分数,比较 2 种测定方法结果的差异。结果 建立的6种成分的HPLC检测方法的专属性、供试品提取条件、检测波长选择、色谱条件、线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求;新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C的相对校正因子平均值分别是 1.362、1.257、1.335、1.470、1.134,3种不同色谱仪和 3种色谱柱对相对校正因子、相对保留时间均无明显影响;QAMS与外标法2种方法测定3批藏茴香样品中6种成分得到的结果之间无显著差异。结论 建立的QAMS简便、准确、可靠,可用于藏茴香中6种咖啡酰奎宁酸类成分——异绿原酸A、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C的定量分析。     

临沂产红银花和大毛花不同部位药效成分含量的比较研究

目的：临沂产红银花和大毛花在不同采收期的花和叶中绿原酸、木犀草苷含量。方法利用高效液相色谱法对绿原酸和木犀草苷含量进行测定。结果临沂产红银花和大毛花不同花期和不同部位的绿原酸、木犀草苷含量差异显著;两种金银花不同花期的绿原酸含量均高于《中国药典》2015年版要求;红银花在幼蕾期、三青期及二白期木犀草苷含量符合药典要求,大毛花在大白期木犀草苷含量最高。红银花的幼叶中的绿原酸含量较高,且明显高于花中绿原酸含量,叶中的木犀草苷含量也明显高于花的含量;大毛花的花中绿原酸含量高于叶中绿原酸含量,但叶中木犀草苷含量明显高于花中木犀草苷含量。结论金银花的叶可以用来提取绿原酸和木犀草苷,以提高金银花资源的利用率。     

HPLC法测定市售杭白菊中2种有机酸和2种黄酮的含量

摘 要 目的： 测定市售杭白菊中有效成分的含量,比较不同产地杭白菊质量。方法: 采用HPLC法测定绿原酸、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸2种有机酸成分以及木犀草苷、木犀草素2种黄酮成分的含量。结果: 收集杭白菊样品各有效成分差异较大,12批市售杭白菊绿原酸含量在0.22%～0.70%之间,木犀草苷含量在0.09%～0.25%之间,3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量在0.84%～1.67%之间,木犀草素含量在0.008%～0.042%之间。结论: 市售杭白菊质量有较大差异,有必要进一步加强质量控制。     

正交试验法优选“武当二号金银花”藤中4种有效成分的提取条件及其含量测定

摘 要 目的：研究“武当二号金银花”藤中主要有效成分含量测定方法,为评价其品质奠定基础。方法: 采用超声法考察提取溶剂、超声时间、超声功率及料液比4个因素对样品中芦丁和木犀草苷成分提取的影响,并使用4因素3 水平的正交试验方法优化提取条件。含量测定色谱条件：色谱柱：绿原酸为C₁₈柱(Phenomenex Luna ,250 mm×4.6 mm,5 μm);马钱苷、芦丁与木犀草苷均为苯基柱(Fortis Xi phenyl ,250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：绿原酸、马钱苷为乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85）;芦丁与木犀草苷为乙腈-0.5%冰醋酸溶液梯度洗脱;柱温：30℃;检测波长分别为327,237,354,348 nm。 结果: 提取“武当二号金银花”藤中芦丁与木犀草苷成分的最佳条件：提取溶剂均为60%乙醇;料液比均为1∶30,超声功率分别为350,250 w;超声时间分别为50,60 min。样品中有效成分绿原酸、马钱苷、芦丁和木犀草苷的平均含量分别为10.27,6.33,0.401,0.450 mg·g^-1。结论:该方法简便、准确、重现性好,为其质量控制及进一步开发利用提供参考。     

同时测定小儿咳喘灵颗粒中4种成分的方法研究

目的：建立同时测定小儿咳喘灵颗粒中（R,S）-告依春、绿原酸、甘草苷和木犀草苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法,Inertsil C8-3色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相：乙腈-0.5%乙酸溶液,梯度洗脱;流速：0.6 mL·min^-1;DAD检测器,检测波长：木犀草苷327 nm、绿原酸327nm、甘草苷276 nm、（R,S）-告依春245 nm。结果：金银花中木犀草苷和绿原酸、甘草中甘草苷及板蓝根中（R,S）-告依春在各自的线性范围内与其峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率在99.4%~103.4%范围内,RSD均符合规定。结论：该方法准确、简便、快速,可用于小儿咳喘灵颗粒中多味药材的多个活性成分的含量测定。     

环境因子对杭白菊黄酮类化合物和绿原酸含量的影响

目的 探讨不同环境因子对杭白菊花序中黄酮类化合物和绿原酸含量的影响。方法 分别用低温、紫外线、高盐、干旱和重金属镉处理杭白菊植株,除紫外线处理时间为8~24h外,其它环境因子处理时间均为1~3d,紫外分光光度法测定杭白菊花序中总黄酮的含量,高效液相色谱法测定杭白菊花序中芦丁、木犀草苷及绿原酸等三种活性成分的含量。结果 紫外线与重金属处理可以快速地诱导杭白菊花序中总黄酮、芦丁、木犀草苷及绿原酸含量的上升;而低温、高盐与干旱在1~2d内对杭白菊花序中总黄酮、芦丁、木犀草苷及绿原酸含量的影响不显著,但在3d后可使杭白菊花序中总黄酮、芦丁、木犀草苷及绿原含量明显增加。结论 多种环境因子造成的胁迫都能在一定程度上促进杭白菊花序中黄酮类化合物及绿原酸的积累。说明生态因素也是调控杭白菊次生代谢产物生物合成的重要因素。通过人工干预的手段,对环境因子进行调控,使得提高杭白菊药材重要活性物质的含量成为可能。     

杭菊叶生长过程中绿原酸类和木犀草苷动态变化分析

目的：建立高效液相色谱（HPLC）法同时测定杭菊叶中5种绿原酸类成分及木犀草苷的方法,并分析不同生长过程杭菊叶中绿原酸类和黄酮类成分的动态变化,比较同期采收的杭菊叶与杭菊花中成分的差异,为杭菊叶的质量控制、合理利用提供参考。方法：采摘不同生长时期的杭菊叶样品及盛花期的杭菊花样品,采用HPLC法对杭菊叶及杭菊花中绿原酸类及黄酮类成分进行检测。结果：不同生长时期杭菊叶中绿原酸类及木犀草苷成分呈不同的规律。新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B随着生长时间而逐渐累积,到9月含量达到峰值后逐步下降;绿原酸、异绿原酸A则随着成分累积,在9月达到峰值,下降后又在11月出现次峰值。木犀草苷则随着生长过程逐步增加,到11月达到含量峰值。同期采收的杭菊叶中绿原酸类及黄酮类成分高于杭菊花。结论：该研究结果为确定杭菊叶的采收时间及质量测定标准提供了参考和依据,为揭示杭菊叶生长过程中资源性化学成分的变化以及药材品质的控制奠定了一定基础。     

Box-Behnken 效应面法优化金银花中绿原酸与木犀草苷闪式提取工艺研究

摘 要 目的：采用Box-Behnken 效应面法,优选闪式提取金银花中有效成分的工艺条件。方法: 采用闪式提取法,以乙醇浓度、料液比和提取时间为主要影响因素,以绿原酸和木犀草苷转移率的总评“归一值”为评价指标进行Box-Behnken试验设计,并用多元线性回归及二项式拟合,建立总评归一值与自变量之间的数学关系,用效应面法预测最佳工艺条件。结果: 采用闪式提取,乙醇浓度为66.92%,料液比为18.82,提取时间为1.20 min,提取次数为一次。以此工艺条件提取金银花中绿原酸的转移率为92.87%,木犀草苷的得率为87.55%。结论: 优选的提取工艺简单、经济实用,能为金银花药材中有效成分的快速提取及质量控制提供新思路。     

基于HPLC法及UPLC-MS法测定芫花饮片炮制前后7种成分的含量变化

目的：建立HPLC法及UPLC-MS法测定芫花中银椴苷、木犀草素、芹菜素、绿原酸、羟基芫花素、芫花素及芫花酯甲7种化学成分含量的方法,分析芫花炮制前后化学成分的变化。方法：采用HPLC法,测定银椴苷、木犀草素、芹菜素、绿原酸、羟基芫花素和芫花素6种成分的含量,色谱柱为AgilentEclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸（B）梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,进样量10 μL。同时采用UPLC-MS方法测定芫花酯甲的含量,色谱柱为ACQUITYUPLC HSS T3 C18 色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.8 μm）,流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸（B）梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温35 ℃,进样量1 μL。结果：7种成分的含量由高到低依次为芫花素＞绿原酸＞银椴苷＞芹菜素＞羟基芫花素＞木犀草素＞芫花酯甲。芫花炮制后7种成分的含量均发生一定程度的变化,其中绿原酸成分在炮制后含量有升高有降低,变化不明显;对于银椴苷和芹菜素成分,炮制后含量降低;对于木犀草素、羟基芫花素和芫花素3个成分,炮制后含量升高;对于芫花酯甲成分,炮制后含量降低。结论：该方法简便、灵敏、高效,为考察芫花饮片炮制前后的质量变化提供了技术支持。     

不同加工方法山银花药材中绿原酸、木犀草苷的含量测定

目的建立高效液相色谱法对不同加工方法山银花药材中绿原酸、木犀草苷2个指标性成分进行含量测定,确定山银花最佳加工方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Agi Lent C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%冰醋酸,梯度洗脱;流速:1 m L·min-1;检测波长:350 nm;柱温:25℃。结果不同加工方法山银花中绿原酸、木犀草苷含量有明显变化,其中低温烘干与杀青烘干山银花中绿原酸、木犀草苷含量较高。结论低温烘干法加工山银花外观质量最优,绿原酸、木犀草苷含量最高,应广泛推广应用。     

HPLC法测定日本蛇根草不同组织器官中绿原酸的含量

摘 要 目的： 测定日本蛇根草不同组织器官及发育周期中绿原酸的含量。方法: 建立高效液相色谱法。色谱柱ODS Phenomenex Gemini C₁₈柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）,流动相乙腈：0.4%磷酸溶液（1∶9）,流速：1.0 ml·min^-1,检测波长：327 nm;柱温：30℃。结果: 绿原酸在0.022～1.320μg（r=0.999 9）范围内线性关系良好。2月花期采收的日本蛇根草根、茎、叶、花中绿原酸的含量分别为7.076 7,1.030 7,10.609 5,24.110 3 mg·g^-1,其全草与四月果期的全草绿原酸含量分别为18.600 4 ,14.082 6 mg·g^-1。结论: 日本蛇根草不同组织器官绿原酸含量差异较大, 其中花的含量最高。不同发育周期绿原酸的含量也不同,花期含量明显高于果期。     

HPLC-DAD法测定“武当一号山银花”藤中6种有效成分的含量

摘 要 目的：采用HPLC DAD法测定“武当一号山银花”藤中绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、咖啡酸及当药苷6种有效成分的含量。方法: 色谱柱：Fortis C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相：乙腈 0.4%磷酸溶液,梯度洗脱;流速：0.9 ml·min-1;绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C及咖啡酸检测波长：327 nm,当药苷检测波长：246 nm;柱温：35℃。结果:6种有效成分分别在进样质量0.397～3.970 μg,0.227～2.270 μg,0.077～0.380 μg,0.386～3.860 μg,0.054～0.270 μg,0.221～2.210 μg范围内均呈良好的线性关系(r≥0.999 4),平均回收率为99.15%～99.73%（n=6）。结论:该法简便、灵敏、准确、重复性好,可用于“武当一号山银花” 藤中6种有效成分的含量测定。     

金银花中绿原酸和木犀草苷的含量测定

目的：建立同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷含量的高效液相色谱方法。方法：以乙腈-四氢呋喃（95∶5）为流动相A,0.4%磷酸为流动相B,采用梯度洗脱,0~8 min为88%,8~10 min为80%,10~25 min为80%~75%;绿原酸和木犀草苷的检测波长分别为327 nm和350 nm;流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,进样量为20μL。结果：应用梯度洗脱得到较好的分离效果,绿原酸浓度在10.18~162.88μg/mL范围内呈良好的线性关系（r=0.999 9）;木犀草苷浓度在2.01~20.12μg/mL范围内呈良好的线性关系（r=0.999 7）。结论：该方法准确,操作简便,可用于金银花中绿原酸和木犀草苷含量的同时测定。     

HPLC-DAD法同时测定杭白菊不同部位七种活性成分的含量

摘 要 目的： 建立HPLC DAD法同时测定杭白菊不同部位（茎、叶、花序）中绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎尼酸、蒙花苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、金合欢素七种活性成分的含量。方法: 采用Diamonsil C₁₈(200 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,流速：1 ml·min^-1,检测波长：348 nm,柱温：30℃。结果: 绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎尼酸、蒙花苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、金合欢素的质量浓度分别在0.014～0.560 μg (r=0.999 5)、0.031～1.260 μg(r=0.999 6)、0.022～0.900 μg (r=0.999 8)、0.036～1.440 μg (r=0.999 6)、0.029～1.160 μg(r=0.999 7) 、0.005～0.220 μg(r=0.999 8)和0.006～0.260 μg(r=0.999 9)内与峰面积呈良好的线性关系。绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎尼酸、蒙花苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、金合欢素的平均加样回收率分别为97.91%,97.91%,97.55%,96.43%,96.44%,97.07%和97.48%,RSD分别为1.24%,1.29%,1.48%,1.83%,0.67%,1.88%和1.80%(n=6)。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于杭白菊药材不同部位多成分的质量控制研究。     

HPLC-MS法测定双黄连口服液中木犀草苷和绿原酸的含量并评价二者对成品质量的影响

目的:建立测定双黄连口服液中主要成分木犀草苷含量的方法,并探讨木犀草苷和绿原酸对成品质量控制的影响。方法:木犀草苷含量测定采用高效液相色谱-质谱联用法。色谱柱为Agilent HC-C18柱,流动相为0.2%磷酸(A)-乙腈(B)(梯度洗脱),流速为1mL·min-1,检测波长为350nm,进样量为10μL,柱温为25℃;绿原酸的含量测定采用2010年版《中国药典》(一部)双黄连口服液项下方法。通过测定9批双黄连口服液样品和4个模拟样品中木犀草苷和绿原酸的含量分析二者对成品质量的影响。结果:木犀草苷检测浓度在3.9～39.0μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为99.5%,RSD=3.6%。9批双黄连口服液中木犀草苷的含量为5.56～30.20μg·mL-1,有较大差异;绿原酸的含量为0.71～0.94μg·mL-1,差异不大。4个模拟样品中木犀草苷的含量为0～33.28μg·mL-1,有较大差异;绿原酸的含量为1.07～1.23μg·mL-1,差异不大。结论:仅测定绿原酸来表征双黄莲口服液中金银花的含量有失准确、专属和有效,建议在双黄连口服液质量标准中增加木犀草苷的含量测定。     

一测多评法同时测定金银花标准汤剂中7种成分的含量

目的 采用一测多评法同时测定金银花标准汤剂中7种成分（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A及异绿原酸C）的含量。方法 采用Agilent Eclipse XDB-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）进行HPLC测定,以乙腈-0.1%乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长为327 nm。以绿原酸为内标物,建立与其余6种成分的相对校正因子,实现一测多评,考察校正因子的重现性。结果 一测多评法测得的金银花标准汤剂中7种成分含量,与外标法测定结果相比较,2组数据无显著性差异。结论 所建立的一测多评法方便、准确、重现性好,可用于金银花标准汤剂的质量评价。     

HPLC法同时测定复方利胆解毒颗粒中绿原酸和连翘酯苷A

目的 建立复方利胆解毒颗粒中绿原酸和连翘酯苷A的定量测定方法。方法 采用HPLC法,Diamonsil-C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以甲醇-0.05%磷酸水（33：67）为流动相,在330 nm检测波长下同时对复方利胆解毒颗粒中有效成分绿原酸和连翘酯苷A进行定量测定。结果 绿原酸在0.044 72～0.894 4 μg线性关系良好,r=1.000 0,平均回收率为98.92%,RSD为1.56%;连翘酯苷A在0.052 16～1.043 2 μg线性关系良好,r=0.999 9;平均回收率为98.36%,RSD为1.44%。结论 本方法专属性强、简便、准确,可有效控制该制剂的质量。     

HPLC法测定银翘解毒丸中绿原酸和牛蒡苷的含量

摘 要 目的: 建立HPLC法同时测定银翘解毒丸（大蜜丸）中绿原酸和牛蒡苷的含量。方法: 色谱柱为Thermo ODS 2Hypersil(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,流速为1.0 ml·min^-1;检测波长为280 nm;柱温为30℃。结果:绿原酸和牛蒡苷线性范围分别为0.049～0.984 μg（r=0.999 6）和0.060～1.230 μg（r=0.999 4）。平均加样回收率分别为99.4%（RSD=1.3%)和99.1%（RSD=1.1%）（n=6）。结论:本法操作简便、准确、重复性好,可用于测定银翘解毒丸中绿原酸和牛蒡苷的含量。