1-磷酸鞘氨醇受体2抑制脂多糖诱导的急性肺损伤

 目的: 探讨1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2R)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)中的作用及机制。方法: 野生小鼠和S1pr2^-/-小鼠经气管滴注LPS,建立急性肺损伤动物模型。LPS注射24 h时观察肺组织的病理改变,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白浓度、总细胞数、中性粒细胞的比值及TNF-α、IL-6细胞因子的表达。为了观察S1P2R在肺损伤中的作用机制,LPS注射10 min前野生小鼠和S1pr2^-/-小鼠经尾静脉注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME,LPS注射12 h时,再观察肺的病理组织学变化以及BALF中的蛋白浓度,总细胞数及TNF-α、IL-6细胞因子表达的变化。结果: 与野生小鼠比较,S1pr2^-/-小鼠恶化LPS诱导的急性肺损伤,BALF中的蛋白浓度、总细胞数,中性粒细胞比值及炎症细胞因子表达显著增加。而L-NAME的预处理显著抑制在S1pr2^-/-小鼠LPS诱导加重的急性肺损伤。结论: S1P2R通过抑制NO合成,维持血管屏障,从而抑制急性肺损伤。     

磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶B在小鼠过敏性气道反应肺组织炎性细胞中的差异表达

目的:探讨丝/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)在过敏性小鼠肺组织不同炎性细胞中的活化状况.方法:应用卵蛋白致敏激发BALB/c小鼠制备过敏性气道炎症反应模型,抽取肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数计数和不同炎性细胞分类计数,应用免疫组织化学检测磷酸化Akt(p-Akt)在过敏性小鼠肺组织中不同炎性细胞的表达.结果:过敏性小鼠BALF中总细胞数明显高于正常鼠;分类细胞计数中,正常组以巨噬细胞为主,而过敏性小鼠的嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分比明显升高;免疫组织化学显示p-Akt在过敏性小鼠气道中嗜酸性粒细胞中表达明显高于淋巴细胞和巨噬细胞,而在淋巴细胞中表达明显高于巨噬细胞.结论:Akt在过敏性小鼠的气道炎症中的作用与炎性细胞的种类密切相关,发挥不同的诱导嗜酸性粒细胞和巨噬细胞增多、趋化、释放炎性细胞因子和对抗淋巴细胞凋亡等重要的作用.     

小鼠感染流感病毒后可抵抗致死性流感病毒攻击的研究

目的 BALB/c小鼠初次感染流感病毒(A/California/7/2009(H1N1)(pCA07)和A/Guangzhou/333/99(H9N2)(GZ333))后,用流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)(PR8) 10倍致死剂量攻击,观察攻毒后小鼠的反应.方法 BALB/c小鼠150只,分成3组,空白对照组PBS滴鼻,实验组分别感染甲型H1N1流感病毒pCA07和禽源H9N2病毒GZ333；感染56 d后用10倍致死剂量的鼠肺适应株流感病毒PR8攻击两个实验组和对照组小鼠,比较PR8病毒攻击后,病毒载量和抗体水平,以及对小鼠存活率的影响.结果 感染过pCA07和GZ333的小鼠在致死病毒PR8攻击后全部存活,并分别在病毒攻击6d和9d后小鼠肺组织中检测不到攻击病毒.对初次感染病毒的抗体水平在病毒PR8攻击后迅速升高,在保持初次感染病毒抗体的同时能够产生针对PR8病毒的抗体.结论 不同亚型流感病毒感染小鼠后可以提供交叉保护.     

Adipolin/CTRP12对LPS致ARDS小鼠的保护作用及肺泡上皮钠离子通道的调节

目的:探讨adipolin/CTRP12对LPS致ARDS小鼠的作用及肺泡上皮钠离子通道(ENaC)的调节。方法:40只C57BL/6J小鼠按随机数字表分为对照组、LPS组、adipolin组和wortmannin(PI3K抑制剂)组,每组10只。苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变;伊文氏蓝标记蛋白检测肺水清除率(AFC),BCA法测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量,评估肺组织通透性改变;ELISA检测BALF中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,髓过氧化物酶(MPO)试剂盒检测MPO活性,吉姆萨染色计数BALF总细胞数和多形核白细胞数,Western blot法检测肺组织α-ENaC蛋白表达和Akt磷酸化水平,实时荧光定量PCR检测肺组织α-ENaC的mRNA转录水平。结果:与control组相比,LPS组表现出典型的ARDS病理改变,肺损伤明显(P0.05),湿干重比(W/D)和BALF蛋白含量明显增高而AFC明显减弱(P0.05),BALF细胞计数、MPO活性、IL-1β含量和TNF-α含量明显升高(P0.05),而肺α-ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调(P0.05)。与LPS组相比,adipolin组肺损伤明显减轻(P0.05),W/D和BALF蛋白含量明显降低而AFC明显增强(P0.05),且BALF细胞计数、MPO活性、IL-1β含量和TNF-α含量均较LPS组显著降低(P0.05),伴α-ENaC表达和Akt磷酸化水平显著上调(P0.05)。而PI3K抑制剂wortmannin组与adipolin组相比,其肺损伤明显加重(P0.05),W/D和BALF蛋白含量明显增高,AFC明显减弱(P0.05),BALF细胞计数、MPO活性、IL-1β含量和TNF-α含量明显升高(P0.05),同时伴α-ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调(P0.05)。结论:Adipolin/CTRP12可通过PI3K/Akt信号通路介导的α-ENaC上调机制,增强肺水肿液清除能力,从而对LPS所致ARDS小鼠发挥保护性调控作用。     

柚皮苷对高糖诱导的血管内皮细胞损伤及PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的:研究柚皮苷(naringin,Nar)对高糖(high glucose,HG)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的作用及对PI3K/AKT/e NOS信号通路的影响。方法:利用HG(33 mmol/L glucose)培养基孵育HUVECs不同时间(6、12、24、48、72 h)后,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,建立内皮细胞损伤模型,分别测定各组上清液中NO水平、细胞中e NOS和磷酸化e NOS(p-e NOS)的水平。对损伤的HUVECs用不同浓度的Nar(5、10、25、50、100 mg/L)孵育不同时间(6、12、24、48和72 h),用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15min,检测细胞上清中的NO水平,观察Nar对HG诱导HUVECs损伤的作用。对损伤细胞先分别用PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)和AKT抑制剂AKT inhibitorⅣ(0.5μmol/L)预处理24 h,再用50 mg/L的Nar处理24 h,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,检测细胞上清中NO的水平,以及e NOS、p-e NOS、PI3K、AKT及p-AKT的蛋白水平,探讨Nar减轻HG对HUVECs损伤作用的机制。结果:Nar的量效和时效结果显示,50 mg/L Nar预处理HUVECs 24 h后,其减轻HG对HUVECs损伤的作用最为显著,表现为NO和p-e NOS的水平升高(P0.05)。加入PI3K和AKT抑制剂后,Nar减轻HG致内皮细胞的损伤及上调p-e NOS和NO水平的作用完全取消(P0.05)。结论:Nar能减轻HG诱导的血管内皮细胞损伤,其作用机制可能是通过PI3K/AKT/e NOS信号通路介导的。     

感冒双解合剂对流感病毒FM1感染小鼠肺部炎性损伤的影响

目的： 探讨治疗流行性感冒临床有效方剂感冒双解合剂对肺部炎性损伤的影响，从而探讨感冒双解合剂抗流感炎性损伤的作用机制。方法: 以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株（FM1）感染小鼠为模型，采用HE染色法观察小鼠肺组织的炎性病理改变，采用双抗体夹心ABC-ELISA法观察感冒双解合剂干预治疗后小鼠肺组织肿瘤细胞因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10 (IL-10)含量的变化。结果: 流感病毒感染小鼠后，感染模型组小鼠肺组织显示为重度间质性肺炎的病变，感冒双解合剂组肺病理改变较感染模型组炎症表现减轻，显示为轻度间质性肺炎病变。感染模型组TNF-α、IFN-γ、IL-10的蛋白表达高于正常空白组，两者比较，差异显著（P<0.05或P<0.01）；感冒双解合剂组TNF-α、IFN-γ的表达较之感染模型组降低，IL-10的表达较之感染模型组升高，差异显著（P<0.05或P<0.01）。结论: 感冒双解合剂可能通过抑制炎性细胞因子TNF-α和IFN-γ的表达，提高抗炎因子IL-10的表达水平，减轻炎性损伤的作用。     

枸杞多糖通过调控PI3K/Akt/eNOS信号通路对去卵巢大鼠心肌产生抗氧化作用

目的:观察枸杞多糖对去卵巢大鼠心肌PI3K/Akt/e NOS信号通路的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、补佳乐组、枸杞多糖高剂量组及枸杞多糖低剂量组,ELISA法比较各组血清雌激素、LDH及CK水平,检测心肌H_2S含量及氧化应激损伤相关指标,HE染色观察各组心肌的形态变化,Western blot法检测各组大鼠心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果:与假手术组相比,去卵巢组大鼠血清雌二醇水平降低,心肌H_2S含量和GSH-Px活性下降,心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达均有所降低,心肌ROS活性和MDA含量升高(P0.05),心肌细胞排列紊乱,细胞间隙增大,血清LDH和CK活性均增多;与去卵巢组比较,枸杞多糖高剂量组大鼠血清雌二醇含量增加(P0.05),心肌H_2S含量、GSH-Px活性、e NOS蛋白及Akt磷酸化水平均提高,心肌ROS活性和MDA含量下降(P0.05),血清LDH和CK活性均降低,并且改善大鼠心肌形态的变化。结论:枸杞多糖可以通过调控PI3K/Akt/e NOS通路改善去卵巢大鼠心脏变化防治绝经后心血管病变。     

骨化三醇通过B细胞受体/PI3K/AKT/NF-κB通路抑制大鼠高原肺水肿的发生

目的 ：探讨骨化三醇通过B细胞受体/磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/核因子κB(NF-κB)通路抑制大鼠高原肺水肿的发生及其机制。方法 ：雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧+骨化三醇组（0.252μg/kg）,连续灌胃给药5 d后,除常氧组外,其余2组均置于模拟海拔6 000 m的低压氧舱内低氧胁迫48h,建立高原肺水肿大鼠模型。干湿比重法测定肺含水量;H-E染色观察大鼠肺组织病理变化,并进行炎症评分;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡率;ELISA检测肺组织B细胞激活因子（BAFF）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)含量;免疫荧光染色观察肺组织CD21和核因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表达;免疫印迹检测肺组织PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)的表达。结果 ：与常氧组比较,低氧组大鼠肺组织见轻微肺泡隔增宽,炎症细胞浸润;肺含水量升高,肺组织细胞凋亡率、BAFF、TNF-...     

紫草醌通过TGF-β1/Smad3信号通路改善哮喘小鼠气道重塑

目的探讨紫草醌对哮喘小鼠气道重塑的影响及其作用的机制。方法建立OVA诱导的哮喘Balb/c小鼠慢性气道炎症模型,经腹腔注射紫草醌0.5 mg/kg、2 mg/kg及4 mg/kg 3种剂量,对照组用生理盐水代替;取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行细胞涂片,Diff-Quick染色进行炎症细胞的分类及计数;采用ELISA法检测小鼠BALF细胞因子及IgE水平;肺组织HE及Masson染色观察其病理学改变。试剂盒检测肺组织中HYP含量;Western blot法检测小鼠肺组织中α-SMA、TGF-β1、p-Smad3、Smad3水平。结果紫草醌抑制了BALF中炎症细胞数量的增加,并降低了BALF中总IgE及OVA特异性IgE含量,调节BALF中Th1/Th2细胞因子的平衡;紫草醌能减轻小鼠慢性气道炎症模型的炎性细胞浸润和胶原沉积,减少胶原纤维的形成并抑制支气管平滑肌的增生;Western blot结果显示,紫草醌抑制了α-SMA、TGF-β1、Smad3的蛋白表达量,并抑制Smad3的磷酸化水平。结论紫草醌能改善哮喘小鼠的气道重塑,其机制可能与TGF-β1/Smad3信号通路有关。     

PI3K/AKT信号通路在全肝缺血再灌注大鼠肺损伤中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/AKT通路在大鼠全肝缺血再灌注肺损伤中作用。方法 本实验分两部分。(1)36只大鼠分别于肝缺血前与再灌注后不同时点处死取肺。（2）12只大鼠分成Wortmannin组与模型对照组。分别应用Western blot、原位末端转移酶(TUNEL)法与免疫组化法检测肺AKT、磷酸化AKT（p-AKT）表达、细胞凋亡与增殖细胞核抗原（PCNA）表达。结果（1）与缺血前相比,缺血再灌注后肺细胞凋亡指数显著增高; p-AKT/AKT与PCNA阳性指数呈双相变化;肺病理改变严重。（2）p-AKT/AKT与PCNA阳性指数成正相关;与凋亡指数呈负相关。（3)与模型对照组相比,Wortmannin组p-AKT/AKT与PCNA阳性指数显著降低,细胞凋亡指数显著增高,病理改变加重。结论 PI3K/AKT通路可能通过抑制凋亡、促进增殖对全肝缺血再灌注肺损伤发挥保护作用。     

HSF1对LPS诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用及其相关差异表达基因的筛选

目的:探讨热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的作用及其分子机制。方法:采用气管滴注LPS的方法制备小鼠急性肺损伤模型,观察HSF1野生型小鼠(HSF1~(+/+))和HSF1敲除小鼠(HSF1~(-/-))肺大体改变和肺组织病理改变,检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的蛋白表达。采用基因芯片技术筛选经LPS处理后的HSF1~(+/+)和HSF1~(-/-)小鼠肺组织中的差异表达基因,并进一步采用real-time PCR对CXC趋化因子受体2(CXC chemokine receptor 2,CXCR2)的表达进行验证。结果:与经LPS刺激后的HSF1~(+/+)小鼠相比,经LPS刺激的HSF1~(-/-)小鼠肺大体和病理损伤加重,BALF中总蛋白、VEGF、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量升高,差异具有统计学意义(P0.05)。基因芯片分析发现,与经LPS处理的HSF1~(+/+)小鼠相比,HSF1~(-/-)小鼠共筛选出918个差异基因,有65个基因表达差异明显,其中Atg7、ccr1、cxcr2、Tbl1xr1、Mmp9、Pparg、Plcb2、Arrb2、Cntn1、Col4a6等共28个基因在HSF1~(-/-)小鼠的肺组织中表达明显上调;Fgfr1、Fgfr2、Map4k4、Ddx58、Tfg、Stat3、Smad4、Lamc1、Sdc3等共37个基因表达明显下调。Real-time PCR结果显示,CXCR2的mRNA水平在LPS刺激的HSF1~(-/-)小鼠肺组织较HSF1~(+/+)小鼠表达明显上调,表达趋势与基因芯片结果一致。结论:HSF1能减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤,CX-CR2可能参与了对肺组织的保护作用。     

大麻制剂HU210对实验性急性胰腺炎的干预作用及其与Toll样受体4信号通路的可能关系

目的:研究大麻类制剂HU210对雨蛙肽(caerulein,CAE)诱导的野生型(wild-type,WT)和Toll样受体4基因敲除(tlr4~(-/-))小鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的干预作用,并探讨其作用机制。方法:将成年C57BL/10J小鼠及相同背景的tlr4~(-/-)小鼠各随机分成3组:AP组、AP+HU210组及正常对照组。小鼠腹腔注射CAE(50μg·kg~(-1)·h~(-1))6次及脂多糖(10 mg/kg)1次复制AP模型;AP+HU210组在造模前及造模后各腹腔注射1次HU210(50μg/kg);对照组注射生理盐水替代CAE和脂多糖。造模处理后3 h,取血处死小鼠,取胰腺、肺组织及肠道Peyer’s结。结果:与对照组相比,无论在WT或tlr4~(-/-)小鼠,AP造模后胰腺病理评分,血浆淀粉酶活性,血浆IL-6、TNF-α及MCP-1水平,以及肺MPO活性均明显升高(P0.05),P38蛋白表达明显上调(P0.05)。同时,AP造模后,与WT小鼠相比,tlr4~(-/-)小鼠血浆IL-6、TNF-α及MCP-1水平,以及胰腺P38及p-P38蛋白表达均明显降低(P0.05),Peyer’s结CD3~+、CD4~+T淋巴细胞百分比及CD4~+/CD8~+比值明显降低(P0.05)。HU210干预使2种小鼠AP模型的胰腺病理学评分和肺MPO活性的升高明显得到改善(P0.05);在WT小鼠,而非tlr4~(-/-)小鼠,AP引起的血浆淀粉酶活性和胰腺P38及p-P38蛋白表达的变化在HU210干预后明显逆转(P0.05)。结论:TLR4主要参与AP全身炎症反应,其机制可能依赖TLR4-P38 MAPK信号通路;大麻制剂HU210对AP的干预主要通过抑制炎症细胞的浸润发挥组织保护作用,与TLR4信号通路的关系似乎不明显。     

Tumor necrosis factor as a mediator of inflammation in influenza A viral pneumonia

The role of tumor necrosis factor α (TNFα) in the pathogenesis of influenza A viral pneumonia was examined. CD-1 male mice were challenged intranasally with influenza A virus A/PR/8/34 (H1N1) and administered rabbit anti-mouse TNFα-specific-neutralizing antibodies intraperitoneally. The effect of treatment on virus titer, TNFα levels, morbidity, mortality, and on pathologic lung lesions were compared with sham-treated controls. The severity of gross and histologic lung lesions positively correlated with the peak bronchoalveolar TNFα levels and was ameliorated with anti-TNFα treatment. Survivorship was prolonged in mice given a lethal dose of virus by treatment with TNF-α neutralizing antibodies. Reduction of TNFα levels by treatment with TNFα-antibodies did not affect virus titers in the lung. These results suggest that TNFα is a mediator of pulmonary inflammation during influenza A viral pneumonia, but may not play a significant anti-viral role in influenza pneumonia.     

Cx43在造血调控及重建中的作用

目的:采用条件性基因敲除技术构建造血系统间隙连接蛋白43(Cx43)基因敲除(Cx43~(-/-))小鼠模型,并探讨Cx43在维持造血细胞自我更新及功能稳定中的作用。方法:将引进的2对转基因小鼠Cx43 loxP/loxP和Lyz-Cre/+杂交,选取F1雌性子代Cx43 loxP/-_Lyz-Cre/+与雄性Cx43 loxP/loxP合笼回配,提取所获得子代小鼠鼠尾组织基因组DNA,采用PCR方法鉴定小鼠基因型,RT-PCR方法筛选Cx43~(-/-)小鼠,同时分析小鼠不同器官中Cx43基因的表达差异;该类小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU;125 mg/kg)处理,在化疗前及化疗后第5、10和15天经眼球取血分析其血象变化。Cx43~(-/-)及Cx43~(+/+)小鼠予7.5 Gy(~(60)Co-γ)的致死量照射,剂量率1 Gy/min,照射后6 h分别给予事先准备就序的骨髓细胞,每只3×10~6细胞于尾静脉注入,2周后处死小鼠检测造血是否重建:分离股骨切片后,收集骨髓细胞进行细胞表型分析(选用的单抗为CD45R、Gr-1、CD4、 CD8a、TCRαβ、Mac-1、抗sIgM、TER119、Sca-1及CD117);同时进行体外造血细胞集落实验观察造血细胞的体外增殖能力。结果:本研究通过2种转基因小鼠间杂交和回交,成功获得造血系统选择性Cx43基因敲除小鼠;该类小鼠骨髓及外周血细胞无Cx43表达,参与造血的组织,如肝脏和脾脏中Cx43表达也显著下调(P0.01),而心脏和肾脏的Cx43表达则无影响,小鼠成年后外周血象分析并无明显异常,但应急代偿能力下降,经5-FU处理后,其造血功能恢复显著减缓,处理15 d后,Cx43~(+/+)小鼠造血功能已接近正常水平,而Cx43~(-/-)小鼠仍无明显的恢复迹象,血红蛋白、白细胞及血小板仍处低位,2者差别有统计学显著性(P0.01);体外集落试验也证实Cx43~(-/-)小鼠造血干/祖细胞的增殖能力下降,其CFU-GM或CFU-E集落数均明显少于Cx43~(+/+)小鼠(P0.01),但流式细胞术结果显示,Cx43~(-/-)小鼠骨髓中Lin~-/c-Kit~+/Sca-1~+细胞亚群数量与Cx43~(+/+)小鼠相比差异并无统计学显著性;Cx43~(-/-)小鼠在化疗或移植后其骨髓造血功能重建均延迟,且化疗15 d后骨髓切片及涂片均证实其骨髓中造血细胞增生程度明显降低,脂肪组织显著增多,而且T、B细胞发育也有异常。此外,其外周血中CD4~+CD8~+细胞比例比野生型小鼠增多(P0.05),但CD4~+T细胞显著减少(P0.01),尤其是TCRαβ亚群细胞减少最为明显(P0.01)。同样,Cx43~(-/-)小鼠外周血中CD45R~+sIgM~-细胞亚群比例与野生型小鼠相比显著减少(P0.01)。结论:骨髓中Cx43基因表达在造血干/祖细胞发育(尤其是应急状态时)具重要作用,敲除Cx43基因后造血干/祖细胞增殖减缓,造血及免疫重建功能受损。     

糖基因GLT25D1和GLT25D2缺失对APAP诱导的急性药物性肝损伤的影响

目的 研究糖基因Glt25D1和Glt25D2在对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的急性药物性肝损伤中的可能作用及机制.方法 抽取6～8周雄性糖基因Glt25D1和Glt25D2敲除小鼠(Glt25D1Δhep Glt25D2-/-)及野生型小鼠(Wild type,WT),构建药物性肝损伤模型....     

Toll-like receptor 2 does not contribute to host response during postinfluenza pneumococcal pneumonia

Influenza A can be complicated by secondary bacterial pneumonia, which is most frequently caused by Streptococcus pneumoniae and associated with uncontrolled pulmonary inflammation. Evidence points to Toll-like receptor (TLR) 2 as a possible mediator of this exaggerated lung inflammation: (1) TLR2 is the most important "sensor" for gram-positive stimuli, (2) TLR2 contributes to S. pneumoniae-induced inflammation, and (3) influenza A enhances TLR2 expression in various cell types. Therefore, the objective of this study was to determine the role of TLR2 in the host response to postinfluenza pneumococcal pneumonia. TLR2 knockout (KO) and wild-type (WT) mice were infected intranasally with influenza A virus. Fourteen days later they were administered with S. pneumoniae intranasally. Influenza was associated with a similar transient weight loss in TLR2 KO and WT mice. Both mouse strains were fully recovered and had completely cleared the virus at Day 14. Importantly, no differences between TLR2 KO and WT mice were detected during postinfluenza pneumococcal pneumonia with respect to bacterial growth, lung inflammation, or cytokine/chemokine concentrations, with the exception of lower pulmonary levels of cytokine-induced neutrophil chemoattractant in TLR2 KO mice. Toll-like receptor 2 does not contribute to host defense during murine postinfluenza pneumococcal pneumonia.     

利用CRISPR/Cas9系统构建水通道蛋白9基因敲除小鼠

目的 利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9(AQP-9)基因,构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域,综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2,前期在其两边设计7个小向导RNA (...     

C1型尼曼-匹克氏症小鼠的肾脏功能及病理变化

目的:探讨Npc1基因突变小鼠肾脏功能及病理生理的变化,为C1型尼曼-匹克氏症(NPC1)患者临床上药物的使用及肾功能的维持提供理论依据。方法:用PCR法确定小鼠基因型;选取出生后第60天(P60)的野生型NCPC1(Npc1~(+/+))和突变型NCPC1(Npc1~(-/-))小鼠,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性及尿素(Urea)、尿酸(UA)和肌酐(Cr)的含量来评价Npc1-/-小鼠的肝肾功能变化;进一步常规冷冻切片后通过β-半乳糖苷酶染色及Masson染色来分别评价Npc1~(-/-)小鼠肾脏衰老及纤维化情况。结果:与P60的Npc1~(+/+)小鼠相比,Npc1~(-/-)小鼠的体重和肾脏重量显著降低(P0.01);肝肾功能明显减退:ALT、AST及LDH活性显著升高(P0.05),Urea、UA及Cr的含量显著增加(P0.05);冷冻切片染色结果表明肾脏组织衰老明显(P0.01),纤维化程度显著增强(P0.01)。结论:Npc1基因突变导致的脂质异常代谢可加速肾间质纤维化,促使肾脏衰老,最终导致肾功能减退。     

Enhanced resistancy of thioredoxin-transgenic mice against influenza virus-induced pneumonia

Thioredoxin (TRX) is a small redox-active protein with anti-oxidant effect and redox-regulating functions. Using TRX transgenic (Tg) mice in which human TRX is overexpressed systemically under the control of beta-actin promoter, the effects of influenza virus infection were examined in TRX Tg mice and wild type C57BL/6 mice. (1) Median lethal dose (LD50) against influenza virus infection in wild-type C57BL/6 mice was 10(-5.3) dilution, while that of TRX Tg mice was 10(-4.2) dilution. Thus, TRX Tg mice were more resistant against the virus infection than wild-type mice. (2) The body weights of wild-type mice 7 days after infection with a sublethal dose of the virus (10(-6) dilution) decreased significantly, whereas those of TRX Tg mice increased slightly. (3) Histopathology of the lung at 3 weeks after sublethal infection of influenza virus showed that severe alveolar or bronchiolar destruction was observed in wild-type mice, while mild viral pneumonia was seen in the TRX Tg mice. (4) Local (IgA) and systemic (IgG) antibody productions against influenza virus hemagglutinin in mice surviving 3 weeks after infection were similar between wild-type and TRX Tg mice. These results indicate that overexpression of TRX in Tg mice suppresses the inflammatory overshoot of viral pneumonia caused by influenza virus infection, resulting in the reduction of mortality without affecting the host's systemic immune responses to the infection. TRX may play some important roles in regulating the inflammatory process in the primary host defense against infection.