万古霉素耐药肠球菌的表型及基因型检测

目的了解我院耐万古霉素肠球菌(VRE)的耐药表型、基因型及流行情况。方法用K-B纸片扩散法检测临床分离肠球菌的药物敏感性,E-test法检测VRE对万古霉素的最低抑菌浓度(MIC);PCR检测vanA、vanB、vanC1和vanC2-3基因型;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析VRE同源性。结果 73株肠球菌中检出3株万古霉素耐药屎肠球菌,检出率为4.1%;3株屎肠球菌对万古霉素和替考拉宁均耐药,但对利奈唑胺敏感;基因型检测显示3株屎肠球菌均为vanA型,PFGE结果显示该3株VRE不属于同一型别。结论我院住院患者中已出现VRE,应加强医院感染控制,以阻止VRE菌株在院内的传播和流行。     

万古霉素耐药肠球菌的药敏表型及基因特性研究

目的研究万古霉素耐药肠球菌(VRE)的耐药表型和基因特性。方法采用浓度梯度法(E-test)测定VRE对万古霉素(VA)、替考拉宁(TP)的耐药表型;采用聚合酶链反应检测vanA、vanB、vanC1、vanC2、vanC3基因,并对van基因产物进行测序。结果万古霉素耐药基因检测结果:VRE经PCR扩增,均获得vanA基因阳性片段。未检测到vanB、vanCl及vanC2/3基因。结论万古霉素耐药肠球菌的耐药表型与耐药基因型一致,菌株之间有较高的同源性。住院患者肠道中VRE携带率高,是医院感染的危险因素。     

肠球菌耐万古霉素基因及耐消毒剂基因检测的研究

目的 利用PCR技术检测南昌地区肠球菌所携带的耐万古霉素基因(vanA、vanB、vanC)和耐消毒剂基因(qacE△1-sul 1)的存在状况.方法 收集81株南昌市各三甲医院临床分离的肠球菌株,用纸片琼脂扩散法筛选出耐万古霉素肠球菌(VRE),从敏感、中介和耐受各组菌中,采取等比例分层抽取方式共抽取16株细菌,E-test法测定耐万古霉素肠球菌的MIC,PCR检测各菌株耐万古霉素基因(vanA、vanB、vanC)和耐消毒剂基因(qacE△1-sul 1).结果 16株细菌中药敏实验检出万古霉素耐受菌1株,而PCR检测出vanB阳性2株,vanA、vanC、qacE△1-sul 1均阴性.结论 南昌地区首次发现2株vanB阳性VRE,尚未发现耐消毒剂基因(qacE△1-sul 1)肠球菌,应引起医院感染监控部门高度重视.     

多重PCR检测万古霉素耐药的肠球菌

目的检测2005～2007年澳大利亚墨尔本地区万古霉素耐药的肠球菌基因。方法用多重PCR检测肠球菌4种耐药基因(vanA,vanB,vanC1和vanC2),鉴定4种肠球菌E.faecalis(粪肠球菌),E.faecium(屎肠球菌),E.gallinarum(母鸡肠球菌)和E.casseliflavus(产黄肠球菌)。结果vanA基因扩增阳性可见732bp条带;vanB基因为635bp条带;vanC1基因为822bp条带;vanC2/3基因为439bp条带。粪肠球菌基因扩增见941bpDNA条带,屎肠球菌为550bpDNA条带。3年回顾性研究中,最常见的万古霉素耐药基因是vanB型(84.9%),菌种是屎肠球菌(76.3%)。2007年还出现2株同时含有vanA和vanB耐药基因的屎肠球菌菌株。结论万古霉素耐药的肠球菌菌株逐年增多,多重PCR检测万古霉素耐药的肠球菌,简便迅速,有利于准确及时地发出报告。     

临床分离万古霉素耐药肠球菌van基因型及分子分型

目的明确临床分离万古霉素耐药肠球菌(VRE)基因型及分子分型。方法收集临床分离VRE 17株;采用16S r RNA测序对临床株进行菌种确认,微量稀释法和琼脂稀释法测定常用抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)。多重PCR进行van基因分型;采用多位点序列分型(MLST)进行分子分型。结果 17株VRE经16S rRNA测序确认均为屎肠球菌;其中12株对替考拉宁耐药。13株检出vanA基因,9株检出vanM基因,5株同时检出vanA及van M基因;17株VRE分属6个MLST型,其中ST78型8株、ST80型4株、ST555型2株,其余3株分别为ST117型、ST262型和ST341型。结论 VRE的临床分离株中van基因型主要为vanA(76.5%),其次为vanM(52.9%),首次发现同时携带vanA及vanM的VRE菌株。     

万古霉素耐药肠球菌耐药基因检测及分子流行病学调查

目的了解我院分离的万古霉素耐药肠球菌的耐药相关基因及流行情况。方法收集2012~2013年间分离的7株经E-test确认的万古霉素耐药肠球菌(VRE),提取基因组DNA,PCR检测van耐药基因型,多重PCR检测asal,gelE,cylA,esp,hyl5个毒力基因;多位点序列分型(MLST)及脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行流行病学调查。结果 7株VRE耐药基因型van均为A型;有6株检测到毒力基因esp、hyl,其余为阴性;MLST及PFGE均显示菌株2、4、5、7为主要型别(ST 17),其余3株各不相同。结论我院分离的VRE耐药基因型为vanA型,毒力基因esp、hyl检出率较高,2013上半年有小规模VRE流行,应加强对于VRE的管控工作。     

耐万古霉素肠球菌耐药基因、转座子结构和多位点序列分析

目的分析耐万古霉素肠球菌(VRE)耐药基因和多位点序列分型(MLST)情况。方法收集三亚中心医院临床分离的耐万古霉素的80株屎肠球菌和12株粪肠球菌,采用VITEK MS微生物鉴定系统进行菌种鉴定。采用VITEK 2 Compact自动化鉴定药敏仪测定VRE对14种常用抗菌药物的敏感性。采用微量肉汤稀释法测定VRE对万古霉素和替考拉宁的最小抑菌浓度(MIC),并确定耐药表型;采用聚合酶链反应(PCR)筛选VRE的毒力基因(esp、hyl、gelE、asal、cy1A、efaA、ace)和转座子结构;对VRE进行MLST。结果质谱鉴定结果为80株屎肠球菌和12株粪肠球菌。体外药物敏感性试验结果表明,屎肠球菌和粪肠球菌对万方霉素的耐药率均为100%,对氨苄西林的耐药率分别为97.5%和50.0%,但对呋喃妥因的耐药率较低。92株VRE对万古霉素和替考拉宁的MIC分别为192～256和32～256μg/mL,均为VanA表型;92株VRE基因型均为vanA,以esp毒力基因所占比例最高(82.5%);屎肠球菌以esp-hyl基因组合最常见,粪肠球菌以多基因组合为主;通过Tn1546基因转座子结构分析可分为A～E 5个型别;92株VRE的MLST包括7个ST型别,分别为ST17(43.5%)、ST78(32.6%)、ST203(6.5%)、ST363(5.4%)、ST555(4.3%)、ST1392(4.3%)和ST1394(3.4%),其中ST17和ST78均属于CC17克隆复合体。结论 92株VRE均为多重耐药株、vanA基因型和CC17克隆复合体,耐药基因和毒力基因携带率均较高,临床应引起重视。     

万古霉素耐药肠球菌的检测和分子流行病学分析

目的为了解本院万古霉素耐药肠球菌（VRE）的流行情况，对VRE株进行实验室检测和分子流行病学检测分析。方法采用多重PCR及测序检测万古霉素耐药基因van，Etest法测定VRE株对万古霉素、替考拉宁的耐药表型；应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对11株VRE进行检测流行病学分析。结果检出1株VanA、4株VanB、5株vanC1，1株VanC2，对万古霉素、替考拉宁的药敏表型与基因型一致；11株VRE中2号vanB株与5号vanB株显示出相同片段，其他VRE株则分别有多于5个区带不同。结论实验室准确检测VRE对防止VRE感染和流行是非常重要的；PFGE电泳分析结果表明了本院11株VRE医院感染为散发。     

肠球菌种属鉴定及万古霉素耐药基因型检测的多重聚合酶链反应方法的建立及应用

目的 建立快速准确的肠球菌种属鉴定及万古霉素耐药基因检测的多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction,MPCR)方法,并在人及动物源菌株中应用. 方法 针对肠球菌属、粪肠球菌、屎肠球菌、vanA、vanB、vanC1、vanC2/C3保守基因设计引物,建立肠球菌种属鉴定及万古霉素耐药基因型检测的MPCR方法;应用建立的MPCR方法检测98株人及动物源菌株菌种及万古霉素耐药基因,并比较MPCR方法检测结果与检测菌株的VITEK Compact 60自动微生物鉴定仪菌种鉴定结果及琼脂稀释法的万古霉素及替考拉宁药敏检测结果,分析MPCR方法检测结果与其他方法的一致性. 结果 成功建立了用于检测肠球菌属和常见肠球菌种及万古霉素耐药基因型的MPCR方法.MPCR方法和VITEK Compact 60自动微生物鉴定仪对98株检测菌株菌种鉴定结果一致;MPCR方法检测98株菌万古霉素耐药基因型与药敏检测其耐药表型相对应. 结论 建立的MPCR方法成功用于检测人及动物源肠球菌种属及万古霉素耐药基因型,为快速准确鉴别肠球菌种属及万古霉素耐药肠球菌耐药基因型提供方法,对于有效监测万古霉素耐药肠球菌,控制其传播、流行具有重要意义.     

肠球菌临床感染情况和药物敏感性分析及耐万古霉素肠球菌耐药基因研究

目的分析肠球菌的临床分离情况,研究肠球菌抗菌药物敏感性和耐万古霉素肠球菌（VRE）耐药基因。方法采用VITEK COMPACT分析仪进行菌种鉴定和药敏测定;采用WHONET 5.5进行数据分析;采用PCR、基因测序及序列在线比对检测VRE耐药基因。结果共分离167株菌,屎肠球菌113株,粪肠球菌47株;标本类型前三位分别为尿液（34.1%）、血液（16.8%）和腹水（15.6%）;ICU分离率在临床科室中居首。屎肠球菌对青霉素G、氨苄西林、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率高达90%以上,且明显高于粪肠球菌（P〈0.05）。检出11株VRE,携带vanA耐药基因。未发现利奈唑胺耐药株。结论肠球菌总体耐药形势严峻,屎肠球菌的分离率和耐药率高于粪肠球菌,应控制多重耐药株尤其VRE的传播。     

社区肺炎链球菌感染药敏分析及分子生物学分型

目的调查该院肺炎链球菌药敏谱及耐药基因型,为肺炎链球菌感染的预防与治疗提供参考。方法收集该院2014年1月至2016年12月分离的肺炎链球菌共184株,用Vitek 2鉴定菌株,检测耐药模式,PCR方法检测耐药基因erm(B)、mef(A)。结果肺炎链球菌对青霉素G的耐药率为60.6%,对红霉素、克林霉素的耐药率分别为93.3%、100.0%。耐药表型为MLSB型的检出率为93.5%(cMLSB:89.7%,iMLSB:3.8%),未检出M耐药表型。耐药基因erm(B)的检出率为91.3%,mef(A)的检出率为1.6%。结论该院肺炎链球菌对红霉素与克林霉素的耐药率较高;耐药表型以erm(B)编码的cMLSB耐药表型为主,主要以靶位点的修饰为主,也与泵外排机制有关。     

The Emergence of Extensively Drug‐Resistant Tuberculosis: A Global Health Crisis Requiring New Interventions: Part I: The Origins and Nature of the Problem

Surveillance studies and outbreak investigations indicate that an extensively drug‐resistant (XDR) form of tuberculosis (TB) is increasing in prevalence worldwide. In outbreak settings among HIV‐infected, there is a high‐case fatality rate. Better outcomes occur in HIV‐uninfected, particularly if drug susceptibility test (DST) results are available rapidly to allow tailoring of drug therapy. This review will be presented in two segments. The first characterizes the problem posed by XDR‐TB, addressing the epidemiology and evolution of XDR‐TB and treatment outcomes. The second reviews technologic advances that may contribute to the solution, new diagnostics, and advances in understanding drug resistance and in the development of new drugs.     

鲍曼不动杆菌耐药性变迁分析及临床对策

目的了解鲍曼不动杆菌(ABA)感染的菌群分布及其对抗菌药物耐药性的变迁趋势,为临床抗感染的预防、诊断、治疗及合理应用抗菌药物提供实验室依据。方法回顾性分析2011年1月至2014年12月本院临床送检的各类标本中分离的ABA的分布及耐药状况,使用VITEK2compact全自动细菌分析仪鉴定菌株及药敏试验,并对其进行统计分析。结果4年间从各类标本中共分离出病原菌7 136株,其中ABA 300株,分离率为4.2%,多药耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)117株,分离率为39.0%;泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-AB)13株,分离率为4.3%,分离率总体呈上升趋势。ABA临床分布以ICU为主(31.7%),其次为呼吸科(29.3%),其他科室散在分布。感染分布以呼吸道标本为主,其次为分泌物,分别占89.7%和4.3%。ABA对常用抗菌药物的耐药率大部分在40%以上,对青霉素类、头孢菌素和β-内酰胺类抗菌药物均表现为较高耐药性。对丁胺卡那霉素的耐药率最低(3.0%),对头孢替坦和头孢呋辛钠完全耐药(100%)。结论 ABA对多种抗菌药物产生了较高的耐药性,并且多药耐药及泛耐药现象比较严重,应加强其耐药性的动态监测,规范合理应用抗菌药物,严格无菌操作,控制及延缓MDR-AB及PDR-AB的产生,预防和控制ABA的感染与暴发流行。     

Daptomycin: first in a new class of antibiotics for complicated skin and soft-tissue infections

With increasing antibiotic resistance reported worldwide, there is an urgent need for novel treatments for infections caused by Gram-positive bacteria. Daptomycin is the first in a new class of antibiotic, the cyclic lipopeptides, with activity against a range of Gram-positive pathogens. US approval of daptomycin for the treatment of complicated skin and soft-tissue infections (cSSTIs) caused by Gram-positive bacteria was gained in 2003, with European approval granted in January 2006. Most Gram-positive clinical isolates tested have proved susceptible to daptomycin, including methicillin- and vancomycin-resistant strains. Daptomycin has a novel mode of action, is rapidly bactericidal in vitro and has a low potential for the development of resistance. Two pivotal phase III studies, in a total of 1092 patients with cSSTIs, demonstrated non-inferiority to currently used antibiotics and a comparable tolerability profile. The unique mode of action of daptomycin is described alongside studies demonstrating its potential in the treatment of cSSTIs and other infections caused by Gram-positive bacteria.     

2011年医院临床常见病原菌分布及耐药性分析

目的了解医院2011年临床感染性标本病原菌的分布及其对常用抗菌药物的耐药性。方法常规培养、分离并鉴定细菌,用纸片扩散法进行病原茵药敏试验。结果20¨年本科室共分离出560株病原茵,以革兰阴性（G－）杆菌为主,占70．4％;革兰阳性（G’）球菌占21．1％;真菌占8．5％。在G杆菌中,大肠埃希菌居首位,铜绿假单胞菌次之;在G’球菌中,金黄色葡萄球菌分离率最高。所有病原菌对常用抗菌药物耐药率较高。产超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）菌株在大肠埃希菌和克雷伯菌属中分离率分别为43．0％、47．2％。结论医院感染病原菌分布广泛,耐药现象严重,耐甲氧西林葡萄球菌及产ESBLs大肠埃希菌和克雷伯菌分离率较高。应加强细菌耐药性监测,指导临床医生合理使用抗菌药物。     

新疆南疆地区371株分枝杆菌耐药状况分析

目的了解新疆南疆地区结核病患者的耐药状况,为耐药结核病防治提供参考依据。方法收集2010年5月至2011年5月新疆南疆地区结核病患者痰液标本,进行结核分枝杆菌的分离培养及菌种初步鉴定,应用比例法对分离菌株进行8种抗结核药物（异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星、氧氟沙星）的耐药性监测。结果共纳入分枝杆菌371株,总耐药率32.1%,初治耐药率30.3%,复治耐药率33.2%。总耐药顺位为异烟肼〉利福平〉链霉素〉乙胺丁醇〉卷曲霉素〉卡那霉素〉氧氟沙星〉阿米卡星。结论新疆南疆地区结核病耐药严重,应采取有效的防控措施。     

可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的耐药基因研究

目的 分析临床分离的可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌所携带的耐药基因.方法 采用全自动细菌鉴定仪进行药敏试验,用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶筛选,用纸片扩散试验进行ESBLs表型检查,用头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,用聚合酶链反应检测β内酰胺酶基因、外膜蛋白（OmpK35和OmpK36）编码基因、转座子tpuA和tpuU基因,并进行产物测序.结果 ①62株可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌对厄他培南和氨苄西林100％耐药,对氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、氨曲南的耐药率达87％以上,对亚胺培南、美洛培南、丁胺卡那霉素耐药率为35％以下;②β内酰胺酶的总检出率为75.81％,主要由同时产ESBLs和AmpC引起,检出率为33.87％,其次为单产ESBLs引起,检出率为30.65％;③检出KPC,DHA,CIT,TEM,CTX M,SHV和NDM1β内酰胺酶基因的阳性率分别为8.06％,14.51％,24.19％,25.81％,27.42％,40.32％和6.45％; Ompk35,Ompk36基因缺失率为38.70％和62.90％;tnpA和tnpU检出率分别为11.29％和32.25％.结论 产碳青霉烯酶并非菌株耐碳青霉烯类药物的主要原因,可能由产ESBLs或AmpC酶引起,合并外膜蛋白缺失,尚存在其它降低碳青霉烯类敏感性的耐药机制.     

产β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的筛选和耐药性分析

目的以多重耐药革兰阴性菌为对象,检测β一内酰胺酶表型,了解其耐药特性和分布特点。方法采用纸片扩散初筛法、扩散确证法、头孢西丁三维试验、甘露聚糖结合凝集素（MBL）的协同试验进行确证;采用法国梅里埃API生化鉴定试条或经VITEK一2鉴定系统将细胞鉴定到种;药敏试验用琼脂纸片扩散（K—B）法,经wH0一NET5．0软件进行统计学分析,分析其耐药特性。结果多重耐药革兰阴性杆菌口一内酰胺酶总检出率为26．4％（80／302）,主要由产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）引起,占16．56％（50／302）;其次为ESBLs＋AmpC引起,占6．62％（zo／302）;ESBLs＋AmpC＋MOL引起,占1．66％（5／302）,单独由AmpC引起的仅占0．66％（2／302）,有3株未能定型占0．99％（3／30z）。多重耐药革兰阴性杆菌对临床常用抗生素的总体耐药率最低的为阿米卡星（18．99％）、其次为亚胺培南（20．0％）,头孢哌酮／舒巴坦（21．7％）、哌拉西林／他唑巴坦（21．89％）;最高的为氨苄西林（98．33％）,其次为氨苄西林／舒巴坦（83．33％）、头孢曲松（76．25％）、头孢西丁（63．64％）及头孢噻肟（60．50％）等,大部分细菌呈多重耐药性。结论产多种6-内酰胺酶的革兰阴性菌具有多重耐药。     

变形链球菌耐氟菌ffh基因siRNA干扰序列的筛选鉴定

目的 筛选鉴定变形链球菌耐氟菌（UA159-FR）ffh基因的siRNA干扰序列.方法设计合成4段21 bp的核酸[1],利用电穿孔方法转入UA159-FR使其与ffh基因序列靶向位点结合.通过RT-PCR 和Real-time PCR技术验证靶向沉默ffh基因的效果,筛选出最佳siRNA干扰序列.结果倒置显微镜观察细菌电转效果正常.转染12 h内除siRNA1外其他3对siRNA都可以抑制ffh基因的表达,而在转染超过12 h达到24 h后,只有siRNA2可以更稳定的抑制ffh基因的表达.结论 siRNA干扰技术可以有效的沉默UA159-FR的ffh基因,siRNA2在沉默过程中效果较稳定.     

2013年上海市细菌耐药性监测

目的：了解2013年上海市细菌耐药性监测结果。方法采用纸片扩散法或自动化仪器法对上海市40所医院的临床分离菌进行药敏试验。其中包括28所三级医院和12所二级医院,采用CLSI 2013年版标准判断结果。结果总计98185株临床分离菌,革兰阳性菌26655株,占27．1％,革兰阴性菌71530株,占72．9％。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（金葡菌）（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的检出率分别为50．8％和77．6％。在二级医院和三级医院MRSA、MRCNS的平均检出率分别为55．1％、80．6％和49．8％、77．0％。葡萄球菌属中未发现万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药株。726株儿童肺炎链球菌非脑膜炎分离株中青霉素敏感、中介和耐药（PSSP、PISP和PRSP）的检出率分别为56．7％、15．6％和27．7％,107株成人分离株为91．6％、2．8％和5．6％。发现35株屎肠球菌和17株粪肠球菌对万古霉素耐药（VRE）。根据表型推测,多数VRE为V anA 基因型。大肠埃希菌、克雷伯菌属和奇异变形杆菌中产ESBLs菌株的检出率分别为61．3％、37．1％和39．5％。上述3种细菌中产ESBLs菌株的检出率在二级医院和三级医院的检出率分别为63．0％、31．6％、56．3％和60．7％、38．7％、33．5％。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍高度敏感,对亚胺培南和美罗培南的总耐药率分别为5．8％和6．6％。铜绿假单胞菌和不动杆菌属对亚胺培南、美罗培南耐药率分别为25．3％、24．3％和52．6％、56．0％。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌中有少数菌株为对所有测试药物耐药的广泛耐药株。分离自尿液标本中的肠球菌属和大肠埃希菌对磷霉素的耐药率低。结论细菌耐药性仍对临床抗感染治疗构成严重威胁,尤其是二级医院中某些细菌的耐药率高于三级医院,应引起高?