PI3K/PKB信号通路在TGF-β_1诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白中的作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(OPN)的调控作用。方法:体外培养LX-2人肝星状细胞株,予TGF-β1(终浓度2.5、5、10、20μg/L)刺激24 h或予TGF-β1(终浓度10μg/L)刺激12 h、24 h、48 h;先经PI3K/PKB信号通路特异性抑制剂wortmannin(0.1μmol/L)预处理1 h,再予10μg/L TGF-β1刺激24 h,收集细胞,采用real-time PCR及Western blotting法检测OPN表达情况。结果:TGF-β1能够促进LX-2细胞表达OPN,在一定浓度和时间范围内,其表达量随着TGF-β1浓度和时间的增加而增加,呈剂量和时间依赖性关系;经wortmannin预处理再予TGF-β1刺激的LX-2细胞,与对照组相比,OPN表达受到明显抑制(P0.01)。结论:TGF-β1对LX-2人肝星状细胞OPN表达具有诱导作用,此作用可能受PI3K/PKB信号通路的调控。     

大鼠肝纤维化与microRNA-181a调控肝星状细胞自噬的关系

目的:观察四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化(HF)大鼠肝脏结构的改变、肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、微小RNA-181a(microRNA-181a)、自噬标志性蛋白LC3-II/-I和beclin-1水平及胶原沉积的变化,以及mi?croRNA-181a对TGF-β1诱导大鼠肝星状细胞(HSCs)自噬的作...     

CCl4促进大鼠肝星状细胞增殖及TGF-β1基因表达

目的进一步阐明四氯化碳(CCl4)引起肝纤维化的分子机制。方法用RT-PCR方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA在肝星状细胞(HSC)的表达,用Western blot检测TGF-β1蛋白表达。用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和周期分布。结果CCl4作用于HSC后,细胞的增殖能力增加,细胞周期分布显示G0/G1期细胞减少而G2/M期细胞增多。同时,TGF-β1蛋白及mRNA的表达量明显增加。结论一定浓度的CCl4能够促进HSC增殖,上调TGF-β1蛋白及mRNA的表达,这可能是CCl4导致肝纤维化的分子机制之一。     

IGFBP2、IGFBP6在TGF-β1活化的肝星状细胞中表达

目的:观察胰岛素样生长因子结合蛋白2、6(IGFBP2、IGFBP6)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导活化后的肝星状细胞中的表达变化。方法:大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)体外培养,分别设立空白对照组(加入等量PBS)、不同浓度的TGF-β1处理组,处理因素作用24 h,采用免疫细胞化学染色、Western blotting检测IGFBP2、IGFBP6在HSC-T6中的表达。结果:免疫细胞化学染色及Western blotting结果发现,TGF-β1各处理组IGFBP2、IGFBP6的表达均较空白对照组显著增强。结论:IGFBP2、IGFBP6在TGF-β1诱导活化后的HSC-T6中表达明显增强,IGFBP2、IGFBP 6可能参与了肝纤维化的形成。     

柔肝降酶方含药血清抑制人肝星状细胞的活化及自噬

背景：自噬在肝纤维化中发挥重要作用,可以通过诱导肝星状细胞活化促进肝纤维化的进程。前期研究表明,柔肝降酶方具有保护肝功能、抗炎、抗氧化应激反应等作用,其是否通过自噬抗肝纤维化的作用机制尚未阐明。目的：探讨柔肝降酶方含药血清对脂多糖诱导的人肝星状细胞活化及自噬的影响及其潜在的作用机制。方法：用脂多糖建立人肝星状细胞活化模型,分成不同的处理组：(1)空白组：人肝星状细胞+空白血清;(2)模型组：人肝星状细胞+空白血清+脂多糖;(3)柔肝降酶方低、中、高剂量含药血清组：人肝星状细胞+低、中、高剂量柔肝降酶方含药血清+脂多糖;(4)柔肝降酶方高剂量含药血清联合雷帕霉素组：高剂量组基础上+雷帕霉素;(5)柔肝降酶方高剂量含药血清联合PI3K抑制剂组：高剂量组基础上+LY294002。CCK-8法观察细胞增殖情况;采用单丹磺酰尸胺染色法观察细胞自噬情况;WesternBlot检测细胞通路蛋白(PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、mTOR、P-mTOR)、自噬相关蛋白(P62、Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)、人肝星状细胞活化标志蛋白(α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原纤维)表达水平的影...     

环状RNA-42398通过调控TGF-β1/Smads信号通路抑制肝星状细胞活化

目的:探讨小鼠环状RNA-42398(mmu_circ₄2398)对肝星状细胞活化的影响及机制是否与调节TGF-β1/Smads信号通路有关。方法:小鼠肝星状细胞株JS1,分成正常对照组、空载体阴性对照组(vector组)和mmu_circ₄2398过表达组(mmu_circ₄2398组),体外构建mmu_circ₄2398过表达载体,通过脂质体瞬时转染法转入JS1细胞,48 h后RT-qPCR检测mmu_circ₄2398的表达变化,PCR产物经一代测序验证其环化位点,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达。结果:与vector组相比,mmu_circ₄2398组的mmu_c...     

TGF-β1诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6活化及上皮间质转换

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)活化及上皮间质转换(EMT)中的作用。方法体外培养HSC-T6,用MTT法筛选TGF-β1对HSC-T6作用的最佳浓度;用10μg/L TGF-β1处理HSC-T6 24 h,相差倒置显微镜下观察细胞形态改变,免疫荧光染色法检测细胞骨架结构F-actin蛋白的表达,RT-q PCR法检测肌动蛋白α-SMA及代表上皮间质转换的神经黏附素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和上皮黏附素(E-cadherin)基因表达;用不同浓度(0、5和10μg/L)的TGF-β1处理HSC-T6 24 h,Western blot检测α-SMA、N-cadherin、vimentin和E-cadherin蛋白表达。结果 10μg/L TGF-β1干预HSC-T6 24 h有最好的细胞存活率;TGF-β1刺激HSC-T6后,细胞拉伸,伪足增多呈星形,细胞间连接疏松,呈显著活化状态;F-actin聚集形成应力纤维丝,沿细胞长轴分布;实验组α-SMA mRNA及vimentin mRNA的表达量明显高于对照组(P0.05),而E-cadherin mRNA的表达量明显降低(P0.05);在不同浓度的TGF-β1呈剂量依赖性致α-SMA及N-cadherin和vimentin的蛋白表达量增多,而E-cadherin的蛋白表达量减少。结论 TGF-β1可诱导HSC-T6活化及上皮间质转换。     

川芎嗪和siRNA沉默转化生长因子β1干预大鼠肝星状细胞 结缔组织生长因子的表达

背景：作者前期研究发现川芎嗪可以通过抑制肝星状细胞的增殖、阻抑p38MARK信号通路、下调结缔组织生长因子的表达等多途径发挥抗肝纤维化的作用。一般认为转化生长因子β1是促进纤维化发生最重要的细胞因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β1的下游效应介质,siRNA靶向抑制转化生长因子β1可能成为治疗肝纤维化的新方法。 目的：观察川芎嗪及化学合成的siRNA转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响。 方法：体外培养大鼠肝星状细胞,从3条siRNA转化生长因子β1中筛选一条有效的基因沉默片段,然后利用脂质体转染试剂共同转染培养24 h的细胞作为转染组,并设计空白对照组、转染试剂组、川芎嗪组及联合治疗组。 结果与结论：与空白对照组相比,转染组、川芎嗪组、联合治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及结缔组织生长因子mRNA表达均下调(P < 0.05)。在转染组、川芎嗪组及联合治疗组,结缔组织生长因子蛋白表达均下调(P < 0.05);培养上清液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量均降低(P < 0.05)。结果表明,siRNA 沉默转化生长因子β1基因能下调结缔组织生长因子的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。川芎嗪也能下调结缔组织生长因子的表达,但对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的抑制作用更加显著,提示川芎嗪抗肝纤维化可能是多种作用靶点。     

脂多糖促进大鼠肝星状细胞系HSC-T6细胞自噬

目的研究脂多糖(LPS)对大鼠肝星状细胞系HSC-T6自噬的影响及NF-κB通路在其中的作用。方法 1)常规培养的HSC-T6细胞以不同质量浓度(0、0.01、0.1、1和10 mg/L)的LPS分别处理不同时间(0、3、6、12、18和24 h)后,Western blot检测细胞内微管相关蛋白轻链Ⅱ(LC3Ⅱ)及Beclin1含量;2)常规培养的HSC-T6细胞随机分为对照组、LPS组、PDTC组、LPS+PDTC组、PMA组和LPS+PMA组,各组经相应处理后,Western blot检测各组LC3Ⅱ及Beclin1含量;免疫荧光法观察NF-κB P65细胞内分布情况;比色法检测各组细胞培养上清羟脯氨酸(Hyp)含量;ELISA检测细胞培养上清层黏蛋白(LN)及透明质酸(HA)含量。结果经LPS处理后HSC-T6细胞中LC3Ⅱ及Beclin1含量增加且在LPS质量浓度为0.1 mg/L作用6 h达到峰值,同时细胞培养上清中肝纤维化指标Hyp、LN和HA含量明显增加(P0.05);经PDTC预处理后,LPS刺激的HSC-T6中LC3Ⅱ及Beclin1含量增加,上清中Hyp、LN和HA含量明显降低(P0.05);而经PMA预处理则LC3Ⅱ、Beclin1含量降低而Hyp、LN和HA含量增加(P0.05)。结论 LPS可促进HSC-T6细胞自噬及NF-κB通路的活化,NF-κB的活化可能抑制HSC-T6细胞自噬。     

丹参素对肝星状细胞TGF-β信号转导的影响

目的： 观察丹参素对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导活化的大鼠肝星状细胞(HSCs)Smad信号转导通路的影响。方法：体外分离、培养大鼠肝HSCs,用不同浓度丹参素作用于HSCs,检测丹参素对HSCs增殖和TGF-β1刺激后HSCs增殖的影响;观察丹参素对TGF-β1刺激HSCs表达α-SMA的影响;观察HSCs转化生长因子受体(TβRⅠ、Ⅱ)的表达;观察丹参素和TGF-β1作用HSCs后,其Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达的变化。结果：(1)丹参素在0.0625 mmol/L-1 mmol/L时,对HSCs的生长增殖具有抑制作用 (P<0.05);丹参素对TGF-β1诱导的HSCs增殖也具有明显的抑制作用 (P<0.05)。(2)丹参素0.25 mmol/ L作用HSCs能下调α-SMA的表达(P<0.05),也能下调TGF-β1诱导的HSCs的α-SMA表达(P<0.05)。（3）HSCs中TβRⅠ、Ⅱ的表达定位于细胞膜上,丹参素能下调活化HSCs中TβRⅠ、Ⅱ的表达（P<0.05或P<0.01）。 (4) TGF-β1促进HSCs中Smad2、Smad3、Smad7 mRNA的表达（P<0.01）;丹参素能下调TGF-β1诱导的HSCs内Smad2、Smad3 mRNA的表达(P<0.05),并能上调Smad7 mRNA表达(P<0.05)。 结论：体外细胞实验表明,丹参素能通过下调活化HSCs细胞膜上TβRⅠ、Ⅱ蛋白的表达来抑制HSCs的活化增殖。丹参素能上调HSCs内Smad7 mRNA表达,并下调Smad2、Smad3 mRNA表达,抑制HSCs活化,并抑制TGF-β1诱导的HSCs活化。     

TRPC1在TGF-β1诱导支气管上皮细胞迁移中的作用

 目的: 探究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)迁移中的作用。方法: siRNA沉默TRPC1; CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡; 细胞划痕和Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭。Western blot检测E-钙黏蛋白和vimentin的蛋白表达。结果: TGF-β1刺激细胞后,TGF-β1组细胞的迁移距离大于对照组(P < 0.01)。TGF-β1组和TRPC1沉默组的细胞活力和凋亡与对照组相比差异不显著;与TGF-β1组细胞比较,siRNA和 TGF-β1 共同作用组迁移能力明显降低(P < 0.01)。与 TGF-β1 组相比,siRNA沉默TRPC1和 TGF-β1 共同作用组E-钙黏蛋白的蛋白表达明显降低(P < 0.05),而vimentin的蛋白表达明显增强(P < 0.05)。结论: TRPC1通过调节E-钙黏蛋白和vimentin 的蛋白表达参与了TGF-β1诱导人支气管上皮细胞迁移的过程。     

吡非尼酮抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞表型转化

目的:研究吡非尼酮(PFD)是否抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肺成纤维细胞(HLFs)表型转化。方法:MTT法检测细胞存活率;Ed U法检测细胞的增殖能力;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法和细胞免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平,实时荧光定量PCR检测α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达水平。结果:不同浓度的吡非尼酮(0.1、0.2、0.3、0.5和0.8 mg/L)无明显的细胞毒性作用,后续实验应用0.2 mg/L为干预浓度。吡非尼酮(0.2 mg/L)预处理HLFs能明显地抑制TGF-β1诱导的细胞增殖、迁移和侵袭能力,下调Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达水平(P0.05),并且干扰TGF-β1诱导的细胞骨架重组和表型转化,使α-SMA的mRNA和蛋白水平均下降(P0.05)。结论:吡非尼酮能有效地抑制TGF-β1所诱导的HLFs细胞功能和表型转化。     

Taurine、EGCG和genistein联合对体外活化肝星状细胞自噬的影响

目的:探讨牛磺酸(taurine)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和三羟基异黄酮(genistein) 3种抗肝纤维化药物联合使用对体外活化大鼠肝星状细胞(HSCs)自噬的影响及可能机制。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立对照组、联合药物(taurine+EGCG+genistein,TEG)组、自噬抑制剂巴弗洛霉素A1(Baf-A1)组和联合药物+抑制剂(TEG+Baf-A1)组。采用CCK-8法分别检测各组HSCs的存活率,应用透射电镜观察HSCs内部自噬体超微结构变化,通过吖啶橙(AO)染色和荧光显微镜观察各组细胞内自噬溶酶体变化,Western blot分析自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和beclin-1的表达。结果:与对照组相比,TEG组、Baf-A1组和TEG+Baf-A1组细胞的存活率明显降低(P 0. 05);透射电镜观察到细胞内部出现双层或多层膜结构的自噬体,以及单层膜结构的自噬溶酶体。与对照组相比,AO染色结果显示TEG组和Baf-A1组红色荧光区域显著缩小,TEG组中LC3-Ⅱ和beclin-1的表达量显著降低(P 0. 05)。结论:活化的HSCs发生自噬现象,联合药物TEG可阻断HSCs的自噬过程,其作用机制可能与抑制HSCs中自噬体的生成有关。     

TRPC1在TGF-β1诱导支气管上皮细胞间充质转化中的作用

目的:探究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)间充质转化(EMT)中的作用。方法:以16HBE细胞株为研究对象,免疫荧光、RT-PCR和Western blotting检测16HBE细胞EMT过程中TRPC1 mRNA和蛋白的表达;Western blotting检测TRPC1阻断剂和siRNA干扰对16HBE细胞EMT的影响。结果:(1)TGF-β1刺激后细胞形态明显改变,E-钙黏蛋白表达减少(P0.01),而α-SMA蛋白表达增加(P0.05)。(2)TRPC1广泛存在于16HBE细胞,且TGF-β1刺激后TRPC1 mRNA和蛋白的表达增加(P0.05)。(3)与TGF-β1组相比,阻断剂和TGF-β1共同作用组或siRNA和TGF-β1共同作用组细胞形态改变受抑制,E-钙黏蛋白和α-SMA蛋白表达受抑制(P0.05)。结论:TGF-β1诱导16HBE细胞发生EMT,其机制可能与其上调16HBE细胞TRPC1有关。     

IGFBP2、IGFBP6在TGF-β1活化的肝星状细胞中表达

目的： 观察胰岛素样生长因子结合蛋白2、6（IGFBP2、IGFBP6）在转化生长因子β₁（TGF-β₁）诱导活化后的肝星状细胞中的表达变化。方法：大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）体外培养，分别设立空白对照组（加入等量PBS）、不同浓度的TGF-β₁ 处理组，处理因素作用24 h，采用免疫细胞化学染色、Western blotting检测IGFBP2、IGFBP6在HSC-T6中的表达。结果：免疫细胞化学染色及Western blotting结果发现，TGF-β₁各处理组IGFBP2、IGFBP6的表达均较空白对照组显著增强。结论：IGFBP2、IGFBP6在TGF-β₁诱导活化后的HSC-T6中表达明显增强，IGFBP2、IGFBP 6可能参与了肝纤维化的形成。     

银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及转化生长因子和结缔组织生长因子基因表达的影响

目的: 研究银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及细胞因子TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白表达的影响，以探讨银杏叶提取物抗肝纤维化的可能机制。方法: 用不同浓度(0、1、10、100、500 mg/L)的银杏叶提取物处理HSC-T6，用MTT及流式细胞仪检测其对肝星状细胞增殖及细胞周期的影响，用RT-PCR及Western blotting检测培养24 h及48 h后各组细胞中TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白的表达。结果： 银杏叶提取物10、100、500 mg/L可抑制肝星状细胞的增殖，与空白对照组相比，G0/G1期DNA含量逐渐增加（P<0.05或P<0.01），S期DNA含量则逐渐降低（P<0.01），增殖指数(PI)逐渐降低(P<0.05 或P<0.01)；24 h各组TGF-β1mRNA及蛋白表达较对照组分别低（28±4）%、（39±4）%、（45±3）% (P<0.01)；（27±4）%、（37±4）%、（41±3）% (P<0.01)；48 h组各组TGF-β1mRNA及蛋白表达较对照组分别低（35±4）%、（49±3）%、（54±3）% (P<0.01)；(33±4)%、(48±3)%、(52±3)% (P<0.01)；4 h各组CTGF mRNA及蛋白表达较对照组分别低（29±6）%、（45±4）%、（56±3）% (P<0.01)；（36±4）%、（48±4）%、（49±3）% (P<0.01)；48 h组各组CTGF mRNA及蛋白表达较对照组分别低（48±6）%、（57±4）%、（69±3）% (P<0.01)；(44±6)%、(58±4)%、(62±3)% (P<0.01)。结论: 银杏叶提取物可能通过抑制肝星状细胞的增殖，抑制细胞因子TGF-β1、CTGF基因的表达发挥其抗肝纤维化的作用。     

MEF2A与肝星状细胞活化的关系研究

目的： 观察核转录因子-肌细胞增强因子2A (MEF2A)在肝星状细胞(HSC)活化过程中的动态变化及与HSC活化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的关系,探讨MEF2A在HSC活化过程中可能作用。方法: 从SD大鼠肝脏分离HSC并培养在塑料细胞培养皿中,在体外培养过程中HSC逐步活化,分别收集新分离(0 d)和经培养(1、2、3、4、5、6、7、8 d)的HSC,采用实时荧光定量PCR检测各期细胞中MEF2A mRNA表达;Western blotting检测各期细胞中MEF2A和α-SMA的含量;凝胶阻滞实验(EMSA)方法检测MEF2A DNA结合活性。结果: 实时荧光定量PCR结果表明新分离的HSC内有少量MEF2A mRNA表达,随着HSC培养逐步活化,MEF2A mRNA表达逐步增加;Western blotting检测结果发现新分离的HSC内有少量MEF2A及α-SMA,随着HSC培养逐步活化,细胞内MEF2A及α-SMA逐步增加,二者呈正相关;EMSA结果表明MEF2A DNA结合活性逐步增高。结论: 随着HSC激活,MEF2A基因和蛋白表达量逐渐增加,且MEF2A DNA结合活性同步增高,MEF2A可能参与了HSC活化过程。     

大鼠肝脏星形细胞的分离培养及鉴定

目的　建立大鼠肝星形细胞 (hepaticstellatecells,HSC)的体外分离及培养方法 ,为进行肝纤维化的实验研究提供技术支持。方法　选用SD大鼠经消化酶灌注肝脏后 ,用调整密度后的淋巴细胞分离液分离HSC。通过观察其自发荧光及显著其特征性结构的脂肪染色、细胞免疫化学染色等方法鉴定。结果　分离得到HSC ,细胞得率为 1～ 1 5× 10 7/只 ,存活率为98%。结论　成功分离及培养HSC ,且方法经济、简便、稳定     

氯喹对体外活化肝星状细胞自噬与胶原代谢的影响

目的:研究不同浓度的自噬抑制剂氯喹(CQ)对活化的大鼠肝星状细胞系HSC-T6中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及可能机制。方法:应用转化生长因子β1(TGF-β1)活化HSC-T6细胞,给予CQ干预24 h。实验分组为:control组、TGF-β1组、TGF-β1+CQ(15μmol/L)组、TGF-β1+CQ(30μmol/L)组和TGF-β1+CQ(60μmol/L)组。采用Western blot技术检测微管相关蛋白轻链3(LC3)比值LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬靶蛋白P62、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和TIMP-2的表达情况;免疫细胞化学检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;RT-q PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-13、TIMP-1和TIMP-2mRNA的表达变化。结果:CQ干预后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高且呈剂量依赖性;P62蛋白表达TGF-β1+CQ组均显著高于TGF-β1组(P0.01)。TGF-β1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量较control组显著增加,TGF-β1+CQ组较TGF-β1组也有明显增加。α-SMA的表达在TGF-β1组和TGF-β1+CQ组均显著高于control组(P0.05),而TGF-β1组和TGF-β1+CQ各组之间无显著差异。MMP-13表达在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著下降(P0.05);TIMP-1和TIMP-2在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著升高(P0.05),且呈剂量依赖性。结论:自噬抑制剂CQ能显著增加HSC-T6细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达并呈剂量依赖性,这可能与其上调TIMP-1及TIMP-2的表达并抑制MMP-13表达有关。     

Pentoxifylline inhibits hepatic stellate cells proliferation via the Raf/ERK pathway

Pentoxifylline (PTX), which is a xanthine derivative, is a well-known suppressor of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) production in inflammatory cells and has also been shown to inhibit collagen synthesis in hepatic stellate cells (HSCs) in vitro. The present study aimed to evaluate the effects of PTX on proliferation in HSCs as mediated by the Raf/MEK/extracellular-signal-regulated kinase (ERK) signaling pathway. The rat hepatic stellate cell line T6 and activated primary rat HSCs were used in this study. The proliferation rate of the cells treated with 1 mM PTX significantly decreased compared with that of the control in T6 cells (78.3 ± 6.03% at 12 h, 61.0 ± 7.55% at 24 h, and 44.7 ± 2.08% at 48 h, p < 0.05). PTX (1 mM) also decreased the fraction of the HSC population in the S and G2/M-phases of the cell cycle in primary activated rat HSCs. The Raf-1 inhibitor GW5074 and the ERK inhibitor U0126 had inhibitory effects that were similar to those of PTX on HSC proliferation. In addition, PTX inhibited the phosphorylation of Raf-1 (p-Raf-1) and ERK (p-ERK) in a dose- and time-dependent manner in HSCs. These data provide evidence that PTX suppresses HSC proliferation via the Raf/MEK/ERK pathway.