成纤维细胞生长因子1非促分裂突变体对2型糖尿病大鼠血管功能的保护作用

目的:研究成纤维细胞生长因子1非促分裂突变体(n FGF1)对链脲佐菌素和高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠主动脉血管功能的保护作用并探讨其机制。方法:将5周龄左右(200±20)g雄性SD大鼠30只随机分为正常对照组、2型糖尿病模型组和2型糖尿病模型+n FGF1给药组,每组10只。给药组予以0.5 mg/kg n FGF1腹腔注射4周(隔天给药),对照组和糖尿病模型组则给予等量的生理盐水。监测各组大鼠的血糖变化情况,检测大鼠主动脉舒张功能变化,检测动脉组织超氧化物歧化酶(SOD)水平,检测环氧化酶2(COX-2)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白表达水平,检测血清中葡萄糖、胆固醇和甘油三酯水平,研究n FGF1对2型糖尿病大鼠主动脉血管功能的调节作用。结果:n FGF1可明显降低2型糖尿病大鼠血清中葡萄糖、胆固醇和甘油三酯水平,显著增强主动脉SOD活性及e NOS蛋白表达水平,并明显下调COX-2和p-ERK的蛋白水平。结论:n FGF1可以有效保护2型糖尿病大鼠主动脉血管功能,其机制可能与降低血糖和血脂,减轻炎症和氧化应激反应,以及上调e NOS信号通路有关。     

代谢综合征大鼠肠系膜动脉eNOS磷酸化水平的变化

<正>代谢综合征(metabolic syndrome,MS)主要表现腹型肥胖、血脂异常、高血压及糖代谢紊乱等,均可导致血管内皮功能紊乱(endothelial cell dysfunction,ECD)。ECD是多种心血管疾病发生发展的病理生理学基础,而e NOS/NO功能障碍又是ECD的发生关键环节。本研究复制MS大鼠模型,观察MS发生发展过程中体循环小血管(肠系膜动脉)e NOS/NO     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对2型糖尿病大鼠肝糖原合成的影响

目的:探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对糖尿病大鼠肝糖原合成的影响及其机制。方法:雄性Wistar大鼠,随机分为2组:正常饮食组和高脂饮食组。喂养8周后,高脂饮食组大鼠腹腔注射单剂量链脲佐菌素(STZ)27 mg/kg复制2型糖尿病大鼠模型,2型糖尿病大鼠造模成功后随机分为3组:糖尿病模型组、PDTC治疗组和胰岛素治疗组。PDTC治疗组大鼠每天腹腔注射PDTC(50 mg/kg)1次;其它各组每天同一时间注射相同体积的生理盐水,胰岛素治疗组大鼠在处死前1 h腹腔注射胰岛素(1 U/kg)1次。治疗1周后尾静脉采血测定各组大鼠血糖水平,然后断头处死大鼠,测定肝组织中肝糖原的含量,采用Western blotting分析大鼠肝脏中蛋白激酶B(PKB/Akt)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化水平的变化。结果:糖尿病模型组与正常饮食组大鼠相比血糖显著升高(P0.01);肝糖原含量明显减少(P0.01);肝脏中Akt及GSK-3β磷酸化水平明显降低(P0.01)。与糖尿病模型组大鼠相比,PDTC治疗组与胰岛素治疗组大鼠肝糖原合成均显著增加(P0.01);血糖均明显降低(P0.01);肝脏中Akt和GSK-3β磷酸化水平均明显增加(P0.01)。结论:PDTC可通过调控Akt/GSK-3β活性,增加肝糖原合成,降低血糖。     

依普利酮对高盐诱导的高血压大鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶表达及活性的影响

目的:探讨依普利酮对高盐诱导的高血压大鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的表达及活性的影响。方法:50~60 g 4周龄雄性Wistar大鼠随机分为3组:对照(control,C)组用普通饲料饲养16周,高盐饮食(high salt diet,HS)组及依普利酮(eplerenone,Epl)组用5%高盐饲料饲养16周,C组和HS组于末4周给予同等剂量生理盐水灌胃,而Epl组于末4周给予依普利酮40 mg·kg-1·d-1灌胃。每2周检测各组大鼠尾动脉收缩压,16周后处死大鼠,留取主动脉。ELISA法检测醛固酮含量,蛋白免疫印迹法检测盐皮质激素受体(MR)及e NOS蛋白表达水平,化学比色法测定一氧化氮合酶活性,免疫组化染色法观察主动脉e NOS、神经型一氧化氮合酶(n NOS)及MR蛋白表达与定位。结果:(1)高盐饲料饲养8周后,大鼠收缩压即明显升高,并逐渐上升,16周时HS组收缩压较同时点C组明显升高(P0.05);依普利酮灌胃4周后,收缩压比灌胃前明显下降(P0.05)。(2)与C组比较,HS组、Epl组主动脉醛固酮含量明显增加(P0.05),且MR表达明显增加(P0.05)。(3)HS组较C组e NOS蛋白表达减少(P0.05)、结构型一氧化氮合酶(c NOS)活性也降低(P0.05);Epl组较HS组e NOS蛋白表达增加(P0.05)、c NOS活性增高(P0.05)。结论:(1)高盐诱导高血压大鼠的主动脉醛固酮含量明显增加,醛固酮可能通过激动MR降低主动脉e NOS蛋白表达及酶活性。(2)选择性MR拮抗剂依普利酮可恢复e NOS蛋白表达及活性,改善e NOS功能。     

罗格列酮减轻2型糖尿病大鼠血管内皮功能受损

目的观察2型糖尿病大鼠血清内皮素(ET)和一氧化氮(NO)水平、主动脉病理变化、在主动脉的内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白和mRNA表达及罗格列酮的干预作用。方法将大鼠随机分为对照组、高脂组、糖尿病组和罗格列酮组,每组20只。制备2型糖尿病大鼠模型后,罗格列酮治疗组4 mg/kg·d灌胃给药,于治疗6周和12周时检测血糖、ET、NO及光镜下主动脉的病理变化;用Western blot和real-time PCR检测主动脉的e NOS蛋白和mRNA表达。结果 1)与对照组比较,高脂组、糖尿病组及罗格列酮治疗组ET升高,NO降低(P0.01)。12周时糖尿病组较高脂组和罗格列酮治疗组ET升高,NO降低(P0.05)。糖尿病组NO水平在12周时比6周时明显下降(P0.05)。2)12周时高脂组、糖尿病组和罗格列酮组大鼠主动脉出现不同程度病理改变。3)6周和12周时,与对照组比较,高脂组、糖尿病组和罗格列酮组主动脉e NOS的蛋白和mRNA表达下调(P0.01);糖尿病组较罗格列酮组主动脉e NOS的蛋白表达下调(P0.01)。结论罗格列酮可以缓解糖尿病组大鼠血管内皮功能受损。     

丹酚酸B对糖尿病大鼠血管舒张功能、NF-κB活化及炎症因子表达的影响

目的:研究丹酚酸B对糖尿病大鼠血管舒张功能的改善作用及其可能机制。方法:SD大鼠40只,采用高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素方法建立糖尿病大鼠模型(随机血糖16.7 mmol/L)。将糖尿病大鼠随机分为模型组、Sal B高剂量(160 mg·kg~(-1)·d~(-1))组和Sal B低剂量(80 mg·kg-1·d-1)组,另取10只正常大鼠作为对照组。丹酚酸B组每日灌胃给予相应剂量丹酚酸B,共6周。采用离体动脉环实验检测血管舒张功能,HE染色观察大鼠主动脉病理学变化,ELISA法测定血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及C反应蛋白(CRP)水平,比色法测定血管组织中总抗氧化能力、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平,Western blot法检测主动脉细胞间黏附分子1(ICAM-1)和单核细胞趋化因子1(MCP-1)的蛋白表达水平以及核因子κB(NF-κB)的活化水平。结果:丹酚酸B明显减轻糖尿病大鼠主动脉病变,改善血管舒张功能,提高血管组织总抗氧化能力和NO水平,降低组织MDA以及血清IL-6、TNF-α和CRP水平(P0.05或P0.01),并减少主动脉NF-κB p65亚基核转位及ICAM-1和MCP-1蛋白表达水平(P0.05或P0.01)。结论:丹酚酸B可明显改善糖尿病大鼠血管舒张功能,其机制可能与改善机体氧化应激状态、抑制NF-κB活化而减轻血管炎性病变有关。     

1-磷酸鞘氨醇在高糖诱导血管内皮细胞功能损伤中的作用

 目的: 探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)在高糖诱导血管内皮细胞功能损伤中的作用及其机制。方法: 在高糖培养的人主动脉内皮细胞模型中,分别或同时给予S1P、鞘氨醇激酶1抑制剂和Akt抑制剂处理后,观察一氧化氮(NO)、粒细胞-内皮细胞黏附率、细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白表达、内皮细胞迁移以及Akt/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号途径的改变。结果: S1P明显降低高糖诱导的内皮细胞培养上清液中NO含量,促进粒细胞与内皮细胞黏附,显著增加内皮细胞ICAM-1蛋白表达,抑制内皮细胞迁移和Akt/eNOS信号通路激活。鞘氨醇激酶1抑制剂减少S1P生成后上述内皮细胞功能指标得以明显改善,Akt/eNOS信号通路恢复激活。结论: S1P促进高糖培养的内皮细胞功能障碍的形成,可能与其抑制Akt/eNOS信号通路激活有关。抑制S1P生成有望成为减轻内皮细胞功能损伤的治疗策略之一。     

内源性一氧化氮合酶抑制物在糖尿病大鼠勃起功能障碍中的作用

目的:探讨内源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物非对称性二甲基精氨酸(ADMA)在糖尿病大鼠勃起功能障碍中的作用及其机制。方法:采用高脂饲养加小剂量链脲佐菌素腹腔注射诱导8周病程的2型糖尿病大鼠模型;麻醉下分离大鼠阴茎海绵体,用器官浴槽方法检测海绵体对乙酰胆碱的内皮依赖性舒张反应以反映其勃起功能;检测血清ADMA含量;检测海绵体组织NOS活性及一氧化氮(NO)和环磷酸鸟苷(c GMP)含量;用Western blot检测海绵体ADMA信号通路蛋白和磷酸二酯酶5(PDE5)的表达;检测超氧化物歧化酶活性和脂质过氧化产物丙二醛含量以评价氧化应激。结果:糖尿病大鼠血糖升高,胰岛素敏感性降低,表明糖尿病大鼠模型建立成功;与正常对照组比较,糖尿病大鼠海绵体舒张功能明显降低,血清ADMA浓度升高,海绵体组织NOS活性及NO和c GMP含量降低,ADMA生成酶蛋白精氨酸甲基转移酶1表达上调,ADMA代谢酶二甲基精氨酸二甲胺水解酶1、2及ADMA靶酶内皮型NOS和神经元型NOS表达下调,PDE5蛋白表达上调,氧化应激增加;体外用ADMA孵育正常大鼠离体海绵体,亦可产生与糖尿病大鼠海绵体相似的舒张功能障碍及NO和c GMP含量减少。结论:内源性NOS抑制物ADMA蓄积是导致糖尿病大鼠勃起功能障碍的重要原因,其机制可能与减少NO生成、增加氧化应激有关。     

高血脂通过氧化/硝基化双重作用介导大鼠血管内皮功能失调

目的:观察高脂饮食对大鼠血管内皮功能的影响并探讨其具体机制。方法:将30只8周龄雄性SD大鼠随机分为正常饮食组及高脂饮食组,喂养14周,麻醉后下腔静脉采血,测定甘油三酯、胆固醇、空腹血糖及胰岛素水平;分离主动脉,观察胸主动脉对内皮依赖性血管舒张剂乙酰胆碱(ACh)及内皮非依赖性血管舒张剂(SNAP)的舒张反应;检测血管一氧化氮(NO)、过氧化物的生成量及gp91phox的表达水平,NO合酶(NOS)的活性。结果:高脂饮食组大鼠血脂、空腹血糖和胰岛素水平显著升高,胸主动脉对ACh反应明显降低,血管组织gp91phox表达显著上调,过氧化物的生成及诱导型NOS的活性水平显著增加。结论:高脂血症大鼠存在内皮功能障碍,其机制可能与高血脂引起的氧化/硝基化作用密切相关。     

未结合胆红素介导了糖尿病小鼠中血红素加氧酶1对血管的保护作用

<正>血红素加氧酶1(HO-1)是否对糖尿病病变血管具有保护作用及其相关机制尚不明确。我们推测胆红素介导HO-1对糖尿病病变血管的保护作用。对糖尿病小鼠进行腹腔注射血精素(HO-1诱导剂),分离主动脉检测血管功能、进行分子生物学研究,测定内皮细胞NO生成。血精素增强糖尿病小鼠主动脉内皮依赖性舒张,增加Akt和e NOS的磷酸化水平,这些作用能被HO-1抑制剂Sn MP或HO-1敲低病毒所抑制。血精素治疗增加糖尿病小鼠血浆中胆红素含量,并且胆红素也能够改善糖     

Regulation of iNOS-Derived ROS Generation by HSP90 and Cav-1 in Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus-Infected Swine Lung Injury

In the lungs, endothelial nitric oxide synthase (eNOS) is usually expressed in endothelial cells and inducible nitric oxide synthase (iNOS) is mainly expressed in alveolar macrophages and epithelial cells. Both eNOS and iNOS are involved in lung inflammation. While they play several roles in lung inflammation formation and resolution, their expression and activity are also regulated by inflammatory factors. Their expression relationship in virus infection-induced lung injury is not well addressed. In this report, we analyzed expression of both eNOS and iNOS, the production of nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS), and expression of their associated regulatory proteins, heat shock protein 90 (HSP90) and caveolin-1 (Cav-1), in a swine lung injury model induced by porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection. The combination of upregulation of iNOS and downregulation of eNOS was observed in both natural and experimental PRRSV-infected lungs, while the combination is much enhanced in natural infected lungs. While NO production is much reduced in both infections, ROS was enhanced only in natural infected lungs. Moreover, HSP90 is increased in both natural and experimental infection and less Cav-1 expressed was observed only in the natural PRRSV-infected lungs. Therefore, the increased ROS generation is likely due to the increased iNOS and its unbalanced regulation by HSP90 and Cav-1, and it also likely causes higher endothelial dysfunction in clinical PRRSV-infected lungs.     

小凹蛋白-1在脐静脉内皮细胞CaR介导NO生成中的作用和机制

目的: 探讨小凹蛋白-1(Cav-1)在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(CaR)介导NO生成中的作用和机制。方法: 利用转染技术将构建的 Cav-1 干扰质粒(Cav-1 shRNA)转染入HUVECs,随机分为:(1) 对照组;(2)CaR激动剂 (精胺)组;(3) 精胺+Ca²⁺组;(4) CaR负性变构调节剂(Calhex231)+精胺组;(5) Calhex231+精胺+Ca²⁺组;(6) 非律平(filipin)+精胺组;(7) filipin+精胺+ Ca²⁺组;(8)空质粒 (vehicle)+精胺+Ca²⁺组;(9) Cav-1 shRNA+精胺组;(10) Cav-1 shRNA+精胺+Ca²⁺组。Western blotting检测Cav-1 shRNA转染后HUVECs中CaR和Cav-1蛋白表达,通过NO荧光探针DAF-FM DA负载HUVECs检测细胞内NO的生成;并在提供充足底物的条件下检测细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性。结果: Cav-1 干扰后,Cav-1蛋白表达降低,同时 CaR的膜蛋白表达降低(P<0.05),CaR的浆蛋白表达无变化(P>0.05)。无论细胞外为零钙液或含钙液时,精胺(2 mmol/L)刺激CaR时均引起eNOS活性和NO含量增加(P<0.05),其中细胞外液为含钙液时,eNOS活性和NO含量增加较细胞外为零钙液时更明显(P<0.05),Calhex231 (1 μmol/L)可阻断(细胞外为零钙液)或降低(细胞外液为含钙液) 精胺介导的上述作用 (均P<0.05);此作用亦可被filipin (1.5 mg/L)或 Cav-1 基因沉默减弱(细胞外液为含钙液) (均P<0.05)。结论: HUVECs中Cav-1对CaR介导的NO生成有促进作用,其机制可能与Cav-1影响CaR膜定位及对激动剂反应性有关。     

Regulation of arterial blood pressure by Akt1-dependent vascular relaxation

Endothelial cell-dependent vascular relaxation plays an important role in the regulation of blood pressure. Here, we show that stimulation of vascular endothelial cells with platelet-derived growth factor (PDGF) results in vascular relaxation through Akt1-dependent activation of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and nitric oxide (NO) production. Stimulation of both human umbilical artery endothelial cells and abdominal aortic vessels with PDGF induced NO production. PDGF-dependent production of NO was completely abolished by inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase with wortmannin (100 nM). Stimulation of aortic vessels with PDGF resulted in the activation of Akt phosphorylation and eNOS phosphorylation: however, eNOS phosphorylation and production of NO were abolished in aortic vessels of mice lacking Akt1. PDGF strongly induced vascular relaxation in the presence of endothelium, and inhibition of NO production by N-nitro-l-arginine-methyl ester completely blocked PDGF-dependent vascular relaxation. In addition, PDGF-dependent relaxation was completely abolished by inhibition of PI3K with wortmannin (100 nM). Furthermore, vessels from Akt1 heterozygotes showed normal relaxation after PDGF stimulation, whereas vessels from Akt1 knockout littermates did not respond to PDGF stimulation. Finally, administration of PDGF (5 ng/ml) significantly lowered blood pressure in Akt1 heterozygotes, whereas a blood pressure-lowering effect was not observed in Akt1 knockout littermates. These results suggest that Akt1 regulates blood pressure through regulation of vascular relaxation by eNOS phosphorylation and subsequent production of NO.     

Akt-eNOS-NO信号途径介导了Ang-1和Ang-2对大鼠失血性休克早期血管高反应性的调节作用

目的:观察内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)在血管生成素1(angiopoietin-1, Ang-1)和血管生成素2(angiopoietin-2, Ang-2)调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用及其机制。方法:采用Western blotting技术观察失血性休克后不同时点肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)中eNOS蛋白表达变化,采用离体微血管环张力测定技术观察eNOS抑制剂对Ang-1和Ang-2调节缺氧早期和晚期血管反应性作用的影响,并观察给予Ang-1、Ang-2以及Tie-2、Akt、p38 MAPK、ERK抑制剂后缺氧血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VECs)和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)混合培养物中eNOS蛋白表达和培养上清一氧化氮(nitric oxide, NO)含量的影响。结果:(1)eNOS在正常SMA中表达很低,失血性休克后逐渐增高,休克10min、30min、1h、2h和4 h时分别增高至正常对照的1.95、2.10、3.01、3.42和3.57倍(P<0.01)。(2)eNOS抑制剂可显著抑制缺氧10min的血管高反应性,去甲肾上腺素(NE)的E_max由13.479 mN降低至9.043 mN(P<0.01),也可以显著抑制Ang-1对缺氧10min血管高反应性的维持作用,NE的E_max由15.283 mN降低至11.219 mN(P<0.01),但不改变Ang-2降低缺氧10 min血管高反应性作用,也不改变缺氧4h的血管低反应性和Ang-1、 Ang-2对缺氧4 h血管反应性的调节作用。(3)缺氧10 min的eNOS表达较正常对照增高,Ang-2和Tie-2、Akt抑制剂可抑制其增高(P<0.01),p38 MAPK、ERK抑制剂对其无显著影响。(4)NO含量在缺氧10 min显著增高,Ang-2和Tie-2、Akt、eNOS抑制剂可抑制其增高(P<0.01),p38 MAPK、ERK抑制剂对其无显著影响。结论:失血性休克早期,Ang-1和Ang-2通过Akt-eNOS-NO途径来调节血管高反应性。     

PI3K/Akt/eNOS信号通路在葛根素抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞组织因子表达中的作用

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路在葛根素(puerarin)抑制氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞组织因子(tissue factor,TF)表达中的作用。方法:实时荧光定量PCR检测TF的mRNA表达,Western blot检测TF和Akt的蛋白表达,硝酸盐还原酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。结果:与对照组相比,ox-LDL孵育内皮细胞后,内皮细胞TF的mRNA和蛋白表达升高,Akt蛋白磷酸化水平降低,细胞内NO产生减少;而葛根素预孵育内皮细胞1 h后,再用ox-LDL孵育,内皮细胞TF mRNA和蛋白表达下降,Akt蛋白磷酸化升高,细胞内NO产生增多;PI3K抑制剂LY294002和葛根素共同预孵育内皮细胞1 h后,再用ox-LDL孵育,内皮细胞TF的mRNA和蛋白表达升高,Akt蛋白磷酸化降低,细胞内NO产生减少;eNOS抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)和葛根素共同预孵育内皮细胞,也明显阻断葛根素对ox-LDL诱导的内皮细胞TF mRNA和蛋白表达、细胞Akt蛋白磷酸化和细胞内NO产生的作用。结论:葛根素可通过上调PI3K/Akt/eNOS信号通路抑制ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞TF mRNA和蛋白表达。     

厚朴酚延缓幼年自发性高血压大鼠的高血压进程及其机制

 目的:研究厚朴酚对幼年自发性高血压大鼠（SHR）血压及血管胰岛素敏感性的影响并探讨其可能的机制。方法:4周龄SHR和年龄匹配的Wistar-Kyoto（WKY）大鼠各随机分为2组,分别给予厚朴酚（100 mg/kg）或蒸馏水灌胃。3周后检测其血压、血糖和血浆胰岛素;离体血管环实验检测胰岛素诱导的主动脉舒张效应;Western blotting检测过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）、Tribbles同源蛋白3（TRB3）表达水平以及胰岛素诱导的Akt/内皮型一氧化氮合酶（eNOS）磷酸化。体外高糖（25 mmol/L）、高脂（500 μmol/L）培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,厚朴酚孵育后观察PPARγ、TRB3表达水平、胰岛素诱导的Akt/eNOS磷酸化及NO的生成。结果:4周龄SHR血压尚未增高,给予厚朴酚灌胃3周后,血压增高减缓,胰岛素诱导的舒血管效应和Akt/eNOS活性增强,血管组织PPARγ表达增加,TRB3表达减少。高糖高脂培养的HUVECs厚朴酚孵育后,PPARγ表达增加,TRB3表达减少,胰岛素诱导的Akt/eNOS活性增强,NO产生增加;PPARγ拮抗剂预处理HUVECs则可阻断厚朴酚的上述效应。结论: 在SHR高血压前期给予厚朴酚干预可以改善血管胰岛素敏感性,延缓血压升高,该作用部分依赖于上调血管组织PPARγ表达和减少TRB3表达,进而增强Akt和eNOS活性,提示厚朴酚有望作为一种早期抗高血压药物在高血压前期使用。     

Angiogenic actions of angiopoietin-1 require endothelium-derived nitric oxide

Angiopoietin1 (Ang1) is a novel angiogenic factor with important actions on endothelial cell (EC) differentiation and vascular maturation. Ang1 has been shown to prevent EC apoptosis through activation of PI3-kinase/Akt, a pathway that is also known to activate endothelium nitric oxide synthase (eNOS). Therefore, we hypothesized that the angiogenic effects of Ang1 would also be dependent on the PI3-kinase/Akt pathway, possibly mediated by increased eNOS activity and NO release. Treatment of human umbilical vein endothelial cells with recombinant Ang1* (300 ng/ml) for 15 minutes resulted in PI3-kinase-dependent Akt phosphorylation, comparable to that observed with vascular endothelial growth factor (VEGF) (50 ng/ml), and increased NO production in a PI3-kinase/Akt-dependent manner. Capillary-like tube formation induced by Ang1* in fibrin matrix at 24 hours (differentiation index, DI: 13.74 +/- 0.76 versus control 1.71 +/- 0.31) was abolished in the presence of the selective PI3-kinase inhibitor, LY294002 (50 micro mol/L) (DI: 0.31 +/- 0.31, P < 0.01) or the NOS inhibitor, L-NAME (3 mmol/L) (DI: 4.10 +/- 0.59, P < 0.01). In subcutaneous Matrigel implants in vivo, addition of recombinant Ang1* or wild-type Ang1 from conditioned media of COS-1 cells transfected with a pFLAG Ang1 expression vector, induced significant neovascularization to a degree similar to VEGF. Finally, angiogenesis in vivo in response to both Ang1 and VEGF was significantly reduced in eNOS-deficient compared with wild-type mice. In summary, our results demonstrate for the first time that endothelial-derived NO is required for Ang1-induced angiogenesis, and that the PI3-kinase signaling mediates the activation of eNOS and NO release in response to Ang1.     

Rho激酶在糖尿病血管内皮功能改变中的作用

目的: 探讨Rho激酶激活在糖尿病血管内皮功能损伤中的作用。方法:利用正常SD大鼠、基因型糖尿病动物模型和高脂饮食诱发的小鼠肥胖模型,用器官浴槽和肌动描记方法对血管功能进行检测,用免疫印迹方法对血管组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)磷酸化水平进行测定,用ELISA方法对血管组织中血栓烷受体(TP受体)激活物进行测量。结果: TP 受体激活可以抑制正常血管的内皮依赖性舒张,使最大舒张值(E_max)由正常组的(78.8±10.6)% 降到 (17.9±5.1)%; Rho激酶抑制剂预处理翻转了TP受体的抑制作用,E_max值为 (62.0±11.2)%;抑制eNOS抵消了Rho激酶抑制剂对血管功能的改善作用。与此相一致,TP受 体激活可以抑制正常血管eNOS磷酸化水平,并且该作用被Rho激酶抑制剂所翻转。此外,抑制Rho激酶可以使糖尿病小鼠和肥胖小鼠的血管内皮依赖性舒张作用得到改善,E_max值显著增加。并且,与对照组相比,糖尿病动物血管组织中血栓烷B₂和前列腺素F_2α水平升高。结论:Rho激酶参与了糖尿病血管内皮功能紊乱的调节,可能与TP受体激活和抑制eNOS活性有关。