二苯乙烯苷通过PI3K/AKT通路抑制TGFβ诱导的结直肠癌上皮间质转换

目的:探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxy stilbene-2-Ο-β-D-glucoside,THSG)对TGFβ诱导的结直肠癌细胞上皮间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及可能的分子机制.方法:通过转化生长因子(transforming growth factorβ,TGFβ)诱导HCT116细胞发生EMT,倒置显微镜观察细胞形态变化,Western印迹检测EMT相关分子标志物的表达;划痕实验、细胞迁移实验、倒置显微镜观察不同浓度THSG干预TGFβ刺激对HCT116细胞运动、迁移能力以及形态学的影响,Western印迹检测EMT相关标志物及PI3K/AKT通路的改变.结果:TGFβ刺激HCT116细胞后,细胞由圆形变为长梭形,E-cadherin表达降低,vimentin和N-cadherin表达增加;与对照组相比,THSG可增加E-cadherin和PTEN的表达,降低vimentin和N-cadherin和p-AKT表达,同时抑制细胞的迁移及运动(F=454.723,P<0.001;F=412.161,P<0.001).结论:THSG可通过PI3K/AKT通路抑制TGFβ诱导的HCT116细胞EMT,并降低其运动迁移能力.     

HMGA2在胃癌细胞上皮-间充质转化中的作用

目的:探讨HMGA2在胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用及机制。方法:采用Western blot和RT-qPCR实验检测不同分化程度的人胃癌细胞株MKN45、MKN28和SGC7901以及人永生化胃黏膜上皮细胞株GES-1中HMGA2的表达水平;采用脂质体转染法将pcDNA3.0-HMGA2质粒转染至MKN28细胞中,将si-HMGA2干扰片段转染至MKN45细胞中,并采用Western blot和RT-qPCR实验检测转染效率;CCK-8实验检测HMGA2上调对MKN28细胞活力的影响以及HMGA2下调对MKN45细胞活力的影响;采用细胞迁移和侵袭实验检测HMGA2上调对MKN28细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot和RT-qPCR实验检测HMGA2过表达对MKN28细胞EMT相关标志蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达的影响以及敲减HMGA2表达对MKN45细胞E-cadherin、N-cadherin和vimentin表达的影响;采用RT-qPCR实验检测过表达HMGA2的MKN28细胞Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的变化。结果:HMGA2在不同分化程度的胃癌细胞中的表达水平是不同的(P0.05)。上调MKN28细胞HMGA2的表达水平能够抑制细胞活力(P0.05);而在MKN45细胞中下调HMGA2的表达水平能够增强细胞活力(P0.05)。上调MKN28细胞HMGA2的表达水平能够促进细胞的迁移和侵袭能力(P0.05),且E-cadherin表达降低,N-cadherin和vimentin表达升高(P0.05);敲减HMGA2在MKN45细胞的表达水平使E-cadherin表达升高,而N-cadherin和vimentin表达降低(P0.05)。上调MKN28细胞中HMGA2的表达水平,细胞内Wnt/β-catenin通路的β-catenin及其下游分子c-Myc和cyclin D1的mRNA表达水平显著增加(P0.05)。结论:HMGA2与胃癌细胞迁移和侵袭能力密切相关,并且能够通过激活细胞内Wnt/β-catenin通路,促进胃癌细胞EMT。     

长链非编码RNA EVADR促进人结直肠癌细胞系增殖及迁移

目的探讨lncRNA EVADR对人结直肠癌HCT116和LOVO细胞系的增殖和迁移的影响以及其作用机制。方法利用慢病毒感染方式分别构建稳定过表达lncRNA EVADR的HCT116和LOVO细胞系;用CCK-8检测细胞的增殖;Transwell小室法检测细胞迁移能力,Western blot检测E-cadherin的表达,实时荧光定量PCR检测Snail、Slug、ZEB1和ZEB2 mRNA的表达。结果成功构建了稳定过表达lncRNA EVADR的结直肠癌HCT116和LOVO细胞系。与HCT116-NC和LOVO-NC细胞组对比,HCT116-EVADR与LOVO-EVADR细胞组的增殖和迁移能力明显提高(P<0.05)。同时,上皮标志物E-cadherin表达明显降低,而Snail、Slug、ZEB1和ZEB2间质化标志物的表达升高。结论过表达lncRNA EVADR具有促进结直肠癌HCT116和LOVO细胞的增殖与迁移能力,可能通过调节结直肠癌细胞上皮间质转化(EMT)发挥作用。     

纺锤菌素抑制胃癌细胞的侵袭和转移

目的探讨纺锤菌素(netropsin)对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响及其分子机制。方法用Transwell检测胃癌细胞侵袭和转移能力,用Western blot检测EMT相关标志物E-cadherin和vimentin表达,用免疫荧光检测β-catenin的细胞定位,验证netropsin作用前后Wnt/β-catenin信号通路活性。结果 Netropsin浓度25μmol/L时对MKN28细胞增殖有抑制作用,netropsin可以降低上皮标志物E-cadherin的表达,上调间质标志物vimentin的表达;netropsin可以通过抑制胃癌细胞的EMT,降低胃癌细胞侵袭和转移能力(P0.05),同时可阻止β-catenin进入细胞核。结论 Netropsin可以通过与HMGA2竞争结合转录因子结合位点抑制Wnt/β-catenin信号通路,降低胃癌细胞EMT的发生,从而抑制胃癌细胞侵袭能力。     

Wnt/β-catenin信号通路调控哮喘气道重塑的机制研究

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路调控哮喘气道平滑肌细胞(ASMC)的功能和参与哮喘气道重塑的机制。方法:建立大鼠哮喘模型,提取大鼠ASMC。Western blot法检测哮喘组和正常组大鼠ASMC中β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、原癌基因c-Myc和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达。抑制哮喘组和对照组ASMC中β-catenin和转录辅助因子p300/CBP间的相互作用后,采用CCK-8法和流式细胞术检测ASMC的细胞活力和周期变化。抑制P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性后,采用Western blot法检测c-Myc和cyclin D1的蛋白表达变化。结果:Western blot法显示哮喘组ASMC中β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白表达水平均明显高于对照组(P0.05),同时GSK-3β的蛋白表达水平则低于对照组(P0.05)。抑制β-catenin和p300/CBP间相互作用后,哮喘组ASMC的细胞活力下降幅度和细胞周期改变程度均较对照组更为明显(P0.05)。抑制P38 MAPK活性后,哮喘模型大鼠及对照大鼠ASMC中Wnt/β-catenin信号通路的靶蛋白c-Myc和cyclin D1的表达均下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路可能通过上调c-Myc和cyclin D1的表达、与P38 MAPK信号通路相互作用以及调控ASMC的生长和分化等途径,影响ASMC的功能,参与哮喘气道重塑。     

RARG对胃癌细胞活力和迁移能力的影响

目的:探讨视黄酸受体γ(retinoic acid receptor gamma,RARG)对胃癌细胞活力和迁移能力的影响及其机制。方法:采用生物信息学技术分析在线数据库中胃癌和正常胃组织的RARG表达水平及其与胃癌患者总生存率的相关性;利用过表达质粒转染和RNA干扰技术,在体外促进和抑制胃癌细胞中RARG的表达,并采用MTT和Transwell实验检测RARG对胃癌细胞活力和迁移能力的影响;通过Western blot和TOP/FOP双萤光素酶报告基因检测RARG对Wnt/β-catenin信号通路的调控;利用免疫共沉淀和免疫荧光共定位实验检测RARG与β-catenin蛋白的相互作用情况。结果 :过表达RARG能够增强胃癌细胞SGC7901的活力和迁移能力(P0.05),敲减RARG能够减弱胃癌细胞MGC-803的活力和迁移能力(P0.05)。同时,过表达RARG能够增加β-catenin、c-Myc、cyclin D1、Twist和Snail的蛋白表达水平(P0.05),以及TOP/FOP双萤光素酶报告基因活性(P0.05)。另外,RARG与β-catenin蛋白存在相互作用。结论 :RARG通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞的活力和迁移能力,其基因在胃癌的发生发展中扮演着癌基因的角色。     

β拉帕醌联合PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235抑制BGC-823细胞增殖和迁移

目的研究β拉帕醌(β-lapachone)与磷脂酰肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/m TOR)抑制剂NVP-BEZ235联合用药对人胃癌BGC-823细胞增殖与迁移的影响及机制。方法将BGC-823细胞分为空白对照组、1μmol/Lβ-lapachone处理组、50 nmol/L NVP-BEZ235处理组及1μmol/Lβ-lapachone联合50 nmol/L NVP-BEZ235处理组。采用MTT法和平板克隆形成实验检测BGC-823细胞的增殖能力;Western blot法检测细胞增殖相关蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白水平;划痕实验及TranswellTM迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail及β联蛋白(β-catenin)的蛋白水平。结果与β-lapachone处理组或NVP-BEZ235处理组相比,β-lapachone联合NVP-BEZ235处理组能更显著地抑制细胞的增殖和克隆形成能力,p-AKT、p-NF-κB、p-ERK及cyclin D1的蛋白表达下调最明显;在联合处理组对细胞迁移的抑制更明显,EMT相关标志物E-cadherin表达上调,vimentin、Snail及β-catenin表达下调最明显。结论β-lapachone联合NVP-BEZ235可有效抑制BGC-823胃癌细胞增殖,可能与p-AKT、p-NF-κB、p-ERK和cyclin D1表达降低有关;并通过调控EMT进程,抑制BGC-823细胞的迁移。     

TIPE2过表达调控Wnt/β-catenin抑制胃癌细胞增殖、迁移和EMT北大核心CSCD

目的:探究肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样因子2(TIPE2)是否通过抑制Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌(GC)细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT)。方法:qRT-PCR和Western blot检测不同细胞中TIPE2 mRNA和蛋白表达。体外培养MKN45细胞,依次分为:Control组(不做任何处理)、AD-EV组(转染AD-EV)、AD-TIPE2组(转染AD-TIPE2)、LiCl组(Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl处理)、AD-TIPE2+LiCl组(转染AD-TIPE2后LiCl处理)。MTT和集落形成实验检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;Western blot检测细胞TIPE2、E-cadherin、N-cadherin、Wnt2、β-catenin和Twist蛋白表达;免疫荧光染色检测细胞TIPE2、E-cadherin及N-cadherin表达。结果:GC细胞株中TIPE2表达显著下调,且在MKN45细胞中表达最低。与AD-EV组相比,AD-TIPE2组MKN45细胞增殖活力、集落形成数、迁移细胞数及N-cadherin、TIPE2、Wnt2、β-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1蛋白表达均显著降低,TIPE2和E-cadherin表达显著增高(P<0.05);与AD-TIPE2组相比,AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞增殖活力、集落形成数、迁移细胞数及N-cadherin、TIPE2、Wnt2、β-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1蛋白表达均显著升高,TIPE2和E-cadherin表达显著降低(P<0.05);与LiCl组相比,AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞增殖活力、集落形成数、迁移细胞数及N-cadherin、TIPE2、Wnt2、β-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1蛋白表达均显著降低,TIPE2和E-cadherin表达显著升高(P<0.05)。结论:上调TIPE2可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制GC细胞增殖、迁移和EMT。     

XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。     

Zeste基因增强子同源物2通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响脑胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)通过调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:以RT-q PCR和Western blot检测胶质瘤U87、H4和U251细胞及正常人脑星形细胞(NHA)中EZH2的表达水平。在H4细胞中转染EZH2 siRNA和siRNA control,MTT测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,分光光度计法检测caspase-3的活性,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)和下游靶分子c-Myc的蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理转染EZH2 siRNA的H4细胞,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定β-catenin和c-Myc的表达。结果:胶质瘤U87、H4和U251细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平均明显高于NHA(P0.05),并且H4细胞中EZH2 mRNA和蛋白水平高于U87和U251细胞(P0.05)。EZH2 siRNA可以明显下调H4细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平。EZH2表达下调后的H4细胞从48 h开始细胞活力降低,并且细胞凋亡率也明显升高,细胞中caspase-3活性也明显升高(P0.05),同时EZH2表达下调还可以抑制β-catenin和c-Myc的表达。Wnt/β-catenin信号通路的激活剂可以减少EZH2诱导的H4细胞凋亡,降低细胞中caspase-3的活性。结论:EZH2在脑胶质瘤细胞中过度表达,下调其表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而诱导胶质瘤细胞凋亡。     

Akt/GSK-3β/Snail通路在TGF-β_1诱导A549/DDP细胞上皮间质转化中的作用

目的:通过观察转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导前后Akt/GSK-3β/Snail信号通路相关分子的表达情况,探讨A549/DDP细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的分子机制。方法:TGF-β_1(5μg/L)作用48 h,观察A549/DDP细胞的形态变化,并测定EMT标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达情况,评估TGF-β_1是否成功诱导A549/DDP细胞发生EMT。进一步将A549/DDP细胞分为TGF-β_1(+)组、TGF-β_1(-)组和LY294002组,应用Western blot法检测各组Akt/GSK-3β/Snail通路相关分子Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平。结果:形态学观察可见TGF-β_1(+)组的细胞变得更加狭长,呈纺锤形,细胞间较为疏散,形态与间充质细胞相似。与TGF-β_1(-)组比较,TGF-β_1(+)组E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin蛋白表达上调(P0.05);各组间Akt和GSK-3β的蛋白表达水平并无明显差别,TGF-β_1(+)组的p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail蛋白水平较TGF-β_1(-)组明显增强(P0.05);PI3K抑制剂LY294002与TGF-β_1同时刺激细胞后,p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平较TGF-β_1(+)组下调(P0.05)。结论:TGF-β_1干预Akt/GSK-3β/Snail信号通路,促进Akt和GSK-3β的磷酸化,提高Snail的表达水平,诱导A549/DDP细胞发生EMT。     

TGFBR1基因调控Wnt/β-catenin信号通路对结缔组织病相关的肺间质病变中抗纤维化的机制研究

目的：探讨TGF-β受体Ⅰ（TGFBR1）基因调控Wnt/β-catenin信号通路对结缔组织病相关的肺间质病变（CTD-ILD）的抗纤维化作用。方法：以肺癌的癌旁组织作为正常对照组,Western blot检测CTD-ILD患者肺组织TGFBR1的蛋白表达;人胚肺成纤维细胞系MRC-5分为空白对照组、TGF-β1组、阴性对照组和TGFBR1-siRNA组,各组细胞培养48 h,Western blot检测TGFBR1、Ⅰ型胶原、结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cad）及Wnt/β-catenin信号通路β 连环蛋白（β-catenin）和c-Myc的蛋白表达;CCK8法检测各组细胞的活力。结果：TGFBR1在CTD-ILD肺组织中的表达显著高于正常肺组织（P<0.05）;与空白对照组比较,TGF-β1组细胞活力、TGFBR1、Ⅰ型胶原、CTGF、α-SMA、β-catenin和c-Myc的蛋白表达均显著升高,E-cad蛋白表达显著降低（P<0.05）;TGF-β1组和阴性对照组细胞活力、TGFBR1、Ⅰ型胶原、CTGF、α-SMA、E-cad、β-catenin和c-Myc的蛋白表达差异均无统计学意义（P＞0.05）;与TGF-β1组比较,TGFBR1-siRNA组细胞活力、TGFBR1、Ⅰ型胶原、CTGF、α-SMA、β-catenin和c-Myc的蛋白表达均显著降低,E-cad蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论：TGFBR1基因在CTD-ILD肺组织中表达升高,抑制TGFBR1的表达可通过下调Wnt/β-catenin信号通路降低CTD-ILD纤维化的发生。     

胡桃醌通过调节Wnt/β-catenin/Snail通路抑制前列腺癌细胞上皮-间充质转化

目的:探讨胡桃醌对人前列腺癌细胞上皮-间充质转化的抑制作用及其机制。方法:培养人前列腺癌LNCaP细胞,实验设置对照组(无胡桃醌)、12. 5μmol/L胡桃醌组和25μmol/L胡桃醌组,后2组用胡桃醌作用LNCaP细胞24 h。采用Transwell实验检测细胞侵袭能力; Western blot实验检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)和Snail的蛋白表达水平;使用LiC l和胡桃醌联合作用LNCaP细胞后,Western blot实验检测Snail和E-cadherin的蛋白表达。结果:Transwell实验结果表明,与对照组相比,胡桃醌作用LNCaP细胞后侵袭能力下降(P 0. 01)。Western blot的结果表明,胡桃醌作用LNCaP细胞后E-cadherin的蛋白表达升高,vimentin和Snail及细胞核中β-catenin蛋白的表达降低(P 0. 01)。与胡桃醌组比较,胡桃醌与LiC l联合作用LNCaP细胞后Snail蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低(P 0. 01)。结论:胡桃醌可能通过抑制Wnt/β-catenin/Snail信号通路而抑制LNCaP细胞上皮-间充质转化。     

转化生长因子β1促进骨髓间充质干细胞迁移与上调Snail表达有关

背景：转化生长因子β1可促进骨髓间充质干细胞迁移及增殖,但机制尚不清楚。 目的：观察转化生长因子β1对体外培养的骨髓间充质干细胞侵袭力的影响,以及对Snail、基质金属蛋白酶2表达的调节作用。 方法：采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞。用改良的Transwell小室检测0,0.5,1,2,5,10 μg/L的转化生长因子β1对细胞迁移的影响。用脂质体转染针对Snail基因的特异性小分子干扰RNA至骨髓间充质干细胞,观察转染前后Snail和基质金属蛋白酶2 的表达。 结果与结论：外源性转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞迁移的促进作用具有剂量依赖性,在2 μg/L时达到最高。在此浓度下,Snail、基质金属蛋白酶2 mRNA表达明显增高。Snail基因沉默可以明显抑制转化生长因子β1对基质金属蛋白酶2表达的促进作用。提示转化生长因子β1可通过促进骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶2的表达提高其迁移能力,此作用与上调Snail表达有关。     

miR-496过表达抑制结肠癌细胞生长和转移

目的:研究miR-496过表达对结肠癌细胞生长和转移的影响及其分子机制。方法:运用生物信息学软件筛选miR-496靶向相互作用蛋白;real-time PCR和Western blot法测定结肠癌细胞系HT29、HCT116、SW480以及正常结肠上皮细胞NCM460中miR-496、CTNNB1 mRNA和β-catenin蛋白的表达;运用Lipofectamine 2000将miR-496 mimics转染HT29、HCT116和SW480细胞,分别命名为HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞,转染scramble为阴性对照;运用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒法、克隆形成实验和Transwell分别测定细胞活力、LDH漏出率、克隆形成能力和转移能力;萤光素酶报告基因实验测定miR-496启动子活性;Western blot法测定β-catenin、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、p-4E-BP1、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)、p-LRP6、MMP-7、MMP-9、MMP-13以及TIMP-2的蛋白水平。结果:miR-496与β-catenin内源性相互作用;miR-496在HT29、HCT116和SW480细胞中低表达,而在NCM460高表达;β-catenin在HT29、HCT116和SW480细胞中高表达,而在NCM460低表达;培养24 h、48 h、72 h、96 h的HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞活力、LDH漏出率、克隆形成率和转移的细胞数均显著低于对照组(P0.05);萤光素酶报告基因实验结果显示转染miR-496 mimics细胞中的miR-496启动子活性明显增加(P0.05),分别是对照组的1.75倍、2.04倍和1.61倍。Western blot实验结果显示miR-496过表达抑制β-catenin蛋白表达,p-4E-BP1和p-LRP6的蛋白水平降低;siRNA或miR-496过表达介导的β-catenin表达下调能显著抑制MMP-7和MMP-9的表达,促进TIMP-2的表达。结论:miR-496在结肠癌细胞中低表达,在正常结肠上皮细胞中高表达;miR-496过表达抑制结肠癌细胞的生长和转移,其机制是通过抑制Wnt/β-catenin通路进一步抑制MMP-7和MMP-9表达,促进TIMP-2表达,从而抑制结肠癌细胞的恶性表型。     

EphA2调控结直肠癌细胞耐药的初步研究

目的:探究Eph受体A2(Eph A2)在结直肠癌细胞化疗耐药中的作用及相关机制。方法:Western blot及real-time PCR检测人结肠癌细胞株Lo Vo及结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU中Eph A2的表达情况。转染Eph A2 siRNA干扰结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU中Eph A2的表达,CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力的变化,Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)及相关信号通路分子的蛋白水平。结果:耐药细胞株Lo Vo/5-FU中Eph A2的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株(P0.05);并且在亲本细胞株Lo Vo中,Eph A2的蛋白表达水平随着5-FU浓度的增加有升高趋势。沉默Eph A2可降低结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU的细胞活力,增加其对化疗药物的敏感性,并抑制细胞的侵袭迁移;同时上调细胞中上皮细胞标志物E-cadherin和β-catenin的表达并下调间充质细胞标志物N-cadherin和vimentin的表达,可抑制结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU的EMT进程。此外,干扰Eph A2的表达之后,Notch和Snail的表达也明显降低。结论:沉默Eph A2可部分恢复结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU对化疗药物的敏感性,其机制可能与抑制细胞侵袭和迁移、同时通过Notch/Snail信号通路影响细胞的EMT进程有关。     

PRRX2通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞活力和迁移

目的:研究配对相关同源框2(paired-related homeobox 2,PRRX2)基因对胃癌细胞活力和迁移能力的影响,并分析其调控Wnt/β-catenin信号通路的机制。方法:通过生物信息学分析在线数据库中胃癌和正常胃组织的PRRX2表达水平及PRRX2在胃癌组织中的表达与胃癌患者总生存率的相关性;将PRRX2小干扰RNA(si RNA)和过表达质粒分别转染到胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中,敲低和过表达PRRX2基因;MTT法和Transwell实验检测胃癌细胞的活力和迁移能力;Western blot和TOPflash/FOPflash双萤光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin信号通路的活化情况;免疫共沉淀实验检测PRRX2与β-catenin蛋白的相互作用。结果:敲低PRRX2能够减弱胃癌细胞MGC-803的活力和迁移能力(P0.05)。过表达PRRX2能够增强胃癌细胞SGC-7901的活力和迁移能力(P0.05),增加β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白的表达水平(P0.05),增强TOPflash/FOPflash双萤光素酶报告基因活性(P0.05)。PRRX2与β-catenin蛋白存在相互作用。结论:PRRX2可促进胃癌细胞的活力和迁移,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Silencing of CEMIP suppresses Wnt/β-catenin/Snail signaling transduction and inhibits EMT program of colorectal cancer cells

Cell migration inducing hyaluronan binding protein (CEMIP) is a hyaluronic acid binding protein, the abnormal elevation of which is suggested as a contributor in the carcinogenesis of colorectal cancer (CRC). Cancer cells lose their adhesive properties and acquire an enhanced mobility by undergoing epithelial-mesenchymal transition (EMT). This study is performed to investigate whether and how CEMIP orchestrates the EMT process of CRC cells. To avoid the unexpected off-target effects possibly caused by one single shRNA, two shRNAs targeting different mRNA regions of CEMIP gene were used to knock down the mRNA and protein expression of CEMIP. Our data showed that the proliferation, migration and invasion of two CRC cell lines, HCT116 and SW480 cells, were inhibited by CEMIP shRNA. We here defined EMT as the complete or partial loss of E-cadherin and zona occludens protein 1 (ZO-1) (epithelial markers) and the gain of Vimentin and N-cadherin (mesenchymal markers), and found that the EMT process was attenuated in CEMIP-silenced SW480 cells. Snail, a direct target of β-catenin/T cell factor complex, is known to activate the EMT program during cancer metastasis. CEMIP shRNA was further found to suppress the Wnt/β-catenin/Snail signaling transduction in CRC cells as manifested by the decreased nuclear β-catenin and Snail. Collectively, our work demonstrates that CEMIP contributes to metastatic phenotype of CRC cells in vitro.