戊地昔布抑制Lewis肿瘤生长的作用

目的检测戊地昔布抑制肿瘤生长的作用并初步探讨其作用机制。方法流式细胞术检测戊地昔布对肿瘤细胞凋亡和细胞周期的影响,Westernblot检测戊地昔布对肿瘤组织Bcl2、Bax、Caspase3,MMP2和VEGF表达的影响,用MTT法检测脾淋巴细胞转化率。结果①戊地昔布抑制Lewis肿瘤的生长,提高荷瘤小鼠的存活率。②10～40mg·kg-1·d-1戊地昔布增加肿瘤细胞的凋亡率,从对照组的19.1%增加到23.1%～29.1%。但对细胞周期分布没有影响。③戊地昔布对Caspase3,Bax,MMP2和VEGF的表达没有明显影响,但降低抗凋亡蛋白Bcl2的表达。④戊地昔布对荷瘤小鼠体重,胸腺指数和脾脏指数,脾脏淋巴细胞增殖没有影响。结论戊地昔布抑制肿瘤细胞生长的作用与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

戊地昔布联合阿霉素对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其机制研究

目的:研究戊地昔布联合阿霉素对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制作用及其机制。方法:将人MCF-7细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、阿霉素(0.25mg·L-1)组、戊地昔布(25、50、100μmol·L-1)组及联用组(阿霉素0.25mg·L-1+戊地昔布25、50、100μmol·L-1),加入相应药物继续培养,检测培养24、48、72h(n=6)后各组人MCF-7细胞的增殖抑制率;检测戊地昔布25μmol·L-1时培养48h后各组细胞周期和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白、细胞周期蛋白(CyclinD1)及环氧酶2(COX-2)蛋白表达。结果:与溶剂对照组比较,除戊地昔布25μmol·L-1培养24h外,阿霉素组、戊地昔布组及联用组增殖抑制率均明显增加(P均<0.01),且呈浓度、时间依赖性;与阿霉素组和戊地昔布组比较,联用组增殖抑制率均明显增加(P均<0.01)。戊地昔布组细胞阻滞于G0/G1期,S期细胞比例明显减少(P<0.05);联用组细胞阻滞于G0/G1期和G2/M期。与溶剂对照组比较,戊地昔布组、阿霉素组及联用组PCNA、CyclinD1蛋白表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),仅戊地昔布组和联用组COX-2蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:戊地昔布与阿霉素联用具有协同抑制人MCF-7细胞增殖的作用,可能与抑制CyclinD1和PCNA蛋白表达从而阻滞细胞周期有关。     

COX-2抑制剂戊地昔布的合成

目的:合成COX-2抑制剂戊地昔布.方法:以苯乙酸为起始原料,经酰氯化、傅克酰化生成二苯乙酮后,与盐酸羟胺反应生成肟,再环合,磺化,氨化得戊地昔布.结果:得到的产品经IR,1H-NMR,MS和元素分析,证明是戊地昔布.结论:本合成路线简化了操作步骤,缩短反应时间,提高了收率.     

戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的机制研究

目的探讨特异选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡及其作用机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布;电子显微镜进一步检测细胞凋亡;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定Eca109细胞的LDH含量;流式细胞术检测p-p38MAPK及凋亡基因Fas和FasL蛋白的表达。结果戊地昔布(25~400μmol.L-1)可诱导人食管癌Eca109细胞发生凋亡,,凋亡率由(2.95±0.83)%增加到(48.46±0.73)%;50~400μmol.L-1时增殖指数和S期的细胞比例则明显降低,G0/G1期的细胞比例增加;同时,流式细胞术显示,25μmol.L-1戊地昔布即可上调人食管癌Eca109细胞p-p38MAPK蛋白的表达,并随剂量的增加而增强;50~400μmol.L-1的戊地昔布可上调Eca109细胞Fas及FasL的表达。结论戊地昔布可诱导人Eca109细胞凋亡,其诱导凋亡的机制可能部分是通过激活p-p38MAPK/Fas、FasL途径实现的。     

选择性非甾体类抗炎药戊地昔布

戊地昔布是一种选择性非甾体类抗炎药，绝对口服生物利用度为83％，tl／2平均值为8．11h。目前已经获准用于缓解由骨关节炎、类风湿性关节炎、痛经及手术引起的疼痛。经过大量临床试验发现，与非选择性非甾体类抗炎药相比，戊地昔布有很好的耐受性，不引起肠胃副作用，也不影响血小板的活性。     

高效液相色谱法测定人血浆中帕瑞昔布和伐地昔布的浓度

目的建立高效液相色谱法测定人血浆中前体药物帕瑞昔布及其产物伐地昔布的浓度。方法色谱柱为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈-水-磷酸(57∶43∶0.01,V/V/V),流速1.0 mL.min-1,检测波长240 nm;内标为塞来昔布。结果帕瑞昔布的线性方程为Y=0.017 8X-0.022 9(r2=0.999 9),线性范围为1～100 mg.L-1。伐地昔布回归方程为Y=0.315 2X-0.005 1,(r2=0.999 8),线性范围为0.05～5 mg.L-1。帕瑞昔布和伐地昔布日内及日间RSD均小于15%,回收率均大于85%。结论本方法灵敏度高、专一性好、操作简单,可同时检测血浆中帕瑞昔布和伐地昔布,能满足药动学研究需要。     

塞来昔布对膀胱癌细胞T24 增殖的影响

目的观察塞来昔布对人膀胱癌细胞T24增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法不同浓度塞来昔布（25、50、100和200μmoL·L^-1）分别作用于人膀胱癌细胞T24不同时间（24h、48h和72h）,MTT检测T24细胞增殖抑制率,半定量RT-PCR和Western-blot检测T24细胞中COX-2表达的变化。结果塞来昔布对膀胱癌T24细胞抑制作用存在剂量、时间依赖性,200μmoL·L^-1塞来昔布作用72h时抑制率达75.7±1.9%,明显高于其它各组（P〈0.05或0.01）;半定量RT-PCR和Western-blot方法显示塞来昔布可显著降低T24细胞中COX-2mRNA和蛋白水平（P〈0.05）,且呈时间依赖性。结论塞来昔布可通过减少COX-2的表达抑制人膀胱癌细胞T24的增殖,并呈时间和剂量依赖性。     

戊地昔布对裸鼠食管癌移植瘤凋亡的影响及其可能机制

目的探讨戊地昔布对裸鼠食管癌移植瘤凋亡的影响及其可能机制。方法建立食管癌裸鼠原位移植瘤模型,给予戊地昔布4 wk。剥离瘤结节,计算瘤体体积和肿瘤生长抑制率;FCM法检测移植瘤中的细胞凋亡率;免疫组织化学和FCM法检测COX-2、c-jun和c-fos蛋白的表达变化;RT-PCR检测移植瘤中COX-2 mRNA表达变化。结果①用戊地昔布的裸鼠组,裸鼠体重明显增加,且随用药时间延长,其体重也随之增加。②戊地昔布可明显降低肿瘤重量,肿瘤生长抑制率为45.80%。③戊地昔布可增加肿瘤细胞的凋亡率。④戊地昔布可下调COX-2 mRNA和蛋白的表达;同时凋亡基因c-jun和c-fos蛋白表达升高。⑤肿瘤组织的凋亡率与COX-2蛋白表达呈负相关(r=-0.726,P=0.008),与c-jum、c-fos蛋白表达呈正相关。⑥给予戊地昔布后,裸鼠胃肠上皮细胞形态没有明显异常。结论戊地昔布能够抑制裸鼠移植瘤的生长和诱导凋亡,其机制部分与抑制COX-2表达及上调凋亡基因c-jun,c-fos有关。     

p38MAPK在戊地昔布诱导Eca109细胞凋亡中的调控作用

目的探讨p38MAPK信号转导途径在戊地昔布诱导食管癌Eca109细胞凋亡中的调控作用。方法将正常培养的人食管癌Eca109细胞随机分为正常对照组、戊地昔布组和戊地昔布+SB203580组;采用流式细胞术和DNA Ladder检测凋亡情况;RT-PCR检测p38mRNA的表达变化;流式细胞术和免疫细胞化学检测p38蛋白的表达变化。结果①戊地昔布能够诱导Eca109细胞发生凋亡,并呈剂量依赖性,而SB203580能够部分降低戊地昔布诱导的Eca109细胞的凋亡率;②戊地昔布能够上调Eca109细胞中p38mRNA和蛋白的表达,而戊地昔布+SB203580组p38mRNA和蛋白的表达下降;③p38蛋白表达与凋亡率呈正相关。结论戊地昔布能够通过部分激活p38MAPK信号途径诱导Eca109细胞发生凋亡。     

塞来昔布联合PDTC对人胃癌细胞株SGC-7901生长的抑制作用

目的:研究塞来昔布及吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对人胃癌细胞株SGC-7901的生长抑制作用及其相关机制。方法:分别应用塞来昔布50、100μmol/L,PDTC50、100μmol/L及2药联合25/25、50/50μmol/L处理SGC-7901胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率。TUNEL法检测细胞的原位凋亡。RT-PCR检测环氧合酶-2(COX-2)、核因子(NF)-κB、caspase-3mRNA的表达。结果:塞来昔布、PDTC及2药联合作用于胃癌细胞72h细胞的生长均受到抑制(P<0.05),72h时25/25μmol/L的2药联合组与50μmol/L塞来昔布组相比,细胞的生长抑制率无明显差异(P>0.05),50/50μmol/L的2药联合组细胞生长抑制率高于100μmol/L的单独用药组(P<0.01)。100μmol/L的单独用药组和50/50μmol/L的2药联合组在作用于细胞24h后,细胞凋亡指数均高于阴性对照组,且2药联合组凋亡指数高于单独用药组(P<0.01)。100μmol/L的塞来昔布及PDTC单独作用于细胞12h后均可见COX-2、NF-κB表达降低(P<0.05),100μmol/L的塞来昔布和PDTC及2种浓度的2药联合caspase-3表达升高(P<0.05)。结论:塞来昔布与PDTC联合应用具有显著抗胃癌细胞增殖,促进其凋亡的作用,其机制可能与抑制COX-2、NF-κB的表达,促进caspase-3表达有关。     

金丝桃苷体外抗胃癌作用及其机制研究

目的：研究金丝桃苷（Hyperoside）对胃癌BGC-823细胞的生长、周期及凋亡的作用,并通过检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase 3、caspase 8、caspase 9）的活性探讨金丝桃苷诱导胃癌凋亡的可能机制。方法：采用MTT法检测金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞的增殖影响;流式细胞技术检测金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞周期和凋亡的影响;比色法测定金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞凋亡过程中caspase 3、caspase 8和caspase 9活性影响。结果：金丝桃苷处理BGC-823细胞24h和48h后,细胞生长明显抑制,作用24h和48h时其IC50分别为32.14和22.67μg/mL;金丝桃苷处理组与对照组相比,胃癌BGC-823细胞G0/G1期比例明显增加,凋亡细胞比例明显增加;caspase 3、caspase 8和caspase9活性随药物浓度增加而逐渐升高。结论：金丝桃苷能够通过阻断细胞周期、诱导细胞凋亡有效抗胃癌,其诱导肿瘤细胞凋亡机制可能与激活caspase 3、caspase 8和caspase 9活性密切相关。     

力达霉素诱导人胃癌BGC823细胞凋亡和抑制裸鼠移植瘤生长

观察力达霉素(LDM)对人胃癌BGC823细胞的诱导凋亡作用及体内抗肿瘤活性。采用MTT法观察LDM对人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用。利用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测细胞凋亡的改变。采用Western blotting法检测细胞中VEGF蛋白的表达情况。建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型，观察LDM的体内抗肿瘤活性。LDM能够明显抑制BGC823细胞增殖，诱导细胞凋亡，降低细胞VEGF蛋白的表达，抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长。LDM剂量0.02和0.04 mg·kg^-1的抑瘤率分别为57%和72%(P<0.01)。LDM可诱导胃癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植肿瘤的生长。     

新型Topo I抑制剂CPUY013对胃腺癌细胞BGC823的体内外作用

探讨CPUY013在体内外对人胃腺癌BGC823细胞的抗肿瘤活性及其机制。采用MTT法、克隆原形成法检测CPUY013对BGC823细胞增殖的抑制作用；体外实验以pBR322 DNA为底物，依据质粒的松弛和超螺旋形式在琼脂糖电泳上泳动度对药物抑制解旋的作用进行定性分析。用AO/EB荧光染色技术、DNA凝胶电泳及JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞凋亡。口服给药CPUY013后观察其对裸鼠移植瘤的生长抑制作用；用流式细胞术观察CPUY013对BGC823细胞周期的影响；采用Western blotting分别检测CPUY013处理后的BGC823细胞中Topo I及凋亡相关蛋白表达的改变。结果表明，CPUY013呈明显的剂量依赖性抑制BGC823细胞的增殖。随着剂量的增加，CPUY013对Topo I松弛活性的抑制趋势增强。100 μmol·L^-1 CPUY013 和拓扑替康(TPT)对Topo I松弛活性的抑制呈现相似的变化趋势。CPUY013可使大部分BGC823细胞阻滞在S期，并诱导细胞凋亡；出现DNA片段化，亚G1峰显著增加，线粒体膜电位降低，荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等。同时，CPUY013能明显抑制BGC823裸鼠移植瘤的生长，150 mg·kg^-1剂量组的瘤重抑制率为62.1%。CPUY013使BGC823细胞内Topo I和bcl-2蛋白表达均有所下调， p53和bax蛋白表达有明显上调趋势， bcl-2/bax比值明显降低， caspase-3蛋白表达增高。新型Topo I抑制剂CPUY013在体内明显抑制移植瘤的生长， 体外可诱导细胞凋亡从而抑制BGC823细胞增殖， 其机制可能与抑制Topo I， 从而下调bcl-2，上调bax和p53蛋白的表达有关。     

Nonylphenol‐induced apoptotic pathways in SCM1 human gastric cancer cells

Environmental chemicals may affect human health by disrupting endocrine function. Many endocrine disrupting chemicals (EDCs) are estrogen‐like molecules that are classified as xenoestrogens (XEs). One XE, nonylphenol, is used as a surfactant or plasticizer and exhibits biotoxicity when accumulated in the body via the food chain. The aim of the present study was to clarify the role of nonylphenol‐induced SCM1 apoptosis by measuring cultured human gastric cancer cell (SCM1) death. Using WST‐1 reduction and propidium iodide‐staining assays, nonylphenol treatment was found to activate caspase‐3 and mitogen‐activated protein kinases (MAPKs), major markers in apoptotic pathways. Nonylphenol also activated the phosphorylation of extracellular signal‐regulated kinase (ERK), c‐Jun NH_2‐terminal kinase (JNK), and p38 mitogen‐activated protein kinase (p38 MAPK). However, only SB203580 (a p38MAPK inhibitor) partially inhibited nonylphenol‐induced apoptosis. Nonylphenol induced a [Ca²⁺]_i rise by causing extracellular Ca²⁺ influx and intracellular Ca²⁺ release from the endoplasmic reticulum, and its effects on SCM1 cell death were prevented by pretreatment with the Ca²⁺ chelator BAPTA/AM. These results suggest that nonylphenol caused Ca²⁺‐dependent apoptosis via the activation of p38 MAPK‐associated caspase‐3 in SCM1 cells. Drug Dev Res 2009. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的探讨红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及其作用机制。方法以MTT法检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L分别在24、48、72 h对人宫颈癌HeLa细胞增殖作用的影响,并在倒置显微镜下观察HeLa细胞形态学改变。流式细胞仪检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L对HeLa细胞凋亡的影响。实时荧光定量PCR仪检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L对HeLa细胞凋亡中调节基因Bax、Bcl-2表达水平的影响。结果红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,表现为时间、浓度的相关性。红三叶异黄酮对HeLa细胞的形态学改变,表现为随药物浓度增加细胞固缩变小,并出现凋亡小体。流式细胞仪检测分析显示红三叶异黄酮能引起HeLa细胞凋亡,并随药物浓度的增加而明显,当红三叶异黄酮达到一定有效浓度时,诱导其细胞凋亡。通过调节Bax mRNA与Bcl-2 mRNA的表达,促进抑制HeLa细胞增殖,能使Bax表达上升、Bcl-2表达下降,且呈剂量相关性。结论红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有抑制作用,并呈一定的剂量和时间相关性,提示通过调节Bax mRNA与Bcl-2 mRNA的表达,促进抑制HeLa细胞增殖。     

去甲斑蝥素降低人胃癌细胞程序性细胞死亡因子4的表达

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的机制。方法MTT法测定NCTD 5~640 μmol·L^-1与人胃癌BGC-823细胞作用24,48和72 h细胞存活率;Western蛋白质印迹法测定NCTD 0, 6, 30和60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞24 h PDCD4蛋白表达水平;NCTD 60 μmol·L^-1作用20 h后加入MG132 10 μmol·L^-1作用4 h对PDCD4蛋白表达的影响;逆转录PCR法测定NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞24 h后PDCD4 mRNA表达的变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞6, 12和24 h后microRNA-21(miR-21)的表达。Western蛋白质印迹法测定细胞转染miR-21抑制剂对PDCD4蛋白表达的影响。结果 NCTD作用后BGC-823细胞存活率明显下降,NCTD作用BGC-823细胞24, 48和72 h IC₅₀分别为74.5, 35.0和10.3 μmol·L^-1。NCTD 6, 30和60 μmol·L^-1作用于BGC-823细胞24 h,PDCD4蛋白分别降低9%, 47%和62%。NCTD对PDCD4 mRNA表达无影响。与NCTD处理组相比,MG132和NCTD共处理对PDCD4蛋白表达无明显影响。NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞12和24 h后,细胞中miR-21的表达显著升高(P<0.01)。细胞转染miR-21抑制剂后,可抑制NCTD降低PDCD4蛋白表达的作用。结论 NCTD通过调控miR-21降低PDCD4蛋白的表达。     

抗癌多肽A38对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响

目的:探讨经计算机辅助药物设计的抗癌多肽A38,或与顺铂联合应用对人胃癌细胞株SGC-7901的体外生长抑制作用及对肿瘤细胞早期凋亡的影响。方法:将人胃癌细胞株SGC-7901与不同浓度的A38、顺铂及A38+顺铂(DDP)分别进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝法测定不同浓度的A38、顺铂及联合用药组在作用24,48,72 h后对SGC-7901细胞的生长抑制率;流式细胞仪分析细胞的凋亡率。结果:不同浓度A38、顺铂及联合用药后,SGC-7901细胞生长抑制率在不同浓度不同时段较对照组均显著增加(P均<0.01),联合用药组细胞生长抑制率较两单药组也明显增强(P均<0.01),呈现明显时效和量效关系。流式细胞仪检测凋亡结果显示:A38、顺铂及联合用药后,SGC-7901细胞的凋亡率在不同浓度不同时段较对照组均显著增加(P均<0.01),联合用药组细胞的凋亡率较两单药组也明显增加(P均<0.01)。结论:A38能抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞生长,诱导肿瘤细胞早期凋亡,小剂量顺铂与A38联用具有协同抑制作用,且效果比高浓度下的单用A38或单用顺铂的抑制作用明显。     

选择性环氧化酶2抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用

目的观察选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用,并探讨其相关机制。方法 NS-398 25,50和100μmol·L-1作用于AGS细胞0～48 h,用CCK-8法检测细胞存活率。NS-398 50μmol·L-1作用于AGS细胞48 h,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测Notch信号通路相关基因的表达,Western印迹法检测Notch胞内结构域(NICD)及下游靶基因NF-κB和毛蛋白和断裂1增强子(Hes-1)蛋白表达。结果 NS-398 25,50和100μmol·L-1能抑制胃癌细胞AGS增殖,并呈时间(r时间=-1.00,P=0.003,50μmol·L-1)和浓度(r浓度=-0.999,P=0.027,48 h)依赖性。NS-39850μmol·L-1作用48 h,AGS细胞凋亡率为(20.1±3.5)%,比正常对照组(3.5±1.4)%明显增加(P<0.05);Notch信号通路受体Notch1和Notch2及Notch信号通路配体δ样1(DLL1)和锯齿状1(JAG1)mRNA表达无明显变化,Notch下游靶基因Hes-1和NF-κB mRNA表达较正常对照组明显减少(P<0.05);NICD,Hes-1和NF-κB蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过抑制Notch信号途径抑制胃癌细胞AGS增殖。