沙鼠脑缺血再灌注后海马中c—fos蛋白表达及纳洛酮 …

目的 观察沙鼠脑缺血再灌注后纳洛酮对海马神经元ｃ－ｆｏｓ蛋白表达及神经元形态改变的影响。方法 采用沙鼠急性全脑缺血模型,用免疫组织化学及组织化学方法观察海马ｃ－ｆｏｓ蛋白表达及细胞形态改变。结果 纳洛酮能明显加强急性全脑缺血沙鼠海马各区ｃ－ｆｏｓ蛋白的表达,ＣＡ１区尤为明显。同时纳洛酮能明显改善缺血后ＣＡ１区神经元细胞的变性坏死。结论 纳洛酮对缺血后海马神经元细胞的保护作用可能与加强ｃ－ｆｏｓ蛋白     

胰岛素对脑缺血后鼠海马CA1区神经元凋亡及记忆影响

目的　观察胰岛素对全脑缺血后海马CA1区神经元凋亡及大鼠学习记忆力改变的影响 ,探讨胰岛素对全脑缺血后海马CA1区神经元产生中枢直接保护作用的机理。方法　利用 4 VO法制作大鼠全脑缺血模型。造成脑缺血 15min后行再灌注 ,于再灌注后即刻经脑室注入 1U胰岛素 ,利用免疫组化及原位标记法分别于全脑缺血后 1、3d观察海马CA1区Bcl 2、Bcl xl蛋白表达及神经元凋亡的情况 ;缺血后 8周 ,利用“Y”型迷宫测试大鼠的学习记忆功能。结果　全脑缺血后 3d ,缺血组大鼠海马CA1区Bcl 2、Bcl xl蛋白的表达呈阴性 ,海马CA1区原位标记阳性细胞计数为 14 3.5± 11.6。治疗组大鼠海马CA1区Bcl 2、Bcl xl蛋白呈阳性表达 ,海马CA1区原位标记阳性细胞计数为 75 .6±6 .7。全脑缺血后 8周 ,治疗组大鼠学习记忆力明显好于缺血组。结论　全脑缺血后脑室内注入胰岛素可促进海马CA1区Bcl 2、Bcl xl蛋白表达 ,减少神经元的凋亡 ,进而减轻脑缺血后大鼠的学习记忆力损害 ,这可能是其对全脑缺血后海马CA1区神经元产生中枢直接保护作用主要机理之一     

缺血预处理后Fas蛋白表达与迟发性神经元凋亡的关系初步探讨

目的动态观察缺血预处理后大鼠大脑皮层和海马CA1区神经元凋亡与Fas蛋白表达变化情况,初步探讨缺血预处理后Fas蛋白表达与迟发性神经元凋亡的关系。方法四血管阻断法复制全脑缺血模型,动物随机分为非缺血对照组、预处理对照组、缺血预处理组和缺血组。采用尼氏和TUNEL染色法观察皮层及海马CA1区神经元存活数和凋亡细胞数,免疫组化方法检测Fas蛋白在缺血预处理后表达变化情况。结果缺血组缺血6h在皮质及海马CA1区Fas阳性表达细胞计数升高,12h达高峰;缺血预处理组缺血12h阳性细胞计数升高,24h达高峰。缺血组缺血6h出现凋亡细胞,48h凋亡细胞数达到高峰;缺血预处理组凋亡细胞数较缺血组明显减少。缺血组缺血7d神经元数明显减少,12周时神经元大量减少;缺血预处理组缺血7d时神经元数无明显变化,但12周时神经元同样大量减少。结论全脑缺血可能通过诱导Fas蛋白的表达增多,启动细胞凋亡,导致缺血后神经元凋亡的发生;缺血预处理虽可延缓缺血后神经元的凋亡,但无法提供真正的长时期的神经元保护作用,其有限的保护作用可能是通过延缓Fas蛋白的表达而减缓了神经元凋亡的进程。     

亚低温对缺血性神经元凋亡、细胞色素C释放的影响

通过大鼠短暂全脑缺血模型来探讨亚低温对大鼠脑缺血后细胞色素c(Cytoehrome c,CytC)释放及缺血性神经元凋亡的影响,揭示亚低温的部分神经保护机制.用原位细胞凋亡检测法(TUNEL染色)检测及电镜观察脑缺血后大鼠脑海马CAi区神经元凋亡发生情况;免疫组织化学法测定脑缺血后大鼠脑海马区神经元中细胞色素C释放情况.结果显示:①低温缺血组海马CAi区凋亡神经元数明显少于常温缺血组(P<0.01);②低温缺血3 h组海马CA1区神经元CytC阳性表达低于常温缺血3 h组(P<0.01).据此认为,全脑缺血后的迟发性神经元死亡很可能经由凋亡途径,而CytC激活、释放是缺血性神经元凋亡的一个关键事件.亚低温可抑制CytC的释放.推测经此途径减少缺血性神经元凋亡而发挥一定的神经保护作用.     

大蒜素对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察大蒜素对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响,进一步探讨大蒜素的脑保护机制。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为5组:假手术组(Sham组);缺血再灌注组(IR组);缺血再灌注+大蒜素10 mg/kg(All-10 mg)、20 mg/kg(All-20 mg)、30 mg/kg(All-30 mg)组,夹闭两侧颈总动脉8 min再灌注24 h建立大鼠全脑缺血再灌注模型,取海马组织硫堇染色观察海马组织学改变及存活神经元密度;免疫组织化学染色测定海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与Sham组相比,IR组海马CA1区神经元密度明显降低,Bax蛋白表达明显增加(均P0.05);与IR组相比,大蒜素处理各组海马CA1区神经元密度明显增多,Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax蛋白表达明显减少,其中以All-20 mg组变化最显著(均P0.05)。结论大蒜素可以通过影响凋亡相关蛋白的表达而抑制细胞凋亡,从而发挥脑保护作用。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达的变化

目的　研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后酪氨酸羟化酶 (TH)和多巴胺 β 羟化酶 (DβH)表达的改变及意义。方法　利用改良四血管闭塞法 ,建立大鼠全脑缺血模型。于缺血再灌注后 1,3,5d断头取脑 ,行免疫组化染色 ,在光镜下观察海马CA1区神经元TH及DβH表达的变化 ,并计数海马CA1区正常神经元。结果　全脑缺血再灌注后 1d ,TH及DβH的表达呈阴性 ,海马CA1区神经元未见显著的病理形态学改变 ;全脑缺血再灌注后 3d ,TH及DβH呈阳性表达 ,海马CA1区可见部分神经元死亡 ;全脑缺血再灌注后 5d ,TH及DβH呈明显阳性表达 ,海马CA1区可见大部分神经元死亡。结论　全脑缺血再灌注后 ,由于TH及DβH异常表达 ,使得儿茶酚胺生物合成增加 ,这可能是短暂性脑缺血损伤的机理之一。     

预缺血诱导大鼠CA1神经元中蛋白伴侣hsp70的表达并抑制蛋白聚集物的形成

目的 研究预缺血对蛋白伴侣hsp70表达和蛋白聚集物形成的影响,探讨其可能的脑保护机制.方法 采用大鼠双侧颈总动脉暂时夹闭法建立全脑缺血模型.大鼠分为3min缺血组,10min缺血组以及预缺血组.苏木素-伊红染色,光镜下随机计数分析预缺血后海马CA1区死亡神经元数量变化.免疫组织化学及激光扫描共聚焦显微镜法观察蛋白伴侣hsp70在CAI区神经元内的分布.差速离心分离细胞浆、细胞核及蛋白聚集物.蛋白印迹法检测不同缺血状态下海马CA1神经元内蛋白聚集物含量的变化,以及胞浆、胞核及蛋白聚集物内蛋白伴侣hsp70含量的变化.结果 组织学检查显示预缺血能够显著减少海马CA1区神经元死亡数量.预缺血诱导海马CA1区神经元内蛋白伴侣hsp70在再灌注后24h表达.预缺血处理后,海马CA1区神经元内蛋白聚集物显著减少.预缺血诱导的蛋白伴侣hsp70与再缺血形成的异常蛋白结合在一起并防止其聚集.结论 预缺血可能通过诱导蛋白伴侣hsp70的表达和抑制再缺血后蛋白聚集物的形成,减少再缺血引起的神经元死亡.     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CAl区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺—β—经化酶表达的变化

目的 研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺—β—羟化酶(DβH)表达的改变及意义。方法 利用改良四血管闭塞法，建立大鼠全脑缺血模型。于缺血再灌注后1，3，5d断头取脑，行免疫组化染色，在光镜下观察海马CA1区神经元TH及DβH表达的变化，并计数海马CAl区正常神经元。结果 全脑缺血再灌注后1d，TH及DβH的表达呈阴性，海马CA1区神经元末见显著的病理形态学改变；全脑缺血再灌注后3d，TH及DβH呈阳性表达，海马CA1区可见部分神经元死亡；全脑缺血再灌注后5d，TH及DβH呈明显阳性表达，海马CA1区可见大部分神经元死亡。结论 全脑缺血再灌注后，由于TH及DβH异常表达，使得儿茶酚胺生物合成增加，这可能是短暂性脑缺血损伤的机理之一。     

Tat-GluR6-9c抑制MLK3-MKK7-JNK信号通路对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元的保护作用

目的 探讨小肽Tat-GluR6-9c对混合性的谱系激酶3(MLK3)、丝裂原活化的蛋白激酶激酶7(MKK7)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平及蛋白表达的影响,以及对海马CA1区神经元损伤的影响. 方法 采用4-血管阻塞方法建立大鼠全脑缺血模型,应用免疫印迹的方法分别检测小肽Tat-GluR6-9c对缺血再灌注6h时MLK3、缺血再灌注3d时JNK的磷酸化及蛋白表达水平的影响;采用免疫印迹、免疫组织化学的方法检测小肽Tat-GluR6-9c对缺血再灌注1d时MKK7的磷酸化及蛋白表达水平的影响;采用焦油紫染色方法检测缺血再灌注5d时小肽Tat-GluR6-9c对大鼠海马CA1区神经元损伤的影响. 结果 Tat-GluR6-9c组MLK3、MKK7及JNK磷酸化水平显著低于缺血再灌注组及对照肽组,海马CA1区神经元存活的数量明显多于缺血再灌注组及对照肽组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 小肽Tat-GluR6-9c能显著抑制脑缺血再灌注诱导的MLK3、MKK7及JNK的磷酸化高峰,降低海马CA1区神经元的损伤.     

沙土鼠全脑适应性再灌注的脑保护机制研究

目的动态研究不同灌注时间和灌注量对全脑组织缺血损害的恢复程度和即早基因c- fos的表达,以探明适应性再灌注的脑保护作用机制.方法沙土鼠随机分7组,实验组夹闭两侧颈总动脉,造成沙土鼠全脑缺血模型,夹闭10 min后,不同开放时间段(4 min,8 min,10 min,15 min,30 min)开放不同脑血流量(1/4,1/2,一次性全开放)和单纯血液稀释后分别观察缺血海马CA区c-fos蛋白的表达,及缺血区大脑半球的改善状况.结果开放15 min,1/2脑血流量时c-fos蛋白表达最高(P<0.05),海马CA区缺血损害改善最明显,开放15 min,全脑血流量一次性开放时海马CA区损害最严重.结论①在适应性灌注流量中,脑缺血海马区c-fos的表达和神经元凋亡呈反相作用关系;②低流量灌注有明显改善脑缺血的作用;③夹闭10 min后,开放1/2脑血流量,持续15 min的效果比一次性再灌注开放效果要好.     

急性脑缺血大鼠海马和齿状回神经元β-NGF与NGFRs基因表达变化对其生存影响的研究

目的探讨急性脑缺血时大鼠海马各区及齿状回神经元β-神经生长因子(β-nervegrowthfactor,β-NGF)及其受体trkA2和p75NGFR基因表达变化对神经元生存的影响。方法采用mRNA原位杂交、免疫组织化学染色和原位细胞凋亡检测等方法,分别观察各缺血组和对照组大鼠海马各区及齿状回神经元上述3种基因表达的变化和神经元凋亡状况。结果正常大鼠海马和齿状回神经元均表达β-NGF、trkA2和p75NGFRmRNA及蛋白,无神经元凋亡。急性脑缺血后,海马CA1、CA2和CA3区均出现大量凋亡的神经元,其密度均明显高于同组CA4区及齿状回(P<0.01)。缺血组海马CA1、CA2和CA3区神经元β-NGF、trkA2和p75NGFRmRNA及蛋白的表达水平均低于对照组的对应区域(P<0.05或P<0.01),它们的表达水平彼此间均呈正相关(r=0.213～0.835,P<0.05～P<0.0001),并均与对应区域的凋亡神经元密度呈负相关(r=?0.551～?0.823,P<0.0001)。缺血组CA4区及齿状回神经元β-NGF及其受体的表达无显著变化,且与凋亡无相关关系。结论β-NGF以自分泌和(或)旁分泌方式发挥神经元保护作用,β-NGF可能对其两种受体的表达具有正性诱导作用,缺血引起的β-NGF及其两种受体表达减少可能是导致对缺血敏感的海马CA1、CA2和CA3区神经元凋亡的重要因素。     

沙鼠全脑适应性再灌注c-fos表达的实验研究

目的动态研究不同灌注时间和灌注量对全脑组织缺血损害的恢复程度和即早基因。c-fos的表达,以探明适应性再灌注的脑保护作用机制。方法沙鼠随机分7组,实验组夹闭两侧颈总动脉,造成沙土鼠全脑缺血模型,夹闭10 min后,不同开放时问段(4 min,8 min,10 min,15 min,30 min),开放不同脑血流量(1/ 4,1/2,一次性全开放)和单纯血液稀释后分别观察缺血海马CA区c-fos蛋白的表达,及缺血区大脑半球的改善状况。结果开放15 min,1/2脑血流量时c-fos蛋白表达最高(P<0.05),海马CA区缺血损害改善最明显,开放15 min,全脑血流量一次性开放时海马CA区损害最严重。结论(1)在适应性灌注流量中,脑缺血海马区c-fos的表达和神经元凋亡呈反相作用关系;(2)低流量灌注有明显改善脑缺血的作用,夹闭10min后, 开放1/2脑血流量,持续15 min的效果比一次性再灌注开放效果要好。     

亚低温对大鼠短暂全脑缺血后神经元凋亡的影响

目的 探讨亚低温对大鼠脑缺血后神经元凋亡的影响，揭示亚低温的部分神经保护机制。方法 采用“双侧颈总动脉阻断＋全身低血压”方法来建立大鼠短暂性全脑缺血模型。用神经元尼氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元损害情况；原位细胞凋亡检测法（TUNEL染色）及电镜观察脑缺血后CA1区神经元凋亡情况。结果 与假手术组、低温缺血组相比，常温缺血组海马CA1区神经元缺失明显（P＜0．01）。常温及低温缺血组海马CA1区均存在神经元凋亡，但低温缺血组海马CA1区凋亡神经元数明显少于缺血组（P＜0．01）。结论 经“双侧颈总动脉阻断＋全身低血压”方法建立的大鼠短暂全脑缺血模型证实了亚低温的脑保护作用。全脑缺血后的迟发性神经元死亡很可能经由凋亡途径，而亚低温可通过抑制缺血性神经元凋亡而发挥一定的神经保护作用。     

亚低温对缺血性神经元凋亡、细胞色素C释放的影响

通过大鼠短暂全脑缺血模型来探讨亚低温对大鼠脑缺血后细胞色素C(CytochromeC ,CytC)释放及缺血性神经元凋亡的影响 ,揭示亚低温的部分神经保护机制。用原位细胞凋亡检测法 (TUNEL染色 )检测及电镜观察脑缺血后大鼠脑海马CA1区神经元凋亡发生情况 ;免疫组织化学法测定脑缺血后大鼠脑海马区神经元中细胞色素C释放情况。结果显示 :①低温缺血组海马CA1区凋亡神经元数明显少于常温缺血组 (P <0 .0 1) ;②低温缺血3h组海马CA1区神经元CytC阳性表达低于常温缺血 3h组 (P <0 .0 1)。据此认为 ,全脑缺血后的迟发性神经元死亡很可能经由凋亡途径 ,而CytC激活、释放是缺血性神经元凋亡的一个关键事件。亚低温可抑制CytC的释放 ,推测经此途径减少缺血性神经元凋亡而发挥一定的神经保护作用。     

亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区c-Jun蛋白表达的影响

目的研究亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元的保护作用,并探讨其可能的机制。方法采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血模型。SD大鼠,随机分为假手术组(SH组)、常温组(IR组)和亚低温组(HIR组)。各组在全脑缺血15min后分别再灌注6h、12h、1d、3d,采用苏木素-伊红(HE)染色观察各时间点海马CA1区细胞形态学变化和TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,免疫印迹检测c-Jun蛋白表达。结果(1)HE染色结果 IR组和HIR组于全脑缺血再灌注后6h,HE染色未见明显改变,IR组缺血再灌注1d时CA1区出现严重改变,3d时损伤最严重,出现细胞数目减少,细胞胞体缩小、胞核固缩深染,损伤严重,排列紊乱,核膜不清,核仁消失。而HIR组海马存活的锥体细胞数较之IR组12h、1d、3d时间点均明显增加(P<0.05)。(2)TUNEL标记IR组于缺血再灌注后6h在海马CA1区阳性细胞开始增多,缺血再灌注1 d时阳性细胞数最多。而HIR组各时间点阳性细胞数均较IR组明显减少(P<0.01)。(3)免疫印迹结果全脑缺血再灌注后6h c-Jun蛋白在IR组海马CA1区表达开始增加,12h达高峰,持续到3d;HIR组在各时间点的表达均弱于IR组(P<0.01)。结论亚低温通过减少海马CA1区c-Jun的表达,抑制海马CA1区神经元的凋亡,可能是亚低温脑保护作用的机制之一。     

小檗碱对大鼠脑缺血后MCP-1表达的影响

目的探讨小檗碱处理对大鼠脑缺血后单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响及小檗碱对脑缺血的神经保护作用。方法建立大鼠短暂性全脑缺血模型，采用尼氏体亚甲蓝染色观察脑缺血后大鼠脑海马CA1区神经元存活情况；采用免疫荧光染色方法检测脑缺血后大鼠缺血脑组织中MCP-1的表达情况。结果（1）与假手术组比较，脑缺血组大鼠脑海马CA1区神经元明显缺失，而小檗碱处理组大鼠脑海马CA1区神经元存活数明显多于缺血对照组；（2）与假手术组比较，脑缺血组大鼠脑缺血区MCP-1表达显著增多，而小檗碱处理显著降低了大鼠脑缺血区MCP-1的阳性表达。结论脑缺血引起MCP-1表达上调，提示MCP-1可能参与脑缺血损伤。小檗碱可抑制缺血脑组织MCP-1的表达，推测其可能经此途径减轻脑缺血的炎症反应而发挥一定的神经保护作用。     

硫酸镁对脑缺血再灌注大鼠脑组织Bcl-2表达的影响及神经保护作用

目的探讨硫酸镁对脑缺血再灌注大鼠脑组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响及脑保护作用。方法将32只大鼠随机分为缺血组(n=15)、硫酸镁组(n=15)和正常对照组(n=2)。采用改良的Pulsinelli法建立脑缺血再灌注大鼠模型;制模后分别给予缺血组和硫酸镁组大鼠腹腔注射生理盐水(1.5 ml/d)及硫酸镁(90 mg/kg.d)。缺血再灌注第1、3、7 d分别观察各组大鼠海马CA1区病理学改变和Bcl-2的表达水平。结果正常对照组大鼠海马CA1区神经细胞数量多,排列整齐。缺血再灌注1 d时,缺血组及硫酸镁组大鼠海马CA1区神经元均未见明显死亡;3 d时,缺血组海马CA1区神经元可见少量死亡,残存神经细胞呈较严重缺血性改变,硫酸镁组海马CA1区神经元无明显死亡;7 d时,缺血组海马CA1区神经元大部分死亡,伴有小胶质细胞增生,硫酸镁组仅见部分神经元死亡。与缺血组相比,硫酸镁组神经元受损程度较轻,坏死区较小。硫酸镁组缺血再灌注各时间点大鼠Bcl-2阳性细胞较缺血组均明显增加(均P<0.05)。结论硫酸镁能上调脑组织Bcl-2的表达,对缺血再灌注大鼠的脑组织有明显的保护作用。     

沙土鼠全脑梯度再灌注的脑保护实验研究

目的 动态研究不同灌注时间和灌注量全脑组织缺血损害的恢复程度和即早基因的表达，以探明梯度再灌注的脑保护作用机制。方法 将沙土鼠随机分为4组：实验组夹闭两侧颈总动脉，造成沙土鼠全脑缺血模型，夹闭10 min后开放10 min，开放不同脑血流量(1／4开放组，1／2开放组，一次性全开放组)，分别检测3组及单纯血液稀释组缺血海马CA区C-fos蛋白的表达，以及缺血区大脑半球的改善状况。结果 开放10 min、1／2脑血流量时C—fos蛋白表达最高(P＜0．05)，海马CA区缺血损害改善最明显；开放10 min、全脑血流量一次性开放时海马CA区损害最严重。结论 ①在梯度再灌注流量中，脑缺血海马区C-fos的表达和神经元凋亡呈反相作用关系；②低流量灌注有明显改善脑缺血的作用；⑧夹闭10 min后，开放1／2脑血流量，持续10 min的效果比一次性再灌注开放效果要好。     

沙鼠脑缺血耐受的组织学变化及HSP在其中的作用

目的 :观察脑缺血耐受时的组织学变化及 HSP在其中的作用。方法 :通过 HE染色观察脑缺血耐受时的组织学变化 ,并通过免疫组化染色 ,了解 HSP70及 HSP2 7在其中的作用。结果 :一次性 5分钟缺血后 7天海马 CA1区神经元大多坏死 ,若在缺血前给予 2分钟的缺血预处理 ,该区神经元大多保留 ,表现出明显的保护作用。只给一次性 5分钟缺血 ,海马 CA1区神经元无 HSP70染色。若在缺血前给予预处理 ,海马 CA1区神经元可见明显 HSP70染色。而HSP2 7主要在胶质细胞表达 ,海马区的神经元未见其表达。结论 :缺血前给予预处理对以后的缺血有保护作用 ;在缺血耐受过程中 ,HSP70表达出一定的保护作用。     

小檗碱对小鼠全脑缺血后神经元凋亡相关基因的影响

目的 探讨小檗碱对小鼠全脑缺血后神经元凋亡相关基因的影响,以了解小檗碱保护脑缺血的机制,为其开发利用提供理论依据。方法 利用改良的Pulsinelli-Brierley4血管闭塞法制成小鼠全脑缺血再灌注动物模型。小檗碱用量为1mg/kg,于术前30min,术后每日1次,腹腔注射。免疫组织化学技术检测凋亡相关基因Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果 正常组海马区未见Bcl-2或Bax蛋白表达;缺血组再灌注6h海马CA3区可见Bcl-2阳性细胞,24h达到高峰,48h开始下降;小檗碱治疗组再灌注24h、48h及168hBcl-2阳性细胞明显减少（P＜0．01）。缺血组再灌注6h海马CA1区可见Bax阳性细胞;48h达高峰;168h明显下降;小檗碱组再灌注24h,48h及168hBax阳性细胞数明显减少（P＜0．01）。结论 小檗碱可以增加小鼠全脑缺血后海马CA3区bcl-2基因的表达,降低CA1区Bax基因的表达,从而减少凋亡的发生,可能为其保护脑缺血的机制之一。