TRPM8抑制剂BCTC对前列腺癌DU145细胞的抑癌作用

目的:探讨TRPM8抑制剂BCTC对前列腺癌DU145细胞的抑癌作用。方法:PCR和Western blot检测TRPM8的表达;MTT法检测DU145细胞增殖能力;划痕实验、transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测周期相关蛋白(p-AKT,p-GSK-3β,cyclin B1,cyclin D1,CDK2/4/6)、凋亡相关蛋白(Bcl-2,Bax,caspase-3)、迁移相关蛋白(pFAK,MMP2)表达水平的变化。结果:PCR和Western blot提示TRPM8在前列腺癌DU145细胞中表达显著高于正常前列腺上皮PNT1A细胞;BCTC处理后,DU145细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞周期表现为G0/G1阻滞期(P<0.05),迁移、侵袭能力也明显下降(P<0.05),但凋亡相关实验显示BCTC并不引起细胞凋亡(P>0.05)。Western blot显示BCTC能下调p-AKT,cyclin D1,CDK2,CDK6,MMP2和pFAK等的表达,而上调p-GSK-3β的表达。结论:TRPM8抑制剂BCTC能抑制前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力,是一个极具潜力的抗前列腺癌药物。     

丝裂霉素C对巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的影响

为研究和探讨抗肿瘤药物丝裂霉素(mitomycin C,MMC)对巨噬细胞的作用,MMC能否增强巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的作用以及与免疫活化剂厌氧棒状杆菌菌苗(CP)的共同作用,本实验将不同剂量MMC,CP,CP+MMC分别注入小鼠腹腔内,收集其中的巨噬细胞,并与肺癌细胞(A549)混合培养,运用相差显微镜、光镜及显微分光光度计等方法进行观察和检测。发现MMC对巨噬细胞具有活化作用,受其作用的A549胞浆内空泡及颗粒增多、边界不清。不同实验组巨噬细胞计数提示,各MMC组较对照组有不同程度减少,CP组明显增加,CP+MMC组增加更为明显。DNA相对含量测定发现对照组及各实验组间巨噬细胞DNA量无显著差异(P>0.05)。而活化的巨噬细胞与A549作用后,A549 DNA的曲线明显左移,DNA量较少的细胞增多,与对照组相比有显著差异(P<0.05),但各实验组之间无明显差异(P>0.05)。由此可见,MMC对巨噬细胞杀伤肿瘤作用具有一定的影响。     

万珂增强NK 细胞对前列腺癌细胞杀伤作用的实验研究

目的 探讨万珂是否能够增强自然杀伤细胞（NK）对前列腺癌细胞的杀伤作用及其作用机制。方法 以激素依赖性和激素非依赖性2 种前列腺癌细胞株LNCaP 和DU145 为模型,不同浓度（0、10和20 nmol/L）万珂处理2 种前列腺癌细胞株24 h。采用Annexin-V/PI 法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测人白细胞抗原-ABC（HLA-ABC）蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测HLA-C mRNA 的表达。结果 万珂能提高2 种细胞系对NK 细胞介导的杀伤作用的敏感性,而且在激素非依赖性前列腺细胞株DU145 细胞中表现更明显。万珂能下调DU145 细胞表面HLA- Ⅰ类分子水平。相对DU145 细胞,万珂对激素依赖性前列腺癌LNCaP 细胞不敏感,万珂处理后LNCaP 细胞中HLA- Ⅰ类分子也没有改变。结论 万珂通过下调HLA- Ⅰ类分子的表达,增强NK 细胞对前列腺癌的杀伤能力,特别是增强对激素非依赖性前列腺细胞的杀伤,该作用能提高前列腺癌的治疗水平。     

前列腺癌相关风险位点rs1800477对前列腺癌细胞系DU145的功能研究

目的:验证前期研究发现的前列腺癌相关风险位点rs 1800477对前列腺癌细胞转移的影响.方法:以前列腺癌细胞DU145为对象,针对位点rs1800477构建慢病毒载体,分4组转染到DU 145细胞,并进行划痕实验,比较各组的迁移率.于6h和24 h测量各组细胞迁移距离并计算迁移率.结果:与空白对照组比较野生型在6h和24 h均有统计学意义,但突变型组无统计学意义.结论:野生型rs1800477对前列腺癌细胞系DU145的迁移能力有影响.     

青藤碱对人前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究天然化合物青藤碱对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测青藤碱对DU145细胞增殖的影响;采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测青藤碱对DU145细胞凋亡的影响;采用电子显微镜观察青藤碱作用DU145细胞后细胞超微结构的变化.结果 MTT结果显示青藤碱浓度在100～400 μmol/L时,作用24、48小时后,细胞增殖受到抑制,呈现明显时间剂量效应关系;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法显示青藤碱(0、200、400 μmol/L)作用于细胞24小时后,细胞凋亡率升高,且呈剂量效应关系;电子显微镜下青藤碱处理组细胞可见染色质浓聚、边集等典型的凋亡改变,而空白对照组没有相应的变化.结论 青藤碱能有效抑制人前列腺癌DU145细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

人宫颈癌细胞对丝裂霉素耐药及逆转的实验研究

目的：探讨ＳＤＺＰＳＣ８３３和维拉帕米（Ｖｅｒａｐａｍｉｌ，ＶＥＲ）对ＭＭＣ体外增敏作用。方法：以人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞和耐药亚系Ｈｅｌａ／ＭＭＣ细胞为材料，观察了ＰＳＣ８３３和ＶＥＲ对ＭＭＣ体外增敏作用。结果：无毒剂量的ＰＳＣ８３３和ＶＥＲ（１～３μｇ／ｍｌ）可显著增加ＭＭＣ的细胞毒作用且可基本克服Ｈｅｌａ／ＭＭＣ细胞对ＭＭＣ５倍的耐药，＾３Ｈ－ＴｄＲ实验表明，ＶＥＲ或ＰＳＣ８３３与ＭＭＣ联用可增     

大蒜素对前列腺癌 DU145细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探索大蒜素对体外培养的前列腺癌D U 145细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用不同浓度的大蒜素分别处理DU145细胞24、48、72h ,M T T比色法检测细胞存活率;流式细胞仪检测大蒜素处理后细胞周期的变化。结果与对照组相比,大蒜素处理显著降低DU145细胞存活率,并对细胞周期产生影响,阻止在G2／M期。结论大蒜素可以抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,抑制细胞周期。     

溶瘤病毒联合丝裂霉素对膀胱癌细胞体内外杀伤的实验研究

目的 探讨溶瘤病毒与丝裂霉素联合应用对膀胱癌T-24细胞体内外生长的抑制效应和机制.方法 将溶瘤病毒不同的感染复数或与丝裂霉素（0.1 mg/L）联合应用,通过细胞生长抑制实验及裸鼠皮下移植瘤模型,观察其对膀胱癌T-24细胞的作用及其机制.结果 与单独应用相比,溶瘤病毒与低剂量的MMC联合可明显抑制T-24细胞体外生长,诱导T-24细胞凋亡,裸鼠体内肿瘤发生时间延迟,4周后肿瘤体积与单独应用时相比,差异有显著性（P＜0.05）.与体外处理结果一致.结论 溶瘤病毒与MMC联合应用可显著增强MMC对T-24细胞的杀伤作用,进一步提高膀胱癌的疗效.     

TRAIL联合低剂量顺铂诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法人前列腺癌细胞株LNCaP经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量顺铂(0.2～1.0 mg/ml)以及联合用药处理24h后,观察其生存率以及相关蛋白的动态变化.结果 LNCaP细胞株单独经过TRAIL或低剂量顺铂处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.经1.0 mg/ml顺铂处理后的LNCaP细胞株,其凋亡抑制蛋白BCL-2的表达随时间延长而明显下降.结论低剂量顺铂可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用;凋亡抑制蛋白BCL-2可能是肿瘤细胞抵抗TRAIL诱导凋亡机制中的一个重要因素.     

TRAIL联合低剂量顺铂诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法人前列腺癌细胞株LNCaP经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量顺铂(0.2～1.0 mg/ml)以及联合用药处理24h后,观察其生存率以及相关蛋白的动态变化.结果 LNCaP细胞株单独经过TRAIL或低剂量顺铂处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.经1.0 mg/ml顺铂处理后的LNCaP细胞株,其凋亡抑制蛋白BCL-2的表达随时间延长而明显下降.结论低剂量顺铂可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用;凋亡抑制蛋白BCL-2可能是肿瘤细胞抵抗TRAIL诱导凋亡机制中的一个重要因素.     

TRAIL抑制原代卵巢癌细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对原代卵巢癌细胞的生长抑制和诱导凋亡情况。方法选择12例患者的原代卵巢癌细胞,每例癌细胞分为6组,分别给予TRAIL 0、5、10、20、50、100μg/L,分别作用24、48、72、96 h。(1)噻唑蓝(MTT)比色法检测TRAIL对原代卵巢癌细胞生长抑制情况。(2)免疫荧光细胞化学法检测原代卵巢癌细胞的凋亡。结果TRAIL对原代卵巢癌细胞的抑制呈剂量依赖性,浓度大于20μg/L后抑制下降;相同浓度TRAIL对原代卵巢癌细胞的抑制呈时间依赖性,72 h后抑制下降;TRAIL浓度相同时随作用时间延长凋亡细胞数增多,5μg/L 24、96 h凋亡细胞数分别为(28±1.18)和(55±4.12),凋亡也呈剂量、时间依赖性。结论TRAIL抑制了原代卵巢癌细胞的增殖、生长并诱导了癌细胞的凋亡。     

TRAIL蛋白联合吉西他宾对肝癌细胞的体外杀伤作用

目的研究肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体（TRAIL）和吉西他宾对肝癌细胞的杀伤作用及联合作用。方法将生长良好的肝癌细胞接种于96孔板,培养24h后,加入不同浓度TRAIL和吉西他宾,倒置显微镜下观察细胞形态变化;利用非同位素细胞增殖试剂盒和流式细胞仪分别检测细胞的生长抑制率和细胞凋亡。结果（1）TRAIL组、吉西他宾组、TRAIL和吉西他宾联合用药组24h后肝癌细胞几乎全部从培养瓶壁脱落;（2）TRAIL与吉西他宾对10株肝癌细胞均有不同程度的生长抑制作用。其中ch—hep-2对TRAIL及吉西他宾最敏感,其IC50分别为24．33ng／ml和328mg／ml;当TRAIL蛋白浓度为500ng／ml时,吉西他宾对ch—hep-2的生长抑制作用明显增强,IC50为065mg／ml,其细胞毒作用增强5倍,流式细胞仪检测两者作用后的细胞,均可检测到细胞调亡峰。结论TRAIL和吉西他宾协同诱导肝癌细胞发生调亡,TRAIL蛋白可明显增加吉西他宾的杀伤效应,它可作为临床肝癌化疗的辅助药物。     

TRAIL联合5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡

目的 探讨TRAIL与化疗药物5氟尿嘧啶(5-Fu)单独和联合对喉癌HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响并探讨其可能机制.方法 不同浓度的TRAIt、5-FU单独及联合作用于HEP-2细胞株,MTT法检测其增殖抑制作用,FCM法检测细胞凋亡率,荧光显微镜下观察细胞形态,Western blot法检测c-FLIP、NF-κB蛋白的表达.结果 TRAIL与5-Fu联合作用于HEP-2细胞株时,其抑制率、凋亡率较单独作用时高,c-FuP、NF-κB蛋白的表达水平低于单独作用时的表达水平.结论 TRAIL与5-Fu联合作用有协同诱导 HEP-2细胞株凋亡的作用,可能机制为下凋c-FLIP、NF-κB蛋白的表达水平.     

TRAIL联合奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合奥沙利铂(oxaliplatin)对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 应用MTT法分别检测TRAIL组、奥沙利铂组及联合组的细胞抑制率,Annexin Ⅴ-FITC/PI染色,流式细胞仪检测SW480细胞的凋亡率.结果 SW480细胞对TRAIL不敏感,对奥沙利铂相对敏感,TRAIL与亚毒性浓度的奥沙利铂联用对细胞的杀伤作用显著增强;亚毒性浓度的TRAIL、奥沙利铂及联合组作用SW480细胞24h的抑制率分别为8.62%,60.51%,81.28%;凋亡率分别为2.43%,11.76%,18.37%,流式细胞学证实这种杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现.结论 TRAIL能显著提高奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用,此协同作用主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现.     

白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制

研究白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制。采用MTT检测细胞增殖情况,活性氧试剂盒分析细胞内ROS水平;流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期的变化。Western blot检测凋亡相关蛋白以及相关通路蛋白表达。结果表明,经不同药物浓度处理,白藜芦醇可以诱导DU145细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于G₀/G₁期,提高细胞内ROS水平,降低细胞内线粒体膜电位水平,并呈剂量依赖性。白藜芦醇通过上调Bax蛋白的表达和抑制Bcl-2蛋白表达,促使Bax/Bcl-2比值升高,激活Caspase级联反应从而诱导细胞发生凋亡。进一步研究发现白藜芦醇可以升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位水平,从而通过线粒体途径诱导DU145细胞发生凋亡。因此,白藜芦醇可能通过ROS-线粒体途径诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞的杀伤作用研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR)在肺癌细胞株A549中的表达及TRAIL对肺癌细胞的杀伤作用,探讨TRAIL治疗肺癌的可行性。方法采用RTPCR检测非小细胞肺癌细胞株A549TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL处理A549,MTT法检测药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。采用不同浓度TRAIL与不同浓度的化疗药物、中药联合作用于A549,观察其疗效。结果肺癌细胞株A549中有DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。经TRAIL(100μg/L)处理48h,肺癌细胞凋亡发生率约5%。TRAIL联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。结论A549中存在TRAILR类型的表达差异。TRAIL可诱导A549凋亡,联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。     

青蒿琥酯和TRAIL对前列腺癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

目的探讨青蒿琥酯和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞(PC-3、LNCaP)凋亡的诱导作用。方法培养前列腺癌PC-3、LNCaP细胞,分别加入不同浓度的青蒿琥酯和TRAIL,随机分为7个组:对照组、青蒿琥酯Ⅰ组(低剂量组)、青蒿琥酯Ⅱ组(高剂量组)、TRAILⅠ组(低剂量组)、TRAILⅡ组(高剂量组)、TRAIL(1 ng/mL)加青蒿琥酯(1mmol/L)Ⅰ组及TRAIL(1 ng/mL)加青蒿琥酯(5 mmol/L)Ⅱ组。流式细胞仪检测青蒿琥酯和TRAIL诱导前列腺癌细胞凋亡的凋亡率。结果青蒿琥酯和TRAIL均可增加前列腺癌细胞凋亡的凋亡率,二者联合使用诱导的前列腺癌细胞的凋亡率明显高于两种药物单独使用。结论青蒿琥酯与TRAIL联合使用对前列腺癌存在诱导凋亡的协同作用。青蒿琥酯能诱导提高前列腺癌细胞对TRAIL的敏感性,加强TRAIL的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

甲基化硒酸对人前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响

目的：观察甲基化硒酸（MSA）对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法观察1.25、2.50和5.00 μmol•L^-1MSA对DU145细胞增殖活力的抑制作用；吖啶橙染色观察MSA诱导细胞凋亡情况；流式细胞术分析细胞周期及凋亡，并计算细胞平均凋亡指数；免疫细胞化学技术观察细胞内激活的caspase-3的表达情况。结果：经1.25、2.50和5.00　 μmol•L^-1MSA处理48　h后，DU145细胞生长抑制率分别为16.35%、38.10%和73.54%，3组间比较差异有显著性（P<0.01），随MSA浓度升高细胞生长抑制率增加，呈明显的剂量依赖性。吖啶橙荧光染色可见，经1.25、2.50和5.00　 μmol•L^-1MSA处理后的细胞呈明显凋亡形态，并随药物剂量增加凋亡细胞数增多；流式细胞术结果显示，经1.25、2.50和5.00　 μmol•L^-1MSA处理48 h后，细胞凋亡率分别为5.34%、8.71%和13.60%，3组间比较差异有显著性（P<0.05）,随MSA浓度升高细胞凋亡率升高，呈剂量依赖关系；免疫细胞化学染色结果显示，随着MSA剂量增加，细胞内激活的caspase-3表达上调。结论:MSA对DU145细胞具有明显的抗肿瘤作用，其机制可能与激活的caspase途径诱导细胞凋亡有关。     

hepaCAM与藏花素联合应用对前列腺癌细胞增殖的影响

目的：研究肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM）与藏花素联用对前列腺癌（prostate cancer,PCa）细胞DU145增殖的影响。方法：四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）法检测细胞增殖效应;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;实时荧光定量PCR、Western blot法检测细胞周期调节因子cyclinD1及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达变化。结果：hepaCAM过表达腺病毒与藏花素单独使用均能抑制PCa细胞DU145的增殖[48 h抑制率分别为（12.0±2.0）%,（22.0±1.0）%],但两者联用比单独应用效果更加明显[48 h抑制率为（54.0±1.0）%,P=0.000]。Real-time PCR结果显示,hepaCAM过表达腺病毒及藏花素联合作用与藏花素单独使用相比,cyclinD1 mRNA表达下调（P=0.048）;两者联合应用与hepaCAM过表达腺病毒或藏花素单独使用相比,PCNA mRNA水平下调（P=0.047,P=0.006）。Western blot结果显示,与单独使用hepaCAM过表达腺病毒或藏花素相比,两者联用组cyclinD1蛋白表达明显降低（P=0.002,P=0.002）,同时PCNA蛋白表达也降低（P=0.000,P=0.003）。结论：hepaCAM基因过表达腺病毒与藏花素联用对PCa DU145细胞增殖的抑制有明显的协同作用,作用机制与下调cyclinD1和PCNA的表达有关。