γ-羟基丁酸对局部脑缺血再灌注损伤的保护作用

γ- 氨基丁酸 (ＧＡＢＡ)类药物可治疗脑缺血后谷氨酸(ＥＡＡ)大量释放引起的神经元损伤。我们观察γ 羟基丁酸(ＧＨＢＡ)对大鼠局部脑缺血再灌注后脑组织ＥＡＡ含量的影响及其与脑梗死体积和脑水肿的关系 ,研究ＧＨＢＡ对脑缺血再灌注损伤的保护作用。材料与方法 :雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 180只 ,体重 ( 3 0 0± 15 )ｇ,随机分为正常组、单纯脑缺血 1ｈ(缺血组 )、脑缺血 1ｈ再灌注 2ｈ和 5ｈ组 (再灌注组 ) ,缺血组和再灌注组分别加ＧＨＢＡ(ＧＨＢＡ组 )及生理盐水 (生理盐水组 ) ,每组 7只。应用改进Ｌｏｎｇａ方法建立阻断左侧大脑中动脉…     

大鼠脑缺血再灌注区ICAM—1的表达与粘附性变化的实验研究

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后缺血区ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达及白细胞和血管内皮细胞间粘附性的变化。方法:４０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为正常组、假手术组和缺血２ｈ再灌注２、４、１２、２４、４８、９６ｈ组,原位杂交和兔疫组化法检测ＩＣＡＭ、１ ｍＲＮＡ和蛋白表达,超高速摄录像系统观察缺血区微血管内白细胞与内皮细胞间的粘附性变化。结果:缺血再灌注后局部脑组织ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达以及微动脉内白细胞与内皮细胞间粘附性均明显增高。结论:脑缺血再灌注后ＩＣＡＭ－１表达增高,介导了白细胞与血管内皮细胞间的粘附增强,参与了缺血再灌注损伤。     

IL—1β和IL—6在脑缺血再灌注微血管内皮细胞炎症反应中的作用

脑缺血再灌注后微血管内皮细胞损伤病理过程有许多炎症介质 ,ＩＬ 1β和ＩＬ 6是两种重要的细胞因子。本实验通过建立大鼠全脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组化方法研究了脑缺血再灌注过程中ＩＬ 1β和ＩＬ 6的表达 ,以了解微血管内皮细胞炎症损害的病理生理过程。1　材料和方法健康雄性ＳＤ大鼠 42只 ,体重 2 5 0～ 30 0 ｇ ,随机分为假手术组和脑缺血再灌注组。手术组 35只 ,随机分为 7个时间点 ,即脑缺血再灌注 (1ｈ、3ｈ、6ｈ、12ｈ、2 4ｈ、48ｈ、72ｈ ,每个时间点 5只 ) ;假手术组 7只。采用六血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。麻…     

缺血预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马CA1区低氧诱导因子-1α及存活素表达的影响

目的探讨缺血预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马CA1区低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及存活素表达的影响。方法健康雄性SD大鼠130只随机分为假手术组(SO组,n=10)、局灶性脑缺血再灌注组(MCAO组,n=60)、缺血预处理组(BIP组,n=60),MCAO组和BIP组又分别分为再灌注2 h、6 h、12h、24 h、48 h、72 h 6个亚组,每亚组10只大鼠。采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型。BIP组在缺血前24h给予10 min的预缺血。采用免疫组化染色法检测HIF-1α、存活素的阳性细胞数。采用Western blot法检测HIF-1α、存活素的蛋白相对含量。结果与SO组比较,MCAO组和BIP组各时间点亚组大鼠缺血侧海马CA1区HIF-1α及存活素的阳性细胞数及蛋白相对含量均明显升高(均P0.05)。与MCAO组比较,BIP组各时间点亚组大鼠缺血侧海马CA1区HIF-1α及存活素的阳性细胞数及蛋白相对含量均明显升高(均P0.05)。在MCAO组和BIP组中,大鼠缺血侧海马CA1区HIF-1α及存活素的阳性细胞数及蛋白相对含量均在再灌注24 h时达到最高峰(均P0.05)。结论缺血预处理能够诱导局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马CA1区HIF-1α、存活素表达上调,这或许与脑缺血耐受的产生机制有关。     

大鼠脑缺血再灌注区ICAM-1表达与白细胞浸润的观察及丹参的影响

目的　观察细胞间粘附分子（ Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１） 蛋白在大鼠脑缺血再灌注的不同时程脑组织中的表达与中性白细胞浸润程度的关系及丹参对它们的影响。方法　 Ｓ Ｄ大鼠分为３ 组：假手术组、对照组及丹参组。大脑中动脉缺血２ ｈ 再灌注２ ｈ 、１２ ｈ、２４ ｈ 、４８ ｈ 、７２ ｈ 、７ ｄ、１４ ｄ 后,分别进行 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 免疫组织化学及组织 Ｈ Ｅ染色。结果　在脑缺血再灌早期,脑微血管内皮细胞 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 免疫反应开始逐渐增加,再灌注４８ ｈ 达到高峰,再灌注１４ ｄ 接近正常水平,同时脑缺血区中性白细胞浸润也随之增加,在时程上与 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 表达同步。丹参组,再灌注４８ ｈ 后, Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 免疫阳性血管数及中性白细胞的浸润比同时间对照组明显降低。结论　脑缺血 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 的表达与中性白细胞浸润密切相关,丹参能降低 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 的表达,抑制中性白细胞的浸润。     

短时间诱导高血压对急性脑缺血再灌注大鼠梗死体积的影响

目的探讨在不同缺血时间诱导高血压对急性局部脑缺血再灌注大鼠梗死体积的影响。方法61只年龄30～40周的SD大鼠,随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注组和升压组。通过静脉滴注新福林对升压组动物进行诱导高血压治疗。结果(1)缺血再灌注组的梗死体积大于相应的缺血组。(2)升压组的梗死体积小于缺血再灌注组和缺血4h组。(3)在缺血4h再灌注2h升压组中,再灌注前15min升压组的梗死体积小于再灌注后30min升压组。结论(1)诱导高血压治疗能有效地减少急性脑缺血再灌注大鼠梗死体积。(2)再灌注前升压疗效优于再灌注后升压。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后早期生长反应基因-1 mRNA的表达

目的探讨早期生长反应基因-1( early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200 ～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情况。结果 (1)原位杂交结果:假手术组神经元及胶质细胞为轻度阳性表达。缺血2 h再灌注2 h后,缺血侧Egr-1 mRNA细胞阳性表达明显增强。再灌注4 h时Egr-1 mRNA细胞阳性表达最高,再灌注22 h Egr-1 mRNA细胞阳性表达下降,至166 h时下降更加明显,但仍显著高于假手术组。(2)RT-PCR结果:大鼠脑缺血再灌注后缺血侧Egr-1 mRNA的表达明显高于假手术组,P<0.01。动态观察发现,脑缺血2h再灌注2 h后,Egr-1 mRNA即高表达,缺血2 h再灌注4 h达高峰,再灌注46 h已明显下降,但仍高于假手术组,P<0.01,随缺血再灌注时间延长,Egr-1 mRNA表达又逐渐增多,至再灌注166 h其表达亦明显高于假手术组,P<0.01。结论缺血再灌注后Egr-1 mRNA有规律性表达。     

托吡酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨托吡酯(TPM)对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其机制。方法将健康30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和TPM干预组。用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,TPM干预组给予TPM80mg/kg腹腔注射,2次。缺血再灌注24h时进行神经功能评分、TTC染色法测量梗死体积、高效液相色谱分析法测定脑组织谷氨酸(Glu)及γ-氨基丁酸(GABA)的含量;免疫组化法检测GABAA受体阳性表达。结果(1)与缺血再灌注组比较,TPM干预组神经功能评分明显增高(P<0.01),脑梗死体积减少(P<0.05);(2)TPM干预组缺血侧脑皮质Glu含量显著低于缺血再灌注组(P<0.01),与假手术组比较差异无显著性;GABA含量显著高于假手术组和缺血再灌注组(均P<0.01);(3)TPM干预组缺血侧脑皮质GABAA受体阳性细胞数显著高于缺血再灌注组(P<0.01)。结论TPM对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能为TPM降低兴奋性递质Glu水平、增加抑制性递质GABA的释放及GABAA受体的表达。     

线粒体钙,钙调素,兴奋性氨基酸丙二醛在脑缺血再灌注中变？…

目的：观察脑缺血再灌注中线粒体钙,钙调素,兴奋性氨基酸,丙二醛的动态变化。研究探索其变化时相,为阻抑其自稳平衡紊乱的发生提供科学的时间效应点。方法;采用大鼠全脑缺血再灌注模型（４ＶＯ）,测定假手术组,缺血３０ｍｉｎ再灌注１ｈ,６ｈ,１２ｈ组大 皮层,海马组织ＭＣａ,ＣａＭ,ＥＡＡ,ＭＤＡ的含量。结果：缺血３０ｍｉｈ再灌注１ｈ鼠大脑皮层,海马组织ＭＣａ,ＣａＭ,ＭＤＡ含量显著升高,ＥＡＡ含量显著降低     

骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血大鼠的实验研究

目的评价骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠脑缺血后肌力、平衡力及空间学习能力的改善作用。方法栓塞大鼠大脑中动脉,制作40只脑缺血2 h再灌注动物模型,再灌注24 h后对移植组(20只)移植异体BMSCs。采用抓绳实验、平衡木行走实验及水迷宫实验,在缺血再灌注后1周、2周、4周和12周时对大鼠肌力、平衡力及空间学习能力进行检测,观察BMSCs移植后脑缺血大鼠神经功能恢复情况。结果脑缺血可导致大鼠肌力、平衡力及空间学习能力下降。缺血后随再灌注时间延长,移植组与对照组大鼠肌力、平衡力及空间学习能力均有一定程度的恢复,而移植组较对照组有明显改善。结论BMSCs移植可较显著地促进脑缺血大鼠肌力、平衡力及空间学习能力的改善。     

塞来昔布对高脂血症大鼠脑缺血再灌注后MMP-9和COX-2表达的影响

目的观察塞来昔布对高脂血症(hyperlipidemia,HL)大鼠脑缺血再灌注损伤后基质金属蛋白酶-9(metallopro-teinase-9,MMP-9)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响。方法健康雄性Wister大鼠70只随机分为4组:正常假手术组(S组)10只、正常缺血再灌注组(nIR组)20只、高脂缺血再灌注组(hIR组)20只和高脂缺血再灌注塞来昔布干预组(C+hIR组)20只。后3组又分为缺血1 h再灌注12 h、24 h、48h 3个时间点。采用高脂饮食建立高脂血症大鼠模型,应用线栓法制做大鼠大脑中动脉栓塞模型。用免疫组化法检测脑组织MMP-9、COX-2的表达,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定梗死灶体积。结果在同一缺血再灌注时间点,与nIR组比较,hIR组、C+hIR组脑组织MMP-9、COX-2表达明显增高(P<0.01),hIR组梗死体积增大具有统计学意义(P<0.01),C+hIR组梗死体积增大具有统计学意义(P<0.05);与hIR组相比,C+hIR组脑组织MMP-9、COX-2表达下降、梗死体积减小(P<0.01),脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9、COX-2的表达有显著的相关性(r=0.835)。结论高脂血症合并脑缺血再灌注损伤病理过程中炎症反应起重要作用。塞来昔布对高脂脑缺血再灌注大鼠COX-2、MMP-9的过度表达产生抑制作用,干预炎症反应减轻脑缺血再灌注损伤。     

缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤神经保护作用的研究

目的探讨大鼠脑缺血后处理对缺血再灌注损伤后神经元的保护作用。方法健康雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组(SO组)、缺血再灌注对照组(MCAO组)、缺血后处理组(IPOC组)3组。采用线栓法制备大鼠MCAO模型及IPOC模型,分别用TTC染色法计算脑梗死体积、流式细胞术和ELISA法观察,对于大鼠缺血半暗带神经细胞凋亡率及血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量的影响。结果 (1)大鼠脑缺血再灌注后24h,IPOC组较MCAO组梗死体积明显减小(P<0.05);(2)MCAO组大鼠脑缺血再灌注24h细胞凋亡发生率及血清中NSE的含量较SO组显著增加(P<0.01);(3)IPOC组神经元凋亡发生率及血清NSE较MCAO组显著降低(P<0.05或0.01)。结论大鼠脑缺血后处理对缺血再灌注神经元损伤有保护作用。     

养血清脑颗粒对大脑缺血再灌注损伤认知功能改善作用分析

为了明确养血清脑颗粒对大脑缺血再灌注后有无认知功能改善,我科取3组大鼠做如下试验,经过分析总结归纳如下. 1材料与方法 1.1材料取成年雄性大鼠36只,提供充足食物、水,室温(25±1)℃ 1.2方法制备双侧颈总动脉结扎术后慢性脑缺血动物模型[1]胆碱能系统:每组取6只大鼠,分3组:(1)假手术组,不闭索双侧颈总动脉;(2)缺血再灌注组,该组夹闭大鼠双颈总动脉30min,而后解除结扎造成缺血再灌注损伤;(3)服用养血清脑水剂后夹闭大鼠双颈总动脉30min,而后解除结扎造成缺血再灌注损伤.     

脑缺血再灌注后脑组织C—fos基因表达与丹参的影响

采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,用地高辛精标记C-fos探针进行原位杂交。结果示缺血再灌注鼠栓塞侧和丹参组栓塞侧皮层及海马C-fos基因表达显著增多,但丹参组栓塞侧C-fos基因表达显著低于缺血再灌组(P<0.05),而两组栓塞对侧比较无显著差异。表明,脑缺血再灌注后脑组织C-fos基因表达显著增多,丹参能部分抑制缺血后C-fos基因的表达。     

氯沙坦对局部脑缺血大鼠脑血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA表达的影响

目的研究大鼠局部脑缺血后血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体mRNA(AT1RmRNA)基因的表达及氯沙坦对其影响。方法将36只SD雄性大鼠按时间段随机分为2组(每组各18只),每组再随机分为假手术组、缺血组和氯沙坦用药组3个亚组(每组各6只)。采用尼龙线栓塞大鼠大脑中动脉而造成局部脑缺血模型,应用RTPCR方法检测脑组织缺血24、48h后缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA的表达水平。结果脑缺血24h各组缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA表达水平无差异(p>0.05);脑缺血48h后与假手术组比较,缺血组缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA表达水平升高(P均<0.05);而与缺血组比较,氯沙坦用药组缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA表达水平降低(P均<0.05),但仍高于假手术组(P均<0.05)。结论氯沙坦能降低局部脑缺血后AT1RmRNA表达水平,AT1R在局部脑缺血中起着重要的作用,它可能成为缺血性脑卒中的一个治疗靶点。     

基于PI3K/Akt/NOS通路探讨鞣花酸在脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用

目的基于磷酯酰激醇3-激酶/蛋白激酶B/一氧化氮合酶(PI3K/Akt/NOS)通路探讨鞣花酸对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用。方法将36只雄性Wistar大鼠按数字表法随机分为3组:假手术(Sham)组、缺血再灌注组和鞣花酸预干预组,线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血120 min再灌注模型。鞣花酸预干预为造模前14 d按100 mg/(kg·d)给予鞣花酸灌胃,每组12只。运用神经功能缺损评分法评估各组动物的行为学变化,HE染色观察各组大鼠缺血侧脑组织病理改变,Western blotting法检测缺血侧脑组织凋亡蛋白及PI3K/Akt/NOS信号通路蛋白。结果 (1)鞣花酸可以提高缺血再灌注后神经功能评分(P0.05)。(2)模型组大鼠缺血侧脑组织凋亡相关蛋白(Bax/Bcl-2、CytC、Cleaved caspase-3)水平比Sham组明显升高(P0.05),鞣花酸组大鼠缺血侧脑组织凋亡相关蛋白(Bax/Bcl-2、CytC、Cleaved caspase-3)水平比模型组组明显减少(P0.05)。(3)模型组大鼠缺血侧脑组织中(p-Akt/Akt及p-eNOS/eNOS)比Sham组明显降低(P0.05),鞣花酸组大鼠缺血侧脑组织中(p-Akt/Akt及p-eNOS/eNOS)明显升高(P0.05)。结论鞣花酸可以激活PI3K/Akt通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,保护脑组织。     

鼠脑急性局灶性缺血早期磁共振波谱分析

磁共振波谱 (ＭＲＳ)能真正无损伤地测定活体组织在不同状态下各种代谢物的相对或绝对浓度以及动力学特性。我们采用自体血栓栓塞及线栓栓塞右侧大脑中动脉模型 ,研究急性缺血后ＭＲＳ以氮 乙酰天门冬氨酸 (ＮＡＡ)、胆碱 (Ｃｈｏ)及乳酸 (Ｌａｃ)为代表的各种代谢物的变化 ,了解缺血后神经活动分子水平的影像学信息。材料与方法 :健康ＳＤ大鼠 9只 ,体重 2 5 0～ 2 80ｇ ,雌雄不限 ,随机分为两组 :Ａ组 (4只 ) :自体血栓栓塞 1ｈ组 ;Ｂ组 (5只 ) :线栓栓塞 1ｈ组。Ａ组模型制作参考毛春等自体血栓制作方法 ,Ｂ组模型采用Ｎａｇａｓａｗａ方…     

缺血后适应对局灶性脑缺血再灌注大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的影响

目的研究缺血后适应对局灶性脑缺血再灌注大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组和缺血后适应组。建立大鼠大脑中动脉栓塞模型。假手术组线栓插入后立即拔出;脑缺血再灌注组大鼠脑缺血60 min后拔出线栓;缺血后适应组大鼠脑缺血60min后,再灌注20 s、再缺血20 s,反复5次后恢复再灌注。于术后24 h、72 h进行神经功能评分。应用单细胞凝胶电泳检测大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤情况。结果与假手术组比较,脑缺血再灌注组和缺血后适应组大鼠术后24 h、72 h神经功能评分明显降低,外周血淋巴细胞DNA单链与双链损伤均明显增加(均P0.01)。与脑缺血再灌注组比较,缺血后适应组大鼠术后24 h、72 h神经功能评分均明显增高,外周血淋巴细胞DNA单链与双链损伤均明显减少(均P0.01)。与术后24 h比较,脑缺血再灌注组和缺血后适应组大鼠术后72 h外周血淋巴细胞DNA单链与双链损伤均明显减少(P0.05~0.01)。结论缺血后适应可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后外周血淋巴细胞DNA的损伤,具有神经保护的作用。     

脑缺血再灌注损伤时 c-fos、c-jun 的表达和细胞凋亡

目的　研究脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡和原癌基因c fos、c jun表达。 方法　 8周龄健康雄性Wistar大鼠 2 4只 ,随机分为缺血再灌注组、假手术组和对照组 ,每组各 8只。制作大鼠大脑中动脉栓塞 (MCAO)再灌注模型 ,缺血 4h再灌注 2h后断头处死 ,TUNEL法检测神经细胞凋亡 ,免疫组织化学法检测神经细胞c fos、c jun蛋白的表达。结果　缺血再灌注组细胞凋亡率、平均吸光度及c fos、c jun阳性细胞率、平均吸光度均高于假手术组和对照组 (P <0 .0 5 )。结论　脑缺血再灌注损伤可诱导c fos、c jun蛋白的表达和细胞凋亡 ;脑缺血再灌注大鼠神经功能评分与c fos、c jun蛋白的表达和细胞凋亡呈正相关。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HIF-1α及凋亡相关蛋白变化的影响

目的观察病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HIF-1α和Bcl-2蛋白变化的影响。方法用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶脑缺血再灌注模型,随机分为正常组、假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,于缺血2h再灌注3h、6h、12h、24h、72h、7d后处死,其中亚低温组于缺血后30min实施病灶侧脑亚低温并持续4h。处死前进行神经功能缺陷评分、HE染色、免疫组化检测HIF-1α和Bcl-2的表达。结果 (1)神经功能缺陷评分:亚低温缺血组大鼠各时间点均明显低于常温缺血组(P0.05);(2)HIF-1α的表达:再灌注3h表达显著增高,至24h左右达高峰,其后又随之下降,亚低温缺血组各时间点表达与常温缺血组无显著性差异(P0.05);(3)Bcl-2的表达:再灌注3h增多,随再灌注时间的延长,其表达逐渐增多(P0.05),6h达高峰,其后又随之下降,亚低温缺血组各时间点表达明显高于常温缺血组(P0.05)。结论 HIF-1α在脑缺血早期就发挥重要的保护作用。Bcl-2在脑缺血再灌注损伤过程中主要起抑制细胞凋亡的作用。亚低温能增加Bcl-2的表达;能明显减轻缺血所致的损伤,并能明显抑制细胞调亡;对大鼠缺血后神经功能的恢复有确切的疗效。