Caveolin-1与兔蛛网膜下腔出血模型基底动脉平滑肌增殖的关系

目的观察兔蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)模型基底动脉小窝蛋白-1(Caveolin-1)和血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)随时间表达变化情况,分析caveolin-1与动脉中膜平滑肌细胞增殖的关系。方法采用随机数字表法将76只新西兰大白兔完全随机分为空白对照组、假手术组和SAH组,空白组(各8只)不施加任何因素干扰,SAH组通过枕大池2次注血模拟脑血管痉挛病理过程,假手术组以生理盐水代替自体动脉血。于2次注血完毕后第1、3、5、7、14天取材,进行基底动脉组织学观察;RT-PCR、Western blot检测caveolin-1及PDGF mRNA转录及蛋白表达的变化规律。结果 SAH组基底动脉中膜滑肌层第7天增厚最为明显(39.92±4.07)μm,较sham组(10.78±2.14)μm显著增厚(P<0.01),第14天恢复正常;SAH组caveolin-1 mRNA转录水平上调,第5天达峰(63.41±4.47)%,较sham组(11.75±1.84)%显著上调(P<0.01),蛋白表达则持续下降,第7天(13.78±0.59)%较sham组(37.63±0.85)%显著下调(P<0.01);SAH组PDGF mRNA转录水平第3天(64.45±4.00)%较sham组(11.13±1.20)%显著上调(P<0.01),蛋白表达于第7天达峰(40.67±0.81)%,较sham组(15.42±1.00)%显著上调(P<0.01);Cavelin-1蛋白表达与基底动脉中膜平滑肌层厚度呈显著负相关(r=-0.89,P<0.01)。结论 Caveolin-1蛋白在SAH后脑血管平滑肌细胞增殖过程中持续下调,可能是抑制血管痉挛平滑肌增殖反应的潜在靶点。     

兔蛛网膜下腔出血后基底动脉平滑肌细胞的分离方法研究

目的 建立一种快速、有效的分离兔蛛网膜下腔出血(SAH)后基底动脉平滑肌细胞(BASMCs)的方法.方法 采用木瓜蛋白酶、二硫赤藓糖醇(DTE)、胶原酶(Ⅺ型)两步法急性分离兔SAH后BASMCs.利用倒置显微镜观察细胞数量及形态,台盼蓝法测定BASMCs成活率.结果 分离出BASMCs的数量(40.33±10.18)个/200倍视野,镜下观察绝大多数平滑肌细胞呈长梭形,包膜完整光滑,细胞成活率为80％.结论 该方法能快速、有效地分离BASMCs,并获得足够数量的细胞,为SAH后脑血管痉挛(CVS) BASMCs上离子通道的膜片钳研究创建了条件.     

过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 为了明确过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用。方法 将血管平滑肌细胞HA-VSMC分为正常对照组、NF-κB过表达组和空载组。通过构建NF-κB过表达载体,转染HA-VSMC细胞后,通过MTT检测各组HA-VSMC细胞的增殖情况,流式细胞仪检测HA-VSMC细胞凋亡情况,WB 检测各组HA-VSMC细胞NF-κB相对表达情况。结果 通过酶切验证证明NF-κB过表达载体构建正确;成功转染HA-VSMC细胞后,MTT检测结果显示NF-κB被激活可以抑制HA-VSMC细胞增殖;流式检测细胞凋亡结果也证实NF-κB激活可以促进细胞凋亡。结论 NF-κB表达升高会抑制血管平滑肌细胞的增殖并促进血管平滑肌细胞的凋亡。     

PDTC抑制NF-κB的表达对兔蛛网膜下隙出血后脑血管重构的影响

目的 观察兔蛛网膜下隙出血模型基底动脉核因子κB （NF-κB）的表达及其对脑血管重构的影响。方法 16只雄性新西兰大白兔随机分为SAH组和吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组,各8只。SAH组枕大池二次穿刺并注入自体动脉血造模,PDTC组在SAH后应用PDTC注入枕大池进行干预。模型制作完成后7 d处死动物,取其基底动脉测量平滑肌厚度。免疫组化法及蛋白质印迹法检测基底动脉中NF-κB、增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达。结果 与SAH组相比,PDTC干预后,基底动脉中NF-κB与PCNA蛋白表达减少,平滑肌厚度变薄,与SAH组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 PDTC可通过抑制NF-κB的激活减轻SAH后脑血管壁平滑肌增殖性改变。     

核因子κB及细胞因子与蛛网膜下腔出血后的脑血管痉挛

核因子κB(NF-κB)是一种广泛存在于哺乳动物细胞中、具有多向转录调节作用的蛋白质。近年研究表明,蛛网膜下腔出血后它在脑基底动脉内皮细胞以及周围的脑组织广泛高水平表达,与其调控的细胞因子(如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1、白细胞介素6等)一起积极参与炎性反应、脑血管痉挛等生物进程。NF-κB的研究将为临床防治脑血管痉挛开辟新途径。     

核因子-κB在中耳胆脂瘤中的表达

目的 观察核因子-κB(NF-κB)在中耳胆脂瘤中的表达,探讨其在胆脂瘤上皮细胞高度增殖过程中的作用.方法 应用免疫组化法检测26例胆脂瘤上皮、20例正常外耳道皮肤中NF-κB及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果 胆脂瘤上皮细胞均出现明显的NF-κB核转位,NF-κB及PCNA的表达显著高于正常外耳道皮肤组织,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 中耳胆脂瘤上皮具有高度增殖能力,NF-κB在胆脂瘤组织中的激活可能是中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖的一个原因.     

蛛网膜下腔出血后血管平滑肌细胞凋亡的microRNA芯片检测及分析

目的：采用microRNA芯片技术筛选蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）凋亡中起重要作用的microRNA。方法：首先建立SAH后VSMC凋亡模型。然后采用microRNA芯片筛选差异表达microRNA。最后采用qRT-PCR方法对筛选出来的microRNA145进行验证,并通过生物信息数据库预测其可能的靶基因。结果：通过200 μmol/L氧合血红蛋白（oxyhemoglobin,OxyHb）作用24 h,成功建立SAH后VSMC凋亡模型。MTT检测显示200 μmol/L OxyHb组作用24 h后吸光度（absorbance,A）值为0.197±0.131,流式细胞仪检测凋亡率为30.233±7.231,与其他组相比差异明显（P<0.05）。然后通过microRNA芯片检测,获得差异表达microRNA 22个,其中显著上调的16个,显著下调的6个。其中microRNA145差异变化最大。经qRT-PCR验证,SAH后VSMC中microRNA145异常高表达。预测结果显示,Bcl-2/腺病毒E１B19０００相互作用蛋白３（Bcl-2/E1B 19 kDa-interacting protein 3,BNIP3）为其可能的靶基因。结论：microRNA145可能是调控SAH后VSMC凋亡的分子靶点。microRNA145可能通过BNIP3相关信号途径,导致了SAH后VSMC凋亡,诱发并加重了脑血管痉挛。     

外伤性蛛网膜下腔出血与自发性蛛网膜下腔出血的甄别

<正>蛛网膜下腔出血,无论在临床医疗或是在法医检案中都极其常见,涉案蛛网膜下腔出血的甄别,尤其是外伤性蛛网膜下腔出血和自发性蛛网膜下腔出血的鉴别诊断,对于涉案事(案)件的定性,乃至最终处理都至关重要。     

兔SAH后p38MAPK、NF-κB、ICAM-1在基底动脉的表达

目的 探讨兔蛛网膜下腔出血(SAH)后丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、核转录因子-kB(NF-kB)及细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在脑血管痉挛(CVS)发病机制中的作用及其相互间内在关系.方法 将新西兰纯种健康级大白兔92只分为正常组(n=10)、对照组(n=10)、SAH组(n=72),SAH组又分为SAH后1、3、5、7、9、11d6个亚组.枕大池二次注血制作兔SAH后CVS模型.分离兔基底动脉(BA),应用形态学观察、免疫组化和原位杂交等方法,观察兔BA管径、血管壁上p38MAPK、NF-kB及ICAM-1表达的动态变化及其与CVS的关系.结果 在SAH后第3天,BA管腔出现狭窄,第5天时狭窄明显,第7天狭窄最为明显.伴随着血管腔管径的变化,血管壁上ICAM-1的表达逐渐增强,第7天时表达最为强烈;p38MAPK、NF-kB的表达也呈逐渐增强的趋势,但在第5天时表达最为强烈,之后逐渐降低.p38MAPK、NF-kB与ICAM-1在蛋白质和mRNA水平上的强烈表达有时程上的差别.结论 在CVS的早期即出现的p38MAPK、NF-kB高表达以及之后出现的ICAM-1高表达,均提示存在由p38MAPK、NF-kB调控的ICAM-1介导的痉挛血管壁的炎症反应,这一级联反应在CVS的发生和发展过程中起了重要作用.     

TNF-α、NF-κB在动脉粥样硬化闭塞症兔动脉中的表达变化

目的探讨动脉粥样硬化闭塞症(ASO)兔模型TNF-α、NF-κB mRNA和蛋白表达的变化,部分阐明ASO炎症反应机制。方法建立ASO动物模型,以免疫组化法观察主动脉内皮组织TNF-α、NF-κB蛋白表达,RT-PCR方法观察TNF-αmRNA、NF-κBmRNA表达情况。通过免疫组化指数以及目的基因的相对转录量为参数进行统计分析。结果 ASO模型兔主动脉内膜明显增厚,斑块面积明显增加。模型组兔主动脉内皮组织TNF-α、NF-κB蛋白表达和TNF-αmRNA、NF-κBmRNA的表达均较对照组升高(P<0.01)。结论 ASO发生发展与炎症反应有关。     

蛛网膜下腔出血量与脑血管痉挛兔基底动脉Cx43蛋白表达相关性研究

目的:通过建立兔二次蛛网膜下腔出血实验模型,观察兔蛛网膜下腔出血后基底动脉缝隙连接蛋白Cx43表达与注血量的关系,初步探讨蛛网膜下腔出血量是否通过调节缝隙连接蛋白的表达参与脑血管痉挛的形成.方法:选择健康新西兰大白兔18只,随机分为3组:正常组和0.5mL注血组,1 mL注血组(每组n=6);建立兔二次蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛实验模型,脑血管造影分析基底动脉的直径变化并应用 Western Blot检测基底动脉Cx43蛋白的表达变化.结果:成功建立兔二次蛛网膜下腔出血模型;脑血管造影显示正常组7d与0d相比血管直径无明显变化(95.2±3.4)%,0.5mL注血组7d较0d血管狭窄[(82.3±4.6)%,P<0.05],1mL注血7 d较0d血管明显狭窄[(63.5±6.8)%,P<0.01].Cx43蛋白表达在正常组为(33.9±6.1)%,0.5 mL注血组为(53.4±3.5)%,(P<0.05)、1 mL注血组为(61.6±3.8)%,(P<0.01).结论:实验结果显示蛛网膜下腔出血后兔基底动脉缝隙连接蛋白Cx43的表达与出血量成正比关系,表明蛛网膜下腔出血量的变化可能通过调节血管壁Cx43蛋白的表达参与脑血管痉挛的形成.     

S-100B蛋白与蛛网膜下腔出血研究的新进展

<正>动脉瘤性蛛网膜下腔出血(SAH)后,脑血管会处于持续痉挛状态导致脑血流量下降,易导致继发性缺血性脑损害发生,其是决定预后的主要因素。S-100B蛋白被认为是神经特异性血清标记物。脑血管病患者脑组织受损,S-100B蛋白易溶于水可透过损害的血脑屏障进入血液循环且通过血管进入细胞间液、脑脊液内[1]。因此,血浆、脑脊液中S-100B蛋白增高是SAH后脑细胞受到破坏后S-100B蛋白分泌增多及神经胶质细胞分化的结果。检测S-100B蛋白在血清及脑脊液的浓度可为继发性脑损害程度及预后评估提供了实验室检测定量手段具有重要意义,其为临床     

血小板活化因子对气道平滑肌细胞的增殖及核因子NF-κB表达的影响

目的:观察血小板活化因子(PAF)对离体培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的增殖及其核转录因子NF-κB蛋白表达的影响. 方法:MTT法及流式细胞仪检测细胞周期,EMSA法检测PAF刺激后ASMCs中NF-κB的活性改变;观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预对PAF作用的影响. 结果:PAF在1×10-6～1×10-9 mol/L范围内均能促进ASMCs的增殖(P<0.01),且1×10-7 mol/L时增殖作用最强, ASMCs细胞增殖指数明显增高(P<0.05),同时ASMCs细胞核内NF-κB活性明显增加(P<0.01). 预先用20 mmol/L NAC干预后,PAF的促增殖作用及核内NF-κB活性均被明显抑制,但该抑制作用呈不完全抑制(P<0.05). 结论:PAF能促进ASMCs的增殖,这一作用部分是通过激活NF-κB通路而发挥的.     

心肌酶在自发性蛛网膜下腔出血与创伤性蛛网膜下腔出血中的水平研究

目的评价心肌酶在自发性蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)和创伤性SAH患者中的血清水平。方法对入院的SAH患者进行CT及腰椎穿刺检查,并经医师诊断筛选出自发性SAH患者和创伤性SAH患者各45例做为观察组,另选同期在深圳市宝安区中心医院进行体检的健康者90例做为对照组,检测两组患者入院24 h内的心肌酶谱,即谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的血清水平,并进行统计分析。结果对观察组和对照组患者的血清AST、CK、LDH水平进行统计分析,观察组患者的AST、CK、LDH的血清水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);其中自发性SAH患者的AST、CK、LDH的血清水平显著高于创伤性SAH患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论自发性SAH患者的心肌酶谱血清水平显著高于创伤性SAH患者,对于自发性SAH和创伤性SAH的并发症及发病机制有进一步的理解,更好的减少治疗期间的并发症发生,提高医疗质量。     

蛛网膜下腔出血模型大鼠基底动脉蛋白酶激活受体-1 的表达

目的探讨蛛网膜下腔出血（SAH）模型大鼠基底动脉PAR1表达与脑血管痉挛（CVS）之间的关系。方法7周龄清洁级SD
大鼠24只,随机数字表法分为正常组、SAH 3 d组、SAH 5 d组、SAH 7 d组,采取二次枕大池注血法建立大鼠SAH模型,观察动
物行为学改变,SAH模型大鼠按照分组于术后3、5、7 d 分别灌杀动物,显微镜下观察基底动脉组织学形态,并以Image-Pro
Plus6.0图像分析软件测量基底动脉管腔横截面积,免疫组化检测基底动脉标本PAR1表达。结果SAH制模术后参照Endo 4分
制方法行神经功能评分SAH 3 d组中2分2只（33.3%）,3分4只（66.7%）;SAH 5 d组中1分3只（50%）,2分3只（50%）;SAH 7 d
组中1分4只（66.7%）,2分2只（33.3%）;正常组均为1分。CVS观察：正常组无痉挛,SAH 3 d组出现基底动脉痉挛,SAH 5 d组
基底动脉稍舒张,SAH 7 d组痉挛程度较3 d组加重,统计分析显示四组之间的差异有统计学意义（P<0.05）,组间两两比较差异
有统计学意义（P<0.05）。PAR1免疫组织化学结果分析：正常组未见明显表达,SAH模型制作后后3、5、7 d组基底动脉PAR1有
阳性表达。统计分析显示四组间PAR1平均光密度差异有统计学意义（P<0.01）,组间两两比较显示正常组与SAH 3 d组、正常
组与SAH 5 d组、正常组与SAH 7 d组、SAH 3 d组与SAH 5 d组、SAH 3 d组与SAH 7 d组差异具有统计学意义（P<0.01）,SAH
5 d组与SAH 7 d组相比差异具无统计学意义（P>0.05）。Pearson相关分析显示PAR1平均光密度与SAH后基底动脉横截面积
之间存在负相关（r为-0.779,P<0.01）。结论本实验中SAH大鼠模型基底动脉PAR1表达上调,并与CVS严重程度呈负相关关
系,凝血酶受体PAR1在CVS发生发展过程中表达上调,提示凝血酶参与了SAH后CVS的病理过程。
     

利多卡因对兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的防治

目的: 研究枕大池注入利多卡因是否能缓解蛛网膜下腔出血后脑血管的痉挛.方法: 30只新西兰大白兔随机分为假手术组、蛛网膜下腔出血组出血组、利多卡因治疗组(治疗组),每组10只.出血组和治疗组的动物于枕大池注入自体动脉血1.5 ml,假手术组注入1.5 ml生理盐水,30 min后假手术组和出血组的动物从枕大池注入0.1 ml生理盐水,治疗组注入0.1 ml 2%利多卡因.72 h后观察脑基底动脉管腔面积,另测定术前和72 h后血浆中的内皮素(ET)和降钙基因相关肽(CGRP).结果: 各组术前的血浆ET,CGRP无显著差别(P＞0.05);术后72 h 出血组的血浆ET高于假手术组和治疗组(P＜0.05),各组术后血浆ET比术前高(P＜0.01或P＜0.001);术后72 h血浆CGRP没有统计学差别(P＞0.05),与术前比较,假手术组和出血组的术后CGRP低于术前水平(P＜0.01或P＜0.001);出血组的血管腔面积低于假手术组和治疗组(P＜0.001).结论: 枕大池注入利多卡因能减轻兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛.     

诱导型一氧化氮合成酶在蛛网膜下腔出血后痉挛脑血管中的表达

目的 探讨iNOS在SAH后迟发性血管痉挛中的作用。方法 SAH模型采用大鼠枕大池二次注血法。HE染色测量SAH不同时期基底动脉腔的周长，比较痉挛程度；免疫组化和RT-PCR方法观察在痉挛最严重时基底动脉血管壁中iNOS的表达。结果 第7天时血管痉挛最为明显。免疫组化染色及RT—PCR分析均可见第7天时基底动脉血管壁中有iNOS的表达而在非SAH组为阴性。结论 iNOS在SAH后脑血管痉挛发生过程中起重要作用。     

NF-κB及其在肿瘤中的作用

细胞核因子κB(nuclearfactorkappaB ,NF κB)是近年来发现的重要转录调控因子。NF κB广泛存在于细胞中 ,具有多种调节作用 ,不仅与机体的免疫应答、细胞增殖、生长分化、细胞周期以及凋亡有关 ,而且与肿瘤的发生发展和侵袭转移有密切关系〔1〕。1　NF κB家族的组成1986年Sen和Baltimore首先发现NF κB并进行描述。最初是从成熟B细胞核抽提物中发现的一种能与免疫球蛋白κ链基因的增强子κB序列特异性结合的核蛋白因子 ,所以称为细胞核因子。最初发现的NF κB是由P5 0和P6 0两个亚单位组成的异源二聚体 ,后来发现存在着一个NF …     

蛛网膜下腔出血的护理

<正>蛛网膜下腔出血是指脑表面血管破裂血液进入蛛网膜下腔,或脑实质出血血液穿破脑组织进入脑室及蛛网膜下腔而言。此病为神经系统常见病之一,患者常因大量出血、再出血和并发血管痉挛而死亡。做好急性期护理对制止出血或减少复发、缓解血管痉挛、改善预后有十分重要的意义。我科收治40例蛛网膜下腔出血病例,护理体会如下。1临床资料1.1一般资料本组患者40例,男性25例,女性15例;平均年龄16~65岁;其中20岁以下者4例,20~50岁27例,50岁以上9例,以中年人较多。1.2临床症状40例中有36例以突出头疼、呕吐为主要表现,占90%,4例表现为突出意识丧失并呕吐占10%.2例为癫痫首发症状占5%。2结果本组病人采取保守治疗、动脉造影术及栓堵术,