rhBMP-2对人牙龈成纤维细胞体外矿化能力的影响

目的 探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)对人牙龈成纤维细胞(GF)体外矿化能力的影响。方法 以组织块培养法培养人牙龈成纤维细胞，分别以含或不含rhBMP-2的矿化培养液长期培养，以倒置显微镜观察细胞生长状况。于培养第7天检测碱性磷酸酶(ALP)活性。于培养第30天行von Kossa染色观察矿化结节。结果 rhBMP-2提高GF的ALP水平，呈剂量依赖性，并能够刺激GF在体外形成矿化结节。结论 rhBMP-2能够诱导人GF向成骨细胞表型分化。     

人脂肪干细胞体外向成骨细胞定向诱导分化的实验研究

目的:探讨人脂肪干细胞(hASCs)的分离方法、体外增殖能力及定向诱导分化为成骨细胞的潜能.方法:从脂肪抽吸物中分离、培养具有多向分化潜能的脂肪干细胞,比较原代(P0)及传代第1、2、5代(P1、P2、P5)细胞的生长曲线.实验组取P2细胞.应用成骨诱导液向成骨细胞定向诱导分化,并以未诱导组为对照组,利用ALP染色,von Kossa染色、免疫荧光检测、RT-PCR等方法对细胞成骨潜能进行评价.结果:传代细胞较原代细胞增殖速度快.P1、P2、P5均具有一些共同特征,传代培养的潜伏期约为24 h,传代培养细胞的对数增殖期约为2～3 d,接种后第4～5天进入平台期;细胞诱导14d后,实验组ALP染色呈阳性反应,对照组阴性;von Kossa染色.实验组出现深棕色结节状沉积,且随诱导时间增加而加深,对照组无结节状沉积出现;免疫荧光检测,实验组和对照组均表达Ⅰ型胶原,实验组骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)检测为阳性,对照组为阴性或弱阳性;RT-PCR检测表明,实验组诱导14d时有ALP、Osteopontin表达,对照组阴性;实验组、对照组及成骨细胞均有Ⅰ型胶原阳性表达.结论:hASCs在体外培养条件下生长良好,P2细胞在诱导培养下可向成骨细胞分化,为以hASCs为种子细胞构建组织工程骨奠定了基础.     

兔成骨细胞体外培养及自体肌内成骨的实验研究

目的 :建立一种体外培养兔成骨细胞的生物学模型 ,并对其生物学特性及体内成骨能力进行研究。方法 :抽取日本大耳白兔骨髓液经离心后得骨髓单个核细胞 ,以1×106/ml的细胞浓度进行培养 ,经传代培养 ,通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜、透射电镜、碱磷酸酶 (alkalinephosphatase,ALP)染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色和VonKossa钙染色等手段对获得的细胞进行生物学特性研究。然后将细胞与载体材料—膨体聚四氟乙烯(ePTFe)复合培养1周后回植自体兔肌肉内 ,4周、8周后分别取材 ,组织学方法观察其成骨能力。结果 :培养的细胞形态多样 ,呈集落样生长 ,可相互重叠成复层状 ,胞浆富含线粒体、粗面内质网和高尔基体 ,胞浆突起长短、粗细不等 ,互相连接。培养细胞富含ALP活性Ⅰ型胶原和VonKossa染色均阳性。这与典型成骨细胞的生物学特性相似。成骨细胞经体外增殖 ,与载体复合培养后生长良好。植入体内早期(4周时 )形成的骨基质结构疏松 ,周围仍有较多成骨细胞 ,晚期 (8周时 )则可见形成的骨样组织结构致密 ,内有骨细胞位于骨陷窝中 ,与典型的骨组织结构相似。结论 :用兔骨髓基质细胞在体外筛选、培养成骨细胞的方法是可行的     

神经生长因子对山羊骨髓间充质干细胞向成骨分化的调节作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对山羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的调节作用. 方法:体外培养山羊BMSCs,流式细胞仪鉴定表面标志物;将第3 代BMSCs分为空白对照组、成骨诱导对照组、NGF组和实验组,检测各组碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)水平、应用von Kossa染色的方法比较各组细胞成骨性能. 结果:流式细胞术测得各组细胞均呈CD90、CD105强阳性表达,CD34、CD45阴性.实验组ALP和OC表达明显高于其它3 组,差异有显著性意义(P<0.05).成骨诱导对照组细胞von Kossa染色阳性,可见黑色钙化结节,实验组较成骨诱导对照组钙化结节数目明显增多,面积增大.而NGF组各项指标与空白对照组无明显差异.结论:单纯使用NGF并不能诱导山羊BMSCs向成骨细胞转化,但NGF对山羊BMSCs向成骨细胞分化过程具有明显的促进作用.     

2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞体外培养与生物学特性研究

目的:研究2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞生物学特异性。方法:采用组织块法进行体外培养2型糖尿病患者和正常人牙槽骨成骨细胞,倒置显微镜观察细胞的形态,用碱性磷酸酶(ALP)、茜素红(Alizarinred)染色法分别进行细胞成骨特性的检测,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖趋势,用酶动力学、放射免疫及酶联免疫分析(ELISA)方法分别进行碱性磷酸酶、骨钙素(BGP)和Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)浓度的检测,结果:在同等培养条件下,二者的形态无明显差异,但2型糖尿病患者成骨细胞较正常人成骨细胞生长慢、活性弱,矿化结节形成少;2型糖尿病成骨细胞上清液中ALP、BGP及COL-Ⅰ浓度均较正常人低(P<0.05)。结论:2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞增殖较缓慢,特征性分泌物含量较正常成骨细胞低。     

大鼠脂肪干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞的研究

目的：研究脂肪组织来源干细胞（adipose tissue-derived stem cells，ADSCs）在体外分离培养、诱导分化为成骨细胞的能力，探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性。方法：从SD大鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织，通过Ⅰ型胶原酶消化法获取原代ADSCs，适时传代。逐日倒置显微镜下观察细胞形态及增殖特征。第3代细胞用成骨诱导培养基向成骨细胞诱导分化，并进行碱性磷酸酶染色、VonKossa染色及免疫细胞化学染色鉴定成骨细胞特性。结果：从大鼠脂肪组织中分离培养出ADSCs，体外形态类似成纤维细胞，增殖迅速。在地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠及1，25-（OH）2 VitD，诱导下，ADSCs表现出成骨细胞特性：ALP活性显著增高，Von Kossa染色出现钙化结节，OC、Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色阳性。结论：ADSCs易于分离培养，体外扩增迅速，经矿化诱导后可分化为成骨细胞，可作为骨组织工程的种子细胞。     

釉基质蛋白对成骨细胞碱性磷酸酶和I型胶原合成的影响

目的 :观察釉基质蛋白 (EMPs)对成骨细胞碱性磷酸酶和I型胶原合成的影响 ,进一步探讨EMPs促进牙槽骨再生的机制。方法 :体外培养MC3T3 E1成骨细胞 ,在培养液中加入不同浓度的EMPs ,用酶动力学方法和MTT法作碱性磷酸酶 (ALP)比活性测定 ,同位素掺入结合细菌胶原酶消化法测定I型胶原的合成。结果 :EMPs能明显促进MC3T3 E1成骨细胞的碱性磷酸酶合成以及I型胶原合成。结论 :EMPs对成骨细胞的生物学活性有明显促进作用 ,提示这可能是EMPs促进牙槽骨再生的一个重要原因     

nHACP／CF材料与成骨细胞体外复合培养的实验研究

目的:检测甲壳素纤维增强多孔胶原基骨组织工程支架材料(nHACP/CF)对成骨细胞附着增殖的影响,为骨组织工程支架材料的选择提供实验依据.方法:原代培养大鼠成骨细胞,将第3代细胞与nHACP/CF材料体外复合培养.碱性磷酸酶(ALP)染色对成骨细胞进行鉴定;将不同浓度成骨细胞接种到nHACP/CF支架上,通过检测ALP活性测定最佳接种浓度;通过扫描电镜观察和各培养时点细胞增殖率及ALP活性检测,评价nHACP/CF材料对成骨细胞的影响.采用SPSS11.5软件包对测定结果进行单因素方差分析.结果:大鼠成骨细胞ALP染色阳性.统计分析表明,6×105/ml为细胞最佳接种浓度;大鼠成骨细胞能在nHACP/CF材料上附着、增殖,其生长及功能不受抑制.结论:nHACP/CF材料是大鼠成骨细胞附着生长的良好载体.     

颞下颌关节滑膜间充质干细胞成骨潜能的实验研究

目的　研究滑膜间充质干细胞的成骨潜能。方法　用2 g/L的Ⅰ型胶原酶消化获得滑膜细胞,待细胞汇 合后用有限稀释法进行单细胞克隆,筛选出滑膜间充质干细胞(SMSC)。取第3代SMSC进行成骨诱导培养,每天观 察细胞形态,并于培养7 d后检测ALP活性和骨桥蛋白的表达,RT-PCR检测核心结合因子al(cbfal)mRNA的转录; 培养30 d后作Von Kossa′s染色,检测成骨化程度。结果　SMSC在体外培养形成葵花样细胞集落,胞浆突起明显, 相互连接成网状;成骨化诱导剂可诱导SMSC定向分化为多形性成骨细胞,细胞ALP染色阳性,骨桥蛋白强阳性,电 泳显示有cbfal的特异性条带,矿化区经Von Kossa′s染色呈阳性反应。结论　经体外纯化的SMSC可定向诱导分化 为成骨细胞,符合成骨细胞的生物学特征。     

乳牙牙髓干细胞体外诱导成骨细胞的实验研究

目的:体外分离、培养人乳牙牙髓干细胞,并向成骨细胞诱导.方法:采用酶消化法分离获得人乳牙牙髓干细胞,有限稀释法分离纯化,测定细胞克隆形成率,细胞计数法测定生长曲线,细胞爬片行HE染色,抗波形蛋白(Vimentin)、CD44和STRO-1免疫组化染色,并向成骨细胞诱导,行HE染色、碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、Van Gieson染色和抗骨钙素免疫组化染色进行鉴定.结果:通过有限稀释法获得了人乳牙牙髓干细胞,并诱导成成骨细胞,表现出与典型成骨细胞相似的形态特征和生物学特征.结论:成功从人乳牙牙髓中分离出牙髓干细胞,并诱导为成骨细胞.